動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)課件

1、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)2.2 動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程(gngchng)(gngchng)第一頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A植物細(xì)胞植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體原生質(zhì)體A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合雜合雜合(z h)的原生質(zhì)的原生質(zhì)體體再生出細(xì)胞壁再生出細(xì)胞壁雜種雜種(zzhng)細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂分化發(fā)育分化發(fā)育愈傷組織愈傷組織(zzh)雜種植株雜種植株植物體細(xì)胞雜交過(guò)程植物體細(xì)胞雜交過(guò)程第二頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)材料1: 1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人鼠細(xì)胞融合的實(shí)

2、驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何(rh)實(shí)現(xiàn)人鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？第三頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)一、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞融合1.概念概念(ginin)： 動(dòng)物細(xì)胞融合（動(dòng)物細(xì)胞融合（cell fusion）也成細(xì)胞雜交，是）也成細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)(y )細(xì)胞的過(guò)程。細(xì)胞的過(guò)程。 融合和形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單融合和形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱(chēng)為核細(xì)胞，稱(chēng)為雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞。第四頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)3.融合融合(rngh)過(guò)

3、程：過(guò)程：第五頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)誘導(dǎo)誘導(dǎo)(yudo)方法：方法：物理物理(wl)方法：方法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物生物(shngw)法：法：滅活的病毒滅活的病毒電激等電激等聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)第六頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課) 為什么滅活的為什么滅活的 病毒病毒(bngd)能作誘能作誘導(dǎo)劑導(dǎo)劑？3.融合融合(rngh)過(guò)程：過(guò)程：第七頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)第八頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)植物細(xì)胞雜交植物細(xì)胞雜交(zjio)與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物

4、體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合原理原理融合前處理融合前處理使用的酶使用的酶誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法主要用途主要用途細(xì)胞細(xì)胞(xbo)膜的流膜的流動(dòng)性細(xì)胞動(dòng)性細(xì)胞(xbo)的的全能性全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi) 物理方法物理方法（離心、振蕩、電激）離心、振蕩、電激） 化學(xué)方法（化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法滅活的病毒滅活的病毒獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合第九頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞

5、融合與單克隆抗體(講課)4.意義意義(yy)： 突破了有性雜交方法(fngf)的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。5.應(yīng)用應(yīng)用(yngyng)：最重要的用途是最重要的用途是制備單克隆抗體制備單克隆抗體第十頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)動(dòng)物動(dòng)物(dngw)細(xì)胞融合細(xì)胞融合 物理物理(wl)法：法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法：誘導(dǎo)融合誘導(dǎo)融合(rngh)的方法的方法原理：原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性過(guò)程：過(guò)程：離心、震動(dòng)、電激離心、震動(dòng)、電激聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)滅活的病毒滅活的病毒動(dòng)、植物細(xì)胞融合的主要區(qū)別動(dòng)、植物細(xì)胞融合的主要區(qū)別用途：

6、用途：最重要的用途是最重要的用途是制備單克隆抗體制備單克隆抗體第十一頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)思考思考？1. 1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生如何產(chǎn)生？2. 2. 抗體抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點(diǎn)？與抗原作用的特點(diǎn)？ 主要分布在哪里主要分布在哪里(n li)？3. 3. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體(kngt)第十二頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)第十三頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)思考思考？1. 1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何如

7、何(rh)產(chǎn)生產(chǎn)生？2. 2. 抗體抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點(diǎn)？與抗原作用的特點(diǎn)？ 主要分布在哪里？主要分布在哪里？3. 3. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體(kngt)第十四頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)抗體抗體(kngt)的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清(xuqng)中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點(diǎn)該法制備抗體的特點(diǎn)(tdin)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗體產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動(dòng)動(dòng)物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 第十五

8、頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課) 單克隆單克隆抗體抗體: :單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué) 性質(zhì)性質(zhì)(xngzh)(xngzh)單一特異性強(qiáng)的抗體單一特異性強(qiáng)的抗體n利用效應(yīng)利用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體細(xì)胞產(chǎn)生抗體(kngt)的功能的功能n利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性n利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞胞n利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：第十六頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課) 1、過(guò)程、過(guò)程(guchng) 注射

9、注射(zhsh)抗抗原原已免疫的已免疫的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、細(xì)胞融合、篩選篩選(shixun)雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選篩選，繼續(xù)培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體第十七頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)單克隆抗體(kngt)的制備第十八頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)第十九頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)第二十頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)2、單克隆抗體單克隆抗體(kngt)的

10、優(yōu)點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高第二十一頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)（1）作為診斷試劑）作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確準(zhǔn)確(zhnqu)、高效、簡(jiǎn)易、快速、高效、簡(jiǎn)易、快速第二十二頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)第二十三頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課) 看書(shū)上看書(shū)上53頁(yè)圖，分組討論，單抗制備過(guò)程分哪幾步？頁(yè)圖，分組討論，單抗制備過(guò)程分哪幾步？請(qǐng)請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解(tji)的字母按正的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？確順序連接起來(lái)。順序是？ 第二十四頁(yè)

11、，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)有夢(mèng)想(mngxing)，才會(huì)有創(chuàng)造！ 已成功的動(dòng)物細(xì)胞已成功的動(dòng)物細(xì)胞(xbo)融合實(shí)例有很多，如人融合實(shí)例有很多，如人小鼠、人小鼠、人兔、兔、人人雞、鼠雞、鼠兔、雞兔、雞鼠等上百種融合細(xì)胞鼠等上百種融合細(xì)胞(xbo)。甚至已成功完成了。甚至已成功完成了酵母菌酵母菌雞雞 、人、人胡蘿卜胡蘿卜 等細(xì)胞等細(xì)胞(xbo)的融合。的融合。 想了解更多信息，可通過(guò)網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑想了解更多信息，可通過(guò)網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑(tjng)關(guān)關(guān)注細(xì)胞融合和單克隆抗體的最新信息。注細(xì)胞融合和單克隆抗體的最新信息。生物種間雜交生物種間雜交想像圖想像圖第二十五頁(yè)

12、，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體(kngt)(kngt)，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A.A.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.B.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞C.C.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的淋巴細(xì)胞沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的淋巴細(xì)胞A2.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（

13、 ）誘導(dǎo)誘導(dǎo)(yudo)融合的方法完全相同融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 操作步驟基本相同操作步驟基本相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞都能形成雜種細(xì)胞 D第二十六頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)3. 單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是（單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是（ ）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合 B.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)(y )B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 C.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D.由小鼠一個(gè)由

14、小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D4.4.只能只能(zh nn)(zh nn)使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（ ）A APEGPEG B B滅活的病毒滅活的病毒 C C電刺激電刺激 D D離心離心B第二十七頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)5. 5. 單克隆抗體單克隆抗體(kngt)(kngt)制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活

15、增殖的細(xì)胞是 （ ）淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A.A. B. B.C.C. D.D. C C6.“6.“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ）A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B.B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(xbo)(xbo)C.C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物在單克隆抗體上連接抗癌藥物 D第二十八頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)A A 、 B B細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)為動(dòng)物細(xì)胞為動(dòng)物

16、細(xì)胞(xbo)(xbo), ,請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題: :A細(xì)胞細(xì)胞(xbo)B細(xì)胞細(xì)胞(xbo)C細(xì)細(xì)胞胞D細(xì)細(xì)胞胞(1)(1)若若A A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞B B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞細(xì)胞為淋巴細(xì)胞, ,那么那么D D細(xì)胞稱(chēng)為細(xì)胞稱(chēng)為 細(xì)胞細(xì)胞,D,D細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的特征細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的特征, ,一方面因具有骨髓瘤一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的細(xì)胞的 性質(zhì)性質(zhì), ,通過(guò)通過(guò) 方式產(chǎn)生方式產(chǎn)生大量細(xì)胞大量細(xì)胞, ,我們稱(chēng)之為我們稱(chēng)之為 過(guò)程過(guò)程; ;另一方面能分泌另一方面能分泌大量的抗體大量的抗體, ,我們把該過(guò)程分泌的抗體我們把該過(guò)程分泌的抗體稱(chēng)稱(chēng) . .雜交瘤雜交瘤連續(xù)分

17、裂連續(xù)分裂有絲分裂有絲分裂單克隆單克隆單克隆抗體單克隆抗體練一練練一練第二十九頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)(2)D(2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是 , ,合成該合成該物質(zhì)的場(chǎng)所是物質(zhì)的場(chǎng)所是 , ,它是由它是由 控制合成的控制合成的, ,合成過(guò)程包括合成過(guò)程包括 和和 兩個(gè)兩個(gè)(lin )(lin )重要步驟重要步驟. .球蛋白球蛋白核糖體核糖體基因基因(jyn)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄(zhun l)翻譯翻譯(3)D(3)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有 作用作用, ,與血清與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于抗體相比其優(yōu)越之處在于 強(qiáng)強(qiáng) 高高. .免疫免疫特異性特異性靈敏度靈敏度第三十頁(yè)，共三十二頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)(4)(4)若若A A為人細(xì)胞為人細(xì)胞,B,B為鼠細(xì)胞為鼠細(xì)胞, ,用同位素標(biāo)記用同位素標(biāo)記A A細(xì)胞膜上的蛋細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)白質(zhì),B,B不標(biāo)記不標(biāo)記, ,在在C C細(xì)胞時(shí)細(xì)胞時(shí), ,檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個(gè)細(xì)胞一半有檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個(gè)細(xì)胞一半有放射性另一半沒(méi)有放射性另一半沒(méi)有(mi yu)(mi yu). .在在D D細(xì)胞時(shí)細(xì)胞時(shí), ,檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個(gè)細(xì)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)整個(gè)細(xì)胞都有放射性胞都有放射性, ,請(qǐng)解釋原請(qǐng)解釋原因因 . .構(gòu)成細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)分子構(gòu)成細(xì)胞膜的蛋