第1章 蛋白質(zhì)化學(xué)3

1、 蛋白質(zhì)復(fù)雜的蛋白質(zhì)復(fù)雜的組成組成和和結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)是其多種多樣生是其多種多樣生物學(xué)功能的基礎(chǔ)；而蛋白質(zhì)獨(dú)特的物學(xué)功能的基礎(chǔ)；而蛋白質(zhì)獨(dú)特的性質(zhì)性質(zhì)和和功功能能則是其結(jié)構(gòu)的反映。則是其結(jié)構(gòu)的反映。 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)包含了其分子的所有信息，蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)包含了其分子的所有信息，并決定其高級(jí)結(jié)構(gòu)，高級(jí)結(jié)構(gòu)和其功能密切并決定其高級(jí)結(jié)構(gòu)，高級(jí)結(jié)構(gòu)和其功能密切相關(guān)。相關(guān)。 保護(hù)和支持功能保護(hù)和支持功能-結(jié)構(gòu)蛋白，細(xì)胞和組織的構(gòu)建，如微管蛋白、延伸蛋白、膠原蛋白、角蛋白等。 保護(hù)和開發(fā)蛋白： 一、一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系一、一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系（一級(jí)結(jié)構(gòu)中的保守序列決定空間結(jié)構(gòu)一級(jí)結(jié)構(gòu)中的保守序列決定空間結(jié)構(gòu)）（1）

2、一級(jí)結(jié)構(gòu)的變異與分子病一級(jí)結(jié)構(gòu)的變異與分子?。罕Ｊ匕被岣淖?，保守氨基酸改變，功能改變功能改變 實(shí)例實(shí)例：分子?。悍肿硬。?）同源蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)差異與生物進(jìn)化同源蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)差異與生物進(jìn)化：保守：保守氨基酸不變，功能不變氨基酸不變，功能不變. 實(shí)例實(shí)例：不同生物的細(xì)胞色素不同生物的細(xì)胞色素C:真核細(xì)胞線粒體內(nèi)膜真核細(xì)胞線粒體內(nèi)膜含鐵單鏈蛋白質(zhì)，生物氧化中起傳遞電子作用含鐵單鏈蛋白質(zhì)，生物氧化中起傳遞電子作用.分子病分子?。╩olecular disease）：）：由于基因結(jié)構(gòu)由于基因結(jié)構(gòu)改變，蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)中的改變，蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)中的關(guān)鍵氨基酸關(guān)鍵氨基酸發(fā)生改變，發(fā)生改變，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)

3、功能障礙，出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能障礙，出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀，這類遺傳性疾病稱為分子病。這類遺傳性疾病稱為分子病。【經(jīng)典舉例】【經(jīng)典舉例】鐮形細(xì)胞貧血癥鐮形細(xì)胞貧血癥：編碼：編碼珠蛋白珠蛋白鏈的鏈的結(jié)構(gòu)基因第六個(gè)密碼子由結(jié)構(gòu)基因第六個(gè)密碼子由CTTCAT，（，（GAA-GUA），相應(yīng)的多肽序列中相應(yīng)的多肽序列中N端的第六個(gè)氨基酸端的第六個(gè)氨基酸由由GluVla； 谷氨酸谷氨酸側(cè)鏈帶負(fù)電的羧基，側(cè)鏈帶負(fù)電的羧基，纈氨酸纈氨酸側(cè)鏈不帶電荷的疏水基，降低溶解度，血紅蛋白側(cè)鏈不帶電荷的疏水基，降低溶解度，血紅蛋白分子容易聚集成纖維狀，分子容易聚集成纖維狀，使紅細(xì)胞變形成成使紅細(xì)胞變形成成

4、桿狀多聚桿狀多聚體（鐮形），輸氧能力下降，細(xì)胞脆弱易溶血而引起貧血。體（鐮形），輸氧能力下降，細(xì)胞脆弱易溶血而引起貧血。 CTT （GAA）CAT （GUA） 1949 Pauling（美）指出美）指出鐮刀形紅細(xì)胞性貧血是一鐮刀形紅細(xì)胞性貧血是一種分子病，并于種分子病，并于1951年提年提出蛋白質(zhì)存在二級(jí)結(jié)構(gòu)。出蛋白質(zhì)存在二級(jí)結(jié)構(gòu)。 1954年獲諾貝爾獎(jiǎng)年獲諾貝爾獎(jiǎng)李納斯李納斯鮑林（鮑林（Linus Pauling） 細(xì)胞色素細(xì)胞色素c c分子的空間結(jié)構(gòu)分子的空間結(jié)構(gòu)不變不變的的AAAA殘基殘基 35個(gè)不變的個(gè)不變的AA殘基，殘基，是是Cyt C 的的生物功能所不可缺生物功能所不可缺少的。少的

5、。其中有的可能參加其中有的可能參加維持分子維持分子構(gòu)象構(gòu)象；有；有的可能參與的可能參與電子傳電子傳遞遞；有的可能參與；有的可能參與“識(shí)別識(shí)別”并結(jié)合細(xì)并結(jié)合細(xì)胞色素還原酶和氧胞色素還原酶和氧化化酶酶。生物生物 與人不同的與人不同的AAAA數(shù)目數(shù)目黑猩猩黑猩猩 0恒河猴恒河猴 1兔兔 9袋鼠袋鼠 10牛、豬、羊、狗牛、豬、羊、狗 11馬馬 12雞、火雞雞、火雞 13響尾蛇響尾蛇 14海龜海龜 15金槍魚金槍魚 21角餃角餃 23小蠅小蠅 25蛾蛾 31小麥小麥 35粗早鏈孢霉粗早鏈孢霉 43酵母酵母 44 不同生物與人的不同生物與人的CytcCytc的的AAAA差異數(shù)目差異數(shù)目根據(jù)細(xì)胞色素根據(jù)細(xì)

6、胞色素 C（真核細(xì)胞線粒體內(nèi)膜含真核細(xì)胞線粒體內(nèi)膜含鐵蛋白質(zhì)，生物氧化起傳遞作用）鐵蛋白質(zhì)，生物氧化起傳遞作用）的順序的順序種屬差異建立起來的進(jìn)化樹種屬差異建立起來的進(jìn)化樹進(jìn)化分支點(diǎn)進(jìn)化分支點(diǎn) 二、空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系二、空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系空間結(jié)構(gòu)中的空間結(jié)構(gòu)中的特定區(qū)域特定區(qū)域體現(xiàn)生物活性體現(xiàn)生物活性1、空間結(jié)構(gòu)體現(xiàn)、空間結(jié)構(gòu)體現(xiàn)生物特異性生物特異性2、空間結(jié)構(gòu)體現(xiàn)、空間結(jié)構(gòu)體現(xiàn)生物活性生物活性 核糖核酸酶核糖核酸酶實(shí)驗(yàn)證明，蛋白質(zhì)氨基酸序?qū)嶒?yàn)證明，蛋白質(zhì)氨基酸序列決定它的構(gòu)象，而構(gòu)象又決定其功能。列決定它的構(gòu)象，而構(gòu)象又決定其功能。 n別構(gòu)效應(yīng)別構(gòu)效應(yīng)（別位效應(yīng)、變位效應(yīng)，（別位效應(yīng)、變

7、位效應(yīng)，allosteric effect）：）：蛋白質(zhì)分子的特定部位（調(diào)節(jié)部位）與小分子化合蛋白質(zhì)分子的特定部位（調(diào)節(jié)部位）與小分子化合物（效應(yīng)物）結(jié)合后，引起空間構(gòu)象發(fā)生改變，從物（效應(yīng)物）結(jié)合后，引起空間構(gòu)象發(fā)生改變，從而促使生物學(xué)活性變化的現(xiàn)象稱為變構(gòu)效應(yīng)。包括而促使生物學(xué)活性變化的現(xiàn)象稱為變構(gòu)效應(yīng)。包括正協(xié)同、負(fù)協(xié)同效應(yīng)正協(xié)同、負(fù)協(xié)同效應(yīng)【經(jīng)典舉例】【經(jīng)典舉例】血紅蛋白（血紅蛋白（Hb）：）：由由22四聚體組四聚體組成，每個(gè)亞基含有成，每個(gè)亞基含有1個(gè)血紅素輔基；個(gè)血紅素輔基；Hb的氧解離曲的氧解離曲線呈線呈“S”型。型。n多種空間構(gòu)象，多種活性狀態(tài)多種空間構(gòu)象，多種活性狀態(tài)3、空間

8、結(jié)構(gòu)的靈活性，體現(xiàn)了生物活性的、空間結(jié)構(gòu)的靈活性，體現(xiàn)了生物活性的可調(diào)節(jié)特性可調(diào)節(jié)特性血紅蛋白由血紅蛋白由去氧形式去氧形式(T)變?yōu)樽優(yōu)檠鹾闲问綍r(shí)氧合形式時(shí)(R)亞基的移動(dòng)亞基的移動(dòng)血紅蛋白的血紅蛋白的別構(gòu)效應(yīng)充別構(gòu)效應(yīng)充分地反映了分地反映了它的生物學(xué)它的生物學(xué)適應(yīng)性、結(jié)適應(yīng)性、結(jié)構(gòu)與功能的構(gòu)與功能的高度統(tǒng)一性高度統(tǒng)一性。與氧親和力低空氣中CO 0.06-0.08%有中毒危險(xiǎn),0.1%則窒息死亡. 4、 空間構(gòu)象并非生物活性的唯一影響因素空間構(gòu)象并非生物活性的唯一影響因素【舉例】低溫下酶活性低，但并不影響構(gòu)象；鹽【舉例】低溫下酶活性低，但并不影響構(gòu)象；鹽析時(shí)沉淀的酶無(wú)活性，但構(gòu)象不變。析時(shí)沉淀

9、的酶無(wú)活性，但構(gòu)象不變。 5、蛋白構(gòu)象疾病：、蛋白構(gòu)象疾病：錯(cuò)誤構(gòu)象相互聚集，形成抗錯(cuò)誤構(gòu)象相互聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病。蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病。n老年癡呆老年癡呆n瘋牛病瘋牛病n亨汀頓舞蹈病亨汀頓舞蹈病 （二級(jí)結(jié)構(gòu)多為二級(jí)結(jié)構(gòu)多為螺旋、螺旋、對(duì)蛋白酶敏感、水溶性對(duì)蛋白酶敏感、水溶性）（一級(jí)結(jié)構(gòu)相同，但二級(jí)結(jié)構(gòu)全為一級(jí)結(jié)構(gòu)相同，但二級(jí)結(jié)構(gòu)全為折疊，折疊，抗蛋白酶、水溶性差、蛋白聚集成淀粉抗蛋白酶、水溶性差、蛋白聚集成淀粉樣沉淀）樣沉淀） 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)一、一、 兩性解離性質(zhì)及等電點(diǎn)兩性解離性質(zhì)及等電點(diǎn)二、二、 蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)蛋

10、白質(zhì)膠體性質(zhì)三、三、 蛋白質(zhì)的沉淀蛋白質(zhì)的沉淀四、四、 蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性五、五、 蛋白質(zhì)的紫外吸收特性蛋白質(zhì)的紫外吸收特性六、六、 蛋白質(zhì)成色反應(yīng)蛋白質(zhì)成色反應(yīng) 同同“氨基酸兩性解離氨基酸兩性解離”一、一、 兩性解離性質(zhì)及等電點(diǎn)兩性解離性質(zhì)及等電點(diǎn) 蛋白質(zhì)兩性解離性質(zhì)和等電點(diǎn)蛋白質(zhì)兩性解離性質(zhì)和等電點(diǎn)pH = pI 凈電荷凈電荷=0 pH pI凈電荷為負(fù)凈電荷為負(fù)PrCOOHNH3+ + H+ OH- + H+ OH-PrCOO-NH2PrCOO-NH3+ 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液在某一定當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液在某一定pH值時(shí)，使某特定蛋白質(zhì)分子上所帶正負(fù)值時(shí)，使某特定蛋白質(zhì)分子上所帶正負(fù)電荷相

11、等，成為兩性離子，在電場(chǎng)中既不向陽(yáng)極也不向陰極移動(dòng)，電荷相等，成為兩性離子，在電場(chǎng)中既不向陽(yáng)極也不向陰極移動(dòng)，此時(shí)溶液的此時(shí)溶液的pH值即為該蛋白質(zhì)的值即為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)等電點(diǎn) （isoelectric point，pI） 二、二、 蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)具有膠體溶液的布朗運(yùn)動(dòng)、丁達(dá)爾效應(yīng)以及不能透過半透膜具有膠體溶液的布朗運(yùn)動(dòng)、丁達(dá)爾效應(yīng)以及不能透過半透膜. 蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)膠體性質(zhì) 可溶性蛋白質(zhì)分子表面分布著大量可溶性蛋白質(zhì)分子表面分布著大量極性氨基酸極性氨基酸殘基，對(duì)水有很高的親和性，通過水合作用在蛋白殘基，對(duì)水有很高的親和性，通過水合作用在蛋白質(zhì)顆粒外面形成一層質(zhì)顆粒外面形

12、成一層水化層水化層，同時(shí)這些顆粒帶有，同時(shí)這些顆粒帶有電電荷荷，因而蛋白質(zhì)溶液是相當(dāng)穩(wěn)定的，因而蛋白質(zhì)溶液是相當(dāng)穩(wěn)定的親水膠體親水膠體。 蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)的應(yīng)用蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)的應(yīng)用 透析法透析法（dialysisdialysis） : :利用蛋白質(zhì)不能透過半透膜利用蛋白質(zhì)不能透過半透膜的的性質(zhì)，將含有小分子雜質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液放入透析的的性質(zhì)，將含有小分子雜質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液放入透析袋再置于流水中，小分子雜質(zhì)被透析出，大分子蛋白袋再置于流水中，小分子雜質(zhì)被透析出，大分子蛋白質(zhì)留在袋中，以達(dá)到純化蛋白質(zhì)的目的。質(zhì)留在袋中，以達(dá)到純化蛋白質(zhì)的目的。 鹽析法鹽析法: :在蛋白質(zhì)溶液中加入在蛋白質(zhì)溶液中加入高濃

13、度高濃度的硫酸銨、硫酸的硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等中性鹽，可有效地破壞蛋白質(zhì)顆粒的鈉、氯化鈉等中性鹽，可有效地破壞蛋白質(zhì)顆粒的水化層水化層。同時(shí)又中和了蛋白質(zhì)表面的。同時(shí)又中和了蛋白質(zhì)表面的電荷電荷，從而使，從而使蛋白質(zhì)顆粒集聚而生成沉淀，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)顆粒集聚而生成沉淀，這種現(xiàn)象稱為鹽析鹽析（salting outsalting out）。不同蛋白質(zhì)析出時(shí)需要的鹽濃度不不同蛋白質(zhì)析出時(shí)需要的鹽濃度不同，利用分段鹽析分離制備蛋白質(zhì)同，利用分段鹽析分離制備蛋白質(zhì)。 如果加入適當(dāng)?shù)脑噭┦沟鞍踪|(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀如果加入適當(dāng)?shù)脑噭┦沟鞍踪|(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀態(tài)或失去水化層（態(tài)或失去水化層（消除相同電荷，

14、除去水膜消除相同電荷，除去水膜），蛋白），蛋白質(zhì)膠體溶液就不再穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀。質(zhì)膠體溶液就不再穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀。 三、三、 蛋白質(zhì)的沉淀蛋白質(zhì)的沉淀 高濃度中性鹽（鹽析、鹽溶）高濃度中性鹽（鹽析、鹽溶）-保持生物活性保持生物活性 酸堿（等電點(diǎn)沉淀）酸堿（等電點(diǎn)沉淀） 有機(jī)溶劑沉淀：有機(jī)溶劑沉淀：-低溫時(shí)保持生物活性，低溫時(shí)保持生物活性，有機(jī)溶劑（乙醇、有機(jī)溶劑（乙醇、丙酮等）作為脫水劑破壞水化層，降低介電常數(shù)，增強(qiáng)分子間作用丙酮等）作為脫水劑破壞水化層，降低介電常數(shù)，增強(qiáng)分子間作用。重金屬鹽類沉淀：重金屬鹽類沉淀：HgHg2+2+、AgAg2+2+、PbPb2+2+等與帶電基團(tuán)形成不溶解鹽等

15、與帶電基團(tuán)形成不溶解鹽 ( (pHpIpHpI 生物堿試劑和某些酸類沉淀：生物堿試劑和某些酸類沉淀：苦味酸、三氯乙酸、丹寧酸等與蛋苦味酸、三氯乙酸、丹寧酸等與蛋白質(zhì)帶正電基團(tuán)生成不溶性鹽。（白質(zhì)帶正電基團(tuán)生成不溶性鹽。（pH pIpH pI）（）（生物堿試劑生物堿試劑: :能引起生物堿沉淀的一類試劑。能引起生物堿沉淀的一類試劑。加熱變性沉淀加熱變性沉淀四、蛋白質(zhì)的四、蛋白質(zhì)的變性變性(denaturation)與與復(fù)性復(fù)性(renaturation)（1）變性：）變性：蛋白質(zhì)各自所特有的高級(jí)結(jié)構(gòu)，是表現(xiàn)蛋白質(zhì)各自所特有的高級(jí)結(jié)構(gòu)，是表現(xiàn)其其物理物理性質(zhì)和性質(zhì)和化學(xué)化學(xué)特性以及特性以及生物學(xué)生物

16、學(xué)功能的基礎(chǔ)。功能的基礎(chǔ)。在某在某些理化因素作用下，蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而些理化因素作用下，蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變、生物活性喪失的現(xiàn)象稱為變性。導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變、生物活性喪失的現(xiàn)象稱為變性。 變性不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。變性不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。特征特征：生物活性生物活性喪失；喪失；物理性質(zhì)物理性質(zhì)（溶解度、粘度、（溶解度、粘度、擴(kuò)散系數(shù)、光譜特性等）和擴(kuò)散系數(shù)、光譜特性等）和化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì)（化學(xué)反應(yīng)，（化學(xué)反應(yīng)，被酶解性）改變。被酶解性）改變。理化因素理化因素次級(jí)鍵次級(jí)鍵斷裂斷裂空間結(jié)構(gòu)空間結(jié)構(gòu)遭破壞遭破壞理化性質(zhì)改變理化性質(zhì)改變生物學(xué)活性喪失生物學(xué)活性喪失紫

17、外吸收上升紫外吸收上升變性原因變性原因變性本質(zhì)變性本質(zhì)變性結(jié)果變性結(jié)果蛋蛋白白變變性性物理因素：加熱（物理因素：加熱（70-100OC）、）、紫外線等射線照射、超聲波、高壓、劇烈震蕩或攪拌等；紫外線等射線照射、超聲波、高壓、劇烈震蕩或攪拌等；化學(xué)因素：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、脲、胍、去垢劑、金屬鹽、生物堿、有機(jī)溶劑等?；瘜W(xué)因素：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、脲、胍、去垢劑、金屬鹽、生物堿、有機(jī)溶劑等。 核糖核酸酶變性與復(fù)性作用核糖核酸酶變性與復(fù)性作用Native ribonucleaseDenative reduced ribonucleaseNative ribonuclease8 M urea and -mercapo

18、toethanolDialysis變性變性復(fù)性復(fù)性天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，有催化活性有催化活性8 M尿素、 -巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無(wú)活性非折疊狀態(tài)，無(wú)活性 蛋白質(zhì)變性與復(fù)性蛋白質(zhì)變性與復(fù)性 （2）應(yīng)用）應(yīng)用 利用變性利用變性：酒精消毒、高壓滅菌、酒精消毒、高壓滅菌、變性制食品變性制食品（豆腐：加熱（豆腐：加熱+ +鹽鹵鹽鹵MgClMgCl2 2, ,豆腐腦、老豆腐、嫩豆豆腐腦、老豆腐、嫩豆腐）、腐）、加熱變性使熟食易消化、抗衰老加熱變性使熟食易消化、抗衰老（種子和有（種子和有機(jī)體蛋白質(zhì)緩慢變性，親水性相應(yīng)減弱）機(jī)體蛋白質(zhì)緩慢變性，親水性相應(yīng)減弱） 防止變性防止變性：低溫保存生物制品（酶、疫苗等）：

19、低溫保存生物制品（酶、疫苗等） 取代變性取代變性：解毒劑：解毒劑(生牛奶、豆?jié){、生雞蛋清與生牛奶、豆?jié){、生雞蛋清與重金屬生成不溶性鹽，用于急救重金屬重金屬生成不溶性鹽，用于急救重金屬HgHg2+2+、AgAg2+2+、PbPb2+2+中毒）中毒） 我國(guó)生物化學(xué)的開拓者吳憲吳憲教授蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域內(nèi)國(guó)際上最具有權(quán)威性的綜蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域內(nèi)國(guó)際上最具有權(quán)威性的綜述性叢書述性叢書Advances in Protein Chemistry第第47卷（卷（1995年）發(fā)表了美國(guó)年）發(fā)表了美國(guó)哈佛大學(xué)教授、蛋白質(zhì)研究的老前輩哈佛大學(xué)教授、蛋白質(zhì)研究的老前輩J. T. Eddsall的文章的文章“吳憲與第一個(gè)蛋

20、白質(zhì)變性吳憲與第一個(gè)蛋白質(zhì)變性理論（理論（1931）Hsien Wu and the first Theory of Protein Denaturation(1931)”，對(duì)吳憲教授的學(xué)術(shù)成就給予了極高的評(píng)價(jià)。對(duì)吳憲教授的學(xué)術(shù)成就給予了極高的評(píng)價(jià)。該卷在該卷在1995年還重新刊登了吳憲教授六十年還重新刊登了吳憲教授六十四年前關(guān)于蛋白質(zhì)變性的論文。四年前關(guān)于蛋白質(zhì)變性的論文。一篇在一篇在1931年發(fā)表的論文居然在年發(fā)表的論文居然在1995年仍年仍然值得在第一流的叢書上重新全文刊登，不然值得在第一流的叢書上重新全文刊登，不能不說是國(guó)際科學(xué)界的一件極為罕見的大事。能不說是國(guó)際科學(xué)界的一件極為罕見的

21、大事。蛋白質(zhì)的變性就是從卷曲變到伸展的過程。蛋白質(zhì)的變性就是從卷曲變到伸展的過程。 （3）復(fù)性）復(fù)性：蛋白質(zhì)的變性作用如果不過于劇蛋白質(zhì)的變性作用如果不過于劇烈，則是一種可逆過程，變性蛋白質(zhì)通常在除烈，則是一種可逆過程，變性蛋白質(zhì)通常在除去去變性因素變性因素后，可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來后，可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來的構(gòu)象，恢復(fù)原有的理化性質(zhì)和生物活性，這的構(gòu)象，恢復(fù)原有的理化性質(zhì)和生物活性，這種現(xiàn)象成為種現(xiàn)象成為復(fù)性復(fù)性（renaturationrenaturation）。）。 五、五、 蛋白質(zhì)的紫外吸收特性蛋白質(zhì)的紫外吸收特性測(cè)定范圍：測(cè)定范圍：0.10.5mg/ml蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度蛋白質(zhì)質(zhì)

22、量濃度/（mg/ml）=1.45A2801cm - 0.47A 260 1cm 6、蛋白質(zhì)成蛋白質(zhì)成色反應(yīng)：雙縮尿反應(yīng)，茚三酮反應(yīng)等。色反應(yīng)：雙縮尿反應(yīng)，茚三酮反應(yīng)等。雙縮脲反應(yīng)可檢測(cè)蛋白質(zhì)的水解程度可檢測(cè)蛋白質(zhì)的水解程度 蛋白質(zhì)在堿性溶液中也蛋白質(zhì)在堿性溶液中也能與硫酸銅發(fā)生相同反應(yīng)，能與硫酸銅發(fā)生相同反應(yīng)，產(chǎn)生紅紫色絡(luò)合物（產(chǎn)生紅紫色絡(luò)合物（定性定性測(cè)定確定蛋白質(zhì)測(cè)定確定蛋白質(zhì)）；）；540nm比色，比色，定量測(cè)定蛋定量測(cè)定蛋白質(zhì)。白質(zhì)。紅紫色絡(luò)合物紅紫色絡(luò)合物(堿性溶液堿性溶液)硫酸銅硫酸銅Cu2+尿素180OC 蛋白質(zhì)的分離純化蛋白質(zhì)的分離純化蛋白質(zhì)研究技術(shù)（根據(jù)分子大小分離） （根據(jù)

23、溶解度分離） 等電點(diǎn)沉淀等電點(diǎn)沉淀 （根據(jù)帶有電荷分離） 蛋白質(zhì)、核酸、核糖體、病毒等沉降系數(shù)蛋白質(zhì)、核酸、核糖體、病毒等沉降系數(shù)1 X 10-13200 X 10-13秒之間，為方便，把秒之間，為方便，把10-13秒作為一個(gè)單位稱斯維德貝格或秒作為一個(gè)單位稱斯維德貝格或沉降系數(shù)單位（沉降系數(shù)單位（Svedberg unit）。）。測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)條件：測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)條件：20OC，溶，溶劑為水。劑為水。需需60000-80000rpm離心機(jī)，產(chǎn)生相當(dāng)于地球重力離心機(jī)，產(chǎn)生相當(dāng)于地球重力50-60萬(wàn)倍的萬(wàn)倍的強(qiáng)大離心力，使蛋白質(zhì)顆粒沉降下來。強(qiáng)大離心力，使蛋白質(zhì)顆粒沉降下來。 蛋白質(zhì)的分離純化總結(jié)：蛋白質(zhì)的

24、分離純化總結(jié)：1、透析、超濾、透析、超濾n根據(jù)蛋白質(zhì)性質(zhì)：根據(jù)蛋白質(zhì)性質(zhì)：分子大小分子大小2、鹽析（、鹽析（salting out）n根據(jù)性質(zhì)：蛋白質(zhì)的根據(jù)性質(zhì)：蛋白質(zhì)的溶解度溶解度（沉淀）（沉淀）n作用機(jī)理：中性鹽中和表面電荷，破壞水化層作用機(jī)理：中性鹽中和表面電荷，破壞水化層n影響因素：表面電荷、水化層、溶劑性質(zhì)影響因素：表面電荷、水化層、溶劑性質(zhì) 3、電泳：、電泳：n根據(jù)性質(zhì)：蛋白質(zhì)的根據(jù)性質(zhì)：蛋白質(zhì)的兩性解離兩性解離n作用機(jī)理：異性電荷互相吸引作用機(jī)理：異性電荷互相吸引n影響因素：電荷種類及數(shù)量、分子大小及形狀、影響因素：電荷種類及數(shù)量、分子大小及形狀、溶液離子強(qiáng)度及溶液離子強(qiáng)度及pH等等4、層析、層析（1）離子交換層析：）離子交換層析：電荷、分子量、分子形狀電荷、分子量、分子形狀（2）親和層析：）親和層析：生物特性生物特性（3）吸附層析：）吸附層析：吸附特性吸附特性 （4）分子篩（凝膠過濾層析）：）分子篩（凝膠過濾層析）：分子大小及形狀分子大小及形狀n大分子先洗脫下來大分子先洗脫下來5、超速離心：、超速離心：分子大小及形狀、溶液特性分子大小及形狀、溶液特性 基本策略基本策略： 片段重疊法氨基酸順序直測(cè)法片段重疊法氨基酸順序直測(cè)法 基本步驟：基本步驟：(1) (1) 多肽鏈的分離，測(cè)定蛋白質(zhì)分子中