標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、標(biāo)準(zhǔn)菌株使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 檢驗?zāi)康膶嶒炇业臉?biāo)準(zhǔn)菌株進行合理的保存，并規(guī)范合理的使用流程，保證菌株的性能穩(wěn)定可靠。2 范圍微生物實驗室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。3 職責(zé)微生物組工作人員正確執(zhí)行本操作規(guī)程。4 術(shù)語和定義4.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株其特征進行了分類和描述，有明確的來源。ATCC(AmericanTypeCultureCollection)美國標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏中心。4.2 標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。4.3 工作菌株標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株傳代后得到的同種菌株。4.4 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱。4.5 質(zhì)控菌株ATCC最佳，但當(dāng)無法獲得時可以使用ATCC寅化的菌株或我國國

2、家菌種庫儲存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。特殊情況，例如定性試驗可用已知的菌種作為質(zhì)控菌株。室間質(zhì)評的菌株即可。5 保存程序5.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株5.1.1商業(yè)購買的ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株干粉，-80C低溫保存，可以2年以上。安瓿真空包裝的，-80C可長期穩(wěn)定保存。將標(biāo)準(zhǔn)菌株進行編號和登記。5.1.2 復(fù)蘇用1ml無菌的小牛血清或營養(yǎng)肉湯溶解。根據(jù)菌種的生長特點，接種到新鮮培養(yǎng)基上選擇適宜的培養(yǎng)條件培養(yǎng)18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2 標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株5.2.1由復(fù)蘇后的ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株制備。復(fù)蘇后的標(biāo)準(zhǔn)菌株要檢查其純度，必要時進行生化試驗檢查。刮取培養(yǎng)物上的菌體，用足量的菌懸浮于防凍培養(yǎng)基中。

3、防凍液可以是無菌脫纖維羊血、10%甘油肉湯。儲存足夠量的標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。5.2.2 甘油肉湯保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化鈉、甘油、純化木。相當(dāng)于20%的甘油。挑取5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯中混勻?？琉B(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。-80C保存。除鏈球菌和嗜血桿菌以外細(xì)菌均可使用。保存期限1-5年。5.2.3 全血保存法成分為脫纖維羊血。挑取5環(huán)菌落加入到1ml甘油肉湯中混勻?？琉B(yǎng)菌可以適當(dāng)增加菌量。-80C保存。主要用于保存鏈球菌、嗜血桿菌及厭氧菌。保存期限1-5年。5.2.4 標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株進行編號和登記。5.3 工作標(biāo)準(zhǔn)菌株由標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株傳代得到的菌株。

4、標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株對多向下傳三代。過多的傳種會增加變異的機會。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株根據(jù)菌種特點選擇適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)18-24h即工作標(biāo)準(zhǔn)菌株。儲存在2-8C,可放四周。個別營養(yǎng)要求高的為2周，例如肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。使用時應(yīng)編號并登記。5.4編號方法每個菌的保存管都要有唯一的編號，簽字筆標(biāo)注，便于查找和管理。來源數(shù)字意義購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株1501ATCC2592215年第1株ATCC25922儲備標(biāo)準(zhǔn)菌株1501ATCC25922-3由1501ATCC25922傳代而來的3號標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株5.5記錄管理5.5.1菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記。每個編號都要有詳細(xì)的記錄包括來源、傳代、保存方法、使用記錄、使用原

5、因、高壓滅菌記錄等。附表標(biāo)準(zhǔn)菌株記錄表標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株記錄表5.5.2菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，保存于專用冰箱中，雙人雙鎖，確保菌種安全。保管人員變動時，必須嚴(yán)格交接手續(xù)。5.5.3各種菌種應(yīng)按規(guī)定時間接種，注意菌種有無污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時，應(yīng)及時更換5.5.4 一個使用周期結(jié)束后，標(biāo)準(zhǔn)菌株、儲備菌株、工作菌株都要進行高壓滅菌處理，并做好記錄。6使用流程購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株（可追溯來源，衛(wèi)生部室間質(zhì)評菌株可作為質(zhì)控菌株使用，按照標(biāo)準(zhǔn)菌株管理）接種傳代培養(yǎng)一次，并進行/純度和生化鑒定1r每天傳代平板作為第二天的工作標(biāo)準(zhǔn)菌株，進1-行室內(nèi)質(zhì)控，用完立刻高壓處理<<2代室內(nèi)質(zhì)控可以再重復(fù)一周，規(guī)則同上。但一般來說工作菌株不能超過3代作為“儲存標(biāo)準(zhǔn)菌株”進行多個分裝保存，按照特定條件儲存和推薦的儲存時間進行純度檢查和生化鑒定。作為傳代物或者第一支“工作菌株”特定的儲存條件和推薦儲存時間7質(zhì)量控制7.1觀察菌落的典型形態(tài)是否符合菌種。有沒有雜菌生長。7.2用氧化酶、觸酶、上機等生化試驗，鑒定菌種有沒有變化。7.3如果有污染或懷疑有問題時，應(yīng)準(zhǔn)備新的首次傳代物或者獲取新的標(biāo)準(zhǔn)菌株。8參考文獻序號唯一性編號文獻名稱9.1ISBN978-7-117-19862-2/R19863全國臨床檢驗操作規(guī)程第四版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R395臨床微生物學(xué)診