Eppendorfplus移液槍校準(zhǔn)方法要點(diǎn)

1、Eppendorf plus 移液槍校準(zhǔn)方法1、準(zhǔn)備超純水、萬(wàn)分之一天平（如果校正0.52.5ul 量程的，至少要十萬(wàn)分之一的天平）、溫濕度計(jì)、恒溫室，還需準(zhǔn)備一個(gè)小口容器，防止水分揮發(fā)。2、按移液器總量程的100% 、 50% 、 10% 分別進(jìn)行第三和第四步。3、吸頭要反復(fù)吸取超純水三次后，吸取固定容積的超純水，推入放置在天平上的小口容器中，待數(shù)據(jù)穩(wěn)定讀取天平數(shù)值，同時(shí)記錄溫度。重復(fù)10 次。4、將測(cè)量的數(shù)據(jù)用iso8655 中的計(jì)算公式計(jì)算獲得對(duì)應(yīng)溫度下的體積，取平均值。5、根據(jù)三個(gè)測(cè)量點(diǎn)的偏差，用移液器專用的校正扳手通過(guò)移液器的校正窗進(jìn)行調(diào)整。6、重復(fù)3、 4 步，直至偏差在ISO86

2、55 的要求內(nèi)為止。ISO 8655-1-2002 活塞式容量測(cè)量?jī)x器.第1 部分 :術(shù)語(yǔ)、一般要求和用戶使用建議ISO 8655-2-2002 活塞式容量測(cè)量?jī)x器. 第 2 部分 : 活塞式吸量管ISO 8655-6-2002 活塞式容量測(cè)量?jī)x器. 第 6 部分 : 確定測(cè)量誤差的重量分析法 三、校準(zhǔn)方法及步驟操作環(huán)境：溫度應(yīng)控制在15-30 ，恒定在±0.5，相對(duì)濕度50%-80% ，要保持較高的空氣濕度以減少水分蒸發(fā)對(duì)結(jié)果造成的影響。建議使用防蒸發(fā)裝置。測(cè)試應(yīng)在獨(dú)立無(wú)通風(fēng)的房間內(nèi)進(jìn)行，并配備溫度和濕度顯示。所需設(shè)備：1 、分析天平一臺(tái)。確保室內(nèi)空氣流動(dòng)平緩，應(yīng)避免天平正對(duì)空調(diào)出

3、風(fēng)口。根據(jù)所測(cè)試的移液器的容量來(lái)選擇適合的天平：移液器容量范圍天平可讀性天平的重復(fù)性和線性測(cè)量不準(zhǔn)確度1 l10 l0.001mg0.002mg 0.002mg10100 l0.01mg0.02mg 0.02mg>100 l0.1mg0.2mg 0.2mg2、純水、三蒸水或去離子水，需達(dá)到ISO 3696 三級(jí)水的標(biāo)準(zhǔn)。3、獨(dú)立工作間，配備防震、防塵、遠(yuǎn)離熱源、無(wú)陽(yáng)光直射的操作臺(tái)。4、溫度計(jì)、濕度計(jì)。校準(zhǔn)操作：為確保校準(zhǔn)的準(zhǔn)確性，采用三點(diǎn)移液十次，具體步驟如下：1 、同溫處理，將移液器、吸頭、天平、測(cè)試用水、操作臺(tái)等校準(zhǔn)用具放置在同一工作間內(nèi)，至少四小時(shí)。2、在正式操作前，先預(yù)洗吸頭，吸

4、排測(cè)試用水5 次。3、用最大體積、50%最大體積和最小體積（或10%最大體積），各移液10 次，記錄每次移液的質(zhì)量。4、計(jì)算每組數(shù)據(jù)的平均值，代入計(jì)算公式，計(jì)算出不準(zhǔn)確度與不精確度。5、對(duì)比可允許的最大誤差限度，根據(jù)實(shí)際需要確定進(jìn)行調(diào)整。附：相關(guān)計(jì)算公式質(zhì)量體積轉(zhuǎn)換公式 1 ： V=（w+e） × Z式中： V= 體積（l）w= 質(zhì)量（ mg ）e= 蒸發(fā)損失（mg ）Z 轉(zhuǎn)換因子以上公式參考ISO 8655 標(biāo)準(zhǔn)。蒸發(fā)損失對(duì)測(cè)量小體積液體影響較大，因此應(yīng)將蒸發(fā)損失計(jì)算在內(nèi)。方法：在稱過(guò)重的容器中注入定量清水，按下秒表觀察30 秒，讀出損失量，然后算出每秒的損失量。（若30s 內(nèi)質(zhì)量

5、損失3mg ，則損失量為3mg ÷30s=0.1mg/s ）。記錄移液時(shí)間，將移液時(shí)間乘以每秒損失量，算出實(shí)際蒸發(fā)損失量，代入上述公式計(jì)算實(shí)際體積。若使用防蒸發(fā)裝置，通?？梢院雎哉舭l(fā)損失量。不同溫度、壓力下水的質(zhì)量和體積不同，具體轉(zhuǎn)換因子Z 值請(qǐng)查看附錄1 。公式 2： V20 =m × K（t）式中：V20= 標(biāo)準(zhǔn)溫度20下實(shí)際體積（l）m= 質(zhì)量（ mg ）K（t） 值以上公式參考JJG 646-2006 移液器檢定規(guī)程。根據(jù)天平測(cè)試蒸餾水的質(zhì)量，以及檢測(cè)時(shí)溫度所對(duì)應(yīng)的K（t） 值， 即可計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)溫度下蒸餾水的實(shí)際體積。具體K（t）值請(qǐng)查看附表2。計(jì)算式時(shí)，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際

6、需要，選擇公式進(jìn)行計(jì)算。不準(zhǔn)確度（系統(tǒng)誤差）不準(zhǔn)確度是指實(shí)際移取體積和顯示體積的差異。A=- V 0式中： A= 不準(zhǔn)確度= 平均值V0 = 標(biāo)稱容量A%=100% × A/V 0不精確度（隨機(jī)誤差）不精確度指每次實(shí)際移取體積與實(shí)際體積平均值的差異，其變化是不可預(yù)計(jì)的測(cè)量誤差的一部分。它可以表示為標(biāo)準(zhǔn)差S 或變異系數(shù)CV：式中：S = 標(biāo)準(zhǔn)偏差 = 平均值 n = 測(cè)量次數(shù)Vi = 單次測(cè)量數(shù)值CV=100% × S附表 1 ：轉(zhuǎn)換因子Z（ l/mg） 數(shù)值表（無(wú)菌水）溫度氣壓（KPa ）1KPa=10hPa（）80859095100101.310515.001.00171

7、.00181.00191.00191.00201.00201.002015.501.00181.00191.00191.00201.00201.00201.002116.001.00191.00201.00201.00211.00211.00211.002216.501.00201.00201.00211.00211.00221.00221.002217.001.00211.00211.00221.00221.00231.00231.002317.501.00221.00221.00231.00231.00241.00241.002418.001.00221.00231.00231.00241

8、.00251.00251.002518.501.00231.00241.00241.00251.00251.00261.002619.001.00241.00251.00251.00261.00261.00271.002719.501.00251.00261.00261.00271.00271.00281.002820.001.00261.00271.00271.00281.00281.00291.002920.501.00271.00281.00281.00291.00291.00301.003021.001.00281.00291.00291.00301.00311.00311.00312

9、1.501.00301.00301.00311.00311.00321.00321.003222.001.00311.00311.00321.00321.00331.00331.003322.501.00321.00321.00331.00331.00341.00341.003423.001.00331.00331.00341.00341.00351.00351.003623.501.00341.00351.00351.00361.00361.00361.003724.001.00351.00361.00361.00371.00371.00381.003824.501.00371.00371.

10、00381.00381.00391.00391.003925.001.00381.00381.00391.00391.00401.00401.004025.501.00391.00401.00401.00411.00411.00411.004226.001.00401.00411.00411.00421.00421.00431.004326.501.00421.00421.00431.00431.00441.00441.004427.001.00431.00441.00441.00451.00451.00451.004627.501.00451.00451.00461.00461.00471.

11、00471.004728.001.00461.00461.00471.00471.00481.00481.004828.501.00471.00481.00481.00491.00491.00501.005029.001.00491.00491.00501.00501.00511.00511.005129.501.00501.00511.00511.00521.00521.00521.005330.001.00521.00521.00531.00531.00541.00541.0054附表 2： K( t)值表( =0.00045/ )水溫K(t)水溫K(t)水溫K(t)cm 3/gcm 3/

12、gcm 3/g15.01.00421318.41.00326121.81.00243615.11.00418318.51.00323521.91.00241415.21.00415318.61.00320922.01.00239115.31.00412318.71.00318422.11.00236915.41.00409418.81.00315822.21.00234715.51.00406418.91.00313222.31.00232515.61.00403519.01.00310722.41.00230315.71.00400619.11.00308222.51.00228115.81

13、.00397719.21.00305622.61.00225915.91.00394819.31.00303122.71.00223816.01.00391919.41.00300622.81.00221616.11.00389019.51.00298122.91.00219516.21.00386219.61.00295623.01.00217316.31.00383319.71.00293123.11.00215216.41.00380519.81.00290723.21.00213116.51.00377719.91.00288223.31.00211016.61.00374920.01

14、.00285823.41.00208916.71.00372120.11.00283423.51.00206816.81.00369320.21.00280923.61.00204716.91.00366520.31.00278523.71.00202617.01.00363720.41.00276123.81.00200617.11.00361020.51.00273723.91.00198517.21.00358220.61.00271424.01.00196517.31.00355520.71.00269024.11.00194517.41.00352820.81.00266624.21

15、.00192417.51.00350120.91.00264324.31.00190417.61.00347421.01.00261924.41.00188417.71.00344721.11.00259624.51.00186417.81.00342021.21.00257324.61.00184517.91.00339321.31.00255024.71.00182518.01.00336721.41.00252724.81.00180518.11.00334021.51.00250424.91.00178618.21.00331421.61.00248125.01.00176618.31

16、.00328821.71.002459附表 3：移液器容量允許誤差和測(cè)量重復(fù)性簡(jiǎn)表JJG-646ISO 8655檢定點(diǎn)系統(tǒng)誤差 （容量允差）隨機(jī)誤差 （重復(fù)性）標(biāo)稱容量系統(tǒng)誤差 （容量允差）隨機(jī)誤差 （重復(fù)性）l±（% ）（%）l±（%）（% ）0.120.010.00.220.010.00.520.010.0112.06.015.05.0212.06.024.02.058.04.052.51.5108.04.0101.20.8204.02.0201.00.5254.02.0403.01.5503.01.5501.00.41002.01.01000.80.31252.01.

17、01502.01.02001.51.02000.80.32501.51.03001.51.05001.00.55000.80.310001.00.510000.80.312501.00.520000.80.325000.50.250000.60.250000.80.3100000.60.2100000.60.3注：標(biāo)稱容量為制造商在移液器上標(biāo)注的可使用的最大容量，如量程范圍是50-1200 l，其標(biāo)稱容量為1200 l。 JJG-646 中，同一個(gè)檢定點(diǎn)在不同的量程范圍，容量允差、重復(fù)性要求一致，即無(wú)論是1-10 l 的移液器還是10-100 l 的移液器，10l 這一檢定點(diǎn)容量允差都為 8%

18、 ，重復(fù)性都為4% 。 ISO 8655 中，所有有效量程點(diǎn)的容量允差、重復(fù)性都與標(biāo)稱容量的一致，即10-100 l 的移液器，10l、 20l、 50l、 100l，其容量允差要求都為0.8%，重復(fù)性都為0.3% 。四、維護(hù)保養(yǎng)1 清潔和消毒為確保移液器的準(zhǔn)確度和精確度，應(yīng)根據(jù)具體使用情況進(jìn)行定期保養(yǎng)。尤其在移取腐蝕性溶劑后，應(yīng)該對(duì)移液器進(jìn)行清潔。通過(guò)簡(jiǎn)單的清潔和保養(yǎng)，可適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)移液器的使用壽命。注意：在清潔或消毒前，請(qǐng)務(wù)必將電池取出。 外部清洗方法：根據(jù)使用情況，可以用沾有70% 乙醇或60 異丙醇的濕棉布拭擦移液器表面，去除外部污垢，再用雙蒸水拭擦一遍，然后晾干。每天開(kāi)始工作前，檢查移

19、液器外表是否有灰塵或污垢，尤其是吸頭連桿部分。 內(nèi)部清洗清潔步驟：1 、按照步驟拆卸需要清潔的部件。2、外套柄、吸頭連桿用沾有70% 乙醇或 60 異丙醇的濕棉布拭擦，再用雙蒸水淋洗，然后晾干。3、一般情況，O 型圈、活塞無(wú)需清潔。如沾有固體顆狀物，請(qǐng)用干凈的干棉布輕輕拭去即可。4、給O 型圈、活塞上潤(rùn)滑脂，只需涂上薄薄一層即可。5、按步驟組裝好移液器。 消毒移液器清潔干凈后，在121 ,1bar 下，消毒20 分鐘。消毒后在室溫下冷卻至少 2 個(gè)小時(shí)后方可使用。部分手動(dòng)移液器可整支消毒，電動(dòng)移液器只可以下端消毒，請(qǐng)根據(jù)產(chǎn)品的具體情況進(jìn)行消毒。整支在紫外線下進(jìn)行消毒滅菌，無(wú)需拆卸。2 日常維護(hù)

20、 針對(duì)不同性質(zhì)的液體，有不同的清洗和保養(yǎng)方法，見(jiàn)下表：處理液體預(yù)防方法清洗和保養(yǎng)方法水溶液和緩沖液拆卸移液器下端，用雙蒸水沖洗受污染的部件，在60 以下干燥或者自然晾干，并給活塞涂抹少量潤(rùn)滑脂無(wú)機(jī)酸或堿= 使用帶有濾芯的吸頭移液結(jié)束后，將移液器下端拆下，并放在通風(fēng)處。必要時(shí)可用雙蒸水沖洗受污染的部件，在 60 以下干燥或者自然晾干，并給活塞涂抹少量潤(rùn)滑脂傳染性 液體= 使用帶有濾芯的吸頭= 正向移液將移液器下端拆下，放在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的消毒劑中浸泡30分鐘，隨后用雙蒸水清洗，對(duì)受污染的部件進(jìn)行121 、1bar 、 20 分鐘高壓滅菌細(xì)胞培 養(yǎng)物= 使用帶有濾芯的吸頭將移液器下端拆下，放在實(shí)驗(yàn)室常

21、規(guī)的消毒劑中浸泡30分鐘，隨后用雙蒸水清洗，對(duì)受污染的部件進(jìn)行121 、1bar 、 20 分鐘高壓滅菌有機(jī)溶劑= 快速移液移液結(jié)束后，將移液器下端拆下，并放在通風(fēng)處。必要時(shí)可用雙蒸水沖洗受污染的部件，在 60 以下干燥或者自然晾干，并給活塞涂抹少量潤(rùn)滑脂放射性 溶液= 使用帶有濾芯的吸頭= 正向移液將移液器下端拆下，將受污染部件放在復(fù)合溶液或?qū)Ｓ玫那鍧嵢芤褐薪?0 分鐘后，用雙蒸水清洗，在60 下烘干或自然晾干，并給活塞涂抹少量潤(rùn)滑脂核酸或蛋白質(zhì)溶液= 使用帶有濾芯的吸頭= 正向移液核酸：在氨基乙酸或鹽酸緩沖液(pH2.0) 中煮沸10 分鐘，用雙蒸水清洗干凈，在60 下烘干或自然晾干，并給活塞涂抹少量潤(rùn)滑脂蛋白質(zhì)：將移液器下端拆下，用去污劑清洗，再用雙蒸水淋洗，在60 下烘干或自然晾干故障排除現(xiàn)象原因解決方法活塞運(yùn)動(dòng)異常= 活塞安裝過(guò)緊= 活塞潤(rùn)滑不充分= 活塞表面潤(rùn)滑脂凝固= 活塞表面有異物或損壞= 在活塞、O 型圈和吸頭連桿之間有雜質(zhì)和顆粒=O 型圈損壞拆開(kāi)下端，重新組裝給活塞上潤(rùn)滑脂清除舊潤(rùn)滑脂，上新潤(rùn)滑脂清潔活塞或更換活塞清潔并潤(rùn)滑 O 型圈和吸頭連桿更換 O 型圈移液體積不準(zhǔn)確 或漏液= 吸頭安裝不當(dāng)= 吸頭不匹配= 在吸頭與吸頭連桿之間有雜質(zhì)顆粒= 吸頭損壞= 移液過(guò)快= 吸頭離開(kāi)液面過(guò)快= 活塞表面有異物或損壞