食品毒理學(xué)第六章化學(xué)毒物的一般毒性作用

1、食品毒理學(xué)第六章化學(xué)毒物的一般毒性作用目的要求n掌握一般毒性作用的概念、試驗?zāi)康膎熟悉一般毒性試驗方法要點n熟悉蓄積毒作用的概念n了解蓄積毒作用研究方法5/4/20222一般毒性作用（基礎(chǔ)毒性作用）n外來化合物在一定劑量、一定接觸時間和接觸方式下對實驗動物產(chǎn)生綜合毒效應(yīng)綜合毒效應(yīng)稱為一般毒性作用（general toxicity) 或基礎(chǔ)毒性作用（basic toxicity) .5/4/20223 一般毒性作用分為急性毒性、亞慢性毒性和慢性毒性。 防治急慢性中毒； 安全性評價和危險度評定;制訂衛(wèi)生標準；管理毒理學(xué)的決策5/4/20224一般毒性作用的類型一般毒性測試一般毒性測試 了解毒性大小

2、特征了解毒性大小特征 了解污染物理化特征了解污染物理化特征 了解在體內(nèi)蓄積和耐受性了解在體內(nèi)蓄積和耐受性 了解對機體毒作用靶點和指標了解對機體毒作用靶點和指標 確定閾值和閾下劑量確定閾值和閾下劑量 急性毒性試驗急性毒性試驗急性致死試驗急性致死試驗急性非致死試驗急性非致死試驗 蓄積毒性試驗蓄積毒性試驗 亞急性毒性試驗亞急性毒性試驗亞慢性毒性試驗亞慢性毒性試驗 慢性毒性試驗慢性毒性試驗 （3個月）個月）（36個月）個月）（6個月至終身）個月至終身）5/4/202251 急性毒性作用急性毒性作用(acute toxicity)n一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n二、急

3、性毒性試驗二、急性毒性試驗n三、急性毒性分級三、急性毒性分級5/4/20226一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)是指機體是指機體( (人或試人或試驗動物驗動物) )一次接觸或一次接觸或2424小時內(nèi)多次接觸小時內(nèi)多次接觸化學(xué)物后在化學(xué)物后在短期短期( (最長到最長到1414天天) )內(nèi)所發(fā)生的內(nèi)所發(fā)生的毒性效應(yīng)毒性效應(yīng)，包括，包括一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應(yīng)。應(yīng)。n最主要觀察指標是最主要觀察指標是LDLD5050。5/4/20

4、227一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n目的目的測試和求出化學(xué)毒物對一種或幾種試驗動物的測試和求出化學(xué)毒物對一種或幾種試驗動物的致死量致死量( (以以LDLD5050表示表示) )以及其它的急性毒性參數(shù)，了解以及其它的急性毒性參數(shù)，了解急性毒作用強度急性毒作用強度。并通過并通過觀察動物中毒表現(xiàn)和死亡觀察動物中毒表現(xiàn)和死亡的情況，了解急性毒作用性質(zhì)、的情況，了解急性毒作用性質(zhì)、可能的靶器官和致死原因，提供化學(xué)毒物的急性中毒資料、初步評可能的靶器官和致死原因，提供化學(xué)毒物的急性中毒資料、初步評價對人體產(chǎn)生損害的危險性。價對人體產(chǎn)生損害的危險性。探求化學(xué)毒物急性毒性的

5、探求化學(xué)毒物急性毒性的劑量劑量反應(yīng)反應(yīng)關(guān)系與中毒特征。關(guān)系與中毒特征。為為亞慢性、慢性毒性作用試驗的染毒劑量亞慢性、慢性毒性作用試驗的染毒劑量設(shè)計提供參考依據(jù)。設(shè)計提供參考依據(jù)。研究化學(xué)毒物研究化學(xué)毒物急性中毒的預(yù)防急性中毒的預(yù)防和和急救治療措施急救治療措施。為毒理學(xué)機制研究提供線索為毒理學(xué)機制研究提供線索 。 5/4/20228一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n急性毒性試驗常用的毒性參數(shù)：急性毒性試驗常用的毒性參數(shù)：LD50/LC50Zac （LD50/Limac） LD84/LD16(或或LC84LC16) 劑量劑量反應(yīng)曲線斜率反應(yīng)曲線斜率 5/4/2022

6、9二、急性毒性試驗方法的要點二、急性毒性試驗方法的要點n( (一一) )試驗動物試驗動物 原則原則 ：n急性毒性試驗要求選擇對化學(xué)毒物的代謝和毒效急性毒性試驗要求選擇對化學(xué)毒物的代謝和毒效應(yīng)表現(xiàn)與人的反應(yīng)盡可能一致的試驗動物。應(yīng)表現(xiàn)與人的反應(yīng)盡可能一致的試驗動物。n動物易于獲得動物易于獲得n品系純化品系純化n價格較低和易于飼養(yǎng)等條件。價格較低和易于飼養(yǎng)等條件。 5/4/202210二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n1 1試驗動物的種屬和品系試驗動物的種屬和品系最好用兩種種屬的動物最好用兩種種屬的動物嚙齒類嚙齒類: :小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非嚙齒類：非嚙齒類：狗或猴狗或猴。

7、急性皮膚毒性試驗可選用成年大鼠、豚鼠或家兔，優(yōu)先考慮白急性皮膚毒性試驗可選用成年大鼠、豚鼠或家兔，優(yōu)先考慮白色家兔。而急性吸入毒性試驗和經(jīng)口急性毒性試驗則優(yōu)先考慮色家兔。而急性吸入毒性試驗和經(jīng)口急性毒性試驗則優(yōu)先考慮大鼠。大鼠。5/4/202211二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n試驗動物的年齡和體重：試驗動物的年齡和體重：急性試驗動物不宜過老或過幼，通常要求選擇急性試驗動物不宜過老或過幼，通常要求選擇剛成年動物進行試驗，而且須是未曾交配和受剛成年動物進行試驗，而且須是未曾交配和受孕的動物。例如：大鼠孕的動物。例如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2

8、 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批試驗動物體重變異范圍不應(yīng)超過同一批試驗動物體重變異范圍不應(yīng)超過該批動物平均體重的該批動物平均體重的2020。 5/4/202212二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n3.3.試驗動物的性別：試驗動物的性別： 雌雄各半；雌雄各半； 如雌、雄動物毒效應(yīng)有明顯差異，應(yīng)分別如雌、雄動物毒效應(yīng)有明顯差異，應(yīng)分別并求出雌性和雄性動物的并求出雌性和雄性動物的LDLD5050值；值； 特殊的試驗研究可僅作單一性別的急特殊的試驗研究可僅作單一性別的急性毒性試驗。性毒性試驗。 5/4/202213二、急性毒性試驗

9、二、急性毒性試驗n4.動物數(shù)量與隨機分組：動物數(shù)量與隨機分組：實驗方法不同采用的動物的數(shù)量不同實驗方法不同采用的動物的數(shù)量不同分組原則分組原則隨機化、均衡性的原則隨機化、均衡性的原則n5.禁食：禁食：經(jīng)消化道染毒時，要求試驗前對動物禁食經(jīng)消化道染毒時，要求試驗前對動物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜進食；染毒后禁食隔夜進食；染毒后禁食4h大動物大動物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后繼續(xù)禁食染毒后繼續(xù)禁食24h，但在禁食時要保障飲水。，但在禁食時要保障飲水。n6.實驗動物的預(yù)檢：實驗動物的預(yù)檢：選擇健康動物選擇健康動物12周的檢疫期周的檢疫期5/4/202214（二）受試物及處理 常用劑型

10、為水溶液、混懸液、油溶液 水溶性受試物，胃腸道外染毒需用生理鹽水，保持與體內(nèi)滲透壓一致。 水不溶性受試物，溶于或懸浮于適當?shù)挠袡C溶劑中。 受試物一般應(yīng)臨用前新配 5/4/202215適宜容積染毒 經(jīng)口：20ml/kg(空腹動物)； 經(jīng)皮：2ml/kg； 靜脈：1ml/kg(5min以上)； 肌肉注射：0.5ml/kg(一個部位)； 眼睛：0.01ml/每眼； 直腸：0.5ml/kg； 陰道：大鼠0.2ml，兔lml； 吸入：2mg/L； 鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。5/4/202216二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗 （二）試驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境（二）試驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境恒定的溫度：恒定的溫度：22

11、3濕度：濕度：3070%照度：晝夜各半照度：晝夜各半飼料合格、飲水合格、墊料合格飼料合格、飲水合格、墊料合格5/4/202217二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（三）染毒途徑的選擇（三）染毒途徑的選擇: 染毒途徑（染毒途徑（exposure routes）的選擇需考慮：）的選擇需考慮：模模擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實際接觸受試物的擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實際接觸受試物的途徑和方式途徑和方式；有利于不同化學(xué)物之間急性毒性大有利于不同化學(xué)物之間急性毒性大小的比較小的比較；受試物的性質(zhì)和用途；各種受試物受試物的性質(zhì)和用途；各種受試物毒性評價程序的要求等。毒性評價程序的要求等。 最常用的染毒途徑為最常用的染

12、毒途徑為經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑。射途徑。 5/4/202218染毒途徑影響受試物急性毒性 靜脈注射吸入肌肉注射腹腔注射皮下注射經(jīng)口皮內(nèi)注射經(jīng)皮。 同一受試物不同染毒途徑LD50的大小通常符合上述規(guī)律。5/4/202219二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n經(jīng)口經(jīng)口( (胃腸道胃腸道) )接觸接觸 : 灌胃灌胃: :小鼠0.21.0ml/只或0.10.5ml/10g 大鼠一次灌胃體積不超過5ml/只 家兔不超過10ml/2kg 狗不超過50ml/10kg 與飼料或飲用水混合：與飼料或飲用水混合： 吞咽膠囊吞咽膠囊: : n經(jīng)呼吸道接觸經(jīng)呼吸道接觸 : 靜式吸入靜式吸

13、入 動式吸入動式吸入 n經(jīng)皮膚接觸經(jīng)皮膚接觸 :n注射途徑接觸注射途徑接觸: : 5/4/202220二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組: 1 1查閱文獻查閱文獻n參考新化學(xué)物的理化性質(zhì)參考新化學(xué)物的理化性質(zhì)了解化學(xué)毒物的結(jié)構(gòu)式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、熔點、沸點、密度、閃點、揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特性，生產(chǎn)批號及純度，雜質(zhì)成分與含量等。n確定使用哪一種計算方法求確定使用哪一種計算方法求LDLD5050，然后再設(shè)計劑量分組。，然后再設(shè)計劑量分組。LDLD5050的計算方法常的計算方法常用用寇氏法寇氏法、概率單位法概率單位法、霍恩氏法霍恩氏

14、法等。等。根據(jù)試驗所選的根據(jù)試驗所選的LD50LD50計算方法確定劑量組數(shù)。一般設(shè)計算方法確定劑量組數(shù)。一般設(shè)5-85-8個劑量組；霍恩氏法設(shè)個劑量組；霍恩氏法設(shè)4 4個劑量組。個劑量組。 n找出與受試化學(xué)毒物結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)近似的化學(xué)物的毒性資料，并以文找出與受試化學(xué)毒物結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)近似的化學(xué)物的毒性資料，并以文獻資料中相同的動物種系和相同接觸途徑所測得的獻資料中相同的動物種系和相同接觸途徑所測得的LDLD5050(LC(LC5050) )值作為受試值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性中值?；瘜W(xué)物的預(yù)期毒性中值。 5/4/202221二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量

15、與分組:2 2預(yù)試驗預(yù)試驗 目的：目的：n1 1）得到死亡率在）得到死亡率在10%90%10%90%之間的致死劑量范圍之間的致死劑量范圍 n2 2）計算正式試驗的組距或公比）計算正式試驗的組距或公比5/4/2022221 1）等比劑量設(shè)計（寇氏法）等比劑量設(shè)計（寇氏法）一般設(shè)一般設(shè)5757組，各組間采用一定的公比設(shè)計劑組，各組間采用一定的公比設(shè)計劑量量公比公比r=4r=4，則組距，則組距i=lg4=0.6i=lg4=0.6例如待測化合物預(yù)期例如待測化合物預(yù)期LDLD5050為為40mg/kg40mg/kg，以此為中，以此為中間劑量組，以間劑量組，以4 4為公比，或為公比，或0.60.6組距向上

16、、下個組距向上、下個推兩個劑量組。推兩個劑量組。5/4/202223某化合物的急性毒性預(yù)試驗劑量設(shè)計組別劑量對數(shù)值12.51.6021-0.6*2210.01.6021-0.6340.01.60214160.01.6021+0.65640.01.6021+0.6*25/4/2022242 2預(yù)試驗預(yù)試驗n2）33 法取9只動物，分為3組，每組3 只，以3種不同劑量處理。組距一般r=10,如10mg/kg ,100mg/kg, 1000mg/kg結(jié)果分析：n（1）3組均無死亡，說明劑量偏低，劑量可上移增大；n（2）3組全部死亡，說明劑量偏高，劑量可下移減?。籲（3）第一組未死，2、3組全部死亡劑

17、量在12組間；而1、2組未死，第3組死亡，大致致死劑量在1001000mg/kg間5/4/2022252 2預(yù)試驗預(yù)試驗n3）序貫法設(shè)計一系列等比劑量，將動物一只一只序貫進行。特點：快速、簡便、節(jié)約動物5/4/202226正式試驗的劑量設(shè)計n可根據(jù)以下公式計算出劑量可根據(jù)以下公式計算出劑量組距組距： i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010) )(n-1) (n-1) 或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0) )(n-1)(n-1)式中式中i i為組距為組距( (相鄰的兩個劑量組對數(shù)劑量之差相鄰的兩個劑量組對數(shù)劑量之差) )； n n

18、為設(shè)計的劑量組數(shù)。為設(shè)計的劑量組數(shù)。 r=lgr=lg-1-1(lgb-lga)/(n-1)(lgb-lga)/(n-1)式中：式中：b b最高組劑量，最高組劑量，a a最低組劑量，最低組劑量，n n為設(shè)計的為設(shè)計的劑量組數(shù)，劑量組數(shù)，n正式試驗分組：a,ar,ar2,ar3,ar45/4/202227LD50計算nlgLD50=Xm-i(p-0.5)式中：Xm最高劑量對數(shù) i組距，或公比的對數(shù)值 p各組死亡率的總和nLD50標準誤差SlgLD50nSlgLD50=i pq/n式中：p各實驗組死亡率；q各實驗組存活率 i組距 n試驗動物組數(shù)nLD5095% 可信限= lg-1(lgLD501.

19、96 SlgLD50)5/4/202228例題：小鼠腹腔注射敵百蟲的急毒及LD50計算n預(yù)試：致死率在0100% 的劑量范圍在300600mg/kg.nr=5-1600/300=1.2n各組劑量：300，3001.2=360；3001.22=432；3001.23=518，3001.24=6225/4/202229試驗結(jié)果組別劑量只數(shù)死亡數(shù)（只）死亡率/p存活率/q130010001.023601020.20.834321050.50.545181070.70.3562210101.005/4/202230解：nlgLD50=Xm-i (p-0.5)nXm=lg622=2.7933ni=lg1

20、.2=0.0792np=2.4nlgLD50=2.7933-0.0792（2.4-0.5）=2.6433nLD50=lg-12.6433=439.87mg/kgnSlgLD50=i pq/n=0.0792 =0.0197LD5095% 可信限=lg(6.64331.96 0.0197) =402.44480.73mg/kg5/4/202231霍恩氏法（horn) n特點：方法簡單，使用動物少，每組動物數(shù)相等，可用4只或5只。n劑量1：2.15倍組距劑量系列n劑量2 ：3.16倍組距劑量系列5/4/202232二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察1

21、.中毒癥狀中毒癥狀5/4/202233二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察（五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察: 2.體重體重n在觀察試驗動物中毒癥狀的過程中，應(yīng)同時觀察體在觀察試驗動物中毒癥狀的過程中，應(yīng)同時觀察體重的變化。重的變化。體重可以反映動物中毒后的整體變化體重可以反映動物中毒后的整體變化n原因：原因：若化學(xué)毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗動物飲食減少若化學(xué)毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗動物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。若化學(xué)毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也若化學(xué)毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也會減輕。會減輕。如果化學(xué)毒物

22、影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能如果化學(xué)毒物影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能在體重上反映出來。在體重上反映出來。n所以，對存活動物尤其是對低于所以，對存活動物尤其是對低于LDLD5050劑量組的存活劑量組的存活動物應(yīng)在觀察期動物應(yīng)在觀察期1414天內(nèi)稱量其體重的變化以便天內(nèi)稱量其體重的變化以便了解受試物引起毒效應(yīng)的持續(xù)時間。了解受試物引起毒效應(yīng)的持續(xù)時間。 5/4/202234二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察（五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察:3.3.病理檢查及其他指標病理檢查及其他指標: :n對對死亡的動物死亡的動物均應(yīng)及時進行大體解剖和病理組織學(xué)均應(yīng)及時進行大體

23、解剖和病理組織學(xué)檢查，檢查，肉眼觀察主要臟器的大體病理變化，肉眼觀察主要臟器的大體病理變化，如臟器如臟器大小、外觀、色澤的變化，有無充血、出血、水腫大小、外觀、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其它改變，對有改變的臟器進行取材做組織病理或其它改變，對有改變的臟器進行取材做組織病理學(xué)檢查。學(xué)檢查。n對對存活動物存活動物在觀察期結(jié)束時進行大體病理檢查必在觀察期結(jié)束時進行大體病理檢查必要時做組織病理學(xué)檢查。根據(jù)試驗需要可進一步擴要時做組織病理學(xué)檢查。根據(jù)試驗需要可進一步擴大觀察項目如體溫、心電圖、腦電圖或進行某些大觀察項目如體溫、心電圖、腦電圖或進行某些生化指標測定等。生化指標測定等。5/4/202

24、235二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察五）試驗周期與毒效應(yīng)觀察4.死亡和死亡時間死亡和死亡時間n重點觀察和記錄每只動物死亡的時間，特別是最早出現(xiàn)死重點觀察和記錄每只動物死亡的時間，特別是最早出現(xiàn)死亡的時間以及各個劑量組動物的死亡數(shù)。分析中毒死亡時亡的時間以及各個劑量組動物的死亡數(shù)。分析中毒死亡時間的規(guī)律具有一定意義，可為深入研究化學(xué)物的毒作用機間的規(guī)律具有一定意義，可為深入研究化學(xué)物的毒作用機制提供參考。制提供參考。 5/4/202236二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n(六六)經(jīng)典急性毒性試驗的局限性經(jīng)典急性毒性試驗的局限性1.消耗的動物量大消耗的動物量大2.獲得

25、的信息有限獲得的信息有限3.測得的測得的LD50僅僅是一個近似值僅僅是一個近似值4.在安全性評價中僅評價動物死亡和簡單在安全性評價中僅評價動物死亡和簡單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗檢查所提供的深入細致血液學(xué)及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒性信息。的毒性信息。5/4/202237三、急性毒性評價三、急性毒性評價外源化學(xué)物急性毒性分級（外源化學(xué)物急性毒性分級（WHO）毒性分級毒性分級大鼠一次經(jīng)口大鼠一次經(jīng)口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小時，死小時，死亡亡24只的濃度只的濃度(ppm)兔經(jīng)皮兔經(jīng)皮LD50(/mg/

26、kg)對人可能致死的估計量對人可能致死的估計量g/kg總量總量(g/60kg)劇毒劇毒11051510005/4/202238三、急性毒性評價三、急性毒性評價我國食品毒理急性毒性分級法我國食品毒理急性毒性分級法(1994)急性毒性分級急性毒性分級大鼠經(jīng)口大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)大致相當于大致相當于70kg人的致死量人的致死量6級級(極毒極毒)1稍嘗稍嘗,150001050克克5/4/202239n一、一、基本概念基本概念n二二、 蓄積毒性試驗方法及其評價蓄積毒性試驗方法及其評價 第二節(jié)第二節(jié) 蓄積毒性蓄積毒性5/4/202240 化學(xué)毒物進入機體后，經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化以化學(xué)毒物進入機體后，經(jīng)過

27、生物轉(zhuǎn)化以代謝產(chǎn)代謝產(chǎn)物物或或化學(xué)物原型化學(xué)物原型排出體外。但是，當化學(xué)毒物反復(fù)排出體外。但是，當化學(xué)毒物反復(fù)多次給動物染毒，化學(xué)毒物多次給動物染毒，化學(xué)毒物進入進入機體的速度機體的速度( (或總或總量量) )超過超過代謝轉(zhuǎn)化的速度和排泄的速度代謝轉(zhuǎn)化的速度和排泄的速度( (或總量或總量) )時，時，化學(xué)毒物或其代謝產(chǎn)物就有可能在機體內(nèi)逐漸增化學(xué)毒物或其代謝產(chǎn)物就有可能在機體內(nèi)逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學(xué)毒物的加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學(xué)毒物的蓄積作用(accumulation)(accumulation)。 一、基本概念一、基本概念5/4/202241蓄積作用蓄積作用n物質(zhì)蓄積（物質(zhì)蓄積（

28、material accumulation）反復(fù)多次接觸化學(xué)毒，可以用分析方法測出體內(nèi)物質(zhì)的原型或其代謝產(chǎn)物。n功能蓄積（功能蓄積（functional accumulation）長期接觸某些化學(xué)毒物后，機體內(nèi)雖不能測出其原型或代謝產(chǎn)物，卻出現(xiàn)了慢性毒性作用。 5/4/202242二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價n化學(xué)毒物的化學(xué)毒物的蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此研因此研究化學(xué)毒物在機體內(nèi)的蓄積性是評價化學(xué)毒物能否引起潛在究化學(xué)毒物在機體內(nèi)的蓄積性是評價化學(xué)毒物能否引起潛在慢性毒性的依據(jù)之一，也是衛(wèi)生標準制訂過程選擇安全系數(shù)慢性毒

29、性的依據(jù)之一，也是衛(wèi)生標準制訂過程選擇安全系數(shù)的主要依據(jù)。的主要依據(jù)。n蓄積毒性試驗是研究化學(xué)毒物基礎(chǔ)毒性的重要內(nèi)容之一，蓄積毒性試驗是研究化學(xué)毒物基礎(chǔ)毒性的重要內(nèi)容之一，目的是通過試驗求出蓄積系數(shù)目的是通過試驗求出蓄積系數(shù)K K，了解化學(xué)毒物蓄積毒性的強，了解化學(xué)毒物蓄積毒性的強弱，弱，并為慢性毒性試驗及其他有關(guān)毒性試驗的劑量選擇提并為慢性毒性試驗及其他有關(guān)毒性試驗的劑量選擇提供參考供參考。5/4/202243蓄積作用的研究方法（一）蓄積系數(shù)法以生物效應(yīng)為指標，用經(jīng)驗系數(shù)（經(jīng)驗系數(shù)（K）評價蓄積作用的方法，即將多次染毒與一次染毒所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)進行比較。簡便，但不能區(qū)分化學(xué)毒物的蓄積性是物簡

30、便，但不能區(qū)分化學(xué)毒物的蓄積性是物質(zhì)蓄積還是功能蓄積質(zhì)蓄積還是功能蓄積。5/4/202244n(一一)蓄積系數(shù)法蓄積系數(shù)法 蓄積系數(shù)蓄積系數(shù)(accumulation coefficient)(accumulation coefficient)是是多多次染毒次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)效應(yīng)使半數(shù)動物出現(xiàn)效應(yīng)( (或死亡或死亡) )的累積的累積劑量劑量EDED5050(n)(n)與與一次染毒一次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)相使半數(shù)動物出現(xiàn)相同效應(yīng)同效應(yīng)( (或死亡或死亡) )的劑量的劑量EDED5050(1)(1)的比值，即：的比值，即： K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050(1)(1) K K

31、LDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1) (1) 蓄積作用的研究方法反復(fù)染毒時實驗動物對化學(xué)反復(fù)染毒時實驗動物對化學(xué)毒物發(fā)生過敏現(xiàn)象，可能出毒物發(fā)生過敏現(xiàn)象，可能出現(xiàn)現(xiàn)K1K5。固定劑量法試驗期為25-100天。 5/4/202247 2 2劑量遞增法：劑量遞增法： 二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價5/4/202248n3 3劑量固定的劑量固定的2020天蓄積法：天蓄積法： 它通常采用經(jīng)口灌胃染毒方式，將動物隨機分為它通常采用經(jīng)口灌胃染毒方式，將動物隨機分為5 5個組，包括陰性對照組和個組，包括陰性對照組和1/20 LD1/20 LD5050、l/10 L

32、Dl/10 LD5050、1/5 LD1/5 LD5050和和1/2 LD1/2 LD5050四個劑量組，每組動物數(shù)四個劑量組，每組動物數(shù)1010只，雌雄各半。每日染毒一只，雌雄各半。每日染毒一次，連續(xù)染毒次，連續(xù)染毒2020天。觀察每組雌雄合計的死亡動物數(shù)量。天。觀察每組雌雄合計的死亡動物數(shù)量。 評定標準：評定標準：各劑量組均無死亡，即為蓄積性不明顯；各劑量組均無死亡，即為蓄積性不明顯； 如僅如僅1/2LD1/2LD5050劑量組有死亡，其他組均無死亡，則為弱蓄積性；劑量組有死亡，其他組均無死亡，則為弱蓄積性； 如如1/20LD1/20LD5050劑量組無死亡，其他各組間死亡數(shù)有劑量反應(yīng)關(guān)系

33、時，則為中等蓄積劑量組無死亡，其他各組間死亡數(shù)有劑量反應(yīng)關(guān)系時，則為中等蓄積性；性； 如如1/20LD1/20LD5050劑量組有死亡，且有劑量反應(yīng)關(guān)系，則為強蓄積性。劑量組有死亡，且有劑量反應(yīng)關(guān)系，則為強蓄積性。 二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價5/4/202249一一 亞慢性毒性作用：亞慢性毒性作用： n 亞慢性毒性的概念亞慢性毒性的概念 n 亞慢性毒性試驗的目的亞慢性毒性試驗的目的 n 亞慢性毒性試驗的設(shè)計亞慢性毒性試驗的設(shè)計 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用： n 慢性毒性的概念慢性毒性的概念 n 慢性毒性試驗的目的慢性毒性試驗的目的 n 慢性毒性試驗設(shè)計慢性毒

34、性試驗設(shè)計 第三節(jié)第三節(jié) 亞慢性和慢性毒性試驗亞慢性和慢性毒性試驗5/4/202250(一一) 概念：概念： 亞慢性毒性亞慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或?qū)嶒瀯游镞B續(xù)接觸或?qū)嶒瀯游镞B續(xù)接觸較長時間、較大劑量較長時間、較大劑量的外源化合物所引起的毒性效應(yīng)。的外源化合物所引起的毒性效應(yīng)。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或?qū)嶒炇侵溉嘶驅(qū)嶒瀯游镩L期動物長期(甚至終生甚至終生)反復(fù)接觸反復(fù)接觸低劑量低劑量的化的化學(xué)毒物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。學(xué)毒物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的5/4/202

35、251亞慢性毒性實驗?zāi)康膎1. 觀察受試物以不同劑量水平較長期喂養(yǎng)，對動物的毒性作用性質(zhì)和靶器官，并初步確定最大無作用劑量和最小有作用劑量。 n2. 分析受試物的劑量效應(yīng)關(guān)系。n3. 為慢性毒性試驗的劑量設(shè)計和觀察指標提供依據(jù)。n4. 為評價受試物能否應(yīng)用提供依據(jù)。5/4/202252慢性毒性試驗?zāi)康膎1.確定確定造成損害作用的最低劑量（LOAEL)和未觀察到損害作用的最大劑量（NOLAE)，對最終評價受試物能否應(yīng)用提供依據(jù)。n2.進一步研究慢性毒作用的特點、毒作用的靶器官及毒理機制，為外推到人的安全系數(shù)選擇提供參考。ADI值是根據(jù)對小動物（大鼠、小鼠等）近乎一生的長期毒性試驗中所求得的最大無

36、作用量（MNL）,取其1/100-1/500作為ADI值。 5/4/202253二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計 （一）實驗動物選擇（一）實驗動物選擇 亞慢性毒性試驗亞慢性毒性試驗 年齡：年齡：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g數(shù)量：數(shù)量：小動物小動物20 大動物大動物6性別：性別：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性試驗慢性毒性試驗?zāi)挲g：年齡：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初斷乳初斷乳數(shù)量：數(shù)量：小動物小動物40 大動物大動物8性別：性別：雌雄各半雌雄各半5/4/202254（二）實驗動物染毒期限：（二）實驗動物染毒期限：工業(yè)毒理學(xué)工業(yè)毒

37、理學(xué) 36個月個月食品毒理學(xué)食品毒理學(xué) 6個月個月1年年環(huán)境毒理學(xué)環(huán)境毒理學(xué) 6個月個月1年年致癌試驗致癌試驗 接近或等于動物的預(yù)期壽命接近或等于動物的預(yù)期壽命二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計5/4/202255二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計（二）實驗動物染毒期限（二）實驗動物染毒期限5/4/202256 經(jīng)消化道經(jīng)消化道經(jīng)呼吸道經(jīng)呼吸道經(jīng)皮膚經(jīng)皮膚二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計二、亞慢性和慢性毒性試驗設(shè)計（三）實驗動物染毒方式（三）實驗動物染毒方式5/4/202257亞慢性毒性的劑量選擇亞慢性毒性的劑量選擇n陰性對照組陰性對照組n低劑量組低劑量組n中劑量組中劑量組n高劑量組高劑量組 急性毒性的閾劑量急性毒性的閾劑量 1/201/5 LD50n組距：組距：310倍，最低不小于倍，最低不小于2倍倍慢性毒性的劑量選擇慢性毒性的劑量選擇n陰性對照組陰性對照組n低劑量組低劑量組n中劑量組中劑量組n高劑量組