立式壓力蒸汽滅菌器驗證

1、1主題內(nèi)容本標準規(guī)定了立式壓力蒸汽滅菌器的確認方案。2適用范圍本方案適用于立式壓力蒸汽滅菌器。3職責項目負責人：負責檢驗設(shè)備及檢驗方法確認方案的起草，并組織相關(guān)人員負責各確認過程中的檢驗工作。質(zhì)量部長：負責檢驗設(shè)備及檢驗方法確認方案及報告的審核評價工作，并監(jiān)督相關(guān)確作的實施。質(zhì)量受權(quán)人：負責檢驗方法及檢驗設(shè)備確認方案及確認報告的審批。驗證管理員：負責確認工作的組織及協(xié)調(diào)工作。4概述立式壓力蒸汽滅菌消毒器是完全符合GMP規(guī)范要求的高檔次的滅菌儀器，該產(chǎn)品是利用高壓高溫濕熱蒸汽殺死細菌，用于衛(wèi)生學檢查的培養(yǎng)基及各種不能干熱滅菌器具的滅菌。驗證依據(jù)*5 驗證對象儀器名稱：立式壓力蒸汽滅菌器儀器型號：

2、規(guī)格：生產(chǎn)廠家：6 確認目的通過對該儀器進行驗證確認該設(shè)備的設(shè)計符合GMP的要求，所采用的滅菌方法準確、可靠，能夠達到滅菌目的，確保檢驗的準確性。7 確認內(nèi)容7.1運行確認接受范圍：設(shè)備在公用工程系統(tǒng)正常供給條件下連續(xù)三次空載及滿載及試驗運轉(zhuǎn)正常，各部件動作狀態(tài)良好，腔室內(nèi)各點滅菌溫度均能滿足滅菌要求。7.1.1運行前確認檢查檢測內(nèi)容接受標準實際檢測結(jié)論閥泵系統(tǒng)閥組開關(guān)靈活、機泵試車良好控制系統(tǒng)能正常顯示設(shè)備狀態(tài)門密封密封材料無裂痕、損傷和污物大慶華科藥業(yè)分公司技術(shù)標準文件能源供給檢杳能源供給是否正常結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.1.2測試用的儀器儀表測試用的儀器儀表等用品和設(shè)備的主要

3、儀器儀表均應(yīng)確認合格，以保證設(shè)備能夠正常運行，同時保證設(shè)備測試結(jié)果的真實性。測溫元件采用熱電偶，精度應(yīng)達到±0.5工，并在實際測試過程中考慮精度負值對測試結(jié)果的影響。測溫元件在驗證前后在0°C和125工兩個點分別進行校正。驗證中使用的標準溫度計必須經(jīng)過標準計量管理部門校驗認可。溫度記錄儀以能記錄數(shù)字并配多點打印為宜，打印和儲存參數(shù)有各種溫度、壓力、F0值、日期、滅菌時間等。儀器儀表用品名稱生產(chǎn)廠家編號測量范圍有效期至結(jié)果溫度記錄儀測溫兀件1測溫兀件2測溫兀件3測溫兀件4測溫兀件5測溫兀件6測溫兀件7測溫兀件8測溫兀件9測溫兀件10測溫兀件11測溫兀件12壓力表1留點溫度計嗜

4、熱脂肪芽抱桿菌結(jié)論：檢查人：日期:復(fù)核人:日期：7.1.3運行時間的確認測試過程：各項操作準備工作就緒后，按照標準操作程序進行操作，設(shè)備運行后，溫度達到12FC的時間應(yīng)60分鐘。在12FC保溫20分鐘，控溫功能應(yīng)良好，無明顯的偏差。結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.1.4熱分布測試7.1.4.1空載熱分布的測試選用12個熱電偶做溫度探頭，分別編號，將其中1支的探頭置于滅菌器的蒸汽進氣口處，1支探頭置于滅菌器排氣口處，1支探頭置于滅菌器的溫度控制和記錄的探頭旁邊，其余探頭的分布在腔內(nèi)的各處，如下圖，將探頭置于上層長方形的四角和下層長方形的四角及中心點。檢測溫度分布均勻性，同時找出冷點位置，檢

5、測腔室內(nèi)溫差是否符合要求。溫度探頭分布圖：設(shè)備空載運行3次，按設(shè)備滅菌操作程序啟動設(shè)備，記錄設(shè)備運行過程中的各點溫度，最大溫差應(yīng)在恒溫平均溫度的±2C以內(nèi)，以檢查其重現(xiàn)性。運行檢測結(jié)果：剛到121C時，各探頭溫度:編號123456789101112編號123456789101112第一次第二次第二次12FC穩(wěn)定20分鐘時各探頭溫度:經(jīng)過三次空載熱分布試驗，滅菌器內(nèi)冷點能夠達到滅菌溫度，腔內(nèi)溫差符合要求，可以進行裝載熱分布試驗。經(jīng)過三次空載熱分布試驗，滅菌器內(nèi)冷點不能夠達到滅菌溫度，腔內(nèi)溫差不符合要求，不能進行裝載熱分布試驗，需進一步檢測調(diào)試。檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.142滿載

6、熱分布的測試測試過程：將滅菌器內(nèi)裝滿含有培養(yǎng)基的錐形瓶（250ml的錐形空瓶，裝玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基200ml），自下而上擺放。取12支探頭，將其中1支的探頭置于進氣口處，1支探頭置于排氣口處，1支置于溫度控制和記錄的溫度計旁邊，其余的探頭均勻分布在腔內(nèi)裝載的各處（同空載的分布）。開啟滅菌鍋，按照121C,20分鐘運行，分別記錄15、20分鐘時各個點的溫度。連續(xù)運行3次，以檢查其重現(xiàn)性。121C穩(wěn)定15分鐘時各探頭溫度:編號123456789101112第一次經(jīng)過滿載熱分布試驗，滅菌器內(nèi)冷點能夠達到滅菌效果，腔內(nèi)溫差符合要求，可以進行性能測試。經(jīng)過滿載熱分布試驗，滅菌器內(nèi)冷點不能夠達到滅菌效果，

7、腔內(nèi)溫差不符合要求，不能進行性能測試，需進一步檢測調(diào)試。檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.2性能確認接受范圍：按照設(shè)備操作說明書操作均運行正常，在熱分布試驗的基礎(chǔ)上，確定裝載中的最冷點，并肯定該點在滅菌過程中獲得的無菌保證值，在121°C,F0>8分鐘。7.2.1運行確認的檢查檢測內(nèi)容接受標準查看結(jié)果結(jié)論運行確認確認已進行并簽發(fā)合格結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：7.2.2滿載熱穿透試驗7.2.2.1裝載熱穿透的測試選用10個熱電偶做溫度探頭，分別編號，置于待滅菌含培養(yǎng)基的錐型瓶中。溫度探頭擺放位置應(yīng)選擇滅菌柜內(nèi)的冷點、高溫點、其余探頭均勻分布。7.2.2.2器皿選擇：250m

8、l錐型瓶，100ml錐型瓶7.2.2.3培養(yǎng)基的選擇：每次可以選擇幾種培養(yǎng)基，三次可以選擇不同的培養(yǎng)基。7.2.2.4滅菌程序：121±2C,20分鐘。7.2.2.5連續(xù)運行3次，以檢查其重現(xiàn)性。121C穩(wěn)定15分鐘時各探頭溫度：編號12345678910第一次第二次第二次12FC穩(wěn)定20分鐘時各探頭溫度:編號12345678910第一次第二次第二次7.2.2.6熱穿透試驗驗證結(jié)論：經(jīng)過三次裝載熱穿透試驗，滅菌柜內(nèi)冷點能夠達到滅菌效果，腔內(nèi)溫差符合要求，熱穿透驗證試驗合格。經(jīng)過三次裝載熱穿透試驗，滅菌柜內(nèi)冷點不能夠達到滅菌效果，腔內(nèi)溫差不符合要求，熱穿透驗證試驗不合格。檢查人：日期：

9、復(fù)核人：日期：7.2.3留點溫度計與細菌生物指示劑驗證7.2.3.1 首先將滅菌器滿載，然后通過物理與生物的方法來驗證滅菌鍋內(nèi)是否達到設(shè)定溫度和熱分布的情況能否達到滅菌效果。7.2.3.2 物理方法在滅菌前將留點溫度計放入滅菌器，置于滅菌器溫度最低點處，從留點的最高溫度可以知道其溫度是否都達到了設(shè)定的條件。7.2.3.3 生物方法在滅菌器開始滅菌前將生物指示劑和被滅菌物品一起放置在滅菌器內(nèi)，121C下30分鐘，滅好菌后將生物示劑56-60C培養(yǎng)24-48小時；同時做空白對照，就是將沒滅菌的生物指示劑直接同滅好菌的生物指示劑相同條件培養(yǎng)，培養(yǎng)到時間后根據(jù)顏色判斷滅菌效果。連續(xù)試驗三次，9、10號

10、設(shè)為空白對照。生物指示劑的使用可以用作壓力蒸汽滅菌設(shè)備滅菌效果的依據(jù)。生物指示劑：即為非致病性嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953)制成的藍紫色液體。含菌量為5x105-6/支。布點：根據(jù)滅菌鍋的層數(shù)而定,對二層裝滅菌器設(shè)4個點，上層中央部位1個點，下層前后部位各1個點，熱穿透試驗最低溫度點1個點，每點置生物指示劑2支。7.2.3.4 結(jié)果判定物理方法：留點溫度計達到設(shè)定溫度為合格；生物方法：(無菌生長“-”、有菌生長“+”)次數(shù)試管號12345678910第次試驗結(jié)果第二次試驗結(jié)果第二次試驗結(jié)果結(jié)論：檢查人：日期：復(fù)核人：日期：724滅菌后培養(yǎng)基適用性檢查7.2.4.1菌種試驗用的菌株傳代次數(shù)

11、不得超過5代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代)，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。大腸埃希菌(Escherichiacoli)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)白色念珠菌(Candidaalbicans)黑曲霉(Aspergillusniger)7.2.4.2菌液制備CMCC(B)*aureus)CMCC(B)*CMCC(B)*CMCC(F)*CMCC(F)*接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18-24小時；接種白色念株菌的新鮮培養(yǎng)物至

12、改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24-48小時。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50-100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5-7天，加入3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。然后採用適宜的方法吸出抱子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含抱子數(shù)50-100cfu的抱子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在2-8°C,可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉抱子懸液可保存在2-8°C,在驗證過

13、的貯存期內(nèi)使用。7.2.4.3適用性檢查取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌各50-100cfu,分別注入無菌平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置30-35C培養(yǎng)48小時，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉各50-100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置23-28工培養(yǎng)72小時，計數(shù)。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。7.2.4.4結(jié)果判定若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。第一次試驗結(jié)果：金黃色葡萄球菌枯早芽抱桿困大腸埃希菌白色念珠菌黑曲霉試驗組平均值對照組平均值比率第二次試驗結(jié)果：金黃色葡萄球菌枯早芽抱桿困大腸埃