抗壞血酸含量測(cè)定_第1頁(yè)
抗壞血酸含量測(cè)定_第2頁(yè)
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1、抗壞血酸含量測(cè)定試劑配制：6%和10%(wt/vol)TCA(三氯乙酸)，室溫放置(20°C)43%(vol/vol)H3PO4(1:1稀釋85%H3PO4)，室溫放置3%(wt/vol)FeCl3，室溫放置75mMphosphatebuffer(pH7.0)，用磷酸氫二鉀和磷酸氫二鉀配制10mMDTT，冰浴0.5%(wt/vol)NEM,冰浴4%(wt/vol)a-a-bipyridyl,用70%乙醇溶解，冰浴ASA標(biāo)品根據(jù)樣品濃度配制(標(biāo)曲)試驗(yàn)步驟：1. 植物材料(約40mg)分裝到離心管中，并立即在液氮中冷凍；2. 加入1mL6%TCA到2mL離心管中，離心(13000g,4

2、C5min)，并將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的2mL離心管中。(所有提取物保持在冰上并立即開(kāi)始測(cè)定);3. 抗壞血酸試驗(yàn)測(cè)定空白、標(biāo)準(zhǔn)和樣品，同時(shí)測(cè)定還原型AA和總AA(每個(gè)樣品四次測(cè)定)；4. 加入10pl75mM磷酸鹽緩沖液和20pl6%TCA(空白)，AA標(biāo)準(zhǔn)品(0.15-10mM)或20pl上清至96孔板；5. 加10pl10mMDTT到離心管中，室溫孵育10分鐘；6. 加100.5%NEM到提取總AA管中除去多余的DTT并孵育至少30s；7. 加20pl水至還原型AA測(cè)定管中，將DTT和NEM的體積加到總AA測(cè)定試管中；8. 加入50pl10%TCA,40pl43%H3PO4,40卩14%a-a-bipyridyl和20pl3%FeCl3至所有測(cè)定管中；9. 37C孵育1h；10. 測(cè)定525nm下吸光值。計(jì)算：2.00.41iiTr0100200300400500600nmolAApowellFigure1|Exampleofanascorbatestandardcurve*Thestandardcurveisusedtn匚alcuhtena

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