微生物檢驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答

1、微生物檢驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答一、方法驗(yàn)證1.做過(guò)驗(yàn)證的樣品微生物檢驗(yàn)方法是否都需要按照新的方法進(jìn)行重新驗(yàn)證?答：對(duì)于微生物限度檢查的產(chǎn)品而言，由于培養(yǎng)時(shí)間調(diào)整，應(yīng)重新進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)于無(wú)菌檢查的產(chǎn)品而言，如果方法未作實(shí)質(zhì)性調(diào)整，可以不必重新驗(yàn)證。個(gè)別產(chǎn)品在各論中收載了新的無(wú)菌檢查方法，對(duì)這些品種，應(yīng)對(duì)收載方法的適用性進(jìn)行驗(yàn)證。2. 以前做過(guò)無(wú)菌驗(yàn)證的品種是否需要重新按照新的標(biāo)準(zhǔn)再驗(yàn)證?答：參見(jiàn)問(wèn)題1。3. “新增抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜” 比如注射用克林霉素磷酸酯屬于抗生素，是否需要重新選取濾膜再驗(yàn)證?答：目前采用的方法如果經(jīng)驗(yàn)證表明可行，則可以繼續(xù)使用該方法。4. 微生物方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，培養(yǎng)

2、時(shí)間是否跟樣品日常檢驗(yàn)所培養(yǎng)時(shí)間一致?答：應(yīng)該一致。5. 微生物限度驗(yàn)證時(shí)，如果一個(gè)方法只有金葡回收率達(dá)不到要求，該方法時(shí)是否可以用來(lái)做細(xì)菌霉菌的檢測(cè)方法?答：按藥典的規(guī)定，一個(gè)計(jì)數(shù)方法通過(guò)驗(yàn)證，是指所有試驗(yàn)菌的回收率均達(dá)到要求。如果采用各種方法以及方法的組合仍無(wú)法使金葡回收率達(dá)標(biāo)，則可以采用使金葡回收率最高的方法作為計(jì)數(shù)方法。6. 薄膜過(guò)濾的沖洗量不能超過(guò)1000ml，我公司的喹諾酮類產(chǎn)品原來(lái)的方法是每張膜沖洗量為1500和2000ml，請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有合適的方法將沖洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合規(guī)定?答：有幾種辦法可以降低沖洗劑的用量：1)降低接觸濾膜的供試品的濃度;2)改進(jìn)沖洗的方式，

3、如少量多次地沖洗、降低蠕動(dòng)泵的轉(zhuǎn)速等;3)添加中和劑，如高價(jià)金屬離子。7. 微生物限度檢查法規(guī)定，技術(shù)方法驗(yàn)證時(shí)，采用上述方法若還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收率達(dá)不到要求，那么選擇回收率最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品檢驗(yàn)。請(qǐng)問(wèn)，上述方法是指僅通過(guò)一種方法還是一定要通過(guò)幾種方法聯(lián)用的?答：應(yīng)該要把可能采用的所有方法包括方法聯(lián)用都進(jìn)行驗(yàn)證。8. 供試品不溶于稀釋劑，同時(shí)又有抑菌性，限度檢查時(shí)應(yīng)如何消除抑菌性?答：采用低速離心的方式，盡可能把供試品去除干凈，取離心后的上層液，進(jìn)行薄膜過(guò)濾。9. 不溶于水的固體產(chǎn)品，加表面活性劑后，如何操作才能在方法驗(yàn)證中得到較好的回收率?答：同問(wèn)題8。10. 有

4、些品種2010年藥典與2005年比較檢驗(yàn)方法變了，是否需要驗(yàn)證或確認(rèn)?答：同問(wèn)題1。二、菌種管理1. 濃菌液的有效期該如何確定?答：藥典沒(méi)有規(guī)定?？梢酝ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)確定有效期。例如，在不同的時(shí)間點(diǎn)測(cè)定濃菌液的濃度，從而判斷其有效期。2. 藥典要求菌液在制備后2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在2-8的菌懸液可在在24小時(shí)內(nèi)使用，那我們?cè)谧鲵?yàn)證或陽(yáng)性對(duì)照是要加一定量的菌就沒(méi)有時(shí)間進(jìn)行平板計(jì)數(shù)了，該如何確保所加菌量準(zhǔn)確?答：藥典對(duì)稀釋菌液的使用期限作出規(guī)定，并不會(huì)影響操作過(guò)程中稀釋菌液的加入。即便不規(guī)定，也無(wú)法在準(zhǔn)確知道菌液濃度的情況下加入試驗(yàn)菌。菌液稀釋的實(shí)驗(yàn)操作和加入菌液的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)該是在同一次實(shí)驗(yàn)中完成的，要使

5、加入的菌量符合藥典的規(guī)定，可以從濃菌液的制備方法、菌液稀釋的方法等方面進(jìn)行規(guī)范，也可以引入濁度比較的方法。3. 菌懸液能否在倒平板之前確定菌含量?答：活菌含量是無(wú)法確定的'?？偩靠梢酝ㄟ^(guò)比濁的方式確定。4. 具體從哪些方面進(jìn)行菌種菌株的特性和純度確認(rèn)?如何操作?答：基層的微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌種純度確認(rèn)可以考慮以下一些方面：1)形態(tài)學(xué)鑒定，包括菌落形態(tài)和染色形態(tài);2)生化鑒定，可以考慮使用API鑒定系統(tǒng)。5. 黑曲霉凍干菌種如何轉(zhuǎn)種，傳代?答：與其他菌種一樣，所不同的是使用的培養(yǎng)基應(yīng)改為改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。6. 干粉狀的是否可做第0代使用?答：只要是菌種保藏機(jī)構(gòu)提供的凍干保藏的菌種，可以

6、確定為第0代。7. 菌種每次傳代都要做純度、特性等的確認(rèn)嗎?答：從外部購(gòu)入的菌種，在進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)室的菌種保藏體系時(shí)，需要進(jìn)行純度和特性的確認(rèn)。以后的每次傳代，可以通過(guò)顯色培養(yǎng)基做簡(jiǎn)單的確認(rèn)即可。8. 如采用低溫保存菌種，需購(gòu)買(mǎi)哪些設(shè)備?能夠到省所進(jìn)行實(shí)際操作培訓(xùn)?答：低溫冰箱，應(yīng)能夠提供-70的低溫?？梢缘绞∷鶃?lái)培訓(xùn)。9. 做方法驗(yàn)證時(shí)，工作用菌種能否同時(shí)操作，如何防止交叉污染?答：可以同時(shí)操作。避免交叉污染的關(guān)鍵是無(wú)菌操作技術(shù)。10. 是否等菌懸液的含菌數(shù)出結(jié)果后再做適用性等檢查?答：沒(méi)有必要?？蓞⒁?jiàn)問(wèn)題2。11. 菌液制備中菌液是否都要驗(yàn)證儲(chǔ)存期?答：稀釋菌液可參考藥典規(guī)定。如要保存濃菌液，

7、則需要驗(yàn)證有效期。12. 菌種CMCC是否可以用ATCC替代，從省所或中檢所購(gòu)買(mǎi)的菌種是否每次都可以出具規(guī)范的COA?答：中國(guó)藥典使用CMCC的菌種，并沒(méi)有規(guī)定可以使用其他等效的菌種。省所提供的菌種嚴(yán)格講屬于標(biāo)準(zhǔn)貯備菌種，無(wú)法提供ATCC這樣的COA。CMCC至今也無(wú)法提供這類證明。13. 銅綠假單胞如何保藏?答：可以使用低溫冷凍保存的方法。14. 工作用菌液是否屬于亞培養(yǎng)或傳代一次?答：工作用菌液應(yīng)屬于一次傳代。三、微生物限度1. 包裝材料的大腸埃希菌檢查?答：根據(jù)包裝材料的不同，大腸埃希菌的檢查方法大致有兩種，一種是將浸提液合并后，取一部分，接種膽鹽乳糖培養(yǎng)基進(jìn)行檢查;另一種是將浸提液合并

8、后，薄膜過(guò)濾，然后按規(guī)定的方法檢驗(yàn)。2. 抗真菌藥品的微生物限度檢查法答：這類產(chǎn)品的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法需要進(jìn)行調(diào)整，可以根據(jù)產(chǎn)品劑型的不同，選擇薄膜過(guò)濾法或培養(yǎng)基稀釋法等方法。3. 為什么在日常樣品檢測(cè)中還需要做陽(yáng)性對(duì)照(國(guó)外不需要)?答：為了確保每一次檢測(cè)對(duì)可能存在的微生物都是有效的。4. 對(duì)于同一個(gè)品種，藥典為什么不規(guī)定統(tǒng)一的檢測(cè)方法?答：本版藥典進(jìn)行過(guò)這樣的嘗試，也有某些品種已經(jīng)收載了統(tǒng)一的檢測(cè)方法，如注射用頭孢類抗生素的無(wú)菌檢查。之所以沒(méi)有大量收載，主要是由于檢測(cè)方法還沒(méi)有經(jīng)過(guò)必要的復(fù)核。將微生物檢驗(yàn)的統(tǒng)一方法收載在品種的各論項(xiàng)下，始終是努力的方向。5. 梭菌檢查中需置厭氧條件下培養(yǎng)

9、48小時(shí)，是否指在厭氧培養(yǎng)箱中?答：需要在厭氧培養(yǎng)裝置中進(jìn)行培養(yǎng)，未必一定是厭氧培養(yǎng)箱。6. 控制菌檢查方法驗(yàn)證時(shí)，采用多種方法均未檢出控制菌，如何處理?答：在確保所使用的各種方法都沒(méi)有錯(cuò)誤的情況下，如果仍無(wú)法使試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，則應(yīng)該采用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行檢查。理由是該方法能夠最大程度地去除產(chǎn)品的抑菌作用。7.常規(guī)的監(jiān)督抽樣檢品(包括原料)在進(jìn)行微生物限度檢查時(shí)，是否一定要進(jìn)行活螨檢查并在原始記錄與報(bào)告書(shū)中體現(xiàn)?答：需要進(jìn)行檢查?？梢栽谠加涗浿畜w現(xiàn)，報(bào)告書(shū)上可以不出現(xiàn)，除非當(dāng)發(fā)現(xiàn)有活螨檢出。8. 藥包材微生物限度檢查規(guī)定了合格質(zhì)量水平，通常產(chǎn)量下取樣8個(gè)，要求8個(gè)瓶子均符合規(guī)定，如何進(jìn)行?答：每個(gè)瓶

10、子分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。9. 大腸埃希菌具體操作規(guī)程?答：參見(jiàn)中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。10. 動(dòng)物組織及動(dòng)物類原藥材的提取物入藥，是否需要檢沙門(mén)菌?答：需要進(jìn)行沙門(mén)菌檢查。11. 關(guān)于中國(guó)藥典菌落計(jì)數(shù)結(jié)果的判斷還存在疑義，望能舉例說(shuō)明。答：不清楚所指的存在疑義是指哪方面。2010年版對(duì)結(jié)果報(bào)告進(jìn)行了較大篇幅的修訂，目前的規(guī)定應(yīng)該比05版更為清晰、明確。12. 需做沙門(mén)菌檢驗(yàn)樣品量的確定?答：10g(ml)用于樣品計(jì)數(shù)檢驗(yàn)和其他控制菌檢查，10g(ml)用于沙門(mén)菌檢查，10g(ml)用于沙門(mén)菌檢查的陽(yáng)性對(duì)照。需要進(jìn)行沙門(mén)菌檢查的樣品，檢驗(yàn)用量應(yīng)為30g(ml)。13. 日常的實(shí)驗(yàn)室裝備能否達(dá)到梭菌無(wú)氧

11、的培養(yǎng)要求?答：完全可以?？梢圆捎脜捬跖囵B(yǎng)盒(罐)。14. 如果一個(gè)產(chǎn)品有兩個(gè)規(guī)格，是否可以取其中之一做陽(yáng)性對(duì)照?答：每個(gè)規(guī)格均需進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照。15. 細(xì)菌數(shù)為100g/g的，樣品稀釋級(jí)只做1:10,1:100的倍數(shù)就可以了嗎?答：可以。16. 培養(yǎng)時(shí)間3天，5天，可理解為72小時(shí)，120小時(shí)嗎?答：可以。這樣更為嚴(yán)謹(jǐn)。17.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范“已做驗(yàn)證試驗(yàn)的供試品，在檢查時(shí)刻不必再做陽(yáng)性對(duì)照”如何理解?答：該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范中在無(wú)菌檢查法中規(guī)定“供試品無(wú)菌檢查應(yīng)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)”，表明不論是否進(jìn)行了方法驗(yàn)證，在產(chǎn)品的每一次檢驗(yàn)過(guò)程中，還必須進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照。在控制菌檢查的大腸埃希菌項(xiàng)下，指出“

12、已做驗(yàn)證試驗(yàn)的供試品，在該供試品檢查時(shí)不必再作陽(yáng)性對(duì)照”。該規(guī)定僅適用方法驗(yàn)證與供試品檢查同時(shí)開(kāi)展的情況。2005年版藥典和2010年版藥典在控制菌檢查中均對(duì)陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)有明確規(guī)定，“進(jìn)行供試品控制菌檢查時(shí)，應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)?！碑a(chǎn)品檢驗(yàn)中應(yīng)以藥典規(guī)定為準(zhǔn)。18. 無(wú)菌檢查和微生物限度檢查中，產(chǎn)品中規(guī)定的溶解液是否可以換成其他的溶液?答：可以。19. 制劑通則中，沒(méi)有微生物檢查項(xiàng)目的，是否可不進(jìn)行微生物項(xiàng)目檢測(cè)?答：可以。主要是二部制劑通則中口服片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑。20. 在細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)中，適用性檢查細(xì)菌是培養(yǎng)48小時(shí)，霉菌和酵母菌是培養(yǎng)72小時(shí)，供試品檢查中細(xì)菌是培養(yǎng)3天，霉菌和酵母菌是培養(yǎng)5天，那方法驗(yàn)證中應(yīng)參照哪個(gè)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)。答：應(yīng)按照供試品檢驗(yàn)時(shí)的條件，即細(xì)菌3天，霉菌和酵母菌5天。21. 測(cè)定純化水微生物限度時(shí)，每張濾膜過(guò)濾量是多少合適?需要先稀釋嗎?過(guò)濾完后需不需要沖洗?假如我取10ml純化水通過(guò)雙杯體封閉式薄膜過(guò)濾器過(guò)濾，每張濾膜上的計(jì)數(shù)是以5ml為單位還是10ml為單位?答：過(guò)濾量應(yīng)以培養(yǎng)后出現(xiàn)的微生物數(shù)不超過(guò)100cfu/膜為標(biāo)準(zhǔn)。