抗抑郁藥理試驗(yàn)方法

1、抗抑郁藥理實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法和模型一、藥物之間相互作用模型許多早期模型涉及到抗抑郁藥與其它藥理學(xué)類(lèi)型藥物之間的相互作用，這些模型曾不嚴(yán)格地被認(rèn)為模擬了抑郁，然而從抑郁模型的三方面標(biāo)準(zhǔn)一一表面上的相似性（facevalidity）、預(yù)測(cè)的有效性（predictivevalidity）及思路的合理性（constructvalidity）來(lái)考慮，這些早期模型實(shí)際上只起著篩選具有專一神經(jīng)化學(xué)作用的抗抑郁藥的作用，只能作為抗抑郁藥初篩的一種手段，從嚴(yán)格上說(shuō)不應(yīng)稱為抑郁動(dòng)物模型。（一）利J血平拮抗（reserpinereversal）1 .概述利血乎是一種囊泡再攝取抑制劑，它使遞質(zhì)留在囊泡外，易被單胺氧化酶

2、降解，從而使兒荼酚胺（NE、E、DA和5HT）耗竭，引起行為和生理上的變化。對(duì)利血平引起的行為和生理變化的拮抗是最早發(fā)展的抑郁動(dòng)物模型。經(jīng)利血平處理的動(dòng)物出現(xiàn)上眼臉下垂、體溫下降及強(qiáng)直癥狀，預(yù)先用三環(huán)抗抑郁藥及單胺氧化酶抑制別處理，能拮抗上眼瞼下垂及體溫下降的癥狀。然而此實(shí)驗(yàn)不能檢測(cè)許多結(jié)構(gòu)上不同于三環(huán)抗抑郁藥及單胺氧化酶抑制劑的新抗郁藥.卻對(duì)于很大范圍的非抗抑郁藥有效，如興奮劑、多巴、。a一腎上腺素能激動(dòng)劑、B腎上腺素能阻斷劑及抗組胺藥。事實(shí)上此實(shí)驗(yàn)包含三方面獨(dú)立的生物學(xué)檢測(cè)，因?yàn)槔揭鸬纳涎勰樝麓?、體溫下降及強(qiáng)直分別被a一腎上腺素能或5-HT能激動(dòng)劑、B腎上腺素能激動(dòng)劑及DA激動(dòng)劑所拮

3、抗。2 .實(shí)驗(yàn)方法及觀測(cè)指標(biāo)選用1823g雄性小鼠1）上瞼下垂（ptosis）的觀測(cè)靜注2mg/kg利血平，同時(shí)腹腔注射或口服藥物或生理鹽水（對(duì)照），1hr后將動(dòng)物放于支架上觀察15s,比較給藥組和對(duì)照組中限盼至少關(guān)閉一半的動(dòng)物的個(gè)數(shù)。2）運(yùn)動(dòng)不能（akinesia）的觀察靜注2.5mg/kg利血平，同時(shí)口服藥物或生理鹽水（對(duì)照），lh后將動(dòng)物放于直徑7.5cm的圓形白紙的中央觀察15s或更長(zhǎng)時(shí)間，比較給藥組和對(duì)照組中仍然呆在圈內(nèi)的動(dòng)物的個(gè)數(shù)。3）體溫下降（hypothermia）的觀察腹腔注射5mg/kg利血平，同時(shí)口服藥物或生理鹽水(對(duì)照),4h后將探頭插入動(dòng)物肛門(mén)內(nèi)1.5至2cm處測(cè)量肛

4、溫，比較給藥組及對(duì)照組中肛溫的差異。3 .注意事項(xiàng)進(jìn)行動(dòng)物體溫測(cè)量實(shí)驗(yàn)時(shí)，環(huán)境溫度應(yīng)保持恒定，最好在20度左右。4 .應(yīng)用常用于具有一定藥理作用的抗抑郁藥的初篩。(二)高齊1J量阿撲嗎啡的拮抗(antagonismofhighdoseofapomorphine)1 .概述Schelkunov1968年首先提出將阿撲嗎啡引起小鼠體溫下降作為篩選抗抑郁藥的一種實(shí)驗(yàn)方法。以后的研究表明，藥物對(duì)高劑量阿撲嗎啡(16mg/kg)引起小鼠體溫下降的拮抗是通過(guò)中樞去甲腎上腺素能機(jī)制，該實(shí)驗(yàn)反映了藥物對(duì)去甲腎上腺素重?cái)z取及/或去甲腎上腺素傳遞的作用，而不反映其抗抑郁性質(zhì)、多巴胺拮抗或其對(duì)5-HT受體的作用。2

5、 .實(shí)驗(yàn)方法及觀測(cè)指標(biāo)環(huán)境溫度保持20-22Co體重2025g的雄性小鼠，測(cè)量肛溫后腹腔注射受試藥物或生理鹽水，30min后皮下注射阿撲嗎啡(16mg/kg),30min后再次測(cè)量肛溫。比較生理鹽水對(duì)照組和受試組肛溫變化的差異。3 .注意事項(xiàng)進(jìn)行動(dòng)物體溫測(cè)量實(shí)驗(yàn)時(shí)，環(huán)境溫度保持恒定。4,應(yīng)用用于篩選抑制NA重?cái)z取或能激活a1和B一腎上腺京能受體的藥物。(三)5-HTP誘導(dǎo)的甩頭行為(5HTPinducedhead-twitches)1 .概述該模型最早由Corne等在1963年提出。5HT受體興奮引起的甩頭綜合征可能通過(guò)5HT2受體介導(dǎo)。小鼠中由5HTPB導(dǎo)的甩頭行為對(duì)于具有不同作用機(jī)制的抗抑

6、郁藥均比較敏感，如西猷普蘭、氟伏沙明等5-HT重?cái)z抑制劑，去甲丙咪嗪、麥普替林、諾米芬辛等NA重?cái)z抑制劑及混合作用于5-HT和NA系統(tǒng)的丙咪嗪。2 .方法步驟及指標(biāo)選用2024g雄性小鼠。首先在測(cè)試前3h腹腔注射100mg/kg帕吉林。之后腹腔注射受試藥或生理鹽水，30min后再注射5HTP(5mg/kg,ip).10min后開(kāi)始觀察，記錄6min內(nèi)小鼠甩頭次數(shù)。比較實(shí)驗(yàn)組和生理鹽水對(duì)照組甩頭次數(shù)的差異。3 .應(yīng)用常用于研究篩選作用于中樞5-HT或NA系統(tǒng)的抗抑郁藥。(四)小鼠育亨賓增強(qiáng)模型(yohimbinepotentiationmodelinmice)1 .概述Gershon及其同事觀察

7、到，臨床上有效的抗抑郁藥包括單胺氧化酶抑制劑、三環(huán)抗抑郁藥及非典型抗抑郁藥IprindoLe均能增強(qiáng)a2受體拮抗劑育亨賓在狗上的毒性?；谶@些發(fā)現(xiàn)，他們建立了狗育亨賓模型。盡管在有限的受檢藥物范圍內(nèi)該模型的臨床預(yù)測(cè)性比較好，但該模型耗時(shí)耗費(fèi)，因而它的使用受到了限制。1963年,Quinton觀察到丙咪嗪及幾種其它類(lèi)型的抗抑郁藥均能顯著增強(qiáng)育亨賓在小鼠中的毒性。與狗育亨賓增強(qiáng)模型相反，小鼠模型對(duì)于抗抑郁藥并不專一，其它藥物如抗精神分裂癥藥物，抗膽堿能藥物也能增強(qiáng)育亨賓在小鼠中的毒性，但由于該模型操作上簡(jiǎn)便快速，出而得到廣泛使用。2 .實(shí)驗(yàn)方法及觀測(cè)指標(biāo)選用1824g的雄性小鼠，口服受試藥物或生理

8、熱水，皮下注射育亨賓30mg/kg。觀察比較注射育亨賓18h后受試組相對(duì)照組中小鼠死亡率。3 .注意事項(xiàng)育亨賓的用量應(yīng)當(dāng)采用使對(duì)照組小鼠沒(méi)有致死作用時(shí)的最大劑量。4 .應(yīng)用觀察藥物對(duì)NE能神經(jīng)傳遞的作用。二、應(yīng)激模型(一)“行為絕望”及其衍生("behaviouraldespair"andderivatives)1 .概述盡管70年代已出現(xiàn)了一些較好的抑郁動(dòng)物模型，如獲得性無(wú)助模型、分離模型，僅由于花費(fèi)或可行性問(wèn)題，這些模型尚未用于常規(guī)的藥物韌篩。藥物初篩迫切需要一些簡(jiǎn)單、快速、敏感的動(dòng)物模型。在此背景下，Porsolt等977年分別發(fā)展了大鼠和小鼠強(qiáng)迫游泳模型。在強(qiáng)迫游泳

9、模型中，大鼠和小鼠被迫在一局限的空間游泳，它們首先掙扎試圖逃跑，隨后處于一種不動(dòng)的狀態(tài)，這種狀您被彌為“行為絕望”。除了一些5-HT重?cái)z取抑制劑之外，多數(shù)抗抑郁藥在此模型中均能減少動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間，且其藥效與臨床上藥效顯著相關(guān)。而在亞活性劑量鋰鹽輔助下，5-HT重?cái)z取抑制劑類(lèi)抗抑郁藥在此模型中也往往有效。繼強(qiáng)迫游泳模型之后，陸續(xù)衍生出了其它一些模型，在這些進(jìn)展中最突出的是小鼠懸尾模型。懸尾小鼠為克服不正常的體位而掙扎活動(dòng)，但活動(dòng)一定時(shí)間后，出現(xiàn)可斷性水動(dòng)，顯示“失望”狀態(tài)。有效藥物包括三環(huán)抗抑郁藥、單胺氧化酶抑制劑及非典型抗抑郁藥（包括5-HT重?cái)z抑制劑）。2 .大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)ratforce

10、dswimmingtest）1）實(shí)驗(yàn)方法選體重160180g雄性大鼠放人水深15cm的量筒（40cm高,18cm直徑），水溫25Co預(yù)試15min后在32c下烤干；24h后，動(dòng)物重新放人上述環(huán)境中，測(cè)定給藥組和對(duì)照組在5min內(nèi)保持漂浮不功的時(shí)間。2）注意事項(xiàng)（1）實(shí)驗(yàn)中水的深度是關(guān)鍵，應(yīng)使動(dòng)物后爪剛可觸及水底，但又不能支撐身體。能增加活動(dòng)性的藥物可能出“假”陽(yáng)性結(jié)果，故在進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的同時(shí)還應(yīng)檢測(cè)該藥對(duì)活動(dòng)性的影響。3 .小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（mouseforcedswimmingtest）選20-24g雄性小鼠放入水深10cm的量筒（20cm高14cm直徑）,水溫25度，觀察6min,比較

11、給藥組和對(duì)照組小鼠在后4min內(nèi)不動(dòng)的時(shí)間。4 .小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)（tailsuspensiontest）選體重2024g雄性小鼠，將其尾端2cm的部位貼在一水平木棍上，使動(dòng)物成倒掛狀態(tài)，其頭部離臺(tái)面約5cm,懸掛兩側(cè)用板隔開(kāi)動(dòng)物視線。比較給藥組及對(duì)照組在6min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。5 .應(yīng)用常用于抗抑郁藥的初篩。（二）獲得件無(wú)助（learnedhelplessness）1 .概述“獲得性無(wú)助”現(xiàn)象最初是在1967年被Seligman和Maier用來(lái)描述狗的，隨后擴(kuò)展到其它種屬（大鼠、貓、小鼠和人）。近些年來(lái)的大多數(shù)實(shí)驗(yàn)多采用大鼠作為研究對(duì)象?！矮@得性無(wú)助”即當(dāng)機(jī)體受到無(wú)法逃避的應(yīng)激刺激如電擊時(shí)，將隨后

12、產(chǎn)生操作欠缺，而在同等的可以逃避的應(yīng)激刺激下則不產(chǎn)生操作欠缺。“獲得性無(wú)助”動(dòng)物產(chǎn)生的操作欠缺可在亞長(zhǎng)期（3-7d）使用各種抗抑郁藥包括三環(huán)抗抑郁藥、單胺氧化兩抑制劑、非典型抗抑郁藥及電驚厥電擊下所逆轉(zhuǎn),而長(zhǎng)期使用興奮劑、鎮(zhèn)靜劑、抗焦慮藥及神經(jīng)松弛劑則無(wú)效?！盁o(wú)助”動(dòng)物除了在令其厭惡的條件刺激下表現(xiàn)出操作欠缺外，還可出現(xiàn)其它一些行為變化，如活動(dòng)性降低、攻擊性減少及食欲和體重下降。腦中NE5-HT、DA能、GABAfg神經(jīng)元活性下降及中樞膽堿能神經(jīng)元活性過(guò)高均與無(wú)可回避電擊后的行為抑制有關(guān)。很難確定具體哪類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)與哪種行為變化相關(guān)聯(lián)，因?yàn)樾袨樽兓旧聿皇菃我坏?。如穿梭箱逃避學(xué)習(xí)包含活動(dòng)性、

13、注意過(guò)程、協(xié)調(diào)過(guò)程、恐懼、疼痛等，其中的任何一項(xiàng)變化均能改變逃避行為。因而各種神經(jīng)化學(xué)的變化均可反映在逃避行為上.無(wú)可回避的電擊后出現(xiàn)的行為欠缺的中樞機(jī)制與多種神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)有關(guān)。2 .操作方法及觀測(cè)指標(biāo)1）“無(wú)助”的誘發(fā)通過(guò)有蓋的20X10X10CR3籠子內(nèi)的不銹鋼柵（1.5cm間隔）傳送60次隨機(jī)的無(wú)法逃避的足部電擊（0.8mA,持續(xù)15s,每1min±15s給一次電擊），對(duì)照大鼠（200220g雄性大鼠）放于相同籠中1h.但不給予電擊。“無(wú)助”的誘發(fā)可在第1天上午進(jìn)行。2）條件回避訓(xùn)練在無(wú)可逃避的電擊之后48h（第3d）開(kāi)始進(jìn)行回避訓(xùn)練，以便于評(píng)價(jià)逃避和回避行為。實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用60

14、X21X30CR3的穿梭箱，其底面由不銹綱柵構(gòu)成（1.0cm問(wèn)隔），穿梭箱被一塊帶有7X7cm2小門(mén)的不銹鋼板隔成兩個(gè)相同的箱子。將動(dòng)物單個(gè)地放人穿棱箱的一端，使其適應(yīng)測(cè)試環(huán)境5min（只在第一期訓(xùn)練時(shí)進(jìn)行），然后進(jìn)行30次回避訓(xùn)練（每次之間間隔30s）o每次訓(xùn)練的最初3s出現(xiàn)一個(gè)光信號(hào)，允許動(dòng)物在此期間到達(dá)另一端的箱中以回避電擊。若此間無(wú)回避反應(yīng)發(fā)生，則光信號(hào)再持續(xù)出現(xiàn)3R,同時(shí)還出現(xiàn)一個(gè)0.8mA勺足部電擊（持續(xù)3s）。若此間無(wú)逃避反應(yīng)發(fā)生，則電擊和光信號(hào)立即自動(dòng)停止，同時(shí)將此記作一次逃避失敗。在第3、4、5d亡午均進(jìn)行一期回避訓(xùn)練，每只大鼠均記錄其逃避失敗次數(shù)。預(yù)先經(jīng)受了無(wú)可逃避電擊的大

15、鼠.在第3、4、5d的測(cè)試中逃避失敗次數(shù)均顯著高于預(yù)先未經(jīng)受無(wú)可逃避電擊的大鼠，而在連續(xù)使用抗抑郁藥之后，預(yù)先經(jīng)受了無(wú)可逃避電擊的大鼠在第3、4、5d的測(cè)試小逃避失敗次數(shù)顯著下降，尤其是在第4、5d中。3.應(yīng)用獲得性無(wú)助模型對(duì)抗抑郁藥高度敏感，不僅可用于這些藥物的次篩，也日益用于研究這些藥物的作用機(jī)制及抑郁病的神經(jīng)生物學(xué)(三)未預(yù)知的長(zhǎng)期應(yīng)激刺激(chronicunpredictablestress)1 .概述此模型最初是在1981年由Roth和Katz描述的：大鼠長(zhǎng)期受到各種應(yīng)激刺激后，其在敞箱測(cè)試中的急性白噪聲刺激下將顯示出活動(dòng)性的減少。隨后又有研究者們觀察到慢性未預(yù)知的應(yīng)激刺激還能導(dǎo)致動(dòng)

16、物在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中活動(dòng)時(shí)間縮短及在穿梭箱實(shí)驗(yàn)中逃避行為欠缺。在慢性應(yīng)激刺激朗間每日給予抗抑郁藥物治療，將明顯改善動(dòng)物的行為欠缺。慢生應(yīng)激大鼠出現(xiàn)的行為欠缺可能與去甲腎素能系統(tǒng)的改變有關(guān)。2 .實(shí)驗(yàn)方法和指標(biāo)選用280350g的大鼠，每籠4只，食水不限(除非持指)。1)敞箱買(mǎi)驗(yàn)(1)慢性應(yīng)激刺激大鼠在21d中受到的應(yīng)激刺激包括：三次1h電擊(平均1mA只續(xù)ll0s,平均每min一次電擊)；兩次40h禁食，三次4c冷水中游泳5min,兩次40h禁水，兩次40c環(huán)境中5min,兩次高速水平方向搖晃30min,兩次晝夜循環(huán)顛倒。每2或3d給予一次刺激，以半隨機(jī)方式給予。(2)給藥方式每日一次，持續(xù)21

17、do(3)活動(dòng)性測(cè)試在最后一次慢性應(yīng)激刺激的48-72h后，將大鼠置于95dB的白噪聲中達(dá)lh。然后立即將大鼠放入1.22m2x45cm高的敞箱(4X4方格)中測(cè)試6min。記錄大鼠在前3min內(nèi)方格間的穿行次數(shù)以及整個(gè)6min內(nèi)的排糞次數(shù)。2)穿按箱實(shí)驗(yàn)1慢性應(yīng)激刺激大鼠在14d中受到的應(yīng)激刺激包括：兩次30加n足部電擊(1mA持續(xù)1s,平均每min一次)，一次24h禁食，兩次4c冷水中游泳5min,兩次24h禁水，兩次lh水平方向高速搖晃，兩次24h轉(zhuǎn)移至另一屋中的新籠中，一次1min夾尾，一次24h孤養(yǎng)。每日隨機(jī)給予一種刺激。(2)給藥方式每次應(yīng)激刺激前1h腹腔注射受試藥或生理鹽水一次，

18、共持續(xù)14do(3)逃避行為測(cè)試第15d,將動(dòng)物放入空梭箱的一端，使之先適應(yīng)測(cè)試環(huán)境3min。然后進(jìn)行30回避試驗(yàn)：每次試驗(yàn)的前4s均出現(xiàn)噪聲信號(hào)，若此期間無(wú)回避反應(yīng)發(fā)生，大鼠將受到0.8mA足部電擊；若此間無(wú)逃避反應(yīng)發(fā)生，則電擊和噪聲信號(hào)將終止。記錄動(dòng)物在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中逃避失敗的次數(shù)，即電擊出現(xiàn)期間動(dòng)物未到達(dá)另一端箱子的次數(shù)。3.應(yīng)用可用于抗抑郁藥物的篩選及抑郁癥病理生理機(jī)制的研究（四）未預(yù)知的長(zhǎng)期溫和應(yīng)激刺激（chronicunpredictablemildstress）1 .概述未預(yù)知的長(zhǎng)期溫和應(yīng)激刺激模型是Willner等受Katz等描述的未預(yù)知長(zhǎng)期應(yīng)激刺激模型的啟發(fā)而在1987年提出的。

19、Willner將其中的應(yīng)激刺激程度減輕，利用長(zhǎng)期的溫和應(yīng)激刺激，使之更現(xiàn)實(shí)地模擬了人們?nèi)粘Ｉ钪性庥龅摹袄щy”。在經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期溫和應(yīng)激刺激之后蔗糖水飲用量的減少反映了內(nèi)源性抑郁癥的中心癥狀即快感缺乏（anhedonia）。在新的模型中，抗抑郁藥治療的時(shí)間進(jìn)程及在正常非應(yīng)激動(dòng)物中的無(wú)效，準(zhǔn)確地模擬了臨床治療的情形。抗抑郁藥在慢性應(yīng)激刺激模型中的作用可能通過(guò)增加突觸后DA受體敏感性來(lái)介導(dǎo)。DA受體拮杭劑Pimozide、SCH-23390和sulpiride急性給藥能拮抗三環(huán)抗抑郁藥在此模型中的療效，D2受體拮抗劑raclopride能選擇性地拮抗fluoxetine（氟西?。┖蚼aprotiline

20、（麥普替林）在此模型中的療效。2 .方法步驟選用體重300350g的雄性大白鼠，孤養(yǎng)。1）所有動(dòng)物首先受訓(xùn)飲用1%的蔗糖水在開(kāi)始的48h內(nèi)將蔗糖水故人籠中以代替自來(lái)水，接著禁食禁水20h,通過(guò)稱飲水瓶重量連續(xù)測(cè)量5次動(dòng)物在lh內(nèi)蔗糖水的飲用量。此后每間隔一周均進(jìn)行一次20h禁食禁水及1h飲蔗糖水測(cè)試，此過(guò)程貫穿于整個(gè)實(shí)驗(yàn).2）根據(jù)最后的基線測(cè)試中大白鼠蔗糖水的飲用量，將動(dòng)物均勻分成兩組。其中一組作為對(duì)照組，只在測(cè)試前禁食和禁水20h,其它時(shí)間食水不限。另一組接受長(zhǎng)期應(yīng)激刺激，包括：兩次20h的禁食和水，其中一次在測(cè)試之前.另一次在禁食和水后給予2h進(jìn)食時(shí)間（將45g食物分散在籠內(nèi)）；16h禁水

21、；兩次通宵照明；兩次（7和17h）45C傾斜籠子；一次17h的配對(duì)飼養(yǎng)；一次17h潮濕籠中飼養(yǎng)（將200m1水加到有鋸末的籠底）；兩次（3、5h）周期性的噪聲（85d®三次（7、9和17h）低強(qiáng)度的閃爍照明（每min閃300次）。兩組動(dòng)物在互相隔離的環(huán)境飼養(yǎng)。3）在經(jīng)過(guò)4周的應(yīng)激刺激之后，根據(jù)測(cè)試結(jié)果，每組動(dòng)物又可均勻分成受試藥組和生理鹽水組。在繼續(xù)進(jìn)行應(yīng)激刺激的同時(shí)，進(jìn)行長(zhǎng)期給藥（如每日一次，共進(jìn)行5周用藥）。3 .指標(biāo)比較各組動(dòng)物蔗糖水飲用量的差異。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期溫和的應(yīng)激刺激之后，動(dòng)物蔗糖水的飲用量將明顯減少，而給予抗抑郁藥治療的動(dòng)物蔗糖水的飲用量將恢復(fù)正常。4 .應(yīng)用該模型對(duì)于研究

22、抗抑郁藥的臨床作用機(jī)制及抑郁病的病理生理機(jī)制具有一定價(jià)值。三、腦損傷模型嗅球切除模型（olfactorybulbectomymodel）（一）概述自從1971年Cairncross和King首次報(bào)道阿米替林能改善嗅球切除大鼠回避學(xué)習(xí)能力以來(lái)，陸續(xù)有許多文獻(xiàn)報(bào)道切嗅球大鼠的許多行為變化包括自主活動(dòng)性增加和被動(dòng)回避反應(yīng)能力欠缺等均能被抗抑郁藥逆轉(zhuǎn)。嗅球切除動(dòng)物行為欠缺的神經(jīng)生化機(jī)制尚不十分清楚，人們認(rèn)為至少部分上嗅球切除后通過(guò)改變不同腦區(qū)5-HT能系統(tǒng)功能引起行為欠缺。例如，增加5-HT傳遞的藥物能改善切嗅球引起的被動(dòng)回避欠缺，而將5HT拮抗劑metergoline全身給藥或注入內(nèi)側(cè)杏仁核，能阻斷

23、抗抑郁藥在嗅球切除大鼠中的藥效；嗅球內(nèi)注射5,7一雙羥色氨酸以破壞其中的5-HT末梢能產(chǎn)生與嗅球切除后相似的被動(dòng)回避欠缺，而破壞兒茶酚胺能神經(jīng)元?jiǎng)t不能。由于作為5-HT投射到邊緣及前腦區(qū)的起源點(diǎn)縫核背側(cè)具有投射到嗅球的纖維，因而切除嗅球后這些聯(lián)系遭到破壞可能導(dǎo)致縫核及與之聯(lián)系的其它腦區(qū)5-HT能傳遞改變。（二）手術(shù)方法1J.選取體重300350g雄性大鼠，經(jīng)過(guò)至少34d每日數(shù)次的撫摸之后，用三澳乙醇（250mg/kg,ip）或水合氯醛（375mg/kg,ip）等麻醉大鼠。5 .從大鼠前因前1cm至前兇后1cm正中線處縱切頭皮，暴露顱骨。6 .在距離前因前面8mm正中線兩側(cè)2mmy1分別鉆通顱骨

24、，使出現(xiàn)兩個(gè)2mms徑的小孔。7 .用連在水泵上的鈍的皮下注射針，借助負(fù)壓將嗅球吸出。8 .用止血海綿填充小孔，四環(huán)素粉末灑在傷口上，縫合皮膚9 .大鼠經(jīng)過(guò)14d左右的恢復(fù)期后可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在恢復(fù)過(guò)活程中，每日仍需撫摸動(dòng)物。假切除大鼠處理方式基本同上.只是嗅球不吸除。（三）測(cè)試方法1 .被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)1）跳臺(tái)（step-down）被動(dòng)回避在電擊箱內(nèi)放一個(gè)木制平臺(tái)，平臺(tái)高出電擊箱底大約5cm左右。將大鼠先置于電擊箱（不予電擊）中使之熟悉環(huán)境1min。然后將大鼠放于平臺(tái)上，只要其4個(gè)爪全部接觸到電擊箱底部就給予一次2s0.6mA左右的電擊，直到它在平臺(tái)上連續(xù)呆上3min或遭受l0次電擊為止。記錄此時(shí)

25、大鼠遭電擊的總次數(shù)。大鼠嗅球切除后遭受電擊次數(shù)明顯增多，反映了嗅球切除能引起被動(dòng)回避反應(yīng)欠缺。當(dāng)給予抗抑郁藥后，能減少遭電擊的次數(shù)。2）避暗（stepthrough）被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)箱由明暗兩室組成，隔板底部有一通道供大鼠出入。暗室網(wǎng)柵與電休克儀相聯(lián)。如大鼠進(jìn)入暗室，則遭電擊。將大鼠放人暗室，并給予一次電擊，人鼠將逃至明室，當(dāng)大鼠的4個(gè)爪又重新回到暗室時(shí).將再次受到電擊，此時(shí)記數(shù)為l,直至大鼠連續(xù)在另一端呆上2min或遭受電擊達(dá)20次，記錄此時(shí)大鼠遭受電擊的總次數(shù)。3）舔水被動(dòng)回避在連續(xù)4d的實(shí)驗(yàn)中，大鼠每日禁水23.5ho第1、2d將大鼠放人受試籠中進(jìn)行l(wèi)0min的舔水訓(xùn)練，第3、4d進(jìn)行測(cè)試。

26、測(cè)試時(shí)，每當(dāng)大鼠舔水20次自動(dòng)給予一次電擊。記錄大鼠舔水次數(shù)及遭電擊的次數(shù)。嗅球切除大鼠遭受電擊次數(shù)將明顯多于假切除大鼠，抗抑郁藥能明顯減少嗅球切除大鼠迢電擊次數(shù)。2 .主動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)沒(méi)有條件刺激裝置，即聲光刺激，底部為不銹鋼柵，與電擊裝置相連，給予非條件刺激（電擊刺激）。實(shí)驗(yàn)箱兩長(zhǎng)側(cè)壁的底部裝備有紅外光電管。實(shí)驗(yàn)包括60個(gè)試行周期，每個(gè)周期分為條件刺激期、非條件刺激期及間歇期。如果大鼠在條件刺激期移動(dòng)并切斷兩端的光束，則可避免電擊，記錄為“回避反應(yīng)"（avoidanceresponse）。如在非條件刺激期切斷光束，則電擊立即中止，記錄為“逃避反應(yīng)”（escaperespons

27、e）0如果切斷光束發(fā)生于間歇期，則記錄為“自發(fā)反應(yīng)”。大鼠嗅球切除后，回避反應(yīng)次數(shù)明顯增多，逃避失敗次數(shù)顯著降低，表明嗅球切除后主動(dòng)回避反應(yīng)能力增強(qiáng)。當(dāng)給予抗抑郁藥后，主動(dòng)回避反應(yīng)能力遭破壞。3 .敞箱活動(dòng)性實(shí)驗(yàn)?zāi)局葡?00x100x50cm3地板用筆劃成25方格（20x20cm2）,將大鼠放于正中格中，其正上方45cm處放一白熾燈照明，觀察大鼠在3min內(nèi)的活動(dòng)情況，包括方格間穿行次數(shù)（三爪以上跨入鄰格的次數(shù)）、豎起次數(shù)（兩前肢離地1cm以上的次數(shù)）、修飾次數(shù)及排糞次數(shù)。每次實(shí)驗(yàn)后均需將動(dòng)物的排泄物清除干凈。大鼠嗅球切除后方格間穿行次數(shù)明顯增多，而在慢性給抗抑郁藥后能使此行為恢復(fù)正常。（四）

28、注意事項(xiàng)1 .術(shù)前術(shù)后的每日撫摸對(duì)于減少術(shù)后動(dòng)物的易怒性及測(cè)試時(shí)的行為差異很重要。2 .巴比妥類(lèi)麻醉劑麻醉時(shí)間長(zhǎng)，易揮發(fā)的麻醉刑具刺激效果而易導(dǎo)致并發(fā)癥，因而使用作用較短暫的不揮發(fā)的非巴比妥類(lèi)麻醉劑較好，有利于術(shù)后恢復(fù)。3 .吸除嗅球時(shí)應(yīng)小心不損傷額葉皮層。測(cè)試結(jié)束時(shí)應(yīng)檢查動(dòng)物手術(shù)是否正確。4 .術(shù)后應(yīng)將動(dòng)物置于20c左右環(huán)境中，以避免動(dòng)物體溫過(guò)低。（五）應(yīng)用常用于抗抑郁藥的次篩以及作用機(jī)制研究。四、72s低頻率差式強(qiáng)化程序（differentialreinforcementoflowrate72-sschedule）（一）概述在低頻率差式強(qiáng)化DRL）程序中，只有與上一次反應(yīng)間隔一定時(shí)間或一定

29、時(shí)間以上發(fā)生的另一次反應(yīng)才被強(qiáng)化，否則不但沒(méi)有強(qiáng)化，而且間隔又要重新開(kāi)始。1980年McGuire和Seiden首先觀察比較了三環(huán)抗抑郁藥丙咪嗪對(duì)大鼠在DRL9-s和皿DRL72-s程序中操作行為的影響，結(jié)果表明，在DRL9-s中丙咪嗪對(duì)強(qiáng)化數(shù)和反應(yīng)數(shù)無(wú)明顯影響，而在DRL72-s中丙咪嗪急性給藥能顯著增加強(qiáng)化數(shù)同時(shí)減少反應(yīng)救，反應(yīng)問(wèn)時(shí)間問(wèn)隔（IRT）分布移向較長(zhǎng)的IRT。隨后陸續(xù)又有報(bào)道表明，在DRL72-s中，其它的三環(huán)抗抑郁藥、單胺氧化酶抑制劑、電休克及一些非典型抗抑郁藥如麥安舍林、曲唾酮、氟西汀、齊美利定也具有與內(nèi)咪嗪相同的效應(yīng)，各類(lèi)非抗抑郁藥如精神抑制劑、抗組胺藥、抗膽堿能藥、抗焦慮藥、精神運(yùn)動(dòng)興奮劑、酒精、麻醉止痛藥測(cè)試結(jié)果則不同于抗抑郁藥。因此DRL72-s成為抗抑郁藥篩選及研究的一個(gè)模型。由于損毀前腦5-HT通路可以阻斷抗抑郁藥在此模型中的應(yīng)用，非選擇性5-HT受體拮抗劑能部分阻斷三