科研基金申請(qǐng)標(biāo)書(shū)立題依據(jù)范例3

1、 ZHANGJIAN僅供個(gè)人學(xué)習(xí),勿做商業(yè)用途立題依據(jù)研究目的和意義肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅著人們的健康.化療在預(yù)防HCC復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著不可替代的作用.多藥耐藥現(xiàn)象是影響HCC化療的主要障礙.研究發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致HCC發(fā)生多藥耐藥的機(jī)制之一是凋亡調(diào)控基因介導(dǎo)機(jī)制的紊亂.Survivin不僅與HCC的發(fā)生、開(kāi)展、預(yù)后及復(fù)發(fā)密切相關(guān),而且是凋亡調(diào)控基因介導(dǎo)機(jī)制中的一種新耐藥相關(guān)凋亡基因.本工程是在原有的工作根底上,利用RNA干擾技術(shù)抑制與凋亡調(diào)控基因survivin的表達(dá),逆轉(zhuǎn)其多藥耐藥性,旨在為進(jìn)步明確HCC多藥耐藥和逆轉(zhuǎn)多藥

2、耐藥機(jī)制的研究提供理論根底,同時(shí)為臨床解決化療耐藥的瓶頸提供有益探討,也為其他惡性腫瘤化療耐藥研究提供新的思路.國(guó)內(nèi)、外研究現(xiàn)狀和開(kāi)展趨勢(shì)肝細(xì)胞性肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,占原發(fā)性肝癌95%,每年約有55萬(wàn)人被確診為HCC,以東南亞國(guó)家及非洲等地區(qū)高發(fā).我國(guó)是HCC的高發(fā)區(qū),死亡率占惡性腫瘤第二位,發(fā)病率亦有增高趨勢(shì).導(dǎo)致HCC的主要危險(xiǎn)因素有肝炎病毒感染、肝硬化、長(zhǎng)期進(jìn)食被黃曲霉毒素污染的食物.由于HCC早期缺乏典型病癥,起病隱匿,極易侵犯門(mén)靜脈分支,癌栓經(jīng)門(mén)靜脈系統(tǒng)形成肝內(nèi)播散,確診時(shí)往往已處于進(jìn)展期,預(yù)后很差,如不治療常于

3、半年內(nèi)死亡,因而成為治療上最困難的腫瘤之一1-2.目前對(duì)HCC有多種治療方法可供選擇,除手術(shù)切除、肝移植、射頻消融、無(wú)水乙醇或乙酸注射、液氮冷凍、激光氣化及微波熱凝等方法外,化療作為各種治療的輔助治療在預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著不可替代的作用.HCC對(duì)多種化療藥均具有廣泛的耐藥性3-4,是阻礙HCC化療效果的主要屏障.因此開(kāi)展對(duì)HCC的多藥耐藥機(jī)理和逆轉(zhuǎn)方法的研究具有極其重要的意義.多藥耐藥(multidrugresistance,MDR)是指腫瘤對(duì)未接觸過(guò)的、結(jié)構(gòu)不同、靶位各異的多種抗腫瘤藥物也具有交叉耐藥性.它是惡性腫瘤化療治療失敗的主要原因.腫瘤細(xì)胞的抗藥性兩類：一是先天性,即腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌

4、藥物天然不敏感；二是后天獲得性,即腫瘤耐藥細(xì)胞因抗癌藥物的誘導(dǎo)及其他因素的激活產(chǎn)生抗藥性.多藥耐藥的可能機(jī)制主要包括除與膜糖蛋白介導(dǎo)的藥物外排泵機(jī)制及酶介導(dǎo)機(jī)制外,還與凋亡調(diào)控基因介導(dǎo)機(jī)制密切相關(guān)5.抗腫瘤藥物主要通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)揮作用,其中與耐藥相關(guān)的基因包括bcl-2家族、Survivin、p53、c-myc等.腫瘤細(xì)胞的耐藥是細(xì)胞凋亡的抑制,參與細(xì)胞凋亡調(diào)控的基因的表達(dá)失控是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物耐受的原因之一.因此,沉默這些細(xì)胞調(diào)控基因的過(guò)表達(dá)能有效可增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性、克服耐藥性的產(chǎn)生6.Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitorsofapoptosisprot

5、ein,IAP)家族成員之一.由耶魯大學(xué)的Altieri等在1997年應(yīng)用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體-1(effectorcellproteasareceptor-1,EPR-1)的cDNA,通過(guò)雜交方法在人類基因組文庫(kù)中篩選并鑒定出來(lái)7.Survivin的表達(dá)具有高度的腫瘤特異性,在多數(shù)腫瘤組織中均有表達(dá),而在大多數(shù)正常組織中不表達(dá),研究證實(shí)Survivin具有抗凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的雙重功能8.研究顯示,survivin是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子9.目前研究的survivin抗凋亡的作用機(jī)制包括以下幾個(gè)途徑10-11:抑制效應(yīng)蛋白caspase-3、caspase-7的激活和活性；抑制cas

6、pase-3的活性；介導(dǎo)P21蛋白和caspase-3前酶復(fù)合物的形成；與第二個(gè)線粒體起源的caspase激活劑Samc/DIABLO分子結(jié)合.其中caspase-3是caspase家族中最重要的凋亡效應(yīng)蛋白,其激活是凋亡信息轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵.Survivin區(qū)別于IAP家族其它成員的獨(dú)特之處在于Survivin在分化成熟的正常組織中很少表達(dá),而在HCC等大多數(shù)腫瘤組織中呈高表達(dá)12.Survivin不僅與肝癌細(xì)胞的生成、生長(zhǎng)、增殖、凋亡、血管生、演變成及預(yù)后明顯相關(guān)13-15,而且與HCC耐藥機(jī)制的形成有關(guān),能增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放療的耐受性16-17,因此抑制survivin的表達(dá)能干預(yù)腫瘤耐藥的產(chǎn)生

7、.通過(guò)阻止Survivin的表達(dá)能有效誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,以及促進(jìn)對(duì)化療藥物的敏感性,并到達(dá)治療腫瘤的目的,故以survivin作為靶基因治療具有重大意義.RNA干擾(RNAinterference,RNAi)現(xiàn)象首先由Fire等18發(fā)現(xiàn)于秀麗隱桿線蟲(chóng),隨后相繼在植物、真菌、果蠅及哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn).RNAi是一種序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象,是雙鏈RNA導(dǎo)入細(xì)胞或通過(guò)載體在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄成具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA,能夠高效特異地剔除同源基因表達(dá),形成相應(yīng)的功能缺陷表型的一種技術(shù).目前已明確作用機(jī)制是RNAi在真核細(xì)胞中的發(fā)生過(guò)程是通過(guò)一個(gè)被稱之為Dicer的酶,將dsRNA裂解成21-25核甘酸的小干

8、擾RNA(siRNA).siRNA變成細(xì)胞內(nèi)RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體的一局部,該復(fù)合物通過(guò)互補(bǔ)靶定將要降解的細(xì)胞內(nèi)的mRNA,最終將細(xì)胞中的基因表達(dá)阻斷19.隨著對(duì)siRNA研究的不斷深入,越來(lái)越多的研究顯示siRNA在基因治療的潛在優(yōu)勢(shì).與其他幾種基因封閉技術(shù)相比,siRNA具有更強(qiáng)大、更持久的抑制基因表達(dá)的水平,如其效能是反義寡核甘酸100-10000倍20;siRNA具有序列特異性高、無(wú)免疫原性及體積小等優(yōu)點(diǎn),這就為治療諸如癌癥這類由于多基因表達(dá)失調(diào)導(dǎo)致的疾病提供了可能21.自從2001年Elbashi等22首次報(bào)道siRNA在哺乳動(dòng)物體外培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)成功誘導(dǎo)基因特異性抑制后,siRNA在人類

9、疾病治療方面的研究倍受關(guān)注,因其具有高效性和高度特異性等優(yōu)點(diǎn),為傳染病、艾滋病和腫瘤等人類頑疾的治療指明了一條新路.采用RNAi技術(shù)在膀胱癌、乳腺癌、白血病、HCC等人類腫瘤細(xì)胞株體外、內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)中均己獲得了成功23-25.止匕外,在腫瘤多藥耐藥研究方面也取得了可喜的成果,研究人員采用RNAi技術(shù)特異性的有效的逆轉(zhuǎn)了mdrl基因介導(dǎo)的胰腺癌和胃癌耐藥細(xì)胞株的多藥耐藥26;Ee等27在乳腺癌多藥耐藥研究中,針對(duì)ABCG2基因設(shè)計(jì)的siRNA有效的抑制了該基因的表達(dá)；在子宮惡性腫瘤、卵巢癌、白血病及胃癌等的耐藥性逆轉(zhuǎn)研究中也取得了成功28-30.本研究選擇的Stealth?RNA,它是經(jīng)過(guò)專門(mén)化學(xué)

10、修飾的,由25個(gè)堿基對(duì)組成,可消除誘導(dǎo)的細(xì)胞應(yīng)激效應(yīng)發(fā)生,研究顯示Stealth?RNA具有以下優(yōu)點(diǎn)31:更高的特異性；更明晰的結(jié)果；更佳的穩(wěn)定性.參考文獻(xiàn)1. BruixJ,SalaM,LlovetJM.Chemoembolizationforhepatocellularcarcinoma.Gastroenterology,2004,127:179-1882. YangJYLuoHY,LinQYLiuZM,YanLN,LinPetal.Subcellulardaunorubicindistributionanditsrelationtomultidrugresistancephenotype

11、indrug-resistantcelllineSMMC-7721/R.WorldJGastroenterol,2002,8:644-6493. GrudePContiF,MennecierD,LouvelA,HoussinD,WeillB,etal.MDR1geneexpressioninhepatocellularcarcinomaandtheperitumoralliverofpatientswithandwithoutcirrhosis.CancerLett,2002,186:107-1134. ArceciRJ.Canmultidrugresistancemechanismsbemo

12、dified?BrJHaematol,2000,110,285-2915. SpanPN,Tjan-HeijnenVC,MandersP.Highsurvivinpredictsapoorresponsetoendocrinetherapy,butagoodresponsetochemotherapyinadvancedbreastcancer.BreastCancerResTreat,2006,98:223-2306. AmbrosiniG,AdidaC,AltieriDC.Anovelanti-apoptosisgene,survivin,expressedincancerandlymph

13、oma.NatMed,1997,3:917-9217. WuL,WangY,TianD.KnockdownofsurvivinexpressionbysiRNAinducesapoptosisofhepatocellularcarcinomacells.JHuazhongUnivSciTechnologMedSci,2007,27:403-4068. WangJ,XuZ,ZhangM.Downregulationofsurvivinexpressionandelevationofcaspase-3activityinvolvedinpitavastatin-inducedHepG2cellap

14、optosis.OncolRep,2007,18:383-3879. AammI,WangT,SausvilleE,etal.lAP-familyproteinsurvivininhibitscaspaseactivityandapoptosisinducedbyFas(CD95),Bax,caspases,andanticancerdrugs.CancerRes,1998,58:5315-532010. FerrarioA,RuckerN,WongS,etal.Survivin,amemberoftheinhibitorofapoptosisfamily,isinducedbyphotody

15、namictherapyandisatargetforimprovingtreatmentresponse.CancerRes,2007,67:4989-499511. SatohK,KanekoK,HirotaM,etal.Expressionofsurviviniscorrelatedwithcellapoptosisandisinvolvedinthedevelopmentofhumanpancreaticductcelltumors.Cancer,2001,92:271-27812. WangZ,XieYWangH.ChangesinsurvivinmessengerRNAleveld

16、uringchemotherapytreatmentinovariancancercells.CancerBiolTher,2005,4:716-71913. FerrarioA,RuckerN,WongS,Survivin,amemberoftheinhibitorofapoptosisfamily,isinducedbyphotodynamictherapyandisatargetforimprovingtreatmentresponse.CancerRes,2007,67:4989-499514. LiD,ChenX,ZhangW.Theinhibitionofapoptosisofhe

17、patomacellsinducedbyHBxismediatedbyup-regulationofsurvivinexpression.JHuazhongUnivSciTechnologMedSci,2003,23:383-386.15. LiF,LingX.Survivinstudy:AnupdateofWhatisthenextwave"?JCellularPhysiol,2006,208:476-48616. ChenT,TianFZ,CaiZH,eta1.Apoptosisinhepatomacellsinducedbyantisenseoligodeoxynucleoti

18、deagainstsurviving.ZhonghuaGanZangBingZaZhi,2003,ll:546-54917. BeardamoreDM,VerbekeCS,DaviesCI.etal.Apoptoticandproliferativeindexesinesophagealcancer;predirtorsofresponsetoneoadjuvanttherapy.JCaatrointestSung,2003,7:77-8618. FireA,XUS,MontgomerymK,etal.Potentandspecificgeneticinterferencebydouble-s

19、trandedRNAinCaenorhabditiselegans.Nature,1998,391:8062-811119. CaplenNJ.GeneTherapyProgressandProspectsDownregulatinggeneexpression:theimpactofRNAinterference.GeneTherapy,2004,11:12412-1248120. CaplenNJ.GeneTherapyProgressandProspectsDownregulatinggeneexpression:theimpactofRNAinterference.GeneTherap

20、y,2004,11:12412-1248121. MaP,XueSP,HanDS.PrinciplesandapplicationsofRNAinterferingtechnology.ChinJHistochemCytochem,2003,12:2021-207122. 日bashirSM,HarborthJ,LendeckelW,YalcinA,WeberK,TuschlT.Duplexesof21-nucleotideRNAsmediateRNAinterferenceinculturedmammaliancells.Nature,2001,411:494-49823. ZhangPH,

21、ZouL,TuZG.RNAi-hTERTinhibitionhepatocellularcarcinomacellproliferationviadecreasingtelomeraseactivity.JSurgRes.2006,131:143-14924. SubramanianR,GondiCS,LakkaSS,etal.siRNA-mediatedsimultaneousdownregulationofupanditsreceptorinhibitsangiogenesisandinvasivenesstriggeringapoptosisinbreastcancercells.Int

22、JOncol,2006,28:831-83925. SangkhathatS,KusafukaT,MiaoJ.etal.InvitroRNAinterferenceagainstbeta-catenininhibitstheproliferationofpediatrichepatictumors.IntJOncol,2006,28:715-72226. NiethC,PriebschA,StegeA,etal.Modulationoftheclassicalmultidrugresistance(MDR)phenotypebyRNAinterference.FEBSLett,2003,545

23、:144-15027. RumpoldH,WolfAM,GruenewaldT,etal.RNAi-mediatedknockdownofP-glycoproteinusingatransposon-basedvectorsystemdurablyrestoresimatinibsensitivityinimatinib-resistantCMLcelllines.ExpHematol,2005,33:767-77528. EePL,HeX,RossDD,etal.Modulationofbreastcancerresistanceprotein(BCRP/ABCG2)geneexpressi

24、onusingRNAinterference.MolCancerTher,2004,3:1577-158329. HuaJ,MutchDG,HerzogTJ.StablesuppressionofMDR-1geneusingsiRNAexpressionvectortoreversedrugresistanceinahumanuterinesarcomacellline.GynecolOncol,2005,98:31-3830. HalderJ,LandenCNJrLutgendorfSK,etal.Focaladhesionkinasesilencingaugmentsdocetaxel-m

25、ediatedapoptosisinovariancancercells.ClinCancerRes,2005,11:8829-883631. KlattAR,KlingerG,ZechD,etal.RNAiinprimaryhumanchondrocytes:Efficiencies,kinetics,andnon-specificeffectsofsiRNA-mediatedgenesuppression.Biologicals,2007,35:321-328版權(quán)申明本文局部?jī)?nèi)容,包括文字、圖片、以及設(shè)計(jì)等在網(wǎng)上搜集整理.版權(quán)為張儉個(gè)人所有Thisarticleincludessomeparts,includingtext,pictures,anddesign.CopyrightisZhangJian'spersonalownership.用戶可將本文的內(nèi)容或效勞用于個(gè)人學(xué)習(xí)、研究或欣賞,以及其他非商業(yè)性或非盈利性用途,但同時(shí)應(yīng)遵守著作