17181食品生物化學(xué)試驗(yàn)考試試題庫(kù)1

1、17181食品生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)考試試題庫(kù)1本學(xué)期做過的實(shí)驗(yàn)中涉及物質(zhì)含量測(cè)定的有幾個(gè)，并說出實(shí)驗(yàn)名稱及其測(cè)定原理。答：有蛋白質(zhì)含量、樣品中的含糖量這兩個(gè)；涉及蛋白質(zhì)含量的試驗(yàn)有雙縮月尿法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度、紫外線吸收法和微量凱氏定氮法；樣品中含糖量涉及的試驗(yàn)是總糖和還原糖的測(cè)定；雙縮月尿法測(cè)蛋白原理：具有兩個(gè)或兩個(gè)以上的肽鍵化合物特有雙縮月尿反應(yīng)，在堿性溶液中與銅離子形成紫色配合物，在540mm處有最大吸收，在一定濃度范圍內(nèi)蛋白質(zhì)濃度與雙縮月尿反應(yīng)所呈的顏色深淺成正比，可用比色法定量測(cè)定。紫外吸收法原理：由于蛋白質(zhì)中的酪氨酸，色氨酸，苯丙氨酸含有共軻雙鍵，因此，蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，吸收峰在28

2、0nm左右。微量凱氏定氮法測(cè)定原理：凱氏定氮也稱克氏定氮，樣品與濃硫酸共熱，含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據(jù)此酸液被中和的程度可計(jì)算得樣品之氮含量?？偺呛瓦€原糖的測(cè)定試驗(yàn)原理：還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物，3,5一二硝基水楊酸則被還原成棕紅色的3氨基一5一硝基水楊酸，再過量的氫氧化鈉堿性溶液中此化合物呈橘紅色在540mm處，一定濃度范圍內(nèi)還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系利用比色法可測(cè)定樣品中的含糖量。2、測(cè)定蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)有哪些？并說明測(cè)定原理。答：紫外吸收法測(cè)蛋白質(zhì)含量原理：蛋白質(zhì)分子中含有酪氨酸

3、、色氨酸等芳香族氨基酸殘基，使蛋白質(zhì)在280nmft有最大吸收峰。在一定濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液280nm吸光度與蛋白質(zhì)濃度成正比，可以用這一性質(zhì)用作蛋白質(zhì)定量測(cè)定凱氏定氮法測(cè)蛋白質(zhì)含量原理：有機(jī)含氮化合物與濃硫酸共熱消化，氮轉(zhuǎn)化為氨，再與硫酸結(jié)合成硫酸俊.硫酸俊與強(qiáng)堿反應(yīng)，放出氨.將氨蒸儲(chǔ)到過量的標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)溶液中，再用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液進(jìn)行滴定.根據(jù)測(cè)得的氨量，計(jì)算樣品的總氮量.雙縮月尿：雙縮月尿（NH2-CO-NH-CO-NH2庇堿性溶液中可與銅離子產(chǎn)生紫紅色的絡(luò)合物，這一反應(yīng)稱為雙縮月尿反應(yīng)3、紫外吸收法測(cè)蛋白質(zhì)含量與雙縮月尿法測(cè)蛋白質(zhì)含量都使用了分光光度計(jì)，二者在使用方法上有何不同？并指出這兩種方

4、法的優(yōu)缺點(diǎn)？答：紫外吸收法測(cè)得是260nm和280nm的吸光度，本方法對(duì)測(cè)定微量蛋白質(zhì)的測(cè)定即快又方便，它還適用于硫酸俊或其他鹽類混雜的情況下，這時(shí)用其他方法測(cè)定則比較困難。此方法有時(shí)會(huì)產(chǎn)生誤差。雙縮月尿法測(cè)蛋白質(zhì)測(cè)得是540nm處吸光度，此方法最常用于需要快速但不要求十分精確得測(cè)定。硫酸俊不干擾此反應(yīng)，銅離子容易被還原，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)紅色沉淀。4、使用分光光度計(jì)測(cè)物質(zhì)含量時(shí)為什么要有空白管？對(duì)空白管所裝物質(zhì)有何要求？使用分光光度計(jì)測(cè)物質(zhì)之外含有一樣的組分，以此來做標(biāo)準(zhǔn)，然后被測(cè)定樣品吸收的單色光與之進(jìn)行對(duì)比得到的測(cè)量數(shù)據(jù)。空白管裝的物質(zhì)一般是指不含被測(cè)物質(zhì)或和被測(cè)樣品除了被測(cè)物質(zhì)之外含有一樣的組

5、分，以此來做標(biāo)準(zhǔn)5、為什么要調(diào)空白管的吸光值為零？怎么操作？空白也有可能會(huì)吸收部分光的，因此需要調(diào)零，以扣除空白的影響。先調(diào)T100%,再調(diào)A0%6、分光光度技術(shù)中透光率是什么？吸光值與透光率之間有何關(guān)系？對(duì)A值的范圍有何要求？T是透射光強(qiáng)度（透過比色皿）與入射射光強(qiáng)度（還未過比色皿之前的光強(qiáng)度）之比。吸光度A=lg（1/T）=-lgT,A是透光率倒數(shù)的對(duì)數(shù)，即透光率的負(fù)對(duì)數(shù)，只有吸光度才與濃度呈正比A的值在0.10.9之間7、標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)物質(zhì)含量時(shí)，如果是求出相關(guān)方程，其中R2的是什么，對(duì)其有何要求？R2指的是相關(guān)系數(shù)，一般機(jī)器默認(rèn)的是R2>0.99,這樣才具有可行度和線性關(guān)系。一般要

6、求將之開方成R后使用，不同精密度方法的R要求不一樣，最好達(dá)到3個(gè)9,大于998也可以8、寫出朗伯-比爾定律，并指出各字母的含義。當(dāng)一束強(qiáng)度為I0的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后，由于一部分光被體系吸收，因此透射光的強(qiáng)度降至I,則溶液的透光率T為：根據(jù)朗伯（Lambert）-比爾（Beer）定律：A=abc式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm）,c為溶液的濃度（g/dmA3）,a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù)與溶液的本性、溫度以及波長(zhǎng)等因素有關(guān)。溶液中其他組分（如溶劑等）對(duì)光的吸收可用空白液扣除。9、稱取5mg淀粉酶粉配成10ml酶溶液，從中取出0.5ml,以20%淀粉為底物，用目視碘比色法測(cè)得分解20

7、ml淀粉至終點(diǎn)色所需時(shí)間為4分鐘；另取4ml酶液用凱氏定氮法測(cè)得氮含量為0.3mg。規(guī)定：每小時(shí)分解1g淀粉至終點(diǎn)色的酶量為1個(gè)活力單位。求出：（1）1ml酶液中所含的蛋白質(zhì)量及酶活力單位數(shù)；36（2）比活力。不會(huì)10、總糖、還原糖含量測(cè)定中，總糖指的是什么？還原糖是什么？測(cè)定原理是什么？總糖：主要指具有還原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在測(cè)定條件下能水解為還原性的單糖的蔗糖、麥芽糖以及可能部分水解的淀粉.還原糖：從總體講，是指可被氧化充當(dāng)還原劑的糖.從結(jié)構(gòu)講，分子結(jié)構(gòu)中含有還原性基團(tuán)（如游離醛基、半縮醛羥基或游離厥基）的糖，叫還原糖.默基碳沒有參與形成糖昔鍵.原理：在NaOH在的條件下，3,

8、5二硝基水楊酸（DNS與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物。在過量的NaOHM性溶液中此化合物呈棕紅色，在540nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系，利用比色法可測(cè)定樣品中的含糖量。11、實(shí)驗(yàn)中用何方法從血清中分離免疫球蛋白？并簡(jiǎn)述其原理？答：鹽析法。鹽析法是指在藥物溶液中加入大量的無機(jī)鹽，使某些高分子物質(zhì)的溶解度降低沉淀析出，而與其他成分分離的方法12、實(shí)驗(yàn)中用何方法除去免疫球蛋白中的鹽？并簡(jiǎn)述其原理？答：凝膠過濾層析法。也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀

9、結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖（如葡聚糖或瓊脂糖）類物質(zhì)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下時(shí)路程較長(zhǎng)，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的路程短，當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就達(dá)到分離的目的。13、我們所做實(shí)驗(yàn)?zāi)z層析中用何凝膠？其工作原理是什么？答：葡聚糖凝膠。是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖（如葡聚糖或瓊脂糖）類物質(zhì)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下時(shí)路程較長(zhǎng)，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的路程短，當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開了。14、凝膠層析

10、除鹽的實(shí)驗(yàn)中對(duì)凝膠柱及床面有何要求？為什么？對(duì)凝膠柱白要求：1、直徑15cm一般長(zhǎng)度：長(zhǎng)度=10:120:1。2、垂直放置防止氣泡產(chǎn)生和柱的分層。15、免疫球蛋白純化實(shí)驗(yàn)中怎么檢測(cè)收集的液體中不含有硫酸錢？怎么確定濃度較高的蛋白收集液？收集的液體滴定到有硫酸氨的比色盤中，有沉淀出現(xiàn)，說明有硫酸俊。不會(huì)！16、免疫球蛋白純化實(shí)驗(yàn)中對(duì)加樣有何要求？洗脫時(shí)為何要控制流速？樣品加樣量的多少要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求而定，加樣過多，會(huì)造成洗脫峰的重疊，影響分離效果。流速太快，分子小的物質(zhì)來不及擴(kuò)散，會(huì)隨著分子的物質(zhì)一起被洗脫下來，達(dá)不到分離要求。流速太慢，大分子物質(zhì)的下沉速度與小分子差不多的話，同樣達(dá)不到分離

11、的目的。17、SDS是什么？在SDS-PAGE；驗(yàn)中有何作用？SDS是十二烷基硫酸鈉的簡(jiǎn)稱作用：是一種陰離子去污劑，它能按照一定比例與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，其負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷，也就消除或降低了不同蛋白質(zhì)之間原有的電荷差別，這樣就使電泳遷移率只取決于分子大小這一個(gè)因素，就可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)對(duì)遷移率所作的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得未知蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。18、PAGE勺主要成分是彳f么？答：PAGE勺主要成分是：丙烯酰胺19、在SDS-PAG毆驗(yàn)中電極緩沖溶液的主要成分是什么？pH值是多少？分離膠和濃縮膠中的緩沖溶液的主要成分是什么？pH值是多少？答：在SDS

12、-PAGE；驗(yàn)中電極緩沖溶液的主要成分是：三羥甲基氨基甲烷（Tris）,甘氨酸，SDSph值是8.3分離膠和濃縮膠中的緩沖溶液的主要成分是：Tris-HCL8.8,6.820、在SDS-PAG毆驗(yàn)中使用不連續(xù)膠有何優(yōu)點(diǎn)？答：不連續(xù)系統(tǒng)中由于緩沖液離子成分、pH凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性，帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng)，分子篩效應(yīng)，還具有樣品濃縮效應(yīng)，因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳。21、在SDS-PAG毆驗(yàn)中濃縮膠為何有濃縮效應(yīng)？答：凝膠孔徑的不連續(xù)性。濃縮膠孔膠大；分離膠孔膠小。在電場(chǎng)作用下，樣品顆粒在大孔膠中泳動(dòng)的阻力小，移動(dòng)速度快；當(dāng)進(jìn)入小孔膠時(shí)，受到的阻力大，移動(dòng)速度減慢

13、。因而在兩層凝膠交界處，樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區(qū)帶。電位梯度的不連續(xù)性。電泳開始后，快離子的快速移動(dòng)會(huì)在其后形成一個(gè)離子強(qiáng)度很低的低電導(dǎo)區(qū)，使局部電位梯度增高，將蛋白質(zhì)濃縮成狹窄的區(qū)帶。22、在SDS-PAG毆驗(yàn)中分離膠中不同蛋白質(zhì)顆粒移動(dòng)的速度為何不同？答：由于PAG注要靠分子篩效應(yīng)分離生物分子，蛋白質(zhì)遷移速率受蛋白質(zhì)的帶電狀態(tài)、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)和分子量的大小影響，如何才能實(shí)現(xiàn)按分子量的大小分離不同的蛋白質(zhì)？23、在SDS-PAGE；驗(yàn)中，上樣緩沖溶液的主要成分有哪些？為何要用上樣緩沖溶液處理蛋白質(zhì)？答：SDS-PAGE:樣緩沖液是以澳酚藍(lán)為染料，5倍濃縮的SDS-PAGE!膠電泳上樣緩沖

14、液；該緩沖液中含有DTT,可是蛋白質(zhì)分子的鍵內(nèi)二硫鍵和鏈間二硫鍵斷裂通過鍵連接的各蛋白亞單位彼此分離，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色以后在電泳凝膠上顯現(xiàn)清晰蛋白條帶。24、簡(jiǎn)述SDS-PAG改驗(yàn)原理。(25,26,27)答：聚丙烯酰胺凝膠電泳之所以能將不同的大分子化合物分開，是由于這些大分子化合物所帶電荷的差異和分子大小不同之故，如果將電荷差異這一因素除去或減小到可以忽略不計(jì)的程度，這些化合物在凝膠上的遷移率則完全取決于相對(duì)分子質(zhì)量。SDS能按照一定比例與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，其負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷，也就消除或降低了不同蛋白質(zhì)之間原有的電荷差別，這樣就使電泳遷移率只取決于分子大小

15、這一個(gè)因素，就可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)對(duì)遷移率所作的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得未知蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。25、利用SDS-PAG改驗(yàn)怎么測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量？答：SDStB按照一定比例與蛋白質(zhì)分子結(jié)合成帶負(fù)電荷的復(fù)合物，其負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷，也就消除或降低了不同蛋白質(zhì)之間原有的電荷差別，這樣就使電泳遷移率只取決于分子大小這一個(gè)因素，就可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)對(duì)遷移率所作的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得未知蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。26、利用SDS-PAG改驗(yàn)怎么進(jìn)行純度的鑒定？根據(jù)染色所出現(xiàn)的區(qū)帶，分析樣品的純度。27、利用SDS-PAG改驗(yàn)怎么定位所需的物質(zhì)？用直尺量出染色所出現(xiàn)的區(qū)帶到

16、頂端的距離。28、紙層析分離氨基酸的基本原理是什么？答：用濾紙為支持物進(jìn)行層析的方法，紙層析所用展層溶劑大多由水和有機(jī)溶劑組成，濾紙纖維與水的親和力強(qiáng)，與有機(jī)溶劑的親和力弱，因此在展層時(shí)，水是固定相，有機(jī)溶劑是流動(dòng)相。將樣品點(diǎn)在濾紙上，進(jìn)行展層，樣品中的各種氨基酸在兩相溶劑中不斷進(jìn)行分配。由于它們的分配系數(shù)不同，不同氨基酸隨流動(dòng)相移動(dòng)的速率就不同，于是就將這些氨基酸分離開來，形成距原點(diǎn)距離不等的層析點(diǎn)。29、怎么利用紙層析對(duì)氨基酸進(jìn)行定性分析？答：紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法，其中濾紙纖維素上吸附的水是固定相，展層用的有機(jī)溶溶劑是流動(dòng)相。在層析時(shí)，將樣品點(diǎn)在距濾紙一端約23cm的某一處，該點(diǎn)稱為原點(diǎn)；然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個(gè)方向進(jìn)行展層，這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配，由于分配系數(shù)不同，結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上。30、什么是電泳？什么是層析？答：帶電顆粒在