血型鑒定和亞型2009-9-20華信(1)

1、ABOABO血型和亞型檢查血型和亞型檢查北京佰利申公司市場(chǎng)部北京佰利申公司市場(chǎng)部張松張松2009-9-24 討論內(nèi)容nABO血型及遺傳n血型試劑的現(xiàn)狀和發(fā)展nABO血型檢查和亞型診斷和案例nABO亞型輸血原則發(fā)現(xiàn)血型n1900年奧地利醫(yī)生Landsteiner發(fā)現(xiàn)了ABO血型系統(tǒng)，成為血型血清學(xué)的奠基人。1932年獲諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。被國(guó)際醫(yī)學(xué)界稱(chēng)為“血型之父”n血型血清學(xué)：應(yīng)用血清學(xué)的方法研究血液中抗原、抗體及其反應(yīng)的科學(xué)。血型與遺傳血型與遺傳n基因是遺傳的基本單位。n一個(gè)個(gè)體所帶的基因總和，稱(chēng)為基因型,血型抗原通常是共顯性性狀。n血型血清學(xué)方法直接檢測(cè)出的基因產(chǎn)物，稱(chēng)為表型。ABO血型的遺傳共

2、由3個(gè)等位基因IA，IB和i控制的，通常為共顯性。血型的遺傳是十分穩(wěn)定的，但也有一些特殊的情況血型的遺傳是十分穩(wěn)定的，但也有一些特殊的情況人類(lèi)ABO系統(tǒng)血型表血型表型基因型抗原(在細(xì)胞膜上)抗體基因和產(chǎn)物AIAIA,IAiA（抗B）IA(9q34)N-乙酰半乳糖轉(zhuǎn)移酶BIBIB,IBiB（抗A)IB(9q34)半乳糖轉(zhuǎn)移酶ABIAIBAB-Oii-（抗A抗B）i(9q34)無(wú)相應(yīng)產(chǎn)物血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n是指一系列等位基因產(chǎn)生的,可使用血清學(xué)方法或免疫學(xué)檢出化學(xué)上有關(guān)的抗原。血型在醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用血型在醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用n器官移植n輸血治療n疾病診斷（HDN等）n疾病相關(guān)n親子鑒定n個(gè)體識(shí)別

3、8ABOABO抗體抗體n性質(zhì)：多數(shù)為IgM，或有少量IgG，IgAn天然抗體：沒(méi)有明顯抗原刺激而產(chǎn)生的抗體。n免疫抗體：通過(guò)輸血、妊娠等免疫刺激獲得的抗體nA型人抗BnB型人抗A多為IgMnO型人除具有抗A，抗B外，還有抗AB，為IgG，IgM或IgA混合物，IgG型抗A或抗B可通過(guò)胎盤(pán)。nB型人抗A效價(jià)高于A型人抗B效價(jià)nO型人抗A，抗B或抗AB效價(jià)高于B型或A型人相應(yīng)抗A或抗B。n完全缺乏抗A、抗B者，0.01%。配血步入基因時(shí)代配血步入基因時(shí)代n為了預(yù)防輸血不良反應(yīng)和挽救生命，歐州學(xué)者們正在呼吁用DNA檢測(cè)替代血清學(xué)方法來(lái)鑒定血型。n基因分型能更準(zhǔn)確地完成供受者間的血型配型，從而防止同種

4、免疫和其它免疫相關(guān)的輸血反應(yīng)。n100多年來(lái)血清學(xué)方法面臨挑戰(zhàn)。血型試劑的現(xiàn)狀與展望血型試劑的現(xiàn)狀與展望n抗A抗B血型定型試劑：中國(guó)生物制品規(guī)程2000版：能檢測(cè)A2、A2Bn2010版藥典（正在修訂）不能低于中檢所的標(biāo)準(zhǔn)品。nISBT對(duì)定型試劑要求，既不能“漏檢”A3、B3，理想的是能識(shí)別Ax、Bx，血凝效價(jià)至少在1：128。我國(guó)抗我國(guó)抗A A抗抗B B血型試劑標(biāo)準(zhǔn)血型試劑標(biāo)準(zhǔn)n特異性：抗-A，只凝集含A抗原紅細(xì)胞，包括A1、A2、A1B、A2B;可不凝集Ax、Bx細(xì)胞。n親和力：抗-A對(duì)A1細(xì)胞開(kāi)始凝集的時(shí)間為15秒，對(duì)A2為30秒，對(duì)A2B為45秒；抗-B對(duì)B紅細(xì)胞為15秒。n效價(jià)：抗-

5、A1 1：128，抗-A2B1：16、抗-B 1：128正確檢查方法和高質(zhì)量試劑缺一不可正確檢查方法和高質(zhì)量試劑缺一不可n從理論到實(shí)際可以說(shuō)明，不可能絕對(duì)避免亞型紅細(xì)胞“漏檢現(xiàn)象”。n應(yīng)用高質(zhì)量的血型試劑，應(yīng)達(dá)到ISBT標(biāo)準(zhǔn)。n正確的血型檢定方法：輸血規(guī)范要求，即”供受”必須做正反定型，才能正確判斷血型。確保安全輸血。13ABOABO亞型亞型nA 亞型 1911年, von Dungern 發(fā)現(xiàn)A型有2種，A1， A2 nA2與A1有量的差別，A2抗原位點(diǎn)數(shù)比A1少得多，糖基轉(zhuǎn)移酶活性也低nA2與A1也有質(zhì)的差別，1-8% A2有抗A1nA1細(xì)胞上有A及A1抗原nA2細(xì)胞上只有A抗原nA1，A

6、2亞型實(shí)際上是由H抗原結(jié)構(gòu)造成的，H1，H2是非分支直鏈，而H3，H4為分支鏈，A1酶可將H1-4轉(zhuǎn)化為Aa-d，而A2酶只能轉(zhuǎn)化H1，H2為Aa，Ab，抗A1可能是針對(duì)Ac，Ad決定簇的。與抗與抗A A反應(yīng)的相對(duì)凝集力反應(yīng)的相對(duì)凝集力以及每個(gè)紅細(xì)胞上以及每個(gè)紅細(xì)胞上A A位點(diǎn)的密度位點(diǎn)的密度表現(xiàn)型凝集力抗原位點(diǎn)密度（每個(gè)紅細(xì)胞上的A位點(diǎn)X105）A1A2A3AxAendAm,AyAel100962631033101050010.5(7.9514.56)2.21(1.293.53)0.35(0.071.0)0.048(0.0140.10)0.035(0.0110.044)0.012(0.001

7、0.019)0.007(0.0010.014)亞型頻率分布亞型頻率分布獻(xiàn)血者檢測(cè)確定其它亞型66/440617份（除A214例，A2B35例）nA亞型22份nAxB11例，AelB3例，Ax3例，Ael2例，Amh2例，A31例nB亞型41份nBx11例，B39例，ABx7例，AB35例，Bel3例，Bm2例，ABel1例，ABend1例，ABm1例，Bend1例。nCisAB2例,nB(A)1例nB亞型多于A亞型。最常見(jiàn)亞型為AxB和Bx。有不規(guī)則抗體54例n引自中國(guó)輸血雜志2006，19（1）：25血源“漏檢”亞型nA3，B3漏檢：微孔板法，正反定型相符，忽略混合視野。nAxB漏檢:誤定為

8、B型，醫(yī)院配血次側(cè)不合退回。nBx漏檢：誤定為O型，輸注給O型，出現(xiàn)明顯輸血反應(yīng)。nA亞型的不規(guī)則抗體通常很弱，屬冷抗體，配血很容易漏檢。n亞型受血者漏檢，又未查出抗體，很容易導(dǎo)致輸血反應(yīng)。血型血型正定型試驗(yàn)正定型試驗(yàn)型物質(zhì)型物質(zhì)抗原數(shù)抗原數(shù)/細(xì)胞細(xì)胞（103）血清中血清中抗抗-A1抗抗A、抗、抗AB、抗、抗H、抗、抗A1A14+ 4+ W+ 4+A，H810-1170無(wú)無(wú)A24+ 4+ 3+ 0A，H240-2904%A32+mf 2+mf 4+ 0A，H35很少很少Ax0/w+ 1-2+ 4+ 0H4幾乎全部幾乎全部Am0/ 0/ 4+ 0A，H0.2-1.9無(wú)無(wú)AendWkmf Wkmf

9、 4+ 0H200(10%凝集凝集)無(wú)無(wú)Ael0 0 4+ 0H0.1-1.4經(jīng)常經(jīng)常A A亞型血清學(xué)反應(yīng)特征亞型血清學(xué)反應(yīng)特征主要A亞型：A1、A2亞型n抗原數(shù)和分泌物質(zhì)量區(qū)別。n與抗A試劑血清均可直接凝集。n與抗A1試劑凝集：為A1、A1B紅細(xì)胞，占80%。n與抗A1試劑不凝集：為A2、A2B紅細(xì)胞，占20%。nA2、A2B紅細(xì)胞：10%,25%有抗A1抗體。nA2、A2B紅細(xì)胞：血樣中不含抗紅細(xì)胞：血樣中不含抗A1抗體，則不必用抗抗體，則不必用抗A1確定其亞型。確定其亞型。亞型有意外抗體n2007某院輸血科、男、輸血前檢查，不同試劑出現(xiàn)不同結(jié)果。n長(zhǎng)春博德標(biāo)清：-A（-）、-B（4+）。

10、n北京血站鑒定：A亞B。輔助檢查和吸收放散試驗(yàn)輔助檢查和吸收放散試驗(yàn)n進(jìn)口試劑：-A(w+)、-B（4+）、-A1(-)、-H(2+w)、Ac(3+)、 Bc(-)、Oc(-)、自身(W+)n國(guó)產(chǎn)長(zhǎng)春：-A(-)、-B（4+）n吸收試驗(yàn)：抗-A（進(jìn)口）+3洗病人紅細(xì)胞各6滴混勻，放4冰箱1小時(shí)（混勻/15分鐘）。n放散試驗(yàn)：6洗吸收后紅細(xì)胞56/10分鐘，放散液+Ac離心3+（效價(jià)1：8）。n診斷：A亞B。n建議輸B型洗滌紅細(xì)胞或O型洗滌紅細(xì)胞比較安全。B亞型案例n2009年02月25日、某醫(yī)院正常體檢n血型檢測(cè)B孔雙群，經(jīng)正反定進(jìn)一步確證，報(bào)告B型。亞型有意外抗體n2004年，某院、女、子宮

11、肌瘤、術(shù)前輸血科血型檢查。n戴安娜卡：正定：AB、反定：B，正反不符。n長(zhǎng)春博德標(biāo)清：正定：B、反定：B，正反相符。n對(duì)卡的血型結(jié)果提出疑問(wèn)？n經(jīng)北京血站鑒定：A亞B、血清中有抗A1抗體。n報(bào)告發(fā)回?cái)?shù)天后，用戶(hù)回電質(zhì)疑：其夫是B型，能生出O型孩子嗎？n答案：？亞型有意外抗體n2008某院、男、輸血前檢查，漏檢弱A，會(huì)誤判B型。n北京血站鑒定：B（A）型、血清中有抗A1抗體。n并做基因檢查（其基因型應(yīng)為B（A）/O型）。n家系調(diào)查：待查。亞型有意外抗體順式遺傳和順式遺傳和B(A)n順式AB指從父母的一方同時(shí)得到A和B基因，在一條染色體上，而另一條染色體上是從父母中另一方來(lái)的O基因。nB（A）血型

12、是一種罕見(jiàn)的ABO亞型，其A和B抗原的傳遞呈順式遺傳方式，同cisAB血型有相似之處。ncisAB和B（A）表型的抗原含量各有偏重（其基因型應(yīng)為B（A）/O型）。n注意的是：n含有不規(guī)則抗體的cisAB型、B（A）型，不宜作為普通供血者。n若為受血者，除輸同型的cisAB型、B（A）型外，還可輸O型洗滌紅細(xì)胞及AB型血漿。正反定型不一致，則需要附加試劑進(jìn)一步鑒定n正定型中增加抗-A1、抗-H、抗-AB。n抗-AB用來(lái)確認(rèn)弱A、弱B抗原。n抗A1用于鑒定A亞型。n抗-H用于鑒定亞型及孟買(mǎi)型。n反定型試驗(yàn)中增加O細(xì)胞，用于鑒定是否存在ABO系統(tǒng)以外的同種抗體對(duì)定型的影響。n吸收試驗(yàn)、放散試驗(yàn)證實(shí)抗

13、原存在。ABO以外的同種抗體對(duì)定型的影響n(yōu)影響反定型的血型抗體，抗-M抗體多見(jiàn)n試管法用O細(xì)胞與病人血漿離心看結(jié)果有凝集，即ABO以外抗體Am 亞型及家系調(diào)查n正定型：抗A(-)抗B (-)抗A1 (-)抗AB (w+)n反定型： Ac (-) Bc (3+) Oc (-)自身(-)n血型物質(zhì)測(cè)定：A、H物質(zhì)n吸收放散：證實(shí)：An家系：其父A 其母O ，子代:2個(gè)Am 2個(gè)An推斷其父血型基因是A/Am,其母血型基因是O/OA3型特征：n與抗-A試劑血清出現(xiàn)混合視野n與抗-AB試劑血清出現(xiàn)混合視野n與抗A1不凝集n與抗-H反應(yīng)n偶爾血清中有抗-A1抗體。n分泌型有A和H物質(zhì)。血站對(duì)亞型結(jié)果判斷

14、n血站對(duì)某些血型鑒定結(jié)果為：“暫定”或“初定”疑問(wèn)：由于病人有過(guò)輸血或治療。某些疾病或治療影響抗體減弱或抗原生成、減弱。一般亞型可以用抗A1檢查，若陰性可以定為亞型。但新生兒本身抗原就弱，用抗A1確定亞型時(shí)，最好用正常的新生兒紅細(xì)胞用抗A1對(duì)照后，再確定結(jié)果（保證抗A1抗體的準(zhǔn)確性）。Ax型特征：填空n與抗-A試劑血清出現(xiàn)（）n與抗-AB試劑血清出現(xiàn)（）n與抗A1試劑血清（）n與抗-H試劑血清反應(yīng)（）n其血清中是否有抗-A1抗體（）。n分泌型有A（）H（）物質(zhì)。n簡(jiǎn)述吸收放散試驗(yàn)？n如何輸血？Oh(孟買(mǎi)）型特征：n血型檢定：正定：-A（-）、-B（-）、-AB（-）、-H（-)， 反定：Ac+

15、、Bc+、Oc+n抗篩：(+）、（+）、（+）、自身（-）n鑒別Oh型、O型？nOh型輸血？總結(jié)：亞型鑒定試驗(yàn)n紅細(xì)胞與抗A及抗A1的凝集強(qiáng)度。n紅細(xì)胞與抗AB的凝集強(qiáng)度。n紅細(xì)胞上H抗原活性強(qiáng)弱n血清中是否存在抗A1抗體。n分泌型人唾液中A及H物質(zhì)的存在。n吸收放散試驗(yàn)證明A抗原的存在。n家系調(diào)查nDNA臨床輸血技術(shù)規(guī)范n2000 184號(hào)衛(wèi)生部關(guān)于臨床輸血技術(shù)規(guī)范n第十五條第十五條 輸血科（血庫(kù)）要逐項(xiàng)核對(duì)輸血申請(qǐng)單、受血者和供血輸血科（血庫(kù)）要逐項(xiàng)核對(duì)輸血申請(qǐng)單、受血者和供血者血樣，復(fù)查受血者和供血者者血樣，復(fù)查受血者和供血者ABOABO血型（正、反定型血型（正、反定型) )n除新生兒外

16、，除新生兒外，ABOABO血型檢測(cè)必須做正反定型血型檢測(cè)必須做正反定型nABOABO正反定型不一致時(shí)正反定型不一致時(shí)重復(fù)試驗(yàn)，排除技術(shù)原因重復(fù)試驗(yàn)，排除技術(shù)原因詢(xún)問(wèn)患者病史，包括診斷、輸血史等詢(xún)問(wèn)患者病史，包括診斷、輸血史等不可根據(jù)自己經(jīng)驗(yàn)，隨意下結(jié)論不可根據(jù)自己經(jīng)驗(yàn)，隨意下結(jié)論臨床輸血技術(shù)規(guī)范輸血前檢查“三保險(xiǎn)”nABO血型：相合99.4%，nRHD：相合99.8%n抗體篩查：相合99.94%n交叉配血：相合99.95%疑難血型/配血，緊急輸血怎么辦？n輸血前檢查（血型、抗篩、配血）與常規(guī)血液血檢查不同，如：Hb、WBC、PT可直接報(bào)結(jié)果。n血型報(bào)告是綜合分析結(jié)果（診斷？）不是直接報(bào)告結(jié)果。

17、n如：正定（AB)、反定（O）直接結(jié)果幾分鐘可報(bào)告。n分析結(jié)果（到底是什么血型） ？n許多補(bǔ)充試驗(yàn)幾小時(shí) 幾天外送。n輸血科與醫(yī)生溝通：血型報(bào)告O/A/B?相當(dāng)于臨床診斷休克/原因待查（？）疑似非典。n政策依據(jù)臨床技術(shù)規(guī)范第10條，對(duì)稀有血型患者（疑難必稀有）輸血原則：自身輸血、同型輸血、配合型輸血。n配合性輸血（沒(méi)有要求供受同型），不必為糾纏血型而耽誤輸血搶救。疑難血型/配血，緊急輸血怎么辦？例：血液病、亞型（疑難）血型：A? O? 進(jìn)一步確定血型：吸收、放散、血型物質(zhì)、抗-H、家系、DNA 需要4h-幾天。若緊急搶救?；颊撸寒?dāng)“O”處理。 真是O，輸O細(xì)胞，安全。 真是A，輸O細(xì)胞，安全。例:AIHA,正定：AB型，反定：O型。 血型：AB? O? 患者：當(dāng)“O”處理。 真是“O”輸O細(xì)胞，安全。 真是“AB”輸O細(xì)胞，安全。疑難血型/配血，緊急輸血怎么辦？n其它血型不容易判斷，照此辦理。n注意：n這種情況下，必須做抗體篩選和兩種方法配血。n遇到疑難血型，輸血科和臨床應(yīng)該理解溝通，提供選擇解決方案： 等待4h-3天（自己做）外送幾天？（血型鑒定清楚再輸血）。 上述緊急辦法，立即配血/緊急搶救。