動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體駱

1、雜雜種種植植株株融合的融合的原生質(zhì)原生質(zhì)體體ABAB再再生生出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)植物細(xì)胞植物細(xì)胞B 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過程過程2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體一、動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）一、動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）1、概念：、概念：指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。的過程。2、結(jié)果：、結(jié)果：形成單核的雜交細(xì)胞形

2、成單核的雜交細(xì)胞3、原理：、原理： 細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性4、誘導(dǎo)方式、誘導(dǎo)方式物理法：離心、振動(dòng)、電激物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇（化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒生物法：滅活的病毒不同不同DNADNA的兩個(gè)細(xì)胞的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂進(jìn)行有絲分裂5 5、動(dòng)物細(xì)胞融合過程、動(dòng)物細(xì)胞融合過程5、過程：、過程：動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合誘導(dǎo)，融合2個(gè)完整的雜交個(gè)完整的雜交細(xì)胞細(xì)胞AB有絲分裂有絲分裂（膜融合、質(zhì)融合）（膜融合、質(zhì)融合）（核融合）（核融合）注意：注意：動(dòng)物細(xì)胞的融合也需要

3、把多個(gè)兩種細(xì)胞放動(dòng)物細(xì)胞的融合也需要把多個(gè)兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞胞6、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。7、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段新品種培育等的重要手段 特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體思考思考？1. 1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？如何產(chǎn)

4、生？2. 2. 抗體抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點(diǎn)？與抗原作用的特點(diǎn)？ 主要分布在哪里？主要分布在哪里？3 3. .用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？二、單克隆抗體二、單克隆抗體 抗體抗體 抗體抗體 抗原抗原 應(yīng)答應(yīng)答 抗體的不純性抗體的不純性 動(dòng)物細(xì)胞受到抗原刺激動(dòng)物細(xì)胞受到抗原刺激, ,引起免疫反應(yīng)產(chǎn)生的球蛋白引起免疫反應(yīng)產(chǎn)生的球蛋白. .不是自己的而又能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原不是自己的而又能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原. .一種抗原有多種不同的決定簇一種抗原有多種不同的決定簇, ,刺激的是多種刺激的是多種B B細(xì)胞細(xì)胞, ,作用于作

5、用于不同的不同的B B細(xì)胞后細(xì)胞后, ,會(huì)產(chǎn)生多種抗體會(huì)產(chǎn)生多種抗體, , 這是多克隆的這是多克隆的, , 故不純故不純! ! 抗原抗原 B B細(xì)胞細(xì)胞漿細(xì)胞漿細(xì)胞 抗體抗體 刺激刺激 怎么才能得到純的抗體怎么才能得到純的抗體? ? 光純還不行光純還不行, ,還要大量還要大量. .怎么辦怎么辦? ? 但，有但，有問題問題: : 找，什么細(xì)胞能無限繁殖呢找，什么細(xì)胞能無限繁殖呢? ? 思路就出來了思路就出來了: :要想獲單一的純抗體要想獲單一的純抗體, ,就必須從一個(gè)就必須從一個(gè)B B細(xì)胞出發(fā)細(xì)胞出發(fā). .讓讓B B細(xì)胞大量繁殖細(xì)胞大量繁殖( (克隆克隆) )就可以產(chǎn)生大量抗體了就可以產(chǎn)生大量抗

6、體了. .B B細(xì)胞是不能無限繁殖的細(xì)胞是不能無限繁殖的. .怎么辦怎么辦? ?癌癌! ! 只有癌細(xì)胞只有癌細(xì)胞. . 但它不能產(chǎn)生抗體但它不能產(chǎn)生抗體. .癌細(xì)胞能無限繁殖癌細(xì)胞能無限繁殖, ,但不能產(chǎn)生抗體但不能產(chǎn)生抗體.B.B細(xì)胞能產(chǎn)生抗體細(xì)胞能產(chǎn)生抗體, ,但不能大但不能大量繁殖量繁殖. .融合呀融合呀! !只要將兩個(gè)細(xì)胞融合即可互補(bǔ)只要將兩個(gè)細(xì)胞融合即可互補(bǔ). .制備過程：制備過程：誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)注射抗原的目的是什么注射抗原

7、的目的是什么為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測(cè)，多次篩選一抗體檢測(cè)，多次篩選大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法抗的方法單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量大量大 作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合特異性結(jié)合 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速用于用于運(yùn)載藥物：制成運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。既不損傷

8、正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。結(jié)合同位素的單抗結(jié)合同位素的單抗-生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈 CD圖中圖中B為為_過程，過程，常用常用_作為誘導(dǎo)劑作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_ 。B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 黑面綿羊去黑面綿羊去核卵細(xì)胞核卵細(xì)胞白面綿羊卵白面綿羊卵腺細(xì)胞核腺細(xì)胞核重組細(xì)胞重組細(xì)胞早期胚胎早期胚胎另一頭母綿羊子宮另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生圖10A A 、 B B細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞, ,請(qǐng)據(jù)圖回答問題請(qǐng)

9、據(jù)圖回答問題: :A細(xì)胞細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞C細(xì)細(xì)胞胞D細(xì)細(xì)胞胞(1)(1)若若A A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞B B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞細(xì)胞為淋巴細(xì)胞, ,那么那么D D細(xì)胞細(xì)胞稱為稱為 細(xì)胞細(xì)胞,D,D細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的特征特征, ,一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的 性性質(zhì)質(zhì), ,通過通過 方式產(chǎn)生大量細(xì)胞方式產(chǎn)生大量細(xì)胞, ,我們稱之我們稱之為為 過程過程; ;另一方面能分泌大量的抗體另一方面能分泌大量的抗體, ,我我們把該過程分泌的抗體稱們把該過程分泌的抗體稱 . .雜交瘤雜交瘤連續(xù)分裂連續(xù)分裂有絲分裂有絲分裂單克隆單克隆單克隆抗體單克隆抗體練一練練

10、一練(2)D(2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是 , ,合成該物質(zhì)的場所是合成該物質(zhì)的場所是 , ,它是由它是由 控制合成的控制合成的, ,合成過程包括合成過程包括 和和 兩個(gè)重要步驟兩個(gè)重要步驟. .球蛋白球蛋白核糖體核糖體基因基因轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄翻譯翻譯(3)D(3)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有 作用作用, ,與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于 強(qiáng)強(qiáng) 高高. .免疫免疫特異性特異性靈敏度靈敏度(4)(4)若若A A為人細(xì)胞為人細(xì)胞,B,B為鼠細(xì)胞為鼠細(xì)胞, ,用同位素標(biāo)記用同位素標(biāo)記A A細(xì)胞膜細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)上的蛋白質(zhì),B,B不標(biāo)記不標(biāo)