動物細胞培養(yǎng)

1、1會計學(xué)動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)2牛牛文庫文檔分享（一）貼附型細胞：（一）貼附型細胞：大多數(shù)培養(yǎng)細胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細胞大多數(shù)培養(yǎng)細胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細胞貼附貼附: :是大多數(shù)有機體細胞在體內(nèi)生存和生長發(fā)育的基本存是大多數(shù)有機體細胞在體內(nèi)生存和生長發(fā)育的基本存在方式在方式結(jié)果結(jié)果: : 基于貼附特性，使細胞與細胞之間相互結(jié)合形成組基于貼附特性，使細胞與細胞之間相互結(jié)合形成組織，有機體的絕大多數(shù)細胞必須織，有機體的絕大多數(shù)細胞必須貼附貼附于一于一固相表面固相表面才能才能生生存存和和生長生長。培養(yǎng)時：培養(yǎng)時：這些細胞被放到體外環(huán)境中以后這些細胞被放到體外環(huán)境中以后, ,同樣需要貼附

2、于同樣需要貼附于某一固相表面才能生存和生長，因而某一固相表面才能生存和生長，因而屬于貼附型細胞屬于貼附型細胞貼附貼附( (錨定或錨著錨定或錨著) )依賴型依賴型( (性性) )細胞細胞牛牛文庫文檔分享細胞在體內(nèi)、外的貼附方式存在差異細胞在體內(nèi)、外的貼附方式存在差異體內(nèi)：體內(nèi)：貼附是全方位貼附是全方位, ,外形具有復(fù)雜的立體特征外形具有復(fù)雜的立體特征體外：體外：多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面，外多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面，外形一般與體內(nèi)時明顯不同形一般與體內(nèi)時明顯不同貼附的固相表面：貼附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料玻璃、聚苯乙烯塑料按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分

3、為四大類型四大類型 牛牛文庫文檔分享1 1、成纖維細胞型：、成纖維細胞型：牛牛文庫文檔分享名稱：名稱：成纖維細胞成纖維細胞來源：來源：由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織真正的成纖維細胞：心肌，平滑肌，成骨細胞，真正的成纖維細胞：心肌，平滑肌，成骨細胞，血管內(nèi)皮血管內(nèi)皮形態(tài)：形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則似體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則三角形，胞質(zhì)向外伸出三角形，胞質(zhì)向外伸出2323個長短不等的突起，個長短不等的突起，中有卵圓形核中有卵圓形核生長特點：生長特點：排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片，排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片， 細胞細胞-

4、-細胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維細胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維樣細胞，常有幾個伸長的細胞突起樣細胞，常有幾個伸長的細胞突起牛牛文庫文檔分享2 2、上皮細胞型、上皮細胞型牛牛文庫文檔分享名稱：名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實際上不完全相同僅形態(tài)上似體內(nèi)，實際上不完全相同來源：來源：來源于外胚層、內(nèi)胚層細胞來源于外胚層、內(nèi)胚層細胞, , 如：皮膚及其衍生物如：皮膚及其衍生物, ,消化道，乳腺，肺泡消化道，乳腺，肺泡, , 上皮性腫瘤上皮性腫瘤形態(tài)：形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細胞，扁平，不規(guī)則多角形，中類似體內(nèi)的上皮細胞，扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核有圓形核 生長特點：生長特點：易相

5、連成片，相靠易相連成片，相靠緊密相連成薄層緊密相連成薄層鋪石鋪石狀生長時呈膜狀移動，很少脫離細胞群而單個活動狀生長時呈膜狀移動，很少脫離細胞群而單個活動牛牛文庫文檔分享3 3、游走細胞型：、游走細胞型：呈散在生長，一般不連成片，胞質(zhì)呈散在生長，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運動，方向常突起，呈活躍游走或變形運動，方向不規(guī)則。此型細胞不穩(wěn)定，有時難以和不規(guī)則。此型細胞不穩(wěn)定，有時難以和其他細胞相區(qū)別。其他細胞相區(qū)別。4 4、多形型細胞：、多形型細胞：有一些細胞，如神經(jīng)細胞難以確定有一些細胞，如神經(jīng)細胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。 牛牛文

6、庫文檔分享（二）懸浮型細胞：（二）懸浮型細胞：見于少數(shù)特殊的細胞，如某些類型的癌細胞及白血病見于少數(shù)特殊的細胞，如某些類型的癌細胞及白血病細胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這細胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。類細胞容易大量繁殖。來源：來源：血，脾或骨髓，血中白細胞癌腫細胞血，脾或骨髓，血中白細胞癌腫細胞特點：特點：在懸浮中生長良好，細胞圓形、單個或小細胞在懸浮中生長良好，細胞圓形、單個或小細胞團團優(yōu)點：優(yōu)點：生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便( (不需消不需消化化) )，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺

7、點：缺點：純化不方便，不能通過離心將死、活細胞分離純化不方便，不能通過離心將死、活細胞分離牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享12牛牛文庫文檔分享細胞貼壁過程牛牛文庫文檔分享14 2. 2.接觸抑制接觸抑制 細胞接觸細胞接觸停止移動停止移動 正常細胞成單層生長正常細胞成單層生長 腫瘤細胞無接觸抑制腫瘤細胞無接觸抑制，可，可以堆積生長。以堆積生長。 接觸抑制可作為區(qū)分正常細胞接觸抑制可作為區(qū)分正常細胞與癌細胞的標志之一與癌細胞的標志之一牛牛文庫文檔分享15 3. 3.密度抑制密度抑制 細胞增殖，密度加大，培養(yǎng)液細胞增殖，密度加大，培養(yǎng)液營養(yǎng)成分消耗，細胞代謝物增營養(yǎng)成分消耗，細胞代謝物增多，導(dǎo)致發(fā)生

8、密度抑制，細胞多，導(dǎo)致發(fā)生密度抑制，細胞分裂停止分裂停止牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)細胞的生長和增殖過程（一）單個細胞的生長過程（二）細胞系的生長過程（三）每代細胞的生長過程牛牛文庫文檔分享（一）單個細胞的生長過程牛牛文庫文檔分享（二）細胞系的生長過程培養(yǎng)細胞的生命期：培養(yǎng)細胞的生命期：是指細胞在培養(yǎng)中持續(xù)增是指細胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長的時間。包括殖和生長的時間。包括原代培養(yǎng)期、傳代期及衰退原代培養(yǎng)期、傳代期及衰退期。期。牛牛文庫文檔分享細胞的生長曲線細胞的生長曲線牛牛文庫文檔分享1 1原代培養(yǎng)期：原代培養(yǎng)期：從體內(nèi)取出組織從體內(nèi)取出組織, ,接種培養(yǎng)到第一次傳代階段（接種培養(yǎng)到第一次傳代階段（初代

9、培養(yǎng)）初代培養(yǎng)）特點特點：1-41-4周、細胞呈活躍的移動、可見細胞分周、細胞呈活躍的移動、可見細胞分裂、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上與體內(nèi)原組織相似裂、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上與體內(nèi)原組織相似性大、多呈性大、多呈二倍體核型二倍體核型細胞群是異質(zhì)的，細胞克隆形成率很低，即細細胞群是異質(zhì)的，細胞克隆形成率很低，即細胞獨立生存性差。胞獨立生存性差。牛牛文庫文檔分享2 2傳代期：傳代期：初代培養(yǎng)細胞一經(jīng)傳代后便改稱做初代培養(yǎng)細胞一經(jīng)傳代后便改稱做細胞系細胞系。在全。在全生命期中此期的持續(xù)時間最長。在培養(yǎng)條件較好生命期中此期的持續(xù)時間最長。在培養(yǎng)條件較好情況下，細胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型，情況下，細胞增殖旺

10、盛，并能維持二倍體核型，呈二倍體核型的細胞稱呈二倍體核型的細胞稱二倍體細胞系二倍體細胞系。為保持二。為保持二倍體細胞性質(zhì)，細胞應(yīng)在初代培養(yǎng)期或傳代后早倍體細胞性質(zhì)，細胞應(yīng)在初代培養(yǎng)期或傳代后早期凍存。一般情況下當傳代期凍存。一般情況下當傳代10105050次左右，細胞次左右，細胞增殖逐漸緩慢，以至完全停止，細胞進入第三期增殖逐漸緩慢，以至完全停止，細胞進入第三期。 牛牛文庫文檔分享3 3衰退期：衰退期：此期細胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細此期細胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細胞形態(tài)輪廓增強，最后衰退凋亡。胞形態(tài)輪廓增強，最后衰退凋亡。在細胞生命期階段，少數(shù)情況下，在以上三期在細胞生命期階

11、段，少數(shù)情況下，在以上三期任何一點，由于某種因素的影響，細胞可能發(fā)任何一點，由于某種因素的影響，細胞可能發(fā)生自發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化的標志之一是細胞可能獲得。轉(zhuǎn)化的標志之一是細胞可能獲得永生性永生性或或惡性性惡性性。牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享（三）每代細胞的生長過程所謂細胞的所謂細胞的“一代一代”是指從細胞接種到分是指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間。這已成為培養(yǎng)工作中離再培養(yǎng)的一段時間。這已成為培養(yǎng)工作中的一種習(xí)慣說法，它的一種習(xí)慣說法，它與細胞倍增一代非同一與細胞倍增一代非同一含義含義。如某一細胞系為第。如某一細胞系為第153153代細胞，即指代細胞，即指該細胞系已傳代該細胞系已傳代

12、153153次。它與細胞世代或倍次。它與細胞世代或倍增不同；在增不同；在細胞一代中，細胞能倍增細胞一代中，細胞能倍增3 36 6次次。牛牛文庫文檔分享25牛牛文庫文檔分享1 1潛伏期潛伏期游離游離: :懸浮懸浮, ,胞質(zhì)回縮胞質(zhì)回縮, , 全部細胞全部細胞變?yōu)閳A球形變?yōu)閳A球形吸附吸附: :貼附底物貼附底物, ,一般一般2424小時內(nèi)貼小時內(nèi)貼壁壁潛伏潛伏: :可有運動活動可有運動活動, ,基本無增基本無增殖殖, , 少見分裂相少見分裂相 牛牛文庫文檔分享2 2指數(shù)生長期：指數(shù)生長期：細胞增值最旺盛的階段，細胞分裂相增多。細胞增值最旺盛的階段，細胞分裂相增多。細胞細胞活力最旺盛活力最旺盛的階段，

13、培養(yǎng)物中的階段，培養(yǎng)物中細胞數(shù)量細胞數(shù)量呈指數(shù)增長呈指數(shù)增長, ,細胞群體均一，是理想的實驗用細胞群體均一，是理想的實驗用細胞細胞接觸抑制：細胞運動停止接觸抑制：細胞運動停止密度抑制：細胞終止分裂密度抑制：細胞終止分裂牛牛文庫文檔分享3 3停止期：停止期：細胞數(shù)量達飽和密度后，細胞停止增殖，進細胞數(shù)量達飽和密度后，細胞停止增殖，進入停止期，也稱入停止期，也稱平臺期平臺期。停滯期細胞雖不增。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動，繼而培養(yǎng)液中營養(yǎng)漸殖，但仍有代謝活動，繼而培養(yǎng)液中營養(yǎng)漸趨耗盡，代謝產(chǎn)物積累、趨耗盡，代謝產(chǎn)物積累、pHpH降低。此時需降低。此時需做分離培養(yǎng)即傳代，否則細胞會中毒，發(fā)生做

14、分離培養(yǎng)即傳代，否則細胞會中毒，發(fā)生形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡牛牛文庫文檔分享潛伏期潛伏期指數(shù)生長期指數(shù)生長期停止期停止期牛牛文庫文檔分享培養(yǎng)細胞的遺傳學(xué)特征（一）染色質(zhì)與染色體：（一）染色質(zhì)與染色體： 正常細胞：二倍體正常細胞：二倍體 細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化：多倍體或異倍體細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化：多倍體或異倍體（二）細胞性別（二）細胞性別 女性：女性：BarrBarr小體小體 男性：男性：Y Y小體小體牛牛文庫文檔分享體內(nèi)外細胞的差異及培養(yǎng)細胞的分化 經(jīng)多次傳代增殖后，培養(yǎng)細胞將失去原有經(jīng)多次傳代增殖后，培養(yǎng)細胞將失去原有的組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)，分化逐漸減弱或的組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)，分

15、化逐漸減弱或不顯。形態(tài)與功能逐漸單一化，細胞衰老不顯。形態(tài)與功能逐漸單一化，細胞衰老或死亡，或發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲得不死性或惡性或死亡，或發(fā)生轉(zhuǎn)化，獲得不死性或惡性性。性。牛牛文庫文檔分享32牛牛文庫文檔分享33牛牛文庫文檔分享34牛牛文庫文檔分享35牛牛文庫文檔分享36牛牛文庫文檔分享1. 1. 天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基37牛牛文庫文檔分享38牛牛文庫文檔分享2. 2. 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基39牛牛文庫文檔分享40牛牛文庫文檔分享3.3.無血清培養(yǎng)基無血清培養(yǎng)基41牛牛文庫文檔分享42牛牛文庫文檔分享43牛牛文庫文檔分享44牛牛文庫文檔分享45牛牛文庫文檔分享46牛牛文庫文檔分享影響動物細胞培養(yǎng)的因素影

16、響動物細胞培養(yǎng)的因素 （1 1）溫度）溫度 ：哺乳動物最適溫度哺乳動物最適溫度36.536.50.5 0.5 ；對低溫耐受性比高溫強。對低溫耐受性比高溫強。 （2 2）p pH H：甚至死亡。甚至死亡。偏酸性耐受較強，偏堿性很偏酸性耐受較強，偏堿性很快死亡。快死亡。 （3 3）氣體）氣體：O O2 2；COCO2 2，還可調(diào)節(jié)，還可調(diào)節(jié)p pH H。 （4 4）滲透壓）滲透壓：不同細胞要求不同。不同細胞要求不同。47牛牛文庫文檔分享48牛牛文庫文檔分享動物細胞體外培養(yǎng)的特點動物細胞體外培養(yǎng)的特點: :牛牛文庫文檔分享幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細胞培養(yǎng)養(yǎng)單個細胞牛牛文庫文檔分享

17、轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進行轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進行原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)牛牛文庫文檔分享52牛牛文庫文檔分享過程過程 組織組織取材取材 組織細胞的分離分離 培養(yǎng)培養(yǎng) 機械法機械法 消化法消化法 牛牛文庫文檔分享動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細胞懸液細胞懸液胰蛋白酶胰蛋白酶1 1代細胞代細胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)5050代細胞代細胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)無限傳代無限傳代單個細胞單個細胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液動物組織細胞間隙動物組織細胞間隙中含有一定量的彈中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，性纖維等蛋白質(zhì)，將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和成具有一定彈性和韌性的組織和器官韌性的組織和器官。（分解彈性

18、纖維）（分解彈性纖維）牛牛文庫文檔分享55牛牛文庫文檔分享56牛牛文庫文檔分享機機械械法法分分離離胚胚胎胎 牛牛文庫文檔分享58牛牛文庫文檔分享59 （二）組織細胞的分離（二）組織細胞的分離 有有機械法機械法和和消化法消化法兩大類兩大類 1. 1.機械法：機械法： 離心分離法：離心分離法：適用于細胞懸液組織。適用于細胞懸液組織。500-1000rpm500-1000rpm離心離心5-10min5-10min。 切割分離法：切割分離法：用剪刀剪切成用剪刀剪切成1mm1mm3 3左右的小塊。左右的小塊。 機械分散法：機械分散法：擠壓和研磨，適用于纖維含量少的擠壓和研磨，適用于纖維含量少的組織。組織

19、。牛牛文庫文檔分享60 （二）組織細胞的分離（二）組織細胞的分離 2. 2.消化法：可使組織疏松，細胞分開，細胞容易消化法：可使組織疏松，細胞分開，細胞容易生長，成活率高。生長，成活率高。 胰蛋白酶消化法：胰蛋白酶消化法：適于消化細胞間質(zhì)較少的適于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織，對傳代細胞也適用。使用濃度一般為軟組織，對傳代細胞也適用。使用濃度一般為0.1%-0.5%0.1%-0.5%，用不含鈣、鎂離子的，用不含鈣、鎂離子的BSSBSS配制，配制，PH8-9PH8-9。血清有抑制其活性作用。血清有抑制其活性作用。 胰蛋白酶消化法有熱胰蛋白酶消化法有熱(37)(37)和冷和冷(4 )(4 )兩種處理兩

20、種處理。牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享62 膠原酶消化法：膠原酶消化法：膠原酶是由細菌中提取出的膠原酶是由細菌中提取出的酶，適用于消化纖維組織、上皮組織或膠原成酶，適用于消化纖維組織、上皮組織或膠原成分的組織?？捎煤}、鎂離子的分的組織?？捎煤}、鎂離子的BSSBSS配制或溶配制或溶于含血清的培養(yǎng)液中。使用濃度一般為于含血清的培養(yǎng)液中。使用濃度一般為0.1-0.1-0.3mg/mL0.3mg/mL，3737溫育。溫育。 優(yōu)點：消化緩和、無需機械振蕩優(yōu)點：消化緩和、無需機械振蕩 缺點：價格昂貴缺點：價格昂貴 可與胰蛋白酶混用可與胰蛋白酶混用牛牛文庫文檔分享63其他消化酶消化法其他消化酶消化法：

21、鏈霉蛋白酶、黏蛋白酶、透：鏈霉蛋白酶、黏蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等。明質(zhì)酸酶等。螯合劑消化法：螯合劑消化法：常用螯合劑有檸檬酸鈉、常用螯合劑有檸檬酸鈉、EDTA-EDTA-NaNa2 2等?？捎貌缓}、鎂離子的等。可用不含鈣、鎂離子的BSSBSS配制成配制成0.02%0.02%溶液溶液。EDTAEDTA適于消化傳代細胞，不受血清抑制，消化后適于消化傳代細胞，不受血清抑制，消化后需徹底清洗。需徹底清洗。牛牛文庫文檔分享64 （三）培養(yǎng)方法（三）培養(yǎng)方法 1. 1.組織塊培養(yǎng)法組織塊培養(yǎng)法：簡便，成功率較低：簡便，成功率較低牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享66牛牛文庫文檔分享67牛牛文庫文檔分享牛牛文庫

22、文檔分享牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享71牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享懸浮細胞培養(yǎng)瓶懸浮細胞培養(yǎng)瓶滾動培養(yǎng)瓶滾動培養(yǎng)瓶貼壁細胞培養(yǎng)瓶貼壁細胞培養(yǎng)瓶牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享牛牛文庫文檔分享76牛牛文庫文檔分享774. 4.克隆培養(yǎng)法克隆培養(yǎng)法：又稱單細胞分離培養(yǎng)法，：又稱單細胞分離培養(yǎng)法，就是將就是將細胞懸液中獲得的單個細胞用于培養(yǎng)，使之重新細胞懸液中獲得的單個細胞用于培養(yǎng)，使之重新繁殖成一個新的細胞群體的培養(yǎng)技術(shù)。繁殖成一個新的細胞群體的培養(yǎng)技術(shù)。 細胞株細胞株 : :由由細胞系細胞系進一步克隆化，而獲得進一步克隆化，而獲得的由的由單一細胞單一細胞形成的細胞群體。形成的細胞群體。

23、 初代細胞和有限細胞系的克隆培養(yǎng)比較困難，初代細胞和有限細胞系的克隆培養(yǎng)比較困難，無限細胞系、轉(zhuǎn)化細胞系和腫瘤細胞等則比較無限細胞系、轉(zhuǎn)化細胞系和腫瘤細胞等則比較容易容易牛牛文庫文檔分享78牛牛文庫文檔分享79牛牛文庫文檔分享80牛牛文庫文檔分享815. 5.細胞同步化培養(yǎng)細胞同步化培養(yǎng)：用自然的或人工的方法獲：用自然的或人工的方法獲得細胞周期同步化的細胞群體。得細胞周期同步化的細胞群體。篩選同步化細胞篩選同步化細胞 誘導(dǎo)同步化細胞誘導(dǎo)同步化細胞 M期細胞震蕩脫落法期細胞震蕩脫落法 離心洗脫法離心洗脫法 梯度沉降法梯度沉降法 血清饑餓法血清饑餓法 異亮氨酸營養(yǎng)缺乏法異亮氨酸營養(yǎng)缺乏法 DNAD

24、NA合成抑制劑阻斷法合成抑制劑阻斷法 秋水仙素阻斷法秋水仙素阻斷法 牛牛文庫文檔分享6. 6.動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)牛牛文庫文檔分享1. 1. 分批式操作分批式操作 2. 2. 流加式操作流加式操作 3. 3. 半連續(xù)式操作半連續(xù)式操作 4. 4. 連續(xù)式操作連續(xù)式操作 5. 5. 灌流式操作灌流式操作 優(yōu)點：操作簡單，培養(yǎng)周期短，污染和細胞突變的風(fēng)險小。優(yōu)點：操作簡單，培養(yǎng)周期短，污染和細胞突變的風(fēng)險小。缺點：費用高，每一次收液后，都要進行一系列新的接種放大缺點：費用高，每一次收液后，都要進行一系列新的接種放大的準備工作，此期間生產(chǎn)停工。而且收液率低的準備工作，此期間生產(chǎn)停

25、工。而且收液率低. .優(yōu)點：生產(chǎn)效率高，可反復(fù)長期培養(yǎng)，反復(fù)收獲產(chǎn)品。優(yōu)點：生產(chǎn)效率高，可反復(fù)長期培養(yǎng)，反復(fù)收獲產(chǎn)品。優(yōu)點：反應(yīng)器的培養(yǎng)狀態(tài)可以達到恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下優(yōu)點：反應(yīng)器的培養(yǎng)狀態(tài)可以達到恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下生長。生長。缺點：開放式操作，容易造成污染。細胞容易發(fā)生變異，且對缺點：開放式操作，容易造成污染。細胞容易發(fā)生變異，且對設(shè)備等要求高。設(shè)備等要求高。優(yōu)點：培養(yǎng)狀態(tài)恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下生長。產(chǎn)量高等優(yōu)點：培養(yǎng)狀態(tài)恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下生長。產(chǎn)量高等. .6. 6.動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)牛牛文庫文檔分享84牛牛文庫文檔分享85牛牛文庫文檔分享86牛牛文

26、庫文檔分享細胞系或細胞株的命名細胞系或細胞株的命名 HeLaHeLa：為供體患者的姓名（來源于宮頸癌）：為供體患者的姓名（來源于宮頸癌）CHOCHO：中國地鼠卵巢細胞（：中國地鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Chinese Hamster OvaryOvary）宮宮-743-743：宮頸癌上皮細胞，：宮頸癌上皮細胞，19741974年年3 3月建立月建立NIH3T3NIH3T3：美國國立衛(wèi)生研究院（：美國國立衛(wèi)生研究院（National National Institute of HealthInstitute of Health）建立；每）建立；每3 3天傳代，每次接天傳代，每次

27、接種種3 310105 5細胞細胞mLmL。牛牛文庫文檔分享細胞系或株的鑒定、管理和使用細胞系或株的鑒定、管理和使用 ATCCATCC入庫細胞要求檢測項目如下：入庫細胞要求檢測項目如下：培養(yǎng)簡歷：培養(yǎng)簡歷：組織來源日期、物種、組織起源、性組織來源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正?；虍惓＝】禒顟B(tài)、細胞已傳別、年齡、供體正?；虍惓＝】禒顟B(tài)、細胞已傳代數(shù)等代數(shù)等凍凍 存存 液：液：培養(yǎng)基和防凍液名稱培養(yǎng)基和防凍液名稱細胞活力：細胞活力：融解前后細胞接種存活率和生長特性融解前后細胞接種存活率和生長特性培培 養(yǎng)養(yǎng) 液：液：培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含抗培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含抗生素）、血清來源和含量生素）、血清來源和含量牛牛文庫文檔分享細胞形態(tài)：細胞形態(tài)：類型，如為上皮或成纖維細胞等類型，如為上皮或成纖維細胞等，融解后細胞生長特性，融解后細胞生長特性核核 型：型：二倍體或多倍體，標記染色體的有二倍體或多倍體，標記染色體的有無無無污染檢測：無污染檢測：包括細菌、真菌、支原體、原包括細菌、真菌、支原體、原蟲和