維生素C定量測定

1、紫外分光光度計(jì)法測定果蔬中紫外分光光度計(jì)法測定果蔬中Vc的含量的含量安徽師范大學(xué)生科院生化教研室本實(shí)驗(yàn)要求：本實(shí)驗(yàn)要求：1.本實(shí)驗(yàn)為設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)，每人須撰寫好實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包含“前言、實(shí)驗(yàn)、結(jié)果與討論、結(jié)論”四部分，其中前言和實(shí)驗(yàn)需要在上實(shí)驗(yàn)課前寫好，其余兩部分在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)撰寫，然后上交。2.實(shí)驗(yàn)時(shí)，每個(gè)小組做一種果蔬的Vc含量測定3.實(shí)驗(yàn)結(jié)束，每個(gè)小組提供一種果蔬的Vc含量數(shù)值供所有小組使用4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時(shí)，繪制表格或柱狀圖等請帶直尺和鉛筆5.參考資料： 馬宏飛， 盧生有，韓秋菊， 李薇. “紫外分光光度法測定五種果蔬中維生素 的含量”. 化學(xué)與生物工程，2012,29（8）：92-94.6

2、.本實(shí)驗(yàn)成績?yōu)樯瘜?shí)驗(yàn)考試成績。1. 學(xué)習(xí)定量測量維生素C的原理和方法2. 學(xué)習(xí)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn) 3.了解水果、蔬菜中維生素C的含量。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理l維生素維生素C C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏它時(shí)會產(chǎn)生壞血病，因此又稱其為是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏它時(shí)會產(chǎn)生壞血病，因此又稱其為抗壞血酸?？箟难帷它可分為還原型和脫氫型。還原型維生素它可分為還原型和脫氫型。還原型維生素C C具有很強(qiáng)的性。金屬銅和酶（抗壞血酸氧具有很強(qiáng)的性。金屬銅和酶（抗壞血酸氧化酶）可以催化維生素化酶）可以催化維生素C C氧化為脫氫型。根據(jù)它具有的還原性質(zhì)可測定其含量。氧化為脫

3、氫型。根據(jù)它具有的還原性質(zhì)可測定其含量。l維生素維生素C C的測定方法主要有紫外分光光度法、的測定方法主要有紫外分光光度法、 紅外光譜法、紅外光譜法、2,62,6二氯靛酚滴定法、二氯靛酚滴定法、 高效液相色譜法、鉬藍(lán)比色法、原子吸收法、碘量法、電位滴定法、熒光光度法、毛高效液相色譜法、鉬藍(lán)比色法、原子吸收法、碘量法、電位滴定法、熒光光度法、毛細(xì)管電泳法、流動注射化學(xué)發(fā)光法等。其中原子吸收法、高效液相色譜法和熒光光度細(xì)管電泳法、流動注射化學(xué)發(fā)光法等。其中原子吸收法、高效液相色譜法和熒光光度法儀器相對昂貴；法儀器相對昂貴； 碘量法和電位滴定法操作步驟較繁瑣，而且受其它還原性物質(zhì)、碘量法和電位滴定法

4、操作步驟較繁瑣，而且受其它還原性物質(zhì)、樣品色素顏色和測定時(shí)間的影響；樣品色素顏色和測定時(shí)間的影響； 紫外分光光度法是根據(jù)維生素紫外分光光度法是根據(jù)維生素C C對紫外產(chǎn)生吸收和對紫外產(chǎn)生吸收和對堿不穩(wěn)定的特性，對堿不穩(wěn)定的特性， 于于243243 處測定樣品液與堿處理樣品液兩者吸光度之差，處測定樣品液與堿處理樣品液兩者吸光度之差， 通通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程， 即可計(jì)算樣品中維生素即可計(jì)算樣品中維生素C C的含量。的含量。 紫外分光光度計(jì) 坐標(biāo)紙 移液器 離心機(jī) 研缽三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材市售果蔬 10-20g四、實(shí)驗(yàn)材料四、實(shí)驗(yàn)材料1. 10% HCl:10mL濃鹽酸溶解成100mL

5、溶液。2. 100ug/mL標(biāo)準(zhǔn)Vc溶液：準(zhǔn)確稱取0.05g抗壞血酸，加10L 10HCl溶解，用蒸餾水定容至00 mL，混勻，即得 100ug/mL維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液。3. 1mol/L NaOH:40g NaOH溶解成1000mL溶液。五、實(shí)驗(yàn)試劑五、實(shí)驗(yàn)試劑1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（有一組同學(xué)提前完成，其他小組不需要做）按照下表操作，以A243為縱坐標(biāo)，以Vc濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)曲。六、實(shí)驗(yàn)步驟六、實(shí)驗(yàn)步驟012345678100g/mLVc標(biāo)準(zhǔn)溶液mL00.03 0.06 0.09 0.12 0.15 0.18 0.24 0.30蒸餾水mL32.97 2.94 2.91 2.88 2.85 2.82

6、 2.76 2.70Vc濃度g/mL0123456810A243 （1）果蔬樣品的處理）果蔬樣品的處理 將蔬菜洗凈晾干，水果取果肉，分別稱取 10.00于研缽中，各加入0 HCl 10mL，研磨勻漿， 轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中， 用蒸餾水稀釋至刻度，混勻。移至離心管中3000轉(zhuǎn)/分鐘 離心 10min ， 取上清液即為待測果蔬提取液。2. 樣品測定（2）待測果蔬提取液吸光度的測量）待測果蔬提取液吸光度的測量 取0.1mL待測果蔬提取液， 放入盛有0.2mL10% HCl試管中， 再加蒸餾水4.7mL，搖勻。以蒸餾水為空白， 在243nm處測定其吸光度（A1）。 （3）堿處理果蔬提取液吸光度的測量

7、）堿處理果蔬提取液吸光度的測量 依次吸取0.1mL 待測果蔬提取液、1.0mL 蒸餾水和 0.4mL 1mol/L NaOH放入試管中。 搖勻； 靜置20min后加入0.4mL 0 HCl ， 混勻， 再加入3.1mL蒸餾水。以蒸餾水為空白， 在243nm處測定其吸光度（A2）。 （4）吸光度確定）吸光度確定 待測果蔬提取液與堿處理果蔬提取液的吸光度之差（A1-A2）即為果蔬樣品吸光度。3.計(jì)算計(jì)算 測得果蔬樣品的吸光度后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可計(jì)算出果蔬中維生素的含量mg/（100g） 式中： 為依標(biāo)準(zhǔn)曲線查到的Vc濃度, ug/mL ； 為測吸光度時(shí)吸取樣品溶液的體積， mL ； 總為吸取

8、樣品定容總體積，mL； 待測總 為待測樣品總體積， mL ； 總 為果蔬質(zhì)量，； 100為100果蔬。維生素 含量 總 待測總 100 總 1000七、分析與討論七、分析與討論012345678100g/mLVc標(biāo)準(zhǔn)溶液mL00.03 0.06 0.09 0.120.15 0.18 0.24 0.30蒸餾水mL32.97 2.94 2.91 2.882.85 2.82 2.76 2.70Vc濃度g/mL0123456810A24300.0480.1050.1590.2130.2700.3210.4440.540線性回歸方程: A= 0.054825581c-0.004244186相關(guān)系數(shù)：R2 = 0.999703455CORREL:array1 和和 array2 之間的相關(guān)系數(shù)之間的相關(guān)系數(shù) INTERCEPT:利用現(xiàn)有的利用現(xiàn)有的 x 值與值與 y 值計(jì)算直線與值計(jì)算直線與 y 軸的截距。軸的截距。 LINEST:使用最小二乘法對已知數(shù)