分子生物學(xué)復(fù)習(xí)

1、 分子生物學(xué) 復(fù)習(xí)中心法則DNARNA蛋白質(zhì)復(fù)制轉(zhuǎn)錄翻譯逆轉(zhuǎn)錄RNA復(fù)制Part A. 復(fù)制復(fù)制通論n1.半保留復(fù)制n2.半不連續(xù)復(fù)制n3.復(fù)制起點(diǎn)固定, 雙向, 等速?gòu)?fù)制. n4.復(fù)制中的信號(hào): (1)復(fù)制 起點(diǎn): 原核ori, 真核ARS (2) 復(fù)制終點(diǎn) 原核和真核復(fù)制的主要差異n復(fù)制起點(diǎn)( 原核1, 真核多);n復(fù)制次數(shù)(原核多次, 真核1次)n真核S期復(fù)制, 端粒的復(fù)制 復(fù)制的幾種特殊形式復(fù)制的幾種特殊形式n環(huán)狀DNA復(fù)制 (1) 型 -雙向, 大腸桿菌(正常); (2) 滾環(huán)型-單向,切割, X174; (3) D-環(huán)型-單向, 線粒體.n病毒中存在全保留復(fù)制方式, 逆轉(zhuǎn)錄復(fù)制方式

2、.復(fù)制中信號(hào)保真復(fù)制中信號(hào)保真 (原核為例原核為例)n1. 復(fù)制中, 復(fù)制酶35外切酶的矯正功能;n2. 復(fù)制后的二次矯正( 母鏈甲基化).DNA的轉(zhuǎn)座的轉(zhuǎn)座n轉(zhuǎn)座: 染色體上可自主復(fù)制和移動(dòng)一段核酸序列.n分類(1) 復(fù)制性轉(zhuǎn)座( TnA)-拷貝(2) 非復(fù)制性轉(zhuǎn)座( IS )-整個(gè)移動(dòng) 1.很小,1kb 左右,編碼轉(zhuǎn)座酶; 2.末端有倒置重復(fù)序列,其外側(cè)還有一小段正置重復(fù)序列(轉(zhuǎn)座時(shí), 復(fù)制靶序列形成) 3.,特定IS,靶序列一樣; 不同IS,靶序列不一樣Part B. 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn) 錄 通 論一一. RNA轉(zhuǎn)錄的一般過(guò)程轉(zhuǎn)錄的一般過(guò)程 1.模板識(shí)別 2.轉(zhuǎn)錄起始 3.通過(guò)啟動(dòng)子 4.轉(zhuǎn)錄的

3、延伸 5.終止二二.轉(zhuǎn)錄的原料轉(zhuǎn)錄的原料: 1.RNA聚合酶; 2.雙鏈DNA模板; 3. NTPs ; 4.輔助因子三三. 轉(zhuǎn)錄的方向轉(zhuǎn)錄的方向: 5 3 (模板鏈 / 編碼鏈)四四. 轉(zhuǎn)錄中模板上的信號(hào)轉(zhuǎn)錄中模板上的信號(hào): (保守序列保守序列) 啟動(dòng)子( promotor), 終止子( terminator) 調(diào)控序列( 操縱子 operator, 增強(qiáng)子 enhancer )五.不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄一.原核生物轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn) RNA聚合酶聚合酶( 2 ): 全酶全酶 = 核心酶核心酶 + 提高酶與啟動(dòng)子序列的親和力(103),降低與非特異序列的親和力(104),啟動(dòng)子（啟動(dòng)子（promoter）nPr

4、ibnow box即即 -10 boxn-10 box與與-35 box的最佳距離為的最佳距離為17 1 bpn+1 一般為一般為A (mRNA轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn))n越接近保守序列越接近保守序列, 起動(dòng)子越強(qiáng)起動(dòng)子越強(qiáng).轉(zhuǎn)錄終止 (終止子)(1)不依賴于不依賴于 因子的終止因子的終止強(qiáng)終止子強(qiáng)終止子 =“ 一段反向互補(bǔ)序列一段反向互補(bǔ)序列 “ + “一段富含一段富含T的區(qū)域的區(qū)域”(2)依賴于依賴于 因子的終止因子的終止.; 弱終止子弱終止子 =“ 一段反向互補(bǔ)序列一段反向互補(bǔ)序列 “ 不依賴于不依賴于 因子的終止因子的終止依賴于依賴于 因子的終止因子的終止二.真核生物mRNA轉(zhuǎn)錄nRNA聚

5、合酶IInII類啟動(dòng)子:增強(qiáng)子(沉默子)n無(wú)方向, 位置, 距離的限制n具有組織特異性n有時(shí)兩者可相互轉(zhuǎn)換.n不屬于啟動(dòng)子, n能調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄.n起動(dòng)子,增強(qiáng)子與沉默子都屬于順式作用元件.真核生物的轉(zhuǎn)錄因子n起始,延伸, 終止都需要因子的幫助.(與原核轉(zhuǎn)錄的區(qū)別)n分為: (1) 通用轉(zhuǎn)錄因子-都需要 (2) 基因特異轉(zhuǎn)錄因子-調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄終止n沒(méi)有明確的終止子,但有終止信號(hào)n轉(zhuǎn)錄會(huì)在AATAAA下游0.5-2kb處終止(AATAAA下游15-30bp加PolyA)前體前體mRNA的加工的加工(時(shí)序性時(shí)序性)n(1) 5加帽 (轉(zhuǎn)錄早期進(jìn)行30 nt)n(2) 3加尾 (前體mR

6、NA加polyA)n (3) 切除內(nèi)含子n (4) 編輯和修飾 5 cap的特殊結(jié)構(gòu)和功能的特殊結(jié)構(gòu)和功能n3 m7GpppNmNm-3 (G的方向與的方向與N的方向相反的方向相反,通過(guò)通過(guò)5-5相連相連)功能功能: (1) 保護(hù)mRNA (2) 提高翻譯能力（效率） (3) 有利于mRNA在細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸（運(yùn)出細(xì)胞核） (4) 使mRNA前體的能正確剪接 (第一個(gè)內(nèi)含子)npoly(A)的功能(1) 保護(hù)保護(hù)mRNA：延長(zhǎng)其壽命（半衰期）(2) 提高提高mRNA的翻譯能力的翻譯能力：能與poly(A)結(jié)合蛋白 結(jié)合，促進(jìn)翻譯，促進(jìn)mRNA與核糖體結(jié)合(3) poly(A)能促進(jìn)最后一個(gè)內(nèi)含子的

7、剪接能促進(jìn)最后一個(gè)內(nèi)含子的剪接(3) RNA剪接（剪接（RNA splicing）n剪接信號(hào)(屬于內(nèi)含子的邊界) 主要: GU-AG (剪切體) 次要: AU-AC 自我剪切的I, II內(nèi)含子n剪接體: snRNAs (核小分子RNA)參與特殊剪接方式n選擇性剪接選擇性剪接: 一個(gè)基因轉(zhuǎn)錄出來(lái)的RNA前體，通過(guò)不同的剪接方式（選擇不同的外顯子）而形成不同的成熟mRNA，產(chǎn)生不同的蛋白質(zhì)n反式剪接反式剪接: 參與剪接的外顯子并不在同一個(gè)基因中（即在不同的RNA分子中）RNA編輯n在特定位點(diǎn): 改變,插入,刪除核苷酸.n在轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行，沿3 5方向進(jìn)行;n由gRNA（guide RNA，向?qū)NA）

8、指導(dǎo)進(jìn)行;n因是RNARNA, 存在 G-U 配對(duì).Part C. 翻譯翻譯蛋白翻譯通論n一.合成過(guò)程n1. 翻譯的起始-2. 肽鏈的延伸-3. 肽鏈的終止及釋放n二. 蛋白質(zhì)生物合成體系n 1、mRNA; 2、核糖體; 3、tRNA; 4、起始因子、延長(zhǎng)因子和終止因子; 5、氨基酰-tRNA 合成酶n三.氨基酸的活化與搬運(yùn)n AA-tRNAn四. 蛋白質(zhì)前體的加工, 折疊n五. 蛋白的定向轉(zhuǎn)運(yùn)n六. 蛋白的降解密碼子的特點(diǎn)密碼子的特點(diǎn)n遺傳密碼遺傳密碼：三聯(lián)體密碼三聯(lián)體密碼n遺傳密碼的特點(diǎn)：遺傳密碼的特點(diǎn)：n連續(xù)性連續(xù)性n有起始密碼有起始密碼(AUG, (AUG, (原核中也用原核中也用GU

9、G)GUG)和終止密碼和終止密碼(UAA,UAG,UGA)(UAA,UAG,UGA)n簡(jiǎn)并性簡(jiǎn)并性n擺動(dòng)性擺動(dòng)性n通用性通用性n偏好性偏好性 tRNA反密碼子堿基反密碼子堿基IUG mRNA密碼子堿基密碼子堿基A,C,UA,GC ,U密碼子與反密碼子配對(duì)的密碼子與反密碼子配對(duì)的擺動(dòng)現(xiàn)象擺動(dòng)現(xiàn)象核糖體A位A位P位P位大亞基大亞基小亞基小亞基mRNAmRNAtRNA：接合器n一種一種tRNA只能與一種氨基酸結(jié)合，一種氨基酸可與幾種只能與一種氨基酸結(jié)合，一種氨基酸可與幾種tRNA結(jié)合。結(jié)合。(tRNA數(shù)目數(shù)目20)n結(jié)合位點(diǎn)為：結(jié)合位點(diǎn)為：3端端CCA-OH。nAla-tRNAala;n起始起始tR

10、NA fmet-tRNAfmet： (原核生物）原核生物） Met-tRNAimet 起始起始tRNA (真核生物）真核生物）n met-tRNAemet;攜帶延長(zhǎng)中的肽鏈上的蛋氨酸攜帶延長(zhǎng)中的肽鏈上的蛋氨酸(真核生物）真核生物）tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 和三級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)三葉草型三葉草型倒倒 L 型型氨基酰-tRNA合成酶n既能識(shí)別特定的氨基酸，又能識(shí)別轉(zhuǎn)運(yùn)該氨基酸的tRNA。n氨酰tRNA合成酶的專一性很高，共有20種，每一種只用于單一種氨基酸與相應(yīng)tRNA的結(jié)合 (氨基酸專一, tRNA有多個(gè)).n氨基酸+ATP+tRNA 氨基酰-tRNA +AMP +PPin氨基酰-tRNA合成

11、酶可發(fā)揮較對(duì)功能，使誤載的氨基酰-tRNA從tRNA上釋下，保證遺傳信息翻譯的準(zhǔn)確性。n1. tRNA裝載裝載 在氨酰tRNA合成酶（aminoacyl-tRNA synthetase）的作用下，使氨基酸連接到tRNA 3端的腺苷酸上，形成氨酰tRNA (fmet-tRNA)n2. 核糖體解離核糖體解離n翻譯起始復(fù)合物首先是在核糖體小亞基上組裝起來(lái)n每一次翻譯后，核糖體的大小亞基必須解離，以讓新的翻譯起始復(fù)合物形成n核糖體解離需要起始因子（initiation factors，IF）的協(xié)助原核生物的蛋白翻譯原核生物的蛋白翻譯n3. mRNA與小亞基結(jié)合。 AUG上游上游813個(gè)堿基處存在個(gè)堿基

12、處存在SD序列能與小亞基中序列能與小亞基中16S rRNA 3端序列互補(bǔ)端序列互補(bǔ)。n4、fmet-tRNA的結(jié)合： fMet-tRNA進(jìn)入小亞基的P位, 反密碼子與mRNA起始密碼子配對(duì); n5、大亞基結(jié)合n6. 延伸延伸Step 1：進(jìn)位 (注冊(cè)) (1) 一個(gè)新的氨酰tRNA結(jié)合到核糖體的A位 (2) 校對(duì)（proofreading）:如錯(cuò)誤的氨酰 tRNA進(jìn)入了A位 （反密碼子與密碼子不能很好配對(duì)），可進(jìn)行校正. Step 2：轉(zhuǎn)肽 大亞基的23S rRNA, 肽基轉(zhuǎn)移酶, 形成肽鍵Step 3：移位nmRNA與肽基tRNA（peptidyl-tRNA）移動(dòng)1個(gè)密碼子的距離，使肽基tR

13、NA進(jìn)入P位，而原在P位的tRNA離開(kāi)核糖體n7. 終止終止(1) 翻譯到達(dá)終止密碼子終止密碼子后，釋放因子及GTP結(jié)合到核糖體的相應(yīng)位點(diǎn)，促使肽鏈與tRNA的連結(jié)斷開(kāi)(2) 接著釋放因子和tRNA從核糖體解離(3) 最后，核糖體與mRNA解離，核糖體大小亞基解離真核生物蛋白質(zhì)合成的特點(diǎn)n起始階段（1）在核內(nèi)合成mRNA前體，加工并與多種蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白顆粒，轉(zhuǎn)入胞漿。起始時(shí)其二級(jí)結(jié)構(gòu)需要松解，并放出多余的蛋白質(zhì)。（2）Met-tRNAiMet（3） 起始復(fù)合物：40S-mRNA-Met-tRNAiMet（4）沒(méi)有SD序列。5cap 和3 ployA參與形成翻譯起始復(fù)合物.起始密碼子的尋找-

14、掃描模型模型n掃描（scanning）n找到起始密碼子后，再加上核糖體大亞基，就可開(kāi)始翻譯n第一個(gè)AUG不一定是起始密碼n與在其周圍，往往有共同序列Kozak 序列CCRCCAUGG (R,嘌呤)n還與高級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)（1）N末端的甲酰甲硫氨酸（原核）或甲硫氨酸（真核）的切除; （2）二硫鍵的形成二硫鍵的形成（3）修飾：磷酸化、糖基化、甲基化、乙基化、羥基化等）修飾：磷酸化、糖基化、甲基化、乙基化、羥基化等（4）多聚蛋白前體的切割）多聚蛋白前體的切割, 切除新生肽鏈中非功能片段切除新生肽鏈中非功能片段, 信號(hào)肽的處理信號(hào)肽的處理.（5）蛋白質(zhì)剪接：除去蛋白質(zhì)內(nèi)含子（）蛋白質(zhì)剪接：除去蛋白質(zhì)內(nèi)含子（

15、intein） (6) 新生肽鏈的折疊 (7) 亞單位聚合肽鏈的翻譯后加工蛋白的定向轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制n1.信號(hào)肽假說(shuō)n(1)分泌蛋白 翻譯-轉(zhuǎn)運(yùn)同步機(jī)制n(2)細(xì)胞器(葉綠體, 線粒體等) 翻譯后轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制n(3)膜蛋白(ER等) 兩者兼有n(4)核定位 翻譯后轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制n2. 信號(hào)肽, 導(dǎo)肽, 核定位信號(hào)的特點(diǎn)蛋白質(zhì)的降解n細(xì)菌: Lon蛋白酶n真核: 泛素(ubiquitin) 降解n(1) 泛素, 76氨基酸;n(2) 成熟蛋白N端第一個(gè)氨基酸嚴(yán)重影響蛋白的壽命.(精氨酸,賴氨酸最不穩(wěn)定, 2-3min)n(3)需要E1, E2, E3三個(gè)降解因子參與和ATP.n(4)泛素標(biāo)記后, 運(yùn)送到蛋白降解體

16、系降解.Part D. 基因表達(dá)調(diào)控基因表達(dá)調(diào)控基因表達(dá)調(diào)控通論n基因表達(dá)的時(shí)間性及空間性基因表達(dá)的時(shí)間性及空間性n基因表達(dá)方式基因表達(dá)方式 （1）管家基因與奢侈基因）管家基因與奢侈基因 （2）誘導(dǎo)和阻遏表達(dá)）誘導(dǎo)和阻遏表達(dá)n基因表達(dá)的調(diào)控方式：基因表達(dá)的調(diào)控方式：多級(jí)調(diào)控，多級(jí)調(diào)控， 轉(zhuǎn)錄調(diào)控最重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控最重要n影響基因表達(dá)的因素：影響基因表達(dá)的因素： （1）原核）原核: 營(yíng)養(yǎng)狀況營(yíng)養(yǎng)狀況, 環(huán)境因素環(huán)境因素; （2）真核）真核: 激素水平激素水平, 發(fā)育階段發(fā)育階段.一. 原核生物基因表達(dá)的調(diào)控n轉(zhuǎn)錄與翻譯相耦聯(lián)。n分為：（1） 轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控：轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控：操縱子操縱子 （2）翻譯水

17、平的調(diào)控）翻譯水平的調(diào)控n啟動(dòng)子對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響啟動(dòng)子對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響 （1）啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄方向及模板鏈）啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄方向及模板鏈 (2) 啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄效率啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄效率 n原核基因 轉(zhuǎn)錄水平轉(zhuǎn)錄水平 的調(diào)控操縱子 =啟動(dòng)子 + 操縱基因 + 結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控機(jī)制n1.負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控 (1) 負(fù)控誘導(dǎo): (2) 負(fù)控阻遏:n2.正轉(zhuǎn)錄調(diào)控 (1)正控誘導(dǎo): (2)正控阻遏:A. 負(fù)控誘導(dǎo):細(xì)菌中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)細(xì)菌中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄的調(diào)控機(jī)制 (范例)n乳糖操縱子調(diào)控的機(jī)制 (分解代謝)n色氨酸操縱子的調(diào)控機(jī)制(合成代謝)mRNA-半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶-半乳糖苷通透酶-半乳糖苷酶翻譯轉(zhuǎn)錄無(wú)活性的阻

18、遏蛋白誘導(dǎo)物阻遏蛋白阻遏物蛋白亞基有誘導(dǎo)物時(shí)lac ALac YLac ZOPi基因CAPcAMPCAP-cAMPRNA聚合酶阻遏蛋白 阻遏物蛋白亞基無(wú)誘導(dǎo)物時(shí)lac ALac YLac ZOPi基因-35-100CAPcAMPORNA聚合酶結(jié)合無(wú)葡萄糖:有葡萄糖:cAMPcAMP(促進(jìn)轉(zhuǎn)錄)(不促進(jìn)轉(zhuǎn)錄)色氨酸操縱子(The trp Operon)ntrp操縱子阻遏型操縱子The more stable structureThe less stable structure前導(dǎo)肽的翻譯 (轉(zhuǎn)錄翻譯偶聯(lián))A位A位P位P位大亞基大亞基小亞基小亞基mRNAmRNA衰減子形成的動(dòng)態(tài)特征翻譯水平的調(diào)控n

19、（一）、（一）、 SD 序列對(duì)翻譯的影響序列對(duì)翻譯的影響 n（二）、核糖體合成反饋抑制（二）、核糖體合成反饋抑制 n（三）、（三）、 mRNA 的穩(wěn)定性的穩(wěn)定性 n（四）、反義（四）、反義 RNA(antisense) 的調(diào)控的調(diào)控 n (五) 稀有密碼子n (六) 重疊基因二.真核生物基因表達(dá)的調(diào)控nDNA水平的調(diào)控水平的調(diào)控*n轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控n轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控*n翻譯水平的調(diào)控翻譯水平的調(diào)控n翻譯后水平的調(diào)控翻譯后水平的調(diào)控*DNA水平的調(diào)控n染色質(zhì)的丟失染色質(zhì)的丟失n基因擴(kuò)增基因擴(kuò)增n基因重排基因重排nDNA甲基化甲基化 (表達(dá)降低表達(dá)降低, X染色體失活中

20、心染色體失活中心)n染色體結(jié)構(gòu)染色體結(jié)構(gòu) (常染色質(zhì)常染色質(zhì) 和和 異染色質(zhì)異染色質(zhì))轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控-最重要n轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄起始n順式作用元件順式作用元件 和和 反式作用因子反式作用因子;n以正調(diào)控為主以正調(diào)控為主反式作用因子特點(diǎn)n三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域：三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域： (1) DNA識(shí)別結(jié)合域識(shí)別結(jié)合域； (2) 轉(zhuǎn)錄活性域轉(zhuǎn)錄活性域 (3) 結(jié)合其他蛋白的結(jié)合域結(jié)合其他蛋白的結(jié)合域n能識(shí)別并結(jié)合順式作用元件能識(shí)別并結(jié)合順式作用元件n正調(diào)控與負(fù)調(diào)控正調(diào)控與負(fù)調(diào)控反式作用因子結(jié)構(gòu)域的模式nDNA結(jié)合域結(jié)合域n轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(1) 酸性酸性-螺旋結(jié)構(gòu)域螺旋結(jié)構(gòu)域(2) 富含谷氨酰胺結(jié)構(gòu)富含

21、谷氨酰胺結(jié)構(gòu)域域(3) 富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域(1) 鋅指結(jié)構(gòu)鋅指結(jié)構(gòu)(2) 螺旋螺旋-轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)角-螺旋螺旋(HTH)(3) 亮氨酸拉鏈亮氨酸拉鏈(4) 螺旋螺旋-環(huán)環(huán)-螺旋螺旋(HLH)(5) 堿性堿性螺旋螺旋轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控n反式作用因子的活性調(diào)節(jié)反式作用因子的活性調(diào)節(jié)n反式作用因子與順式作用元件反式作用因子與順式作用元件, 通過(guò)成環(huán)等方式通過(guò)成環(huán)等方式調(diào)控調(diào)控n反式作用因子間存在組合式調(diào)控反式作用因子間存在組合式調(diào)控.(1) 合成后即有活性：需要時(shí)合成，可迅速降解(2) 共價(jià)修飾：磷酸化-去磷酸化，糖基化(3) 配體結(jié)合：如激素與受體的結(jié)合(4) 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用：二聚體轉(zhuǎn)錄

22、后水平的調(diào)控nmRNA的選擇性剪接 mRNA 運(yùn)輸?shù)目刂苙轉(zhuǎn)錄后的基因沉默*（RNA干涉, RNAi）翻譯水平的調(diào)控n翻譯起始的調(diào)控翻譯起始的調(diào)控: (1) 激活隱蔽mRNA (2)阻遏蛋白的調(diào)控 (3)翻譯起始因子的調(diào)控 (4) 5AUG對(duì)翻譯的調(diào)控作用 (5) mRNA5 端非編碼區(qū)長(zhǎng)度對(duì)翻譯的影響nmRNA穩(wěn)定性調(diào)節(jié)穩(wěn)定性調(diào)節(jié)n小分子小分子RNA對(duì)翻譯水平的影響對(duì)翻譯水平的影響翻譯后水平的調(diào)控n新生肽鏈的水解新生肽鏈的水解: 肽鏈肽鏈N端的第一個(gè)氨基酸決定蛋白的半衰期端的第一個(gè)氨基酸決定蛋白的半衰期n肽鏈中氨基酸的共價(jià)修飾肽鏈中氨基酸的共價(jià)修飾: 磷酸化磷酸化*、甲基化、?；?、甲基化、

23、?；痭通過(guò)信號(hào)肽分揀、運(yùn)輸、定位通過(guò)信號(hào)肽分揀、運(yùn)輸、定位Part E. 分子免疫學(xué)分子免疫學(xué)n1.非特異性免疫細(xì)胞 (與抗原無(wú)關(guān)) 天然殺傷細(xì)胞 ( NK細(xì)胞 )n2.特異性免疫細(xì)胞 (1) B細(xì)胞-產(chǎn)生抗體, 體液免疫 (2) T細(xì)胞 -細(xì)胞免疫.抗原的性質(zhì): 免疫原性 + 反應(yīng)原性 = 完全抗原(僅有) 反應(yīng)原性 = 半抗原 (用于檢測(cè))(僅有) 免疫原性 = X抗原表位n1. B細(xì)胞抗原表位-抗體識(shí)別位點(diǎn)（）位于分子表面(親水）（）包括線形表位和非線形表位（空間構(gòu)型）（）8氨基酸T細(xì)胞抗原表位-細(xì)胞免疫識(shí)別位點(diǎn)（）可位于分子內(nèi)部（）都是線形表位（連續(xù)氨基酸序列）（）CD8+ : 91

24、 氨基酸 (與MHC I結(jié)合呈遞)CD4+: 氨基酸 (與MHC II結(jié)合呈遞)B細(xì)胞抗原表位二抗體n四肽鏈結(jié)構(gòu),兩條重鏈（H）和兩條輕鏈（L）n重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子結(jié)構(gòu): 分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE;n輕鏈可分為兩型：、型n三個(gè)高變區(qū)與抗原表位結(jié)合n木瓜蛋白酶水解IgG 得到兩個(gè)相同的Fab段和一個(gè)Fc段。免疫球蛋白的特性與功能1.結(jié)合特性: (1) 抗原結(jié)合特性-高變區(qū) (2) 補(bǔ)體 結(jié)合特性- 重鏈保守區(qū) (3) 與NK細(xì)胞表面受體作用 *其它: 與二抗作用(重鏈保守區(qū)) Protein A, protein G (重鏈保守區(qū))2. 生物功能: (本身僅有結(jié)合活性,發(fā)揮

25、功能需要其它分子,細(xì)胞參與) (1) 清除異源細(xì)胞- 補(bǔ)體參與, 破壞細(xì)胞; ADCC:抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用 調(diào)理作用 (2) 清除異源分子-調(diào)理作用 (3) 中和作用, 封閉受體結(jié)合位點(diǎn). (病毒) (4)通過(guò)胎盤(pán), 被動(dòng)免疫 (IgG)抗體的個(gè)性IgG (1) 血液中最主要的免疫球蛋白(75%) (2) IgG是唯一能通過(guò)胎盤(pán)的抗體IgM (1) 為五聚體，是分子量最大的Ig (2) IgM是個(gè)體發(fā)育過(guò)程最早能產(chǎn)生的抗體 (3) IgM是抗原刺激后出現(xiàn)最早的抗體，故檢測(cè)IgM水平可用于傳染病的早期診斷l(xiāng)gA 主要存在于初乳、唾液、淚液，以及呼吸道消化道和泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中抗體多樣性的遺傳學(xué)基礎(chǔ)n1.基因重排 (隨機(jī)不精確): (1)輕鏈V 區(qū)重排: VL-JL (2)重鏈V區(qū)重排: VH-DH-JHn 2. VDJ基因片段的多樣性, 基因重排的多樣性 輕鏈重鏈相互隨機(jī)配對(duì) 重鏈V區(qū)的N區(qū)隨機(jī)插入VH-N-DH-N-JH 體細(xì)胞突變(B細(xì)胞V基因區(qū)突變)一種B細(xì)胞只表達(dá)一種特異抗體n等位排斥: 兩條同源染色體上的免疫球蛋白等位基因,只有一條表達(dá).n同型排斥: 輕鏈表達(dá),只生成一種鏈(、), 不能同時(shí)表達(dá)鏈和鏈.n多克隆抗體 多個(gè)抗原決定基機(jī)體多種抗體的混合物n單克隆抗體（monoclonal antibody）為只