菊花的組織培養(yǎng)剖析說課講解

1、菊花的組織培養(yǎng)剖析n概念概念：高度分化的植物細胞，仍然具有發(fā)育成：高度分化的植物細胞，仍然具有發(fā)育成 完整新個體完整新個體的潛能。的潛能。n基礎(chǔ)基礎(chǔ)：生物體的每一個細胞都包含有：生物體的每一個細胞都包含有該物種該物種所所 特有特有全套遺傳物質(zhì)全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成為完整，都有發(fā)育成為完整 個體所必需的個體所必需的全部基因全部基因。因為它們都是。因為它們都是 由由同一個同一個受精卵細胞受精卵細胞經(jīng)經(jīng)有絲分裂和分化而有絲分裂和分化而來。來。細胞的全能性細胞的全能性有絲分裂有絲分裂受精卵受精卵 在個體發(fā)育中，細胞在形在個體發(fā)育中，細胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差

2、異的過程叫做細胞分化。性差異的過程叫做細胞分化。細胞分化的實質(zhì)：細胞分化的實質(zhì)：基因的選擇性表達基因的選擇性表達1.離體2.一定的營養(yǎng)物質(zhì)3.植物激素：主要是生長素和細胞分裂素4.適宜的外界環(huán)境條件：例如無菌、適宜的溫度、PH值、濕度、光照等 細胞全能性大?。?受精卵生殖細胞體細胞 植物細胞動物細胞 分化程度低的細胞分化程度高的細胞 由由高度分化高度分化的植物器官、組織或的植物器官、組織或細細 胞產(chǎn)生胞產(chǎn)生愈傷組織愈傷組織的過程，又稱去分化。的過程，又稱去分化。 脫分化產(chǎn)生的愈傷組織在培養(yǎng)過程脫分化產(chǎn)生的愈傷組織在培養(yǎng)過程中重新分化成中重新分化成根或芽根或芽等器官的過程等器官的過程. 細胞細胞

3、排列疏松排列疏松而而無規(guī)則無規(guī)則, ,是是高度液泡化高度液泡化的、成無定形狀態(tài)的的、成無定形狀態(tài)的薄壁細胞薄壁細胞. .脫分化：脫分化： 再分化：再分化：愈傷組織特點愈傷組織特點: :外植體：外植體：用于用于離體離體培養(yǎng)的植物培養(yǎng)的植物器官器官或或組織片段組織片段（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：1植物材料的影響：植物材料的影響：無機營養(yǎng)無機營養(yǎng)N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S SB B、微量元素、微量元素（無機營養(yǎng)無機營養(yǎng)）: :B B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCoC C、有機物、有機物：甘氨酸甘氨酸、煙酸、肌醇、

4、煙酸、肌醇、維生素維生素、蔗糖蔗糖D D、植物激素、植物激素：生長素、細胞分裂素生長素、細胞分裂素、赤霉素等、赤霉素等、主要影響蛋白質(zhì)、核酸的合成；、主要影響蛋白質(zhì)、核酸的合成； K K、 Ca Ca、MgMg、S S主要影響酶的活性。主要影響酶的活性。討論：你能說出討論：你能說出MSMS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題同專題 2 2中微生物培養(yǎng)基的配方相比中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MSMS培養(yǎng)基培養(yǎng)基 的配方有哪些明顯的不的配方有哪些明顯的不同同答：答：微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需的 無機鹽；蔗糖提供碳源

5、，同時能夠維持細胞的滲無機鹽；蔗糖提供碳源，同時能夠維持細胞的滲 透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離 體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn) 生的特殊營養(yǎng)需求。生的特殊營養(yǎng)需求。 微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)與微生物的培養(yǎng) 不同，不同，MSMS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽，無機鹽 混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素 兩大類。兩大類。關(guān)鍵性激素關(guān)鍵性激素加強加強思考：以下培養(yǎng)基出

6、現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？思考：以下培養(yǎng)基出現(xiàn)的現(xiàn)象反應(yīng)了什么問題？有利于有利于根根的分化的分化有利于有利于芽芽的分化，的分化，抑抑制根制根的分化的分化促進促進愈傷組織愈傷組織生長生長制備制備MS固固體培養(yǎng)基體培養(yǎng)基外植體消毒外植體消毒接種接種培養(yǎng)培養(yǎng)栽培栽培 三、實驗具體操作過程三、實驗具體操作過程移栽移栽MSMS培養(yǎng)基包括培養(yǎng)基包括2020多種營養(yǎng)成分，實驗室一般使用多種營養(yǎng)成分，實驗室一般使用4 4保存的配制好的保存的配制好的培養(yǎng)基培養(yǎng)基母液母液來制備來制備無機物中無機物中大量元素濃縮大量元素濃縮1010倍倍，微量元素濃縮微量元素濃縮100100倍倍，常溫保存，常溫保存激素類、維生素類以及

7、用量較小的有機物一般可激素類、維生素類以及用量較小的有機物一般可按按1mg/ml1mg/ml的質(zhì)量濃度的質(zhì)量濃度單獨單獨配制成母液配制成母液用用母液母液配制培養(yǎng)基時，需要配制培養(yǎng)基時，需要根據(jù)根據(jù)各種母液的各種母液的濃縮濃縮倍數(shù)倍數(shù)，計算用量計算用量瓊脂加水并加熱熔化，加蔗糖和各種母液瓊脂加水并加熱熔化，加蔗糖和各種母液菊花莖段用菊花莖段用流水沖洗流水沖洗后可后可加少許洗衣粉加少許洗衣粉，用軟刷，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在輕輕刷洗，刷洗后在流水流水下沖洗下沖洗20min20min左右左右用用無菌吸水紙無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入吸干外植體表面的水分，放入體積體積分數(shù)為分數(shù)為7070的酒精

8、的酒精中搖動中搖動2 23 3次，持續(xù)次，持續(xù)6 67s7s，立，立即將外植體取出，在即將外植體取出，在無菌水無菌水中清洗中清洗 取出后用取出后用無菌吸水紙無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放吸干外植體表面的水分，放入入質(zhì)量分數(shù)為質(zhì)量分數(shù)為0.10.1的氯化汞溶液的氯化汞溶液中中1 12min2min，取，取出后在出后在無菌水無菌水中至少清洗中至少清洗3 3次，漂凈消毒液次，漂凈消毒液正常苗正常苗污染苗污染苗1、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔、環(huán)境不清潔污染途徑污染途徑珍珠巖 ,珍珠巖是一種火山噴發(fā)

9、的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖 。蛭石是一種天然、無毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會膨脹的礦物。它是一種比較少見的礦物，屬于硅酸鹽。 1、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒、外植體的消毒（酒精、氯化汞）（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作、接種的無菌操作（酒精、酒精燈（酒精、酒精燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌無菌環(huán)境的？環(huán)境的？四、結(jié)果分析與評價（一）對接種操作中污染情況的分析（一）對接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化（二）是否完