第二章中藥制劑的鑒別

1、中藥制劑的鑒別藥物分析教研室1第二章中藥制劑的鑒別n定義定義中藥制劑鑒別是利用一定的分析方法和技術(shù)來確定中藥制劑中藥制劑的真?zhèn)握鎮(zhèn)?。n內(nèi)容內(nèi)容 性狀鑒別 顯微鑒別 理化鑒別2n定義定義 中藥制劑的性狀中藥制劑的性狀是對藥品顏色和外表的感官描述，包括形狀、大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、形狀、大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、氣味氣味等方面。 性狀與投料的原料質(zhì)量及工藝有關(guān) 初步反映中藥制劑質(zhì)量狀況中藥制劑的鑒別性狀鑒別黃連上清丸：黃連上清丸： “本品為本品為黑褐黑褐色色的大蜜的大蜜丸丸；氣氣芳香，芳香，味味苦。苦?！?n內(nèi)容內(nèi)容顏色顏色：與所含成分、制備工藝有關(guān) 復(fù)方制劑考慮到貯存期間顏色會變深形態(tài)形態(tài)

2、：不同劑型，形態(tài)不一形狀形狀：與設(shè)備模具有關(guān)（栓劑）氣氣：香、芳香、清香、腥、臭、特異等 不明顯用氣微，香氣濃厚時用芳香濃郁味味：甜、酸、苦、澀、辛、涼、咸、辣、麻等中藥制劑的鑒別性狀鑒別4n注意注意1.制劑的性狀指成品成品的顏色、形態(tài)、氣味等2.有包衣的丸劑、片劑應(yīng)描述除去包衣后的片心、片心、 丸心的顏色及氣味丸心的顏色及氣味3.硬膠囊應(yīng)寫明除去膠囊后內(nèi)容物的性狀內(nèi)容物的性狀4.制劑色澤有兩種色調(diào)組合，描寫時以后者為主后者為主，如棕紅色中藥制劑的鑒別性狀鑒別56789中藥制劑的鑒別n物理常數(shù)測定物理常數(shù)測定折光率、旋光度、比旋度、凝點(diǎn)、熔點(diǎn)、相對密度 定性鑒別的一種手段性狀鑒別10n局限性局

3、限性中藥種類繁多，品種復(fù)雜。中成藥而言，包括“丸、散、膏、丹、片”等多種劑型，僅靠傳統(tǒng)的性狀鑒定方法不能識別出其中的方藥組成和藥材的真?zhèn)?。中藥制劑的鑒別丸散膏丹、神仙難辨丸散膏丹、神仙難辨性狀鑒別11n發(fā)展發(fā)展 我國著名生藥學(xué)家徐國鈞教授，開創(chuàng)了中藥制劑顯微鑒定，從實際上解決了中藥材粉末和含有中藥原粉的中成藥制劑的真?zhèn)舞b定問題。在我國歷版藥典中均有很大部分的中成藥采用顯微方法鑒定。 中藥制劑的鑒別顯微鑒別12n定義定義 利用顯微鏡顯微鏡來觀察中藥制劑中原料藥材原料藥材的組組織碎片、細(xì)胞或內(nèi)含物織碎片、細(xì)胞或內(nèi)含物等微觀特征，從而鑒別制劑的處方組成。 中藥制劑的鑒別顯微鑒別13n使用范圍使用范圍

4、 以藥材粉碎成細(xì)粉后直接制成制劑或添加有部分藥材粉末藥材粉末的制劑，原藥材的顯微特征仍保留。 蛇膽川貝散：川貝母僅用淀粉粒淀粉粒作為指標(biāo) 牛黃解毒片：大黃用草酸鈣簇晶草酸鈣簇晶作為鑒別特征中藥制劑的鑒別顯微鑒別1415n制片方法制片方法 顯微鑒定，制作良好的切片切片或標(biāo)準(zhǔn)片標(biāo)準(zhǔn)片是關(guān)鍵。把切片或粉末標(biāo)準(zhǔn)片用適當(dāng)?shù)脑囈哼M(jìn)行處理和封藏，試液的選擇必須具有合理性合理性。 中藥制劑的鑒別顯微鑒別16n制片方法制片方法試液的選擇試液的選擇1.水或稀甘油水或稀甘油：細(xì)胞壁顏色及淀粉粒、油滴、樹脂2.水合氯醛：水合氯醛：組織構(gòu)造和細(xì)胞形狀及葉片、花和花粉粒，尤其適于觀察草酸鈣結(jié)晶3. 5%氫氧化鉀液：氫氧化

5、鉀液：可溶解糊粉粒、淀粉粒及蛋白質(zhì)，使細(xì)胞壁膨脹，從而增強(qiáng)透明度4.氯化堿液：氯化堿液：試劑可漂白切片及除去葉綠素5. 1:1乙醚乙醇液：乙醚乙醇液：用于脫去種子類藥材切片中的脂類及揮發(fā)油類成分 中藥制劑的鑒別顯微鑒別17n制片方法制片方法中藥制劑的鑒別散劑、膠囊劑：粉末粉末+ +載玻片載玻片+ +適當(dāng)?shù)脑囈哼m當(dāng)?shù)脑囈?顯微觀察顯微觀察片劑：正中切開，由切開面由外至內(nèi)刮取少量樣品裝片；粉末粉末+ +載玻片載玻片+ +適當(dāng)?shù)脑囈哼m當(dāng)?shù)脑囈?顯微觀察顯微觀察丸劑、顆粒劑：研成粉末，裝片粉末粉末+ +載玻片載玻片+ +適當(dāng)?shù)脑囈哼m當(dāng)?shù)脑囈?顯微觀察顯微觀察顯微鑒別18中藥制劑的鑒別1. 5%氫氧化鉀

6、液適量蜜丸+試管中+ 5%氫氧化鉀液 加熱至玻璃棒擠壓能離散為止，傾出堿液+水洗滌，取出少量+試液處理 觀察蜜丸：正中切開，由切開面由外至內(nèi)刮去少量樣品，裝片；或切碎除蜜蜜丸除蜜方法顯微鑒別19中藥制劑的鑒別2.氯酸鉀法：適量蜜丸+試管中+ 硝酸溶液及氯酸鉀少量緩緩加熱至產(chǎn)生的氣泡漸少時+氯酸鉀少量玻璃棒擠壓能離散為止，傾出酸液+水洗滌，取出少量+試液處理 觀察顯微鑒別20蜜丸切碎+水洗滌 離心管中離心分離沉淀（多次）取出少量+試液處理 觀察中藥制劑的鑒別4.離心分離法：適量蜜丸+試管中+硝鉻酸液 放置 玻璃棒擠壓能離散為止，傾出酸液+水洗滌，取出少量+試液處理 觀察3.硝鉻酸法：顯微鑒別21

7、n例中藥制劑的鑒別顯微鑒別22n例中藥制劑的鑒別顯微鑒別山藥山藥茯苓茯苓熟地黃熟地黃牡丹皮牡丹皮山茱萸山茱萸澤瀉澤瀉23n局限性局限性1.藥材粉末特征間的交叉干擾；交叉干擾；2.經(jīng)過提取的藥材經(jīng)過提取的藥材，其化學(xué)成分已被浸出，但仍然保持著原來的細(xì)胞形態(tài)特征，所以僅通過顯微觀察不能完全解決內(nèi)在的質(zhì)量問題；不能完全解決內(nèi)在的質(zhì)量問題；3.一種藥材具有多種植物來源，通常粉末的特征各不相同；4.藥材在處方中所占的比例小(如貴重藥、劇毒藥)專屬性特征出現(xiàn)的幾率更??；有的粉末粒度過細(xì)(如水飛法制得的礦物藥粉末)，使特征變得不明顯。中藥制劑的鑒別顯微鑒別24n定義定義 利用物理的、化學(xué)的或物理化學(xué)的方法物

8、理的、化學(xué)的或物理化學(xué)的方法對制劑中所含的化學(xué)成分進(jìn)行定性鑒別定性鑒別，從而判斷制劑的真?zhèn)?。中藥制劑的鑒別理化鑒別n方法方法化學(xué)反應(yīng)法、顯微化學(xué)法 、光譜法 、色譜法、色譜法、指紋圖譜鑒別法、特征圖譜鑒別法25n 化學(xué)反應(yīng)法 中藥制劑的鑒別中藥制劑化學(xué)中藥制劑化學(xué)成分的性質(zhì)成分的性質(zhì)+合適的提取溶劑合適的提取溶劑提取待檢測成分提取待檢測成分排除其他成分干擾排除其他成分干擾理化鑒別26n 化學(xué)反應(yīng)法注意事項注意事項 1.避免附加成分的干擾：如注射劑、顆粒劑及糖漿劑2.慎重使用專屬性不好的分析反應(yīng)：如泡沫反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)3.對樣品進(jìn)行分離、精制：除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬

9、性4.采用陰性及陽性對照方式，對擬定的鑒別方法進(jìn)行反復(fù)驗證：防止出現(xiàn)假陽性 中藥制劑的鑒別27n 化學(xué)反應(yīng)法例 中藥制劑的鑒別 牛黃解毒片中大黃、黃芩的定性鑒別反應(yīng)牛黃解毒片中大黃、黃芩的定性鑒別反應(yīng)取本品取本品6 片片(包衣者除去包衣包衣者除去包衣)，研細(xì)，加乙醇，研細(xì)，加乙醇1O ml， 溫?zé)釡責(zé)?0分鐘，過濾，濾液作如下反應(yīng)分鐘，過濾，濾液作如下反應(yīng)(1) 取濾液取濾液5ml，加鎂粉少量與鹽酸，加鎂粉少量與鹽酸0.5ml，加熱，即，加熱，即顯紅色。顯紅色。(2) 另取濾液另取濾液4ml，加氫氧化鈉試液，即顯紅色，再，加氫氧化鈉試液，即顯紅色，再加加30%過氧化氫溶液，加熱，紅色不消失，加

10、酸或酸過氧化氫溶液，加熱，紅色不消失，加酸或酸性時，則紅色變?yōu)辄S色。性時，則紅色變?yōu)辄S色。28z定義定義：將具有升華性質(zhì)的成分，在一定的溫度下從制劑中分離出來，并以升華物所具有的某些理化性質(zhì)作為制劑鑒定的依據(jù)。z制劑中若有2種以上的藥味都含有升華物，升華升華的溫度的溫度不同，可控制加熱的溫度分段收集升華物，分別進(jìn)行鑒定。中藥制劑的鑒別n升華法 理化鑒別29中藥制劑的鑒別n光譜法 熒光法可見紫外分光光度法紅外分光光度法理化鑒別30n光譜法熒光法 有些中藥材中含有能產(chǎn)生熒光的化學(xué)成分：在可見光 or 紫外光照射下發(fā)出熒光，有的須經(jīng)試劑處理后發(fā)出熒光。含有這類藥材的中藥制劑:熒光法鑒別操作方法:取制

11、劑的提取液點(diǎn)在濾紙上或試紙上，置紫外光燈下(365nm or 254nm)觀察，有時則是加一定的試劑后再進(jìn)行觀察。中藥制劑的鑒別理化鑒別31n光譜法紫外可見分光光度法 中藥材有些化學(xué)成分在紫外可見光區(qū)有選擇性吸收，顯示特征吸收光譜。不同的藥材所含的成分不同，在一定條件下吸收光譜的特征可用于鑒別藥材，因此該法也可用于中藥制劑的鑒別。中藥制劑的鑒別理化鑒別32n光譜法紫外可見分光光度法 中藥制劑成分復(fù)雜，具吸收的加和性，樣品不純化，所得光譜為混合光譜，專屬性差。 樣品純化后測定吸收光譜，常見方法： 1.規(guī)定吸收波長法 2.對照品對比法 3.規(guī)定吸收波長和吸收度法 4.規(guī)定吸收波長和吸收度比值法 5

12、.多溶劑光譜法中藥制劑的鑒別理化鑒別33n1.規(guī)定吸收波長法：規(guī)定吸收波長法：樣品經(jīng)適當(dāng)處理后，測定吸收光譜，在一定波長處有最大吸收。 中藥制劑的鑒別復(fù)方丹參片紫外光譜圖復(fù)方丹參片紫外光譜圖 283nm理化鑒別n2.對照品對比法：對照品對比法：取對照品或?qū)φ账幉募肮┰嚻方?jīng)處理后，制成對照品及供試品溶液，分別測定吸收光譜，比較二者吸收光譜的一致性。 樣品與對照品在樣品與對照品在2802nm處皆有最大吸收，處皆有最大吸收，在在2544nm處皆有最小吸收。處皆有最小吸收。 例：大山馇丸的紫外光譜鑒定例：大山馇丸的紫外光譜鑒定34n3.規(guī)定吸收波長和吸收度法規(guī)定吸收波長和吸收度法：樣品經(jīng)處理后，在規(guī)定

13、波長下，應(yīng)有若干個吸收峰，并有相應(yīng)的吸收度值。 中藥制劑的鑒別n4.規(guī)定吸收波長和吸收度比值法規(guī)定吸收波長和吸收度比值法：樣品在一定波長下應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的吸收峰，并且吸收度與對照峰吸收度比值應(yīng)在一定的范圍內(nèi)。需有對照品或參照物。 理化鑒別35n光譜法紅外分光光度法對于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價值的信息。 主要成分的質(zhì)和量大致相同，而且基本恒定，所得紅外光譜也呈現(xiàn)很好的相似性，可重復(fù)，因而可作真?zhèn)舞b別依據(jù)：1. 不太復(fù)雜的混合體系，圖譜有特征性 2. 統(tǒng)一分離提取方法，圖譜特征強(qiáng)重復(fù)性好 中藥制劑的鑒別理化鑒別36例1：熊膽、牛膽、豬膽的紅外圖譜比較 中藥制劑的鑒別在特征區(qū)和指紋區(qū)三者則有

14、明顯的差別在特征區(qū)和指紋區(qū)三者則有明顯的差別理化鑒別37n色譜法 紙色譜紙色譜 TLC法法 GC法法 HPLC法法 中藥制劑的鑒別理化鑒別38n色譜法紙色譜法 載體：紙 固定相：紙上所含水分或其他物質(zhì) 展開劑 供試品、對照品、對照藥材 中藥制劑的鑒別理化鑒別39n色譜法TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別l定義：定義： 將適宜的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后，與適宜的對照物按同法在同板上所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀掃描，用于中藥制劑的鑒定。40中藥制劑的鑒別理化鑒別 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 薄層板的制備薄層板的制備 點(diǎn)樣點(diǎn)樣 展開展開 顯色與檢

15、視顯色與檢視 l操作步驟操作步驟41n色譜法TLC法 中藥制劑的鑒別理化鑒別 單一溶劑萃取法單一溶劑萃取法：采用單一溶劑萃取出樣品中待采用單一溶劑萃取出樣品中待測成分，舍棄其他成分測成分，舍棄其他成分 分段萃取法分段萃取法 液液萃取法液液萃取法 固液萃取法固液萃取法l供試品溶液的制備：供試品溶液的制備：42中藥制劑的鑒別理化鑒別lTLCTLC法使用的材料：法使用的材料： 薄層板 涂布器 點(diǎn)樣器材 層析缸 顯色與檢測儀器n色譜法TLC法 43中藥制劑的鑒別理化鑒別 手工自制板：手工自制板： 玻璃：玻璃：12mm優(yōu)質(zhì)平板玻璃優(yōu)質(zhì)平板玻璃 洗凈至不掛水珠，晾干洗凈至不掛水珠，晾干 吸附劑或載體吸附劑

16、或載體 預(yù)制板：預(yù)制板：普通薄層板和高效薄層板普通薄層板和高效薄層板lTLC法使用的材料薄層板薄層板44中藥制劑的鑒別理化鑒別市售薄層板：市售薄層板：臨用前，臨用前，110110活化活化30min30min 聚酰胺薄膜不用活化聚酰胺薄膜不用活化 自制薄層板自制薄層板 1份份固定相固定相+3份份水（水（or含粘合劑的水溶液），在研缽中向同含粘合劑的水溶液），在研缽中向同一方向研磨混勻，驅(qū)除氣泡，鋪板（一方向研磨混勻，驅(qū)除氣泡，鋪板（0.20.3mm)。置水平臺。置水平臺上室溫晾干，上室溫晾干，110 活化活化30min，置有干燥劑的干燥箱中備用。，置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢驗均勻度、麻點(diǎn)

17、、氣泡、有無污染使用前檢驗均勻度、麻點(diǎn)、氣泡、有無污染l操作方法薄層板的制備45中藥制劑的鑒別理化鑒別手工、半自動、全自動；固定厚度或可調(diào)節(jié)厚度手工、半自動、全自動；固定厚度或可調(diào)節(jié)厚度lTLC法使用的材料涂布器定量點(diǎn)樣毛細(xì)管：定量點(diǎn)樣毛細(xì)管：0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10l 微量注射器（針尖平頭）微量注射器（針尖平頭） 半自動、自動點(diǎn)樣器半自動、自動點(diǎn)樣器lTLC法使用的材料點(diǎn)樣器材46中藥制劑的鑒別理化鑒別注意：點(diǎn)樣時勿注意：點(diǎn)樣時勿損傷薄層表面損傷薄層表面l操作方法點(diǎn)樣（1 1）器具：毛細(xì)管、微量注射器）器具：毛細(xì)管、微量注射器（2 2）點(diǎn)樣方法：垂直方向，成圓點(diǎn)狀

18、）點(diǎn)樣方法：垂直方向，成圓點(diǎn)狀( (斑點(diǎn)直徑斑點(diǎn)直徑3 3 mm)ormm)or窄細(xì)的條帶狀（增大上樣量）窄細(xì)的條帶狀（增大上樣量）1cm1cm1cm10cm47中藥制劑的鑒別理化鑒別 展開劑的制備：新鮮配制展開劑的制備：新鮮配制 展開：點(diǎn)樣后的薄層板放入加有展開劑的層析缸展開：點(diǎn)樣后的薄層板放入加有展開劑的層析缸中，密閉，一般上行展開，中，密閉，一般上行展開，薄層板浸入展開劑深度薄層板浸入展開劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點(diǎn)約一般要求溶劑最初的前沿距原點(diǎn)約5mm5mm，展開至規(guī)定展開至規(guī)定展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測。展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測。 展距：展距：一般一般

19、8 815cm15cm，高效板，高效板5 58cm8cml操作方法展開48中藥制劑的鑒別理化鑒別lTLC法使用的材料顯色與檢測儀器 49中藥制劑的鑒別理化鑒別照相照相掃描圖譜掃描圖譜描畫描畫l記錄與保存記錄與保存50中藥制劑的鑒別理化鑒別1.樣品的預(yù)處理及供試液的制備樣品的預(yù)處理及供試液的制備2.薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)3.吸附劑的活性與相對濕度的影響吸附劑的活性與相對濕度的影響4.空氣溫度、濕度的影響空氣溫度、濕度的影響n色譜法TLC法l主要影響因素主要影響因素51中藥制劑的鑒別理化鑒別1. 樣品的預(yù)處理及供試液的制備：樣品的預(yù)處理及供試液的制備： 制備樣品供試液的溶劑要求制備樣

20、品供試液的溶劑要求:溶解度不宜太大，粘度不易溶解度不宜太大，粘度不易太高（如正丁醇）太高（如正丁醇）or太低（如乙醚），沸點(diǎn)適中太低（如乙醚），沸點(diǎn)適中 供試液凈化處理相當(dāng)重要供試液凈化處理相當(dāng)重要 2. 薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)：薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)： 點(diǎn)樣量不宜過大，最好控制在點(diǎn)樣量不宜過大，最好控制在10l以下以下 不要破壞薄層板不要破壞薄層板52中藥制劑的鑒別理化鑒別3.吸附劑的活性與相對濕度的影響吸附劑的活性與相對濕度的影響 吸附劑的活性取決于吸附劑的活性取決于實驗室環(huán)境實驗室環(huán)境的相對濕度。控制展開的相對濕度?？刂普归_時的相對濕度：時的相對濕度： 在雙槽展開箱的一側(cè)用一定濃度的在雙槽展開箱的一側(cè)用一定濃度的硫酸溶液硫酸溶液，密閉放置，密閉放置一定時間，再加入展開劑于另一側(cè)展開一定時間