CHO細胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng)流程簡介

1、CHO細胞培養(yǎng)流程簡介一 懸浮培養(yǎng)特點（suspension culture)v非貼壁依賴型細胞的一種培養(yǎng)方式非貼壁依賴型細胞的一種培養(yǎng)方式v細胞懸浮于培養(yǎng)基中生長或者維持細胞懸浮于培養(yǎng)基中生長或者維持v某些貼壁依賴型細胞經(jīng)過適應和選擇后也可某些貼壁依賴型細胞經(jīng)過適應和選擇后也可用此方法培養(yǎng)用此方法培養(yǎng)v使用振蕩或者轉動裝置使細胞始終處于懸浮使用振蕩或者轉動裝置使細胞始終處于懸浮狀態(tài)狀態(tài)二 CHO細胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng)工藝流程細胞株 搖瓶 WAVE或者種子罐 收貨細胞液 反應器培養(yǎng)1 細胞復蘇v將水浴鍋溫度調(diào)至37v從液氮罐中取出凍存管，用鑷子夾住迅速放入水浴鍋中晃動，直至完全溶解后將凍存管表面消

2、毒轉移至超凈工作臺內(nèi)進行操作v將細胞懸液轉移至15ml離心管內(nèi)，加入約10ml培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻v將細胞懸液經(jīng)800-1000rpm離心5分鐘，棄去上清液v向細胞沉淀加入10ml培養(yǎng)液，吹打均勻后將細胞懸液轉移至搖瓶內(nèi)，加入適量培養(yǎng)液，開始培養(yǎng)細胞復蘇注意事項v注意全程無菌操作v溶解凍存細胞時速度一定要快，避免緩慢升溫細胞內(nèi)形成冰晶，對細胞造成損傷v計算合適的接種密度，一般CHO細胞培養(yǎng)的接種密度范圍在3.0-6.0*10E5個/mlv注意安全：取出凍存管時防止凍傷，同時注意有無液氮滲透進入凍存管，防止液氮迅速氣化導致凍存管爆炸造成人員危險2 搖瓶細胞傳代v搖瓶細胞培養(yǎng)2-3天后，細胞密度增

3、高，營養(yǎng)物逐漸耗盡，需要對細胞進行擴培v根據(jù)細胞密度計算擴培體積v當達到反應器擴培接種細胞數(shù)量要求后，停止搖瓶培養(yǎng)，接種至反應器進行擴培3 反應器擴培v在超凈臺內(nèi)將搖瓶細胞合并至接種瓶內(nèi)v用無菌焊接機將接種瓶管路與反應器管路無菌焊接，將細胞液打入反應器進行擴培v當反應器內(nèi)細胞密度達到要求后，接種至下一級反應器開始生產(chǎn)階段培養(yǎng)4 反應器生產(chǎn)階段培養(yǎng)v取樣v補堿v補料v補糖v收獲取樣v取樣瓶滅菌v將取樣瓶連接至反應器取樣口，開始管路滅菌v滅菌完成后等待管路冷卻v開始取樣v取樣完成后用純蒸汽沖洗取樣管路v將所取細胞液測定細胞密度、活力、pH值等參數(shù)補堿、補糖、補料v當反應器內(nèi)pH值低于6.8左右時，需要進行補堿v當反應器內(nèi)糖含量低于2g/L時，需要進行補糖v當反應器內(nèi)營養(yǎng)物逐漸耗盡，需要根據(jù)工藝進行補料收獲細胞液v在培養(yǎng)末期，細胞密度及活力都開始下降，此時應該進行細胞液的收獲，收獲時保證細胞活力高于60%v預先準備好深層過濾膜包及管路的安裝和保壓v將反應