基因診斷與基因治療習(xí)題及答案

1、第十八章 基因診斷與基因治療一、填空題1. 基因突變可導(dǎo)致 的改變，從而引起 2. 基因變異包括 和。3.內(nèi)源性基因變異包括 、 和_等。4.外源性基因變異是指 疾病。5.基因診斷常用技術(shù)方法有 _、 、 _和 。6.核酸分子雜交技術(shù)是依據(jù) _、 和_原理設(shè)計的技術(shù)方法。7.常用固相核酸雜交方法有 _、 、 _、 、 和等。8.PCR 是的縮寫，譯為 _。9.PCR過程由、和_步驟組成。10.生物芯片技術(shù)包括、_、 、 _、 和。11.基因測序是將有關(guān)基因進(jìn)行，測出_，從中找出 _所在。12.基因治療在概念上分為_和。目前普遍接受的是 _。13.基因治療的總體策略主要有、 、 _、 、 、和等

2、。14. 基因治療的基本程序包括 _、 、 _、和 。15. 獲得治療性基因的方法包括、 、和 。16. 常被用于基因治療的基因轉(zhuǎn)移載體有 _、 和 。17. 基因治療中的靶細(xì)胞也稱為細(xì)胞，靶細(xì)胞有 和_兩大類18. 基因轉(zhuǎn)移方法概括地講有 _、 和_等。二、名詞解釋19. 基因診斷20. 基因治療21. 核酸分子雜交22. Southern blotting23. 生物芯片24. 免疫基因治療25. 基因矯正26. 基因置換27. 基因增補(bǔ)28. 基因失活29. 自殺基因30. 夾心雜交31. 引物32. Northern blotting33. PCR三、問答題34. 簡述基因診斷的特點(diǎn)3

3、5. 簡述分子雜交程序。36. 簡述 PCR 技術(shù)原理。37. 簡述基因診斷的臨床應(yīng)用概況38. 基因治療要符合哪些要求？答案一、填空題1. 相應(yīng)表型；疾病。2. 內(nèi)源性基因變異；外源性基因變異。3. 點(diǎn)突變；缺失或插入性突變；染色體移位；基因重排和基因擴(kuò)增。4. 病原體感染性。5. 核酸雜交；PCR;基因芯片；基因測序。6. DNA 雙鏈堿基互補(bǔ)；變性；復(fù)性。7. Southern印跡雜交法；Northern印跡雜交法；斑點(diǎn)或狹縫雜交法；菌落雜 交法；夾心雜交法；原位雜交法。8. Polymerase chain reaction 聚合酶鏈反應(yīng)。9. DNA 模板的變性；模板與引物結(jié)合；引物

4、延伸。10. 芯片制作（配體點(diǎn)陣及固定化 ）；樣品處理（擴(kuò)增和標(biāo)記 ）；分子間反應(yīng)或雜 交；檢測；數(shù)據(jù)處理；綜合分析。11. 分離；其堿基序列；其變異。12. 廣義基因治療；狹義基因治療；廣義基因治療。13. 基因矯正；基因置換；基因增補(bǔ)；基因失活； “自殺基因 ”的應(yīng)用；免疫 基因治療；耐藥基因治療14. 治療性基因的獲得；基因載體的選擇；靶細(xì)胞的選擇；基因轉(zhuǎn)移方法的 選擇。15. 真核基因組文庫； cDNA 文庫； PCR 擴(kuò)增；人工合成。16. 逆轉(zhuǎn)錄病毒；腺病毒；腺相關(guān)病毒。17. 受體；生殖細(xì)胞；體細(xì)胞。18. 化學(xué)法；物理法；生物 （病毒 ）法。二、名詞解釋19. 是利用分子生物學(xué)

5、和分子遺傳學(xué)的技術(shù)方法， 直接檢測基因分子結(jié)構(gòu)及 表達(dá)水平是否異常，從而對疾病做出診斷的方法。20. 為達(dá)到治療目的，采用正常基因置換或增補(bǔ)患者體內(nèi)變異基因的方法。21. 是依據(jù) DNA 雙鏈堿基互補(bǔ)、變性和復(fù)性原理，用已知堿基序列的單鏈 核苷酸片段作為探針， 檢測樣本中是否存在與其互補(bǔ)的同源核苷酸序列的一種實 驗技術(shù)，是分子生物學(xué)領(lǐng)域及基因診斷最常用的基本技術(shù)之一。22. DNA 分子經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和凝膠電泳后， 可按分子量大小分離， 再 進(jìn)行變性處理，將單鏈 DNA 從凝膠中吸附轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或尼龍膜上，然 后在該濾膜上進(jìn)行雜交反應(yīng)，稱為 Southern 印記雜交法。23. 主要

6、用于 DNA 測序、基因表達(dá)譜的鑒定和基因突變體的檢測與分析， 故又稱為 DNA 芯片或基因芯片。生物芯片技術(shù)包括芯片制作、樣品處理、分子 間反應(yīng)或雜交、檢測、數(shù)據(jù)處理和綜合信息分析。24. 是把產(chǎn)生抗病毒或腫瘤免疫力的相應(yīng)的抗原決定族基因?qū)霗C(jī)體細(xì)胞， 以達(dá)到治療目的的基因治療技術(shù)。25. 是指將致病基因中的異常堿基進(jìn)行糾正， 而正常部分予以保留的基因治 療技術(shù)。26. 是指用正?；蛲ㄟ^基因同源重組技術(shù)，原位替換致病基因，使細(xì)胞內(nèi) 的 DNA 完全恢復(fù)正常的基因治療技術(shù)。27. 即把正?；?qū)塍w細(xì)胞，通過基因的非定點(diǎn)整合進(jìn)入體細(xì)胞 DNA ， 并使其表達(dá)， 以彌補(bǔ)缺陷基因的功能， 或使原

7、有基因的功能得到增強(qiáng)， 但致病基 因本身并未除去。28. 是將特定的反義核酸（反義RNA、反義DNA和核酶）導(dǎo)入細(xì)胞，在轉(zhuǎn)錄 和翻譯水平阻遏某些基因的異常表達(dá)，從而達(dá)到治療目的的基因治療技術(shù)。29. 在某些病毒或細(xì)菌中的某基因可產(chǎn)生一種酶， 它可將原本無細(xì)胞毒或低 細(xì)胞毒藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性物質(zhì)，將細(xì)胞本身殺死，此種基因稱為 “自殺基 因”。30. 用位于待測靶基因序列上兩個相鄰但不重疊的 DNA片段（A、B），分別 制作捕捉探針（不標(biāo)記的、與A序列互補(bǔ)的片段）和檢測探針（標(biāo)記的、與B序列 互補(bǔ)的片段 ），先后與靶基因雜交。31. 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增時需先設(shè)計一對序列與已知序列的 DNA 待

8、測區(qū)兩個 3'- 端的堿基互補(bǔ)的寡核苷酸，稱為引物。32. 是經(jīng)典的 RNA 分析法，用于組織細(xì)胞中總 RNA 或 mRNA 的定性和定 量分析，可確定其加工、剪接的缺陷及外顯子的變異等。33. 即聚合酶鏈反應(yīng)，是由Kary B.M.在1985年創(chuàng)建的，是一種在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的 DNA 序列酶促合成反應(yīng)，又稱為基因擴(kuò)增技術(shù)。三、問答題34. 基因診斷的對象是基因，它具有一般診斷所不具備的以下特點(diǎn)：特異性高?；蛟\斷是以特定的基因為探查靶點(diǎn)， 所采用的分子雜交技術(shù)是用特定基 因序列作為探針，故病因針對性很強(qiáng)。靈敏度和精確性高。分子雜交技術(shù)和PCR技術(shù)具有放大效應(yīng)。其中PCR可檢出p

9、g水平靶基因。實用性強(qiáng)，診斷范 圍廣?？捎糜趦?nèi)源性基因和外源性基因的檢測。 此外被檢測基因樣品幾乎可以是 任何狀態(tài)的組織細(xì)胞， 包括分化階段的特異性表達(dá)及異常表達(dá)， 也可對血斑、 精 斑中的 DNA 等進(jìn)行鑒定。35. 分子雜交程序主要包括下列內(nèi)容：待測核酸樣本的制備。特異性探 針的制備與標(biāo)記：制備的探針包括基因組探針、cDNA探針、寡核苷酸探針、RNA 探針。核酸探針必須標(biāo)記。待測核酸樣本的電泳分離、變性、轉(zhuǎn)移和固定。非特異性DNA分子的預(yù)雜交，標(biāo)記探針的雜交、漂洗。雜交信號的檢測：放 射性核素標(biāo)記的核酸探針雜交信號， 一般用放射自顯影法檢測。 非放射性標(biāo)記的 核酸探針雜交信號，是通過酶促反

10、應(yīng)顯色或發(fā)光來顯示的。36. 采用PCR方法進(jìn)行的基因擴(kuò)增過程類似于體內(nèi) DNA的復(fù)制過程。不同 之處是使用耐熱的Taq酶取代DNA聚合酶，用合成的DNA引物替代RNA引物。 PCR全過程由DNA模板變性、模板與引物結(jié)合和引物延伸三個步驟組成，具體 過程如下：DNA模板的變性：將待擴(kuò)增的DNA高溫變性，使雙鏈解開變成單 鏈。模板與引物的結(jié)合：預(yù)先加入反應(yīng)體系中的兩種引物在降溫退火過程中將 分別同待擴(kuò)增的 DNA 片段兩條鏈 3'-端對應(yīng)的核苷酸互補(bǔ)結(jié)合， 配對復(fù)性。 引 物延伸：將反應(yīng)體系調(diào)節(jié)到所選用的 Taq酶的最適溫度，在有四種dNTP底物存 在的條件下，聚合酶以待擴(kuò)增 DNA為模

11、板，從引物的3-端合成新的DNA鏈。37. 基因診斷臨床應(yīng)用概況：遺傳病的基因診斷：如鐮刀形紅細(xì)胞貧血病的B珠蛋白基因的第六個密碼子發(fā)生單堿基突變。 這一突變改變了該基因內(nèi)部的 一個內(nèi)切酶Mst U作用位點(diǎn)。當(dāng)把正常人和帶有基因突變者的基因組 DNA用Mst U酶解后，用B珠蛋白基因探針雜交，結(jié)果會出現(xiàn)不同的 DNA條帶，依此對其 進(jìn)行基因診斷。 腫瘤的基因診斷： 從分子生物學(xué)角度來看， 腫瘤的發(fā)生是由某 些因素的作用所致的多個癌基因的激活或抑癌基因的缺失。 所以有人認(rèn)為腫瘤是 一種多基因異常性疾病。 依其基因突變事實， 可采用相應(yīng)的技術(shù)對腫瘤進(jìn)行基因 診斷。診斷結(jié)果對了解癌變機(jī)制， 腫瘤分類分型及預(yù)后均有指導(dǎo)意義。 感染性 疾病的基因診斷：采