青霉素發(fā)酵技術14 大米孢子制備(六步教學法)

1、教 案 首 頁授課順序 學時 日期 年 月 日 班級課題1.4大米孢子制備學習目標學習大米培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)及計數(shù)操作技術，掌握大米孢子制備的目的、原理、步驟以及應用領域，掌握試管斜面孢子到大米培養(yǎng)基（三角瓶或茄子瓶）的接種方法，掌握大米孢子的培養(yǎng)條件，進一步鞏固無菌操作技術。主要內(nèi)容（1）大米培養(yǎng)基制備（2）大米孢子的接種方法（3）大米孢子的培養(yǎng)（4）米孢子保藏（5）米孢子計數(shù)（6）無菌操作技術教學過程1、資訊 2、計劃 3、決策 4、實施 5、檢查 6、評價教具或工具 工作任務單、多媒體設備、滅菌鍋、顯微鏡、超凈工作臺等載體產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)物考核與評價采用工作任務單上的考核表進行評價，將評

2、價結果記入期末總成績，并填寫教師評語部分。輕工職業(yè)技術學院 教 案 NO 1 課程 青霉素發(fā)酵生產(chǎn)技術 201 /201 學年第 2 學期 教師 授課日期班 級工作過程：青霉素發(fā)酵生產(chǎn)技術教學任務1.3：產(chǎn)黃青霉菌株的平皿培養(yǎng)及菌種檢測知識目標：（1）了解青霉素的分類及分子結構、作用機理應用等。（2）掌握青霉菌在固體培養(yǎng)基形態(tài)特征（3）熟悉青霉素產(chǎn)生菌生長發(fā)育過程（4）熟悉產(chǎn)黃青霉菌的特點（5）掌握大米孢子的制備方法。（6）掌握青霉菌菌種的保藏（7）掌握青霉菌的直接制片觀察法（8）熟悉母瓶斜面固體培養(yǎng)基配方（9）掌握種子質量要求技能目標：（1）能配制察氏斜面培養(yǎng)基（2）會使用高壓蒸汽滅菌鍋（3

3、）學會無菌操作（4）會斜面劃線接種產(chǎn)黃青霉菌株（5）學會使用恒溫培養(yǎng)箱（6）會制備大米培養(yǎng)基（8）會配制乳酸石炭酸棉藍染色液（9）會配制50%乙醇（10）會青霉菌直接制片（11）能正確使用顯微鏡（12）會制備菌懸液（供凍干用）（13）學會操作小型凍干機（14）會使用高頻火花真空測定器測定凍干菌種真空度重點難點：（1） 青霉菌插片制片觀察（2）青霉菌形態(tài)的準確鑒定（3）產(chǎn)黃青霉菌株保存 教學方法： “課堂，實訓一體化”的現(xiàn)場教學方法；項目導入教學法?？己朔椒ǎ航M內(nèi)自我評分和組間互評、實施過程評分、實驗結果評分。學時安排：設計方案2學時、組織實施2學時教學札記： 編寫日期：輕工職業(yè)技術學院 教 案

4、 附 頁教學組織一、分組學生全部進入發(fā)酵室后，將其分為7組，各組組長兼任安全員、副組長兼任設備材料員，達到學生的自管自治和相互監(jiān)督，學生與教師的高度配合。二、工作過程導入（資訊）教師通過ppt向學生展示青霉菌大米培養(yǎng)物，提出問題：大家想，由試管到茄子瓶培養(yǎng)物有什么變化？學生回答引導學生：容器大?。慨a(chǎn)黃青霉生長數(shù)量？孢子數(shù)量？最后得出結論。繼續(xù)引導學生思考：我們在實驗室自己如何能獲得青霉菌大米培養(yǎng)物？為何用茄子瓶？如果沒有茄子瓶，可拿什么容器代替（三角瓶？）。大米培養(yǎng)基如何制作，如何接種（還用劃線法嗎）？霉菌孢子的培養(yǎng)一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。培養(yǎng)的溫度一般為252

5、8C。培養(yǎng)時間一般為414天。培養(yǎng)基的特點：成本低、米粒之間結構疏松提高比表面積和氧的傳質，營養(yǎng)適當（要求大米的白點?。?；有利于孢子的生長。怎樣才能獲得數(shù)量集中的孢子量？能否將一個玻片斜插如培養(yǎng)基上，來獲得制片？（答案是肯定的）得到的培養(yǎng)物能否檢測其生長量？大米孢子的要求：1粒米含1.4*106個孢子三、教學任務導入（資訊）要求學生快速瀏覽青霉素發(fā)酵學習指導書上的參考資料，并提煉出大米孢子制備的關鍵技術點，從而讓學生建立對該工作過程的感性認識。接著教師隨機指定學生回答問題：大米孢子培養(yǎng)物在青霉素發(fā)酵生產(chǎn)流程中的作用是什么？從而引出本次課要完成的任務。附：大米孢子制備過程：1. 將優(yōu)質新米（大米

6、白點?。┯盟?. 倒入搪瓷盤內(nèi)蒸15分鐘3. 蒸畢，取出搓散團塊，稍冷，加0.5%到1.0%玉米漿4. 分裝于茄形瓶內(nèi)，裝2到3層5. 蒸汽滅菌（121攝氏度30分鐘）冷卻備用6. 取制備好的斜面孢子管，加入少量無菌水，制成孢子懸液7. 接入到裝有大米的茄形瓶（250毫升）中，培養(yǎng)2到3天，上下翻動一次，繼續(xù)培養(yǎng)，直到大米表面長滿菌絲，形成綠色孢子（4攝氏度冰箱內(nèi)保存，10天內(nèi)使用）。引導學生分析大米孢子制備的詳細步驟，找出關鍵技術點，導出工作過程：由試管斜面培養(yǎng)物到大米培養(yǎng)基（三角瓶或茄子瓶）培養(yǎng)物的菌種擴增制備流程。四、任務實施1. 初步方案討論（計劃）以小組為單位，按照發(fā)酵實訓任務書

7、上的“任務1.4、產(chǎn)黃青霉菌株大米孢子制備”的學習目標及任務要求，查閱學習指導書上的相應參考資料，通過學習，各小組分別討論產(chǎn)黃青霉菌株的大米培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)及計數(shù)操作技術、填寫項目任務書。2. 最佳方案篩選（決策）教師對各小組方案進行點評，推薦最佳方案，進行修改完善，并對其它小組的方案進行指導，找出錯誤或不足之處。同時，學生填寫項目任務書。3. 方案具體實施各小組按照產(chǎn)黃青霉菌株大米孢子制備制備流程的定稿方案，利用實驗室的器材，具體實施：將優(yōu)質新米（大米白點?。┯盟浮⒌谷胩麓杀P內(nèi)蒸15分鐘、蒸畢，取出搓散團塊，稍冷，加0.5%到1.0%玉米漿；分裝于茄形瓶內(nèi)，裝2到3層；蒸汽滅菌（1

8、21攝氏度30分鐘）冷卻備用；取制備好的斜面孢子管，加入少量無菌水，制成孢子懸液、接入到裝有大米的茄形瓶（250毫升）中，培養(yǎng)2到3天，上下翻動一次，繼續(xù)培養(yǎng)，直到大米表面長滿菌絲，形成綠色孢子（4攝氏度冰箱內(nèi)保存，10天內(nèi)使用）、分組交流以及進行孢子計數(shù)，最后進行顯微拍照，制作自己青霉素發(fā)酵實訓動漫演示作業(yè)。仔細觀察實訓生產(chǎn)的過程，對每一步都進行記錄，最后完成小組用書的項目記錄表。4. 關鍵能力的重點指導（檢查）教師對學生的實踐練習進行有效監(jiān)控，巡回指導，及時指出不規(guī)范的操作。并對其關鍵能力進行重點指導。如大米篩選、拌制、分裝、滅菌，孢子液制備、接種、培養(yǎng)，以及顯微操作進行孢子計數(shù)等。5.

9、任務結果評價完成產(chǎn)黃青霉菌株的大米孢子制備任務后，各小組分別展示產(chǎn)黃青霉菌株的大米孢子三角瓶培養(yǎng)物。首先，進行組內(nèi)自我評價和組間互評，接著，教師對每組結果進行評價，指出存在的問題和改進的方法。（附：評價項目包括：產(chǎn)黃青霉菌株大米培養(yǎng)物無雜菌污染、產(chǎn)黃青霉菌株在大米培養(yǎng)基上生長指標、鏡下能觀察到典型的不對稱分生孢子梗及青綠色成串圓球形小孢子。）6. 任務小結 各組討論進行項目小結、填寫項目報告書。教師指出各小組在操作過程中存在的問題和正確的處理方法，評價同學們在任務實施過程中的表現(xiàn)（包括遵守紀律，認真仔細，團結合作），提出表揚，指出不足。7 . 完成課后作業(yè)要求學生完成發(fā)酵實訓任務書中該環(huán)節(jié)中的相關作業(yè)題。8. 布置下一任務液體培養(yǎng)基配制、大米孢子接入、產(chǎn)黃青霉菌株液體菌種的搖床培養(yǎng)。 書是我們時代的生命別林斯基書籍是巨大的力量列寧書是人類進步的階梯高爾基書籍是人類知識的總統(tǒng)莎士比亞書籍是人類思想的寶庫烏申斯基書籍舉世之寶梭羅好的書籍是最貴重的珍寶別林斯基書是唯一不死的東西丘特書籍使人們成為宇宙的主人巴甫連柯書中橫臥著整個過去的靈魂卡萊爾