免疫功能檢查

1、免疫功能檢查免疫功能檢查Laboratory Diagnosis for Immune Function第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院全軍醫(yī)學免疫中心高春芳第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院全軍醫(yī)學免疫中心高春芳 臨床疾病與免疫的關(guān)系臨床疾病與免疫的關(guān)系 免疫系統(tǒng)性疾病免疫系統(tǒng)性疾病 免疫缺陷病、免疫增殖病免疫缺陷病、免疫增殖病 免疫相關(guān)性疾病免疫相關(guān)性疾病 自身免疫性疾病、變態(tài)反應性疾病自身免疫性疾病、變態(tài)反應性疾病 感染性疾病感染性疾病 應用免疫學技術(shù)診斷、治療性疾病應用免疫學技術(shù)診斷、治療性疾病 臨床免疫臨床免疫自身免疫病自身免疫病 內(nèi)分泌免疫學內(nèi)分泌免疫學變態(tài)反應性疾病變態(tài)反應性疾病 皮膚病免疫學皮膚

2、病免疫學免疫缺陷性疾病免疫缺陷性疾病 免疫增殖性疾病免疫增殖性疾病 心血管病免疫學心血管病免疫學 呼吸免疫學呼吸免疫學移植免疫學移植免疫學 生殖免疫學生殖免疫學腫瘤免疫學腫瘤免疫學 神經(jīng)免疫學神經(jīng)免疫學傳染免疫學傳染免疫學 消化免疫學消化免疫學風濕病學風濕病學 血液免疫學血液免疫學創(chuàng)傷免疫學創(chuàng)傷免疫學 免疫治療學免疫治療學腎病免疫學腎病免疫學 免疫預防學免疫預防學免疫學診斷的定義：免疫學診斷的定義： 用抗原、抗體結(jié)合的技術(shù)對與免疫用抗原、抗體結(jié)合的技術(shù)對與免疫有關(guān)的疾病，如免疫增殖病、免疫缺有關(guān)的疾病，如免疫增殖病、免疫缺陷病、變態(tài)反應、自身免疫、傳染病、陷病、變態(tài)反應、自身免疫、傳染病、惡性

3、腫瘤等作出輔助診斷或特異性診惡性腫瘤等作出輔助診斷或特異性診斷。斷。應用意義：應用意義：1. 直接測定免疫功能直接測定免疫功能 2. 檢查致病因子檢查致病因子 3. 參考作用參考作用 免疫功能免疫功能 (immune function) 體液免疫體液免疫 (humoral immunity) 細胞免疫細胞免疫(cellular immunity) 免疫球蛋白免疫球蛋白(immunoglobulin) T細胞細胞 (T-cell) 補體補體(complement) 細胞因子細胞因子(cytokines)兩種兩種T輔助細胞不同的細胞因子產(chǎn)生譜輔助細胞不同的細胞因子產(chǎn)生譜 及不同效應及不同效應 體液

4、免疫測定體液免疫測定免疫球蛋白定量免疫球蛋白定量散射及濁度測定技術(shù)散射及濁度測定技術(shù) 原理是根據(jù)抗原和抗體形成的復合物原理是根據(jù)抗原和抗體形成的復合物粒子對光的散射和吸收度來判斷待測抗原的量。測定散射光粒子對光的散射和吸收度來判斷待測抗原的量。測定散射光強度的方法稱為強度的方法稱為nephelometry，測定吸收光強度的方法稱，測定吸收光強度的方法稱turbidimetry。兩種方法均可采用速率法（。兩種方法均可采用速率法（rate assay）即反應）即反應開始第開始第1分鐘內(nèi)的光散射或吸收度或終點法（分鐘內(nèi)的光散射或吸收度或終點法（end-point assay），即反應終止時（一般為）

5、，即反應終止時（一般為30min）的光散射度或吸收）的光散射度或吸收總量。通過微電腦對數(shù)據(jù)進行處理，即可知道被檢蛋白質(zhì)總量。通過微電腦對數(shù)據(jù)進行處理，即可知道被檢蛋白質(zhì)（Ig）的含量）的含量參考值：參考值： IgG 815 g/L, IgA 0.93 g/L, IgM 0.52.5 g/L 免疫球蛋白測定的臨床意義免疫球蛋白測定的臨床意義免疫球蛋白升高免疫球蛋白升高 非特異性多克隆升高非特異性多克隆升高 特異性單克隆升高特異性單克隆升高免疫球蛋白減低免疫球蛋白減低 細胞免疫缺陷、體液免疫缺陷、聯(lián)合免疫缺陷細胞免疫缺陷、體液免疫缺陷、聯(lián)合免疫缺陷 免疫球蛋白缺陷病：無免疫球蛋白缺陷?。簾o球蛋白血

6、癥、選擇性球蛋白血癥、選擇性IgA 缺陷癥、選擇性缺陷癥、選擇性IgM或或IgE缺陷缺陷Recombination&Expression of Ig genes 免疫球蛋白正常合成免疫球蛋白正常合成 免疫球蛋白輕鏈、重鏈不在同一條染色體上。免疫球蛋白輕鏈、重鏈不在同一條染色體上。(-2;-22;H-14) 輕鏈、重鏈的基因不連續(xù)，必須經(jīng)過基因重排分別連在一起。輕鏈、重鏈的基因不連續(xù)，必須經(jīng)過基因重排分別連在一起。 同樣按照同樣按照DNAmRNA蛋白質(zhì)這一生物合成的中心法則合成。蛋白質(zhì)這一生物合成的中心法則合成。 重鏈、輕鏈分別在不同的核糖體重鏈、輕鏈分別在不同的核糖體( polysom

7、es)上合成。上合成。 合成后的輕鏈和重鏈在光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成完整的合成后的輕鏈和重鏈在光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成完整的Ig分子分子(H2L2)。 裝配好的裝配好的Ig分子進入高爾基氏體進行糖基化，通過分泌泡送至細分子進入高爾基氏體進行糖基化，通過分泌泡送至細胞膜表面胞膜表面, 在釋放前可在細胞膜表面停留幾個小時。在釋放前可在細胞膜表面停留幾個小時。 H鏈和鏈和L鏈的氨基酸數(shù)量差別很大鏈的氨基酸數(shù)量差別很大,合成的速度也合成的速度也不同不同,一般合成一條重鏈約需一般合成一條重鏈約需18分鐘分鐘,而合成一條輕鏈只而合成一條輕鏈只需需10分鐘分鐘, 組成一條完整的組成一條完整的Ig(兩條重鏈和兩條輕鏈兩條重鏈

8、和兩條輕鏈)則則有一條以上輕鏈過剩。多余、過剩的輕鏈由細胞膜分有一條以上輕鏈過剩。多余、過剩的輕鏈由細胞膜分泌到胞外泌到胞外, 再轉(zhuǎn)入腎臟再轉(zhuǎn)入腎臟, 約約10在腎小管內(nèi)分解代謝在腎小管內(nèi)分解代謝, 80回吸收回吸收,由體內(nèi)巨噬細胞吞噬降解，由體內(nèi)巨噬細胞吞噬降解，10從尿排出。從尿排出。因此因此, 正常人尿中始終有微量輕鏈排出。正常人尿約含正常人尿中始終有微量輕鏈排出。正常人尿約含510g/ml, 最大最大20g/ml, 每天約排每天約排25mg/d。因為是。因為是正常合成正常合成, /也是也是2:1。這個含量用一般方法是無法測。這個含量用一般方法是無法測出的。出的。非特異性免疫球蛋白增殖病

9、非特異性免疫球蛋白增殖病 肝病肝病 自身免疫病自身免疫病 慢性感染慢性感染 惡性腫瘤惡性腫瘤 免疫母細胞淋巴結(jié)病免疫母細胞淋巴結(jié)病 AIDS 免疫指標不是肝功能的直接指標，但由于免疫指標不是肝功能的直接指標，但由于肝臟承擔了體內(nèi)蛋白質(zhì)的及其它物質(zhì)的合成與肝臟承擔了體內(nèi)蛋白質(zhì)的及其它物質(zhì)的合成與代謝，因此能直接或間接地影響與調(diào)節(jié)機體的代謝，因此能直接或間接地影響與調(diào)節(jié)機體的免疫狀態(tài)，通過對血清免疫狀態(tài)，通過對血清Ig及補體的檢測，可在及補體的檢測，可在一定程度上反映受檢者肝臟的疾病和損傷。一定程度上反映受檢者肝臟的疾病和損傷。血清蛋白電泳血清蛋白電泳 肝病是導致外周血免疫球蛋白非特異性升肝病是導

10、致外周血免疫球蛋白非特異性升高的六大病種之一。高的六大病種之一。急性肝炎多以急性肝炎多以IgM升高（升高（310天）。天）。慢性肝炎慢性肝炎IgG、IgA皆升高，以皆升高，以IgG為主。為主。肝硬化則肝硬化則IgG、IgA、IgM皆升高，但以皆升高，但以 IgA升高為顯著。升高為顯著。肝癌則肝癌則IgM降低、降低、IgA升高最明顯。升高最明顯。當然以上這些變化是相對而言，并不是絕對當然以上這些變化是相對而言，并不是絕對的。的。 肝臟不是免疫球蛋白的合成場所，但對血清肝臟不是免疫球蛋白的合成場所，但對血清中免疫球蛋白含量起重要的調(diào)節(jié)作用，這種調(diào)節(jié)中免疫球蛋白含量起重要的調(diào)節(jié)作用，這種調(diào)節(jié)作用表現(xiàn)

11、在：作用表現(xiàn)在： 影響腸道內(nèi)抗原物質(zhì)的吸收及處理影響腸道內(nèi)抗原物質(zhì)的吸收及處理; 通過通過Kupffer細胞對抗原呈現(xiàn)特殊遞呈作用細胞對抗原呈現(xiàn)特殊遞呈作用; 門體靜脈側(cè)枝循環(huán)可將腸道來源的抗原直接門體靜脈側(cè)枝循環(huán)可將腸道來源的抗原直接 暴露在全身免疫系統(tǒng)而誘導機體大量抗體的產(chǎn)暴露在全身免疫系統(tǒng)而誘導機體大量抗體的產(chǎn) 生等。生等。 特異性免疫球蛋白增殖癥特異性免疫球蛋白增殖癥 (單克隆增殖和惡性單克隆增殖和惡性Ig增殖癥增殖癥) 單克隆增殖是一個細胞在某一分裂階段發(fā)生突變單克隆增殖是一個細胞在某一分裂階段發(fā)生突變, 然后急然后急劇分化、增殖劇分化、增殖, 并大量表達某種單一的并大量表達某種單一

12、的Ig, 這種惡性增殖具有這種惡性增殖具有如下特點如下特點: 均一型均一型 含量大含量大(達到數(shù)克也可高達達到數(shù)克也可高達10余克余克) 正常成分減少正常成分減少(正常值以下正常值以下) 比例失調(diào)比例失調(diào)(/或或2:1) 出現(xiàn)相關(guān)臨床表現(xiàn)出現(xiàn)相關(guān)臨床表現(xiàn)(骨骼、腎臟、血液等系統(tǒng)骨骼、腎臟、血液等系統(tǒng)) 當當Ig異常表達時異常表達時, 可出現(xiàn)以下三個現(xiàn)象可出現(xiàn)以下三個現(xiàn)象: 被激活、突變的被激活、突變的B細胞轉(zhuǎn)化為前細胞轉(zhuǎn)化為前B細胞或漿細胞活性極細胞或漿細胞活性極高高,可快速合成可快速合成Ig, 合成一條合成一條H鏈大約需要鏈大約需要2.5分鐘分鐘, 合成一條合成一條L鏈則只需鏈則只需1分鐘。

13、如此分鐘。如此, 每合成一分子每合成一分子Ig則會剩余則會剩余3條輕鏈條輕鏈,多多余的輕鏈由尿中排出余的輕鏈由尿中排出, 可達可達1mg/ml以上。以上。 由于突變和激活的細胞是單一克隆由于突變和激活的細胞是單一克隆, 按一個細胞一種抗按一個細胞一種抗體的原則體的原則, 所表達的所表達的Ig均為單一產(chǎn)物均為單一產(chǎn)物, 亦即一個型、一個亞型、亦即一個型、一個亞型、一個基因型。因此一個基因型。因此, 尿中出現(xiàn)的過剩輕鏈均屬一個型。同樣尿中出現(xiàn)的過剩輕鏈均屬一個型。同樣, 血中增殖的血中增殖的Ig, 多屬一個型。血和尿中多屬一個型。血和尿中/決不是決不是2:1或大于此或大于此或小于此?；蛐∮诖?。 由

14、于同種抑制和反饋抑制由于同種抑制和反饋抑制, 當某一克隆細胞大量、快速當某一克隆細胞大量、快速增殖時增殖時, 其他克隆細胞則會被抑制其他克隆細胞則會被抑制, 大量的均一產(chǎn)物大量的均一產(chǎn)物(Ig)也會也會反饋地抑制正?？寺〉脑鲋澈捅磉_。因此反饋地抑制正?？寺〉脑鲋澈捅磉_。因此, 除單一克隆產(chǎn)物除單一克隆產(chǎn)物大量增殖外大量增殖外, 正常正常Ig則會明顯減少。則會明顯減少。多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤: 發(fā)病機率和發(fā)病機率和Ig含量一樣含量一樣, IgG型最多型最多, IgA型次之型次之, IgM型少見型少見(7S),IgD更少更少, IgE型罕見型罕見(至今至今發(fā)現(xiàn)不過發(fā)現(xiàn)不過20例例)。 巨球蛋白血

15、癥巨球蛋白血癥: 屬于屬于IgM型型, 由于大量增殖由于大量增殖, IgM可發(fā)可發(fā)生各種聚合生各種聚合, 正常為正常為19S, 患者可出現(xiàn)患者可出現(xiàn)24S, 32S等多鐘等多鐘聚合體。聚合體。 淋巴瘤淋巴瘤: 有時慢性淋巴細胞惡性病變有時慢性淋巴細胞惡性病變, 也可出現(xiàn)多克也可出現(xiàn)多克隆增殖。隆增殖。輕鏈病輕鏈病 可分可分型和型和型型, 亦有雙克隆型。由于尿中出現(xiàn)亦有雙克隆型。由于尿中出現(xiàn)輕鏈可分多克隆型、單克隆型輕鏈可分多克隆型、單克隆型, 并隨型在診斷中要分析并隨型在診斷中要分析清楚。輕鏈病的診斷必須符合以下三條才能作出決定清楚。輕鏈病的診斷必須符合以下三條才能作出決定: 各種各種Ig正常

16、或減少正?；驕p少; 血中和尿中出現(xiàn)一條輕鏈帶血中和尿中出現(xiàn)一條輕鏈帶(電泳后電泳后) 臨床上符合一個多發(fā)性骨髓瘤的診斷臨床上符合一個多發(fā)性骨髓瘤的診斷重鏈病重鏈病: Ig有有5種重鏈則應有種重鏈則應有5種重鏈病種重鏈病, 但目前只發(fā)現(xiàn)了但目前只發(fā)現(xiàn)了4種種, 最多的是最多的是重鏈病重鏈病, 已發(fā)現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)200余例余例, 重鏈病已報告重鏈病已報告, 重鏈病只有重鏈病只有19例例, 重鏈病只有一例報告重鏈病只有一例報告,重鏈病至今重鏈病至今未見報告。未見報告。7S IgM病病: IgM是是19S, 7S是小分子是小分子IgM報告不報告不 多多, 我國尚未發(fā)現(xiàn)。我國尚未發(fā)現(xiàn)。 半分子病半分子病: 按

17、機率按機率5種種Ig皆可出現(xiàn)半分子病皆可出現(xiàn)半分子病, 但至但至 今只發(fā)現(xiàn)今只發(fā)現(xiàn)IgG(3例例)和和IgA(5例例)半分子病。除了免疫分析半分子病。除了免疫分析有特點之外有特點之外, 其他基本上如其他基本上如MM選擇性選擇性或或鏈缺乏癥鏈缺乏癥: 本病報告極少本病報告極少, BMG(良性良性M蛋白血癥蛋白血癥)或或MGUS(不明意義的不明意義的M蛋白癥蛋白癥): 屬于一種良性異常增殖、性質(zhì)不良、屬于一種良性異常增殖、性質(zhì)不良、/值輕度變化值輕度變化, M蛋白蛋白3g/dL, 骨髓漿細胞骨髓漿細胞10等。等。Four- M character Monoclonal Multiple Myelo

18、ma MalignantLight chainLight chainonly 5%only 5%(47)(47)IgG 61%IgG 61%(565)(565)BiclonalBiclonal3.5% (32)3.5% (32)IgMIgM19%(172)19%(172)IgA 11.5%IgA 11.5%(106)(106)Distribution of serum monoclonal proteins in 922 cases at the Mayo Clinic in 1992 Epidemiology of MMl l Annual incidence: 4 per 100,000,

19、 related to the availability of medical facilities; in the elderly and the improvement of diagnostic techniques.l l 1% in all malignant diseases, slight more than 10% in hematologic malignancies.l l Racial difference for incidence rate, lower in Asian.l l In persons younger than 50yr: 18%l l Median

20、age at diagnosis: 63 yrMultiple Myeloma ( MM) The annual incidence of MM is 4/100,000 per year Il-6 is a major growth factor in MM 99% of patients have a monoclonal protein in the serum or urine during the course of their disease The most important prognostic factors are plasma cell labeling index a

21、nd 2 microglobulin levelBiologic Aspectsl l Surface markers of malignant plasma cells suggests its origin from a pluripotent stem cell.l l CD4 T cells: decreased.l l IL-1 and TNF devoted to the bone lesions in myeloma.l l IL-6: important myeloma cell growth factor for the progression.l l Oncogenes r

22、elated: Ras mutation 47%/33 cases; P53 point mutationl l Cytogeneic studies: chromosome abnormalities 50%Clinical manifestationsl l Bone pain: 2/3l l Height reduce because of vertebral collapsel l Weakness and fatigue because of anemial l Fever because of infectious processl l Pallor, most frequent

23、physical findingl l Liver palpable in 15% patients, spleen rarely enlargedl l Extramedullary plasmacytomas: large, purplish, subcutaneous masses observed late in the course of the diseaseLaboratory findingsL L Normocytic, normochromic anemia 2/3L L HypercalcemiaL L Elevation of serum creatinine leve

24、lL L SPE: M-spike 80%L L M-protein: 92% IgG 50%; IgA 20%; free monoclonal light chain 20%L L Serum or Urine M protein: 99%L L Plasma cells: 10% (5100%), more focal than diffuse, repeated bone marrow examination necessaryHelpful laboratory items for differential diagnosis: The size of the serum M-pro

25、tein; The amount of urine M-protein; The number of bone marrow plasma cells; The hemoglobin, calcium, and creatinin levels and levels of uninvolved serum Igs;Prognostic factorsl l Duration of survival: few months many years, median 2.53 year.l l Uncorrected 2 microglobulin level is one of the most p

26、owerful prognostic factorsl l CRP, which correlated with the serum IL-6 level maybe helpful for determining prognosisl l LDH, if elevated indicates poor prognosisl免疫球蛋白及輕鏈定量免疫球蛋白及輕鏈定量l血清蛋白電泳血清蛋白電泳l免疫固定電泳免疫固定電泳l尿蛋白電泳及本周氏蛋白定性尿蛋白電泳及本周氏蛋白定性 補體檢查和有關(guān)疾病補體檢查和有關(guān)疾病總補體活性測定總補體活性測定 CH50單個補體成分定量單個補體成分定量 C4經(jīng)典途徑經(jīng)典途

27、徑 B因子旁路途徑因子旁路途徑 C3經(jīng)典和旁路途徑經(jīng)典和旁路途徑臨床意義：臨床意義：補體減少：腎病、自身免疫性疾病、腫瘤、補體減少：腎病、自身免疫性疾病、腫瘤、 補體缺陷病。補體缺陷病。補體增加：少見，如腫瘤。補體增加：少見，如腫瘤。Two TypicalPathway for Complement ActivationCommon Pathway for complement activation 補體與肝臟的關(guān)系較免疫球蛋白更為密切，部分補體及其補體與肝臟的關(guān)系較免疫球蛋白更為密切，部分補體及其抑制因子由肝臟合成，肝臟的感染和炎癥反應可刺激機體免疫抑制因子由肝臟合成，肝臟的感染和炎癥反應可

28、刺激機體免疫系統(tǒng)，導致血清總補體活性及其它補體成分的含量增加，這種系統(tǒng)，導致血清總補體活性及其它補體成分的含量增加，這種現(xiàn)象可見于預后較好的現(xiàn)象可見于預后較好的急性病毒性肝炎早期急性病毒性肝炎早期。 當肝實質(zhì)受到嚴重損傷當肝實質(zhì)受到嚴重損傷時，補體成分的合成相應減少，這時，補體成分的合成相應減少，這種減少往往在肝病的晚期，同時伴有顯著的肝功能受損。種減少往往在肝病的晚期，同時伴有顯著的肝功能受損。 此外任何造成肝實質(zhì)損傷與肝臟流動力學變化均可導致循環(huán)此外任何造成肝實質(zhì)損傷與肝臟流動力學變化均可導致循環(huán)免疫復合物在外周血中的積聚，其結(jié)果導致對補體的過量激活，免疫復合物在外周血中的積聚，其結(jié)果導致

29、對補體的過量激活，使血清中補體含量消耗性降低，急性降低多見于使血清中補體含量消耗性降低，急性降低多見于急性重癥肝炎急性重癥肝炎，慢性消耗性減低主要發(fā)生在多種補體成分慢性消耗性減低主要發(fā)生在多種補體成分自身免疫性疾病、自自身免疫性疾病、自身免疫性肝炎、肝硬化及其它原因?qū)е碌母尾⊥砥谏砻庖咝愿窝住⒏斡不捌渌驅(qū)е碌母尾⊥砥?。細胞免疫功能測定細胞免疫功能測定抗原特異抗原特異T細胞檢測細胞檢測細胞毒性細胞毒性T細胞檢測細胞檢測流式細胞術(shù)（流式細胞術(shù)（Flow Cytometry, FCM）是八十年代發(fā)）是八十年代發(fā)展起來的一項利用流式細胞儀進行分析的新技術(shù)。展起來的一項利用流式細胞儀進行分析的新技

30、術(shù)。流式細胞術(shù)集激光術(shù)、微電腦、單克隆抗體技術(shù)、流式細胞術(shù)集激光術(shù)、微電腦、單克隆抗體技術(shù)、細胞色素化學于一體，形成了快速、準確的分析和細胞色素化學于一體，形成了快速、準確的分析和細胞分選技術(shù)方法。細胞分選技術(shù)方法。FCM在臨床和基礎(chǔ)研究中的價在臨床和基礎(chǔ)研究中的價值主要體現(xiàn)于值主要體現(xiàn)于免疫表型分析、免疫表型分析、DNA含量分析和細胞含量分析和細胞分選分選三個方面。其中免疫表型分析在細胞免疫功能三個方面。其中免疫表型分析在細胞免疫功能測定中起著重要作用。測定中起著重要作用。FCM原理原理 用細胞表面特異性單克隆抗體與細胞用細胞表面特異性單克隆抗體與細胞作用，再利用熒光結(jié)合的第二抗體與之作用。

31、通作用，再利用熒光結(jié)合的第二抗體與之作用。通過抗原抗體反應，使陽性細胞標上熒光，此為間過抗原抗體反應，使陽性細胞標上熒光，此為間接標記法或?qū)⑻禺愋詥慰瓜葮擞浬蠠晒庠僦苯优c接標記法或?qū)⑻禺愋詥慰瓜葮擞浬蠠晒庠僦苯优c細胞結(jié)合發(fā)光，此為直接標記法，當細胞流經(jīng)流細胞結(jié)合發(fā)光，此為直接標記法，當細胞流經(jīng)流式細胞儀，激光束（式細胞儀，激光束（488nm）對高速通過的細胞）對高速通過的細胞流照射，使熒光染料產(chǎn)生不同波長的散射光，光流照射，使熒光染料產(chǎn)生不同波長的散射光，光信號收集后經(jīng)由信號收集后經(jīng)由PMT（光電倍增管）放大并加以（光電倍增管）放大并加以分析處理，在短時可獲取細胞大小、核質(zhì)比、熒分析處理，在短

32、時可獲取細胞大小、核質(zhì)比、熒光強度和陽性百分比等數(shù)據(jù)光強度和陽性百分比等數(shù)據(jù)。 流式細胞術(shù)的幾個重要特點流式細胞術(shù)的幾個重要特點 標本只要是單細胞即可用于分析標本只要是單細胞即可用于分析 極短時間內(nèi)可分析大量細胞極短時間內(nèi)可分析大量細胞 可同時分析單個細胞的多種特征可同時分析單個細胞的多種特征 定性或定量分析定性或定量分析FCM對細胞免疫功能的檢測主要用于對細胞免疫功能的檢測主要用于1、細胞分群和細胞亞群的分析、細胞分群和細胞亞群的分析 利用利用CD45/CD14可以可以分出外周血中的白細胞和單核細胞，在白細胞內(nèi)利用分出外周血中的白細胞和單核細胞，在白細胞內(nèi)利用CD3、CD19、CD20、CD

33、3/(CD16+56)+ 等標記進一步等標記進一步可分出可分出T、B淋巴細胞和淋巴細胞和NK細胞等。在細胞等。在T細胞內(nèi)又有細胞內(nèi)又有CD4/CD8標志的標志的T輔助輔助/誘導和誘導和T抑制抑制/殺傷亞群利用殺傷亞群利用CD4/CD29、CD8/CD28標志可以將標志可以將T4、T8進一步分出進一步分出各亞群。各亞群。2、檢測淋巴細胞的活化、檢測淋巴細胞的活化 CD3/HLA-DR、CD3/CD25、CD69等都是活化等都是活化T淋巴細胞的特異性標記，另有淋巴細胞的特異性標記，另有C17單單抗是活化的細胞毒抗是活化的細胞毒T淋巴細胞的標志物。其比值的改變淋巴細胞的標志物。其比值的改變對病情監(jiān)測

34、，療效判斷有重要的指導意義。對病情監(jiān)測，療效判斷有重要的指導意義。3、一些特殊的標志如、一些特殊的標志如CD4/CD8比值是比值是AIDS、自身免疫、自身免疫性疾病病程監(jiān)測的重要指標。性疾病病程監(jiān)測的重要指標。當前流式細胞分析的發(fā)展趨勢當前流式細胞分析的發(fā)展趨勢(1)從相對細胞計數(shù)到絕對細胞計數(shù)從相對細胞計數(shù)到絕對細胞計數(shù) 淋巴細胞亞群、造血干細胞、網(wǎng)織紅細胞、血小板等淋巴細胞亞群、造血干細胞、網(wǎng)織紅細胞、血小板等從相對定量到絕對定量從相對定量到絕對定量 定量抗體微球法定量抗體微球法 定量熒光素分子微球法定量熒光素分子微球法從單色到多色熒光分析從單色到多色熒光分析 特別適用于淋巴細胞亞群分析、

35、白血病免疫表型分析、特別適用于淋巴細胞亞群分析、白血病免疫表型分析、 細胞功能評價細胞功能評價 當前流式細胞分析的發(fā)展趨勢當前流式細胞分析的發(fā)展趨勢(2) 從細胞膜成分到細胞內(nèi)成分分析從細胞膜成分到細胞內(nèi)成分分析 胞漿酶、細胞因子等多種成分分析胞漿酶、細胞因子等多種成分分析 液體中可溶性成分的流式細胞術(shù)分析液體中可溶性成分的流式細胞術(shù)分析 流式微球分析流式微球分析 流式分子表型分析流式分子表型分析 Molecular phenotyping 用流式細胞計數(shù)檢測細胞中特異性核酸序列或用流式細胞計數(shù)檢測細胞中特異性核酸序列或 特特異性基因異常。分析表型與免疫表型分析技術(shù)相結(jié)合，異性基因異常。分析表型與免疫表型分析技術(shù)相結(jié)合，對于分析特定細胞群的功能和特性提供廣闊應用前景。對于分析特定細胞群的功能和特性提供廣闊應用前景。 常用外周血表型分析值常用外周血表型分析值* CD分類分類 意意 義義 正常值（）正常值（）X2S CD3 總總T淋巴細胞淋巴細胞 65.869.60 CD2 花環(huán)形成細胞花環(huán)形成細胞 77.469.27 CD4 T輔助輔助/T誘導亞群誘導亞群 37.538.91 CD4+/CD29- 輔助性輔助性T細胞細胞 21.228.98 CD4+/CD