微免實驗復(fù)習(xí)整理(圖文詳盡版本)

1、微免實驗整理（一） 實驗一 大吞噬現(xiàn)象、小吞噬現(xiàn)象吞噬功能的測定計數(shù)方法：吞噬百分率:計數(shù)100個中性粒細胞中具有吞噬作用的細胞數(shù),即為吞噬百分率。吞噬指數(shù)：觀察100個中性粒細胞，計數(shù)被吞噬的細菌總數(shù)，求平均每個中性粒細胞吞噬的細菌數(shù)即為吞噬指數(shù)。·大吞噬現(xiàn)象要認識“巨噬細胞”·小吞噬現(xiàn)象主要認識“中性粒細胞”（馬蹄狀形） （二）實驗二 淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（原理、分型、意義）1、原理：T淋巴細胞可以在分裂劑的刺激下，向母細胞轉(zhuǎn)化。促分裂劑能選擇性地激發(fā)T淋巴細胞合成DNA與細胞分裂。轉(zhuǎn)化百分率正常值為70%左右2、分裂相：即染色體型3、母細胞：較小淋巴細胞大4-5倍；核質(zhì)疏

2、松呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有1-3個核仁；核周透明區(qū)；胞漿嗜堿性，有空泡4、過渡型：較小淋巴細胞略大；核質(zhì)略疏松；著色較淡5、小淋巴細胞：核質(zhì)致密；著色深；胞漿少6、意義：體外淋巴細胞轉(zhuǎn)化反應(yīng)，可為測定機體細胞免疫狀態(tài)的指標(biāo)之一。 E玫瑰花環(huán)實驗1、原理：T細胞表面有綿羊紅細胞受體，可在自然情況下與綿羊紅細胞結(jié)合，形成E玫瑰花環(huán)，由此可區(qū)分T淋巴細胞與B淋巴細胞2、判定結(jié)果：凡是淋巴細胞周圍圍繞4個以上綿羊紅細胞者為陽性 血清學(xué)反應(yīng)1、基礎(chǔ)：抗原決定簇抗體的互補決定區(qū)2、特點：特異性、可逆性、 比例性、階段性3、抗原抗體反應(yīng)因素：電解質(zhì)、溫度、酸堿度4、抗原或抗體的檢測方法：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、免疫標(biāo)記技

3、術(shù) I 凝集反應(yīng)：（直接、間接）概念：抗原 + 抗體 = 凝集團塊直接凝集：顆粒性抗原 + 抗體 = 凝集團塊（ 玻片法、試管法）直接凝集反應(yīng)玻片凝集反應(yīng) 定性；用已知抗體檢測顆粒性抗原；細菌的診斷和分型，紅細胞ABO鑒定 出現(xiàn)白色凝集塊，屬于陽性反應(yīng) 直接凝集反應(yīng)試管凝集反應(yīng)（半定量，診斷傷寒副傷寒）間接凝集：可溶性抗原包被于載體 + 抗體 = 凝集團塊反向間接凝集：抗體包被于載體 + 抗原 = 凝集團塊協(xié)同凝集：抗體結(jié)合金葡菌SPA + 抗原 = 凝集團塊II 沉淀反應(yīng)：（單項、雙向）概念：可溶性抗原 + 抗體 = 沉淀物 單向瓊脂擴散單向瓊脂擴散試驗是一種定量試驗。將一定量已知抗體混于瓊

4、脂中，制板，在適當(dāng)位置打孔，將抗原加入孔中擴散，與板中抗體相遇，在比例合適處呈現(xiàn)白色沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比。主要用于測定血清各種Ig和補體成分的含量 雙向瓊脂擴散可用于分析和鑒定標(biāo)本中多種抗原成分（抗原、抗體同時擴散（自由、定向） 對流免疫電泳在相應(yīng)抗原抗體孔之間可見白色沉淀線?；鸺娪荆嚎乖吭囼灒贵w瓊脂板、抗原擴散（自由、定向）將一定量已知抗體混于瓊脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待檢樣品，置于陰極端進行電泳?？乖谟緞舆^程中與抗體在比例合適部位形成錐形沉淀峰，狀如火箭，稱火箭電泳。沉淀峰的高低與抗原的濃度成正比。敏感度與單擴相仿，但需時較短。III 直接凝集反應(yīng)玻片凝

5、集（三）實驗三 補體結(jié)合實驗 中和反應(yīng)實驗：（病毒中和實驗、毒素中和實驗）略免疫標(biāo)記技術(shù)：1、概念：將已知抗體標(biāo)記上顯示性物質(zhì)，通過檢測標(biāo)記物，反映有無抗原抗體反應(yīng)，從而間接測出微量的抗原或抗體。2、原理：免疫標(biāo)記技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)及顯微鏡術(shù)進展的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項技術(shù)，具有特異、敏感、快速的特點。將熒光色素（常用異硫氰基熒光黃，簡稱FITC）與特異性抗體（或抗原）以共價鍵基團牢固結(jié)合，但不影響該血清抗體的免疫特性。這種熒光標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，可通過熒光燈源中產(chǎn)生的紫外光或藍紫光激發(fā)產(chǎn)生熒光，而從熒光顯微鏡加以觀察。3、常用的標(biāo)記物有： 酶、熒光素、放射性同位素、膠體金、生物素、電子

6、致密物等。 E L I S A（酶聯(lián)免疫吸附試驗）1、原理：把抗原抗體的免疫反應(yīng)和酶（主要有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）的高效催化作用有機地結(jié)合起來，并仍保持其免疫和酶的活性。結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時，可以催化底物水解、氧化或還原，從而產(chǎn)生有色的物質(zhì)。顏色反應(yīng)的深淺與抗體或抗原的量成正比。2、方法：主要有間接法（用于測抗體）和雙抗體夾心法（用于測抗原）。 革蘭染色1、意義：對細菌鑒別、選擇抗菌藥物、研究細菌致病性等有重要意義。2、原理：與細菌細胞壁有關(guān)，尚未完全闡明。陰性紅色 陽性藍色 細菌學(xué)總論 細菌是一類具有細胞壁的單細胞微生物，形體微小，一般以微米（µm）

7、作為測量單位。細菌按其外型可分為球菌、桿菌、螺型菌三大類。不同種類的細菌大小不一，大多數(shù)球菌直徑約1µm，桿菌長25µm，寬0.31µm。細菌的特殊結(jié)構(gòu)：莢膜、鞭毛、芽孢、菌毛【實驗】毒力試驗：（Elek平板）鑒定分離出的細菌能否產(chǎn)生外毒素方法：在含血清的瓊脂平板中央貼上一條浸有白喉抗毒素血清的濾紙條，將待檢菌垂直劃過濾紙條接種現(xiàn)象：如產(chǎn)生外毒素，則產(chǎn)生白色沉淀線（毒素與抗毒素特異性結(jié)合）本質(zhì)：抗原抗體沉淀實驗【實驗】細菌劃線分離、藥物敏感試驗（觀察抑菌圈的直徑，mm來計數(shù)）、抗酸染色方法（四）實驗四 細菌生長情況（1）液體培養(yǎng)基 沉淀生長、混濁生長、表面生長（2

8、）半固體培養(yǎng)基（0.1%0.3%瓊脂粉） 混濁生長、線狀生長（3）固體培養(yǎng)基（1.4%2%瓊脂粉） 菌落、菌苔 細菌變異1、菌落變異（SR變異） S型菌落(Smooth)光滑菌落 表面光滑有光澤，邊緣整齊。 R型菌落 (Rough) 粗糙菌落 表面粗糙而暗淡，邊緣不整齊。菌落變異是由于菌體本身起變化。一般光滑的細菌有毒力；粗糙的細菌沒有毒力或毒力減退。2、鞭毛變異（HO變異）細菌的鞭毛在某些情況下可以消失而變成沒有鞭毛的細菌。 細菌色素金黃色葡萄球菌產(chǎn)生脂溶性金黃色色素銅綠假單胞菌（俗稱綠膿桿菌）產(chǎn)生水溶性綠色色素 細菌生化反應(yīng)（五）實驗五 化膿性球菌：葡萄球菌（左上）、鏈球菌（右上）、肺炎球

9、菌（左下）、淋球菌（右下） 甲型（）乙型（）丙型（）溶血鏈球菌、肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌1、甲型 草綠色，不完全溶血2、乙型 透明完全溶血3、丙型 不溶血4、肺炎鏈球菌G+ （血瓊脂平板）（草綠色不完全溶血）5、淋病奈瑟菌G-（巧克力血瓊脂平板）6、其中，鏈球菌的致?。簲U散因子（透明質(zhì)酸酶）使膿液稀釋擴散。 白喉桿菌G+（亞碲酸鉀血瓊脂）（Albert染色異染顆粒）（Elek平板白喉桿菌毒力試驗）下面圖片的Eleck平板寫錯了，正確是Elek平板 結(jié)核桿菌（齊-尼抗酸染色紅色）（羅氏培養(yǎng)基（綠色）菜花樣（黃色）（六）實驗六 肥達反應(yīng)1、概念：用已知的傷寒沙門菌菌體（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及

10、引起副傷寒的甲型副傷寒沙門菌、乙型副傷寒沙門菌H抗原的診斷菌液與受檢血清做試管或微孔板凝集實驗，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價的試驗。2、結(jié)果判斷：3、【實驗】血清學(xué)診斷：肥達反應(yīng)原理：用已知傷寒沙門菌的O、H抗原、甲、乙副傷寒沙門菌的H抗原與患者血清做定量凝聚試驗，根據(jù)抗體效價的增長，輔助腸熱癥的臨床診斷。用途：輔助診斷傷寒、副傷寒 【帶菌者檢查：Vi抗體】【實驗】·方法：試管凝集法（定量）當(dāng)TO1：80，TH1：160，PA、PB均1：80才有意義·動態(tài)觀察：雙份血清抗體四倍升高有診斷意義·臨床意義：輔助診斷傷寒和副傷寒·O抗體（IgM）， H抗

11、體（IgG）* O 、H抗體均升高，患傷寒的可能性大* O 、H抗體不升高，患傷寒的可能性小* 只有H升高，則可能是預(yù)防接種過或非特異性回憶反應(yīng)，* 只有O升高而H不高，則可能是感染早期或其他沙門菌的交叉反應(yīng)。·分析結(jié)果時應(yīng)注意：正常人抗體水平。一般傷寒桿菌O抗體效價在1：80以上，H抗體效價在1：160以上，甲、乙副傷寒桿菌H抗體效價在1：80以上才有診斷價值；動態(tài)觀察：一般隨病程延長第2次檢測抗體效價比第1次高4倍或4倍以上才有診斷意義。區(qū)別H、O抗體增高的意義：兩者同時升高有輔助診斷意義；兩者同時低于正常無意義；O 抗體效價高而H抗體效價低，可能是感染的早期或其他沙門菌感染引起

12、的交叉反應(yīng)。若H抗體效價高而O抗體效價在正常范圍內(nèi)，則可能是以往接種過疫苗或非特異性回憶反應(yīng)所致。 腸道桿菌 G-（SS、雙糖培養(yǎng)基） 生化反應(yīng)表 炭疽桿菌G+（普通瓊脂培養(yǎng)基）（灰白色粗糙型菌落）（卷發(fā)狀邊緣） 霍亂弧菌G-（堿性蛋白胨水） 厭氧芽孢梭菌（破傷風(fēng)、產(chǎn)氣莢膜、肉毒梭菌）1.破傷風(fēng)梭菌G+（庖肉培養(yǎng)基）（毒素動物實驗）2.產(chǎn)氣莢膜梭菌G+（庖肉培養(yǎng)基）（血瓊脂平板雙層溶血環(huán)）（高層瓊脂斷裂試驗）（洶涌發(fā)酵試驗）3.肉毒梭菌G+（庖肉培養(yǎng)基）（血瓊脂平板完全溶血） 產(chǎn)氣莢膜梭菌【G+，侵襲性很強】【實驗】培養(yǎng)特性：血瓊脂平板上，雙層溶血環(huán)（靶樣溶血）；內(nèi)環(huán)溶血，外環(huán)溶血（內(nèi)環(huán)是由毒素引起的較窄的透明溶血環(huán)，外環(huán)是由毒素引起的不完全溶血環(huán)）蛋黃瓊脂平板上，有Nagler反應(yīng)現(xiàn)象；菌落周圍出現(xiàn)乳白色渾濁圈，是由于毒素分解卵磷脂所致；代謝活躍，分解多種糖類，產(chǎn)生大量氣體皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)，可分解肉渣中糖類產(chǎn)氣，肉渣呈淡紅色牛奶培養(yǎng)基中，可出現(xiàn)“洶涌發(fā)酵”該菌分解乳糖產(chǎn)酸，使牛奶中的酪蛋白凝固，產(chǎn)生大量氣體沖散酪蛋白，并將封固液面的凡士林層頂開，甚至沖掉試管口棉塞（七）實驗七 白色念珠菌G+（白假絲酵母菌）（普通瓊脂、沙保培養(yǎng)基）可見酵母樣細胞伴假菌絲。 新型隱球菌（血瓊脂、沙保培養(yǎng)基）（墨汁負染）可見圓形