生物技術題庫

1、一、名詞解釋1. 生物技術：也稱生物工程（bioengingineering），是指人們以現代生命科學為基礎，結合先進的工程技術手段和其他基礎學科的科學原理，按照預先的設計改造生物體或加工生物原料，為人類生產出所需產品或達到某種目的。2.植物組織培養(yǎng)：是指在無菌條件下，把離體的植物器官、組織、細胞、原生質體等材料接種在人工培養(yǎng)基中，使其發(fā)育成完整植株的過程。3、植物細胞全能性：任何一個擁有完整細胞核的植物細胞都具有形成一個完整植株所必需的全部遺傳信息，在特定條件下表達可產生獨立的個體。4.脫分化：也叫去分化，已經停止分化的細胞、組織、器官在離體培養(yǎng)條件下，逐漸失去其原來的結構和功能而恢復其分生

2、狀態(tài)，形成無組織結構的細胞團的過程。5.再分化：由脫分化產生的無組織結構的細胞團在離體培養(yǎng)條件的剌激下重新分化成具有不同結構和功能的細胞、組織、器官的過程，即再分化。 6.培養(yǎng)基：是植物組織培養(yǎng)的物質基礎。其成分是植物生長發(fā)育所必需的各種物質的來源，主要包括營養(yǎng)元素、植物生長調節(jié)劑、碳源、維生素、有機添加物等。 7.外植體：在植物組織培養(yǎng)中，用來進行培養(yǎng)的植物材料常稱外植體(explant)，包括植物器官、組織、細胞等。 7.重組DNA技術：是指將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進行拼接重組，然后轉入另一種生物體（受體）內，使之按照人們的意愿穩(wěn)定遺傳并表達出新產物或新性狀的DNA體外操作程

3、序，也稱為分子克隆技術。8.基因工程：就是將目的基因插入到載體（質粒，病毒）中，再把攜帶目的基因的載體轉入受體材料細胞中，使目的基因在受體細胞中表達。進而使受體生物表現出目的基因的性狀。限制性核酸內切酶：是一類能夠識別雙鏈DNA中的特定核苷酸序列，并在特定位點切割雙鏈DNA的內切酶。平齊末端：當限制酶在它識別序列的中心軸線處將DNA的兩條鏈切開時，產生的則是平末端。粘性末端：當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側將DNA的兩條鏈分別切開時，產生的就是黏性末端。同裂酶：能識別同一序列（切割位點可同或不同）但來源不同的兩種酶。同尾酶：有些限制性內切酶雖然識別序列不完全相同，但切割DNA后，產生相同的黏

4、端，這樣的酶彼此互稱為同尾酶。9.限制性內切酶的活性：在適當反應條件下，1小時內完全酶解1g特定DNA底物，所需要的限制性內切酶的量，為一個活性單位。10.限制性物理圖譜：DNA上某些限制性內切酶酶切位點的圖譜，可作為DNA片段的特殊標記。也稱DNA物理圖譜。11.限制性內切核酸酶的切割頻率：切割頻率是指限制性內切核酸酶在DNA分子中的預測切點數。12.回文序列：雙鏈DNA中的一段倒置重復序列，當該序列的雙鏈被打開后，可形成發(fā)夾結構。這段序列被稱為回文序列。13.克隆載體: 將外源基因攜帶入宿主細胞，并在宿主細胞中進行DNA擴增和使外源基因得以高效表達。 14.表達載體:在克隆載體基本骨架的基

5、礎上增加表達元件（如啟動子、RBS、終止子等），使目的基因能夠表達的載體。15.目的基因:把需要研究的基因稱為目的基因（靶基因或者插入基因）。要分離、改造、擴增或表達的基因。1、標記輔助選擇（Marker-assisted Selection, MAS）：就是對特定的主效基因（major gene）或者數量性狀位點（Quantitative Trait Loci, QTL）在遺傳標記的輔助下區(qū)分其基因型，并在此基礎上應用于育種實踐。2、細胞學標記：即植物細胞染色體的變異。包括染色體核型（染色體數目、結構、隨體有無、著絲粒位置等）和帶型（C帶、N帶、G帶等）的變化。3、分子標記：廣義的分子標記(

6、molecular marker)是指可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白質。狹義的分子標記概念只是指DNA標記，而這個界定現在被廣泛采納。4.基因組文庫：將目標生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA片段并克隆到某種載體上而形成的集合。5.SNP：單核苷酸多態(tài)性，在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。6.動物細胞培養(yǎng)：是指離體細胞在無菌條件下進行分裂生長，但是在整個培養(yǎng)過程中細胞不出現分化，不再形成組織。7.遺傳標記：指可追蹤的染色體或染色體上的某一段或某個基因在家系中可傳遞的任何一種遺傳特性，是遺傳多樣性的表示方法。8.動物生物反應器：利用轉基因活體動物，高效表達某種

7、外源蛋白的器官或組織，進行工業(yè)化生產功能蛋白質的技術。9.共顯性：雜合子的一對等位基因都具有各自的表現效應，當這一對等位基因雜合時，有兩種表現性共存，便于區(qū)別的純和基因型和雜合基因型。10.cDNA文庫： 是將目標生物某一發(fā)育時期或者是某一組織器官的全部mRNA反轉錄成cDNA并克隆到載體上而形成的集合11.人工種子：是指利用細胞全能性，將植物離體培養(yǎng)產生的體細胞胚或者具有發(fā)育成完整植株能力的分生組織包埋在含有營養(yǎng)物質并具有保護能力的外殼內，形成在適宜條件下能發(fā)芽出苗的顆粒體。12.胚狀體：指植物組織培養(yǎng)過程中，由非合子細胞經胚胎發(fā)生發(fā)育而形成具有胚狀結構，具有發(fā)育成完整植株能力。二，填空1.

8、克隆載體即攜帶目的基因進入宿主細胞進行復制或保存的載體，包括質粒載體、噬菌體載體、黏粒載體、工染色體載體2.所有切割雙鏈DNA分子中相鄰兩個核苷酸殘基之間磷酸二酯鍵，從而使核酸分子發(fā)生水解斷裂的酶，即核酸酶。根據其水解方式不同分為外切核酸酶和內切核酸酶，根據其底物不同又可分為RNA酶和DNA酶3.細菌細胞中的限制行內切酶識別位點被甲基化酶保護起來了，限制行內切酶對已經甲基化的識別位點無效，從而使自身的DNA不被切割。因此，限制行內切酶和能識別相同位點的甲基化酶一起構成了限制-修飾系統(tǒng)4.型限制性內切酶切割雙鏈DNA分子后產生的末端片段，有黏末端和平末端5.Ti質粒都含有一下四個區(qū)：T-DNA區(qū)

9、，Vir區(qū)，Con區(qū)，Ori區(qū)。6.培養(yǎng)基的成分： 1.大量元素2.微量元素3.有機成分4.植物生長調節(jié)劑5.培養(yǎng)基其他成分6.PH值 7.母液：指培養(yǎng)基的濃縮液，也稱儲備液，一般將培養(yǎng)基原來配方擴大10倍，20倍，100倍甚至更高倍數，配置母液和培養(yǎng)基一般用純度較高的蒸餾水。簡答題1.AFLP標記技術原理：由于不同物種的基因組大小不同，基因組DNA經限制性內切酶酶切后產生的限制性片段的分子量大小不同。使用特定的雙鏈接頭與酶切DNA片段連接作為擴增反應的模板，用含有選擇性堿基的引物對模板DNA進行擴增，選擇性堿基的種類,數目和順序決定了擴增片段的特殊性，所以只有那些限制性位點側翼的核苷酸與引物

10、的選擇性堿基相匹配的限制性片段才可被擴增。擴增產物經放射性同位素標記,聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，根據凝膠上DNA指紋的有無來檢出多態(tài)性。2.Northern雜交原理：外源基因如果正常表達，在轉化植株的細胞有其轉錄產物-特異mRNA生成，提取總RNA或mRNA并進行凝膠電泳，轉膜并與標記好的探針雜交形成DNA-RNA雜合體，通過探針上的標記可檢測出目的mRNA。Northern雜交程序：探針制備探針選擇：檢測外源基因轉錄的mRNA應使用同源的DNA探針，雜交后形成DNA-RNA雜合體；也可使用cDNA探針。探針序列的獲得人工合成PCR方法質粒酶切法探針標記切口平移法轉化植株總RNA的提取。RNA純

11、度的分析：A260/A280=1.72.0,2.0若2表明有異硫氰酸污染，有異丙醇重新沉淀，RNA濃度計算:RNA(ug/ml)=A260稀釋倍數40ug/ml分離柱層析法電泳-甲醛變性電泳單鏈使RNA，其鏈內堿基易于氫鍵形成二級或三級結構，而甲醛與堿基結合后形成保持線性，電泳時才與分子量標記成正比。轉膜-烘膜-雜交-信號檢測-分析結。3.wetern雜交原理：若目的基因表達正常，則在轉基因植物中含有一定量的目的蛋白。從轉基因植物中提取總蛋白質，兩蛋白質樣品溶于去污劑和還原劑的溶液中，經SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳使蛋白質按分子發(fā)小分離，將分離的各蛋白條帶原位轉印到固相膜上。膜在高濃度的蛋白質中溫

12、育，以封閉非特異位點，加入特異抗體，印記上的目的的蛋白與一抗結合后，再加入能與一抗專一結合的標記好的二抗，最后痛過二抗上的標記化合物的性質進行檢出。4.可被利用的遺傳標記應具備以下幾個條件：多態(tài)性高；表現為共顯性；對農藝性狀影響??；經濟方便，容易觀察記載。5.基因組文庫： 是將目標生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA片段并克隆到某種載體上而形成的集合。根據所用載體不同，基因組文庫分為以下幾種。質粒文庫，噬菌體文庫，黏粒文庫，人工染色體文庫。6.基因組文庫的構建步驟：1 目標植物基因組DNA提取及片段化 2 載體的選擇與制備 3 DNA片段與載體連接，噬菌體進行離體包裝 4 重組體感染宿

13、主細胞（大腸桿菌）5 轉化細胞的篩選放射性標記探針進行文庫雜交篩選7.mRNA差異顯示技術分離差異表達的基因：其基本原型： 利用真核生物成熟mRNA的3“polyA結構，用oligo(dT)12MN（其中M為錨定堿基，起增大引物Tm值得作用，M為A,C,G,T中的任意一種）作為描定引物與mRNA的PLOYA結合，再反轉錄酶的作用下將MRNA反轉錄成mRNA-cDNA的雜交分子，這一過程即差異顯示反轉錄，然后在用10BP的隨機引物與OLIHO(DT)12MN組成的引物對，以MRNA-CDNA為模板進行PCR擴增，PCR產物進行聚丙烯酰氨凝膠電泳，通過放射自顯影或顯色反應即可獲得差異表達基因的擴增

14、條帶。聚合酶鏈式反應：在有DNA單鏈，引物，DNTPS、DNA聚合酶等條件下，DNA聚合酶即可從引物開始沿單鏈DNA的5”3“合成其互補鏈，而PCR儀可以使這一反應不斷進行下去，直到條件不復存在。8.PCR反應原理：RT-PCR即反轉錄PCR，以MRNA為模板，在反轉錄酶的作用下，合成CDNA第一鏈的過程。在已知目的基因CDNA序列的情況下可用此法來分離目的基因。二高溫高壓滅菌注意事項 ： 1.滅菌鍋提前加入適量的水2.鍋內待滅菌的培養(yǎng)基應放平不傾倒3.鍋內不要裝太滿4,。鍋內冷氣要排放出去5.滅菌條件嚴格控制6.滅菌完成后，應排氣降壓，待壓力表指回0才能打開鍋蓋三外植體的選擇原則： 1再生能

15、力強2.遺傳穩(wěn)定性好3.來源豐富4.滅菌容易5.外植體的大小一培養(yǎng)基的類型 1.含鹽類較高的培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基 2.硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基 ：B5 N6 SH培養(yǎng)基3.無機鹽中等含量的培養(yǎng)基：包含H培養(yǎng)基等，適合花藥培養(yǎng)4.無機鹽含量較低的培養(yǎng)基：主要WS培養(yǎng)基等，適合生根培養(yǎng)二培養(yǎng)基的配置及注意事項 1.準備好稱量的器具，按培養(yǎng)基的配方及所要配置的數量計算好各成分的分量，取出母液并按順序排好2.在可加熱容器內加所配培養(yǎng)基數量三分之一的蒸餾水，按量加入瓊脂，按計算好的母液分別加入大量元素，微量元素，鐵鹽，有機物，其他物質，最后加入適量蔗糖攪拌均勻，生長調節(jié)劑必須在高溫高壓滅菌后再加入3.加蒸餾

16、水定容，攪拌均勻并做好標記4.調節(jié)PH值，常用5.8。5.分裝，注意不要讓培養(yǎng)基沾到內壁瓶口，做好標記 6.封口，培養(yǎng)基分裝好后，一般用硫酸紙，耐高溫塑料蓋，封口膜封口，防止污染。1.人工種子的結構人工種子由胚狀體、人工胚乳和人工種皮三部分組成。胚狀體:包括組培過程中產生的愈傷組織、頂芽、腋芽、不定芽、原球莖和小鱗莖等繁殖體人工胚乳:一般由供應胚狀體養(yǎng)分的膠囊組成其養(yǎng)分主要有礦質元素、維生素、碳源、激素等，有時還添加殺蟲劑、殺菌劑、除草劑和一些有益微生物人工種皮:即膠囊之外的薄膜，是人工種子的最外層部分。要求具有機械保護作用，同時又能通氣，但是又不能使水分和養(yǎng)分外流。2.基因的時空表達是細胞分

17、化和個體發(fā)育的根本原因?基因:染色體上具有特定結構和功能的DNA片段。不同基因表達不同的蛋白質，所以不同生物體表現出不同的性狀。即基因決定生物體的性狀，基因一般都包含5非轉錄區(qū)、起始密碼子、轉錄區(qū)、終止密碼子、3非轉錄區(qū)。3.基因的性質:1:不同的基因具有相同的物質基礎2:基因是可以切割的3:基因是可以轉移的4:基因和多肽之間是對應的5:遺傳密碼是通用的6:基因可以通過復制把遺傳信息傳遞給后代6:基因可以通過復制把遺傳信息傳遞給后代 。八、分子標記技術4、分子標記特點: 直接以DNA形式表現，在生物體各發(fā)育階段,各組織均可檢測到。與生長發(fā)育無關，取材不受限制；數量多，信息量大,遍及整個基因組;

18、多態(tài)性高，自然界存在許多等位突變，無需專門創(chuàng)造特殊的遺傳材料;中性，不影響目標性狀的表達，與不良性狀無必然連鎖;許多分子標記表現為共顯性（codominance）, 能夠鑒別出純合基因型與雜 合基因型，提供完整的遺傳信息;真核生物中，基因組DNA多態(tài)性要遠遠多于各種基因的遺傳多態(tài)性，因為基因組中存在著大量的不編碼的DNA序列，它們的變異不受或較少地受自然選擇的制約.5、SSR標記的定義及其主要特點定義：也稱微衛(wèi)星或短串聯(lián)重復序列多態(tài)性（STRP）。是利用真核生物基因組中存在的大量簡單串聯(lián)重復序列。特點：數量豐富，廣泛分布于整個基因組；人和動物（TG）n， 植物（AT）n微衛(wèi)星DNA兩端多是高度

19、保守的單拷貝序列,微衛(wèi)星DNA長度的多態(tài)性,具有較多的等位性變異；共顯性標記，可鑒別出雜合子和純合子；1. 實現細胞全能性的兩個條件是什么？必須把細胞從植物體的相應部位分離出來。必須給予它們適當的刺激，尤其是激素的作用。2. 配制母液的好處是什么？使用母液可以保證培養(yǎng)基各成分的準確性，配制及使用的方便性，從而顯著提高工作效率。3. 試管苗為什么不能直接移植于大田？由于試管苗的生長環(huán)境不同于自然外界環(huán)境，因此其具有高濕、弱光、恒溫、低透氣性等特點。所以需要馴化后才能移栽。二、基因工程原理：3、重組DNA技術的三大基本元件：供體、受體、載體。4、基因工程基本用途（意義）分離、擴增、鑒定、研究、整理

20、生物信息資源；大規(guī)模生產生物活性物質（基因調節(jié)）；設計、構建生物的新性狀甚至新物種（正義、反義）5，與形態(tài)學標記，細胞學標記生化標記相比，分子標記具有哪些明顯的優(yōu)越性？1直接以DNA形勢表現，在生物體的各個組織，各各個發(fā)育階段均可檢測到，不受季節(jié)，環(huán)境限制，不存在表達與等問題。2數量基多，遍布整個基因組，可檢測的座位幾乎是無限的。3多態(tài)性高，自然界存在許多等位變異，無需人為創(chuàng)造。4表現為中性，不影響目的性狀的表達5許多標記表現為共顯性的特點，能區(qū)別純合體和雜合體、5、基因克隆中三個基本要點是：基因克隆就是PCR技術，三個基本要點是：變性（將DNA加熱到90-95度）。復性（將DNA降溫至55-

21、60度）。延伸（將DNA升溫到70-75度）?；蚬こ痰幕境绦虬ǎ韩@得目的基因重組質粒構建基因工程菌工程菌大規(guī)模培養(yǎng)分離提取目的產物。6.作為基因工程載體，必須滿足哪些條件？1可轉移性，即能攜帶目的基因進入宿主細胞。2可自主復制，能在宿主細胞中實現目的基因的增值。3多克隆位點，由單一的限制性內切酶識別位點組成4合適的選擇標記。用于重組質粒的宿主細胞篩選。7、基因工程操作的基本步驟是什么？獲得目的基因（DNA片段）；目的基因克隆（復制）與驗證；表達載體構建：將目的基因與載體組合成能在目的生物中表達的形式（重組 DNA）；轉化：把重組DNA引入某種受體生物或細胞；篩選：從大量的受體中篩選出可能

22、具有目的基因且目的基因能夠表達的個體或細胞。 一、生物技術與農業(yè)：（1）、植物基因工程育種：培育抗病蟲作物、抗逆育種、抗除草劑育種、品質種改良（2）植物細胞工程1、植物次級代謝細胞：利用植物細胞培養(yǎng)生產的植物次生代謝產物包括藥用成分、香料、色素、殺菌劑等，已經成功培養(yǎng)出紫草寧、人參皂苷、紫杉醇、阿馬里新等一系列的天然植物次生代謝物質，植物次生代謝產品的市場潛能2、快速無性繁殖3、原生質體融合4、花粉、花藥和胚的培養(yǎng)5、遺傳轉化中的應用6、物質資源保存（3）生物醫(yī)藥 1、我國首次利用除蟲菊成功開發(fā)出無公害農藥，2、蘇云金芽孢桿菌是應用最廣的殺蟲細菌3、白僵菌是防止鱗翅目昆蟲的真菌制劑4、昆蟲病毒

23、5、生物肥料（4）動物基因工程育種：動物分子育種技術主要包括基因工程技術、細胞工程技術、胚胎工程技術等（5）動物繁殖新技術：1、人工授精及精液的冷凍保存2、胚胎移植及胚胎的冷凍保存3、體外胚胎生產4、胚胎分割技術性別控制技術5、性別控制技術（6）1、DNA重組生長激素的作用2、利用微生物發(fā)酵技術生產飼料添加劑3、寡糖、寡肽類飼料添加劑或稱益生素（7）動物生物反應器：利用轉基因活體動物，高效表達某種外源蛋白的器官或組織，進行工業(yè)化生產功能蛋白質的技術。主要是乳腺生物反應器 未來石油的替代物乙醇 優(yōu)點：產能效率高、燃燒不產生CO等有害物質污染小、可通過微生物發(fā)酵大量生產成本低。乙醇只要是由酵母菌以

24、蔗糖和淀粉為原料進行發(fā)酵產生的。二、生物技術與安全：1、對人和動物的潛在危害：致病性、抗藥性、食品安全性2、對生態(tài)環(huán)境的潛在危害：致病性和毒性、生存競爭力、傳播擴散能力、遺傳變異能力、遺傳轉移能力3、轉基因作物4、生物武器：目前世界上公認的對人類危害最大的最易散發(fā)的三種生物武器是：炭疽桿菌、天花病毒、肉毒桿菌。三、工具酶：限制性核酸內切酶2、粘性末端的意義？連接方便：不同的DNA雙鏈：只要粘性末端堿基互補可以連接。這比連接兩個平齊末端容易的多。同一個DNA分子內連接：通過兩個相同的粘性末端可以連接成環(huán)形分子。 2.影響限制性酶活性的因素有哪些？在酶切反應中，DNA的純度、緩沖液中的離子強度、M

25、g2+等因素均可影響反應，一般可通過增加酶的用量，延長反應時間等措施以達到完全酶切。但應該注意的是，過多的酶量和過長的反應時間會造成非特異性的酶切(星號活性)。當兩種限制性內切核酸酶的作用條件不同時，若要進行雙酶切，應采取什么措施? 為什么?注意星活性，先低鹽，后高鹽；先低溫酶，后高溫酶；并且可以直接在換酶前將第一種酶失活，再加第二種酶，否則，易產生星活性。或使用通用緩沖液。6、說明限制性內切核酸酶的命名原則要點。用屬名的第一個字母和種名的頭兩個字母，表示宿主菌的物種名。如大腸桿菌（Escherichia coli）用Eco表示。用一個大寫字母表示菌株或型。如EcoR。同一宿主菌內，如有不同的

26、限制酶，用羅馬字母表示。如EcoR I8、什么是限制性內切核酸酶的星號活性：改變反應條件，導致限制酶的專一性和切割效率的改變？受哪些因素的影響? DNA的純度。DNA的甲基化程度。 溫度 Tm。緩沖液 Buffer。10、計算下列兩種酶各自在某染色體DNA 序列上識別位點間的平均距離：Alu I：5 AGCT 3， EcoR I: 5GAATTC 3四、工具酶：連接酶與聚合酶1、DNA連接酶的定義：把兩種來源的DNA（用同一種限制酶切割）的黏性末端粘合起來。2、DNA連接酶連接反應的條件：必須是兩條雙鏈DNA。DNA3端有游離的-OH，5端有一個磷酸基團（P）。需要能量。3、影響DNA 連接酶

27、連接反應的因素主要有哪些？插入片段與載體的濃度比例。 1020倍。增加插入片段與載體的接觸機會，減少載體自我連接的現象。反應溫度：12.5。一般1416。4、DNA 連接酶的連接機理是什么？ATP（NAD+)提供激活的AMP一磷酸腺苷 。ATP與連接酶形成共價“連接酶-AMP”復合物，并釋放出焦磷酸PPi。AMP與連接酶的賴氨酸e-氨基相連。AMP隨后從連接酶的賴氨酸e-氨基轉移到DNA一條鏈的5端P上，形成“DNA-腺苷酸”復合物。3-OH對磷原子作親核攻擊，形成磷酸二脂鍵，釋放出AMP。5、DNA 連接酶的作用特點有哪些？6、DNA聚合酶的特點：DNA聚合酶的特點為需要DNA模板、需要RN

28、A或DNA做為引物、催化dNTP加到引物的3末端。DNA聚合酶以四種三磷酸脫氧核苷為原料，這種酶的共同性質是：需要DNA模板，因此這類酶又稱為依賴DNA的DNA聚合酶（DNa dependent DNA polymerase， DDDP）。需要RNA或DNA做為引物（primer），即DNA聚合酶不能從頭催化DNA的起始。催化dNTP加到引物的3末端，因而DNA合成的方向是53。三種DNA聚合酶都屬于多功能酶，它們在DNA復制和修復過程的不同階段發(fā)揮作用。7、DNA聚合酶與DNA連接酶的異同點？相同點：催化兩個脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵。不同點：連接酶不需要模板，聚合酶需要的一條鏈為模板；連

29、接酶的作用對象是游離的DNA片段，聚合酶的作用對象是單個的脫氧核苷酸； 連接酶的作用結果是形成完整的DNA分子，聚合酶的作用結果是形成DNA的一條鏈；連接酶用于基因工程，聚合酶用于DNA復制。五、載體與質粒：3、克隆載體必須具備什么條件? 具有使外源DNA片段插入的限制性酶識別位點（外源性DNA能組入）.能將外源DNA導入到受體細胞并進行自我復制（能繁殖）。必須具有選擇標記（能篩選出來）。 4、基因工程中有三種主要類型的載體：質粒型載體、病毒型載體、混合型載體5、pUC 質粒利用-互補作用篩選重組子原理是什么？（藍白斑實驗） 基因載體上含有-半乳糖苷酶（LacZ)的基因，當外源DNA插入到載體

30、的LacZ基因上后將造成-半乳糖苷酶失活，就不能分解培養(yǎng)基中的X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷）產生藍色產物，結果可通過大腸桿菌轉化子菌落在含有X-gal-IPTG（異丙基-D-硫代半乳糖苷）培養(yǎng)基的顏色變化直接觀察出來。5、舉例說明什么是穿梭載體？ 是能夠在兩類不同宿主中復制、增殖和選擇的載體。如有些載體既能在原核細胞中復制又能在真核細胞中復制，或能在 E.coli 中復制又能在革蘭氏陽性細菌中復制。這類載體主要是質粒載體。6、表達載體必須具備的條件？載體能夠獨立的復制；應具有靈活的克隆位點和方便的篩選標記，以利于外源基因的克隆、鑒定和篩選；應具有很強的啟動子，能被RNA聚

31、合酶所識別；應具有阻遏子，使啟動子受到控制，只有當誘導時才能進行轉錄；應具有很強的終止子，以使RNA聚合酶集中力量轉錄克隆的外源基因，同時使很強的終止子所產生的mRNA較為穩(wěn)定；6、所產生的mRNA必須具有翻譯的起始信號，以便轉錄后能順利翻譯。2、未知基因的獲得途徑？構建基因組文庫利用鳥槍法克隆目的基因。構建cDNA文庫，篩選目的基因。mRNA差異顯示技術篩選差異表達基因。酵母雙雜交體內鑒定基因。3、利用用限制性內切酶把基因組DNA切成不同大小的片斷的優(yōu)點和缺點？優(yōu)點：如果帶有粘性末端，產物可以直接與載體連接，連接效率高。缺點：目的基因內部可能有內切酶的切點， 目的基因也被切成碎片。消化的片斷

32、分子量太大或太小，不符合載體容量，不能克隆。4、基因組文庫定義？什么是cDNA 文庫？同基因組文庫有何差別?基因組文庫：某種生物的基因組的全部遺傳信息通過克隆載體貯存在一個受體菌的群體之中，這個群體即為該生物的基因組文庫。cDNA文庫：某種生物基因組轉錄的的全部mRNA經反轉錄產生的各種cDNA分別與克隆載體重組，貯存在一個受體菌的群體中，這個群體就稱為cDNA文庫。區(qū)別：克隆均一性：cDNA文庫大小不一，基因組文庫大小基本一致。基因覆蓋率：cDNA文庫包含部分基因，基因組文庫包含所有基因。5、構建基因組文庫時連接方法主要是粘性末端連接法；而構建cDNA 文庫，可用接尾連接法或人工接頭連接法。

33、6、構建cDNA文庫的一般步驟？細胞總DNA的提取和mRNA的分離。第一鏈cDNA合成。第二鏈cDNA合成。雙鏈cDNA的分級分離。雙鏈cDNA克隆進質?；蚴删w載體并導入宿主中繁殖。重組體的篩選與鑒定。分離基因文庫中目的基因的方法有：核酸雜交法、差別雜交篩選、mRNA差別顯示法、酵母雙雜交篩選法 （建立了一個基因文庫后，如何鑒定一個攜帶目的基因的克??？）用目的基因制作一個引物，進行pcr擴增就知道究竟克隆載體是否帶有目的基因片段了。七、轉基因育種1、作物轉基因育種定義及其優(yōu)勢：優(yōu)勢：拓寬可利用的基因資源；培育高產、優(yōu)質、高抗優(yōu)良品種提供了嶄新的育種途徑；可以對植物的目標性狀進行定向變異和定向選擇；可以大大提高選擇效率，加快育種進程。此外，還可將植物作為生物反應器生產藥物等生物制品2、定義:就是根據育種目標，從供體生物中分離目的基因，經 DNA重組與遺傳轉化或直接運載進入受體作物，經過篩選獲得穩(wěn)定表達的遺傳工程體，并經過田間試驗與大田選擇育成轉基因新品種或種質資源。3、植物遺傳轉化的表達載體有哪兩大類？質粒載體系統(tǒng)；病毒載體系統(tǒng)。4、一元載體系統(tǒng)；雙元載體系統(tǒng)定義；二者的不同一元載體系統(tǒng)（整合載體系統(tǒng)）：這一類載體系統(tǒng)由外源基因表達結構和改造后的卸甲(去掉致瘤基因，disarmed)Ti