食品中合成著色劑的測定——色素提取

1、食品中合成著色劑的測定食品中合成著色劑的測定 色素提取色素提取2012.4.18課程目的：課程目的： 掌握食品中合成著色劑的測定原理；1. 了解高效液相色譜的工作原理及操作方法。著色劑：著色劑：通過使食品著色后改善其感官性狀，增進食欲的一類物質(zhì)。天然著色劑：天然著色劑：辣椒紅、甜菜紅、紅曲米、胭脂蟲紅、高粱紅、葉綠素銅鈉、姜黃、梔子黃、胡蘿卜素、藻藍素、可可色素、焦糖色素等等。 合成色素：合成色素：用人工合成的方法從煤焦油中制取，或以苯、甲苯、萘等芳香烴化合物為原料合成的有機色素。包括莧菜紅、檸檬黃、亮藍、日落黃、誘惑紅、赤鮮紅等等。合成著色劑的潛在危害致瀉性、致癌性致瀉性、致癌性國際：JEC

2、FA制定各種合成著色劑的ADI我國：食品安全國家標準、食品添加劑使用標準（GB2760-2011）現(xiàn)狀：超量使用，使用工業(yè)色素、染料色素 方便、快速、準確地檢測食品中合成著色劑，是對其進行有效管理的必要手段。測定手段（GB/T 5009.35-2003）： 高效液相色譜法 薄層色譜法 示波極譜法1. 其他：紙上層析、分光光度法莧菜紅、亮藍、檸檬黃、日落黃莧菜紅、亮藍、檸檬黃、日落黃著色劑最大使用量（g/kg）檸檬黃0.1日落黃0.1莧菜紅 0.05亮藍 0.025合成著色劑在合成著色劑在飲料飲料中的最大使用量中的最大使用量（GB2760-2011）一、實驗原理一、實驗原理1.聚酰胺吸附法提取合

3、成著色劑聚酰胺吸附法提取合成著色劑 聚酰胺（尼龍）通過氫鍵吸附著色劑，天然著色劑（影響測定）在酸性條件下被洗脫去除，合成著色劑在堿性條件下被洗脫收集，濃縮后上機測定。吸附吸附洗滌洗滌解吸附解吸附濃縮濃縮上機上機理化測定一般步驟：除雜質(zhì)、收集目標物、理化測定一般步驟：除雜質(zhì)、收集目標物、調(diào)整濃度、上機調(diào)整濃度、上機2. 高效液相色譜法高效液相色譜法 高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）：）：是是色譜法色譜法的的一個重要分支，以液體為一個重要分支，以液體為流動相流動相，采用高壓，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動

4、相泵入裝同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有有固定相固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離分離后，后，進入進入檢測器檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。析。 檢測器：二極管陣列檢測器檢測器：二極管陣列檢測器 3.結(jié)果分析結(jié)果分析保留時間保留時間（定性）：根據(jù)樣品中各物質(zhì)被洗脫至檢測器的時間差異來進行定性分析；峰面積峰面積（定量）：根據(jù)樣品峰面積與標準品峰面積的比較來進行定量分析。試劑試劑配方配方作用作用聚酰胺粉吸附檸檬酸溶液20g檸檬酸，100mL水溶解調(diào)PHPH 4的水（70） 水+檸檬酸溶液，調(diào)至PH=4，加熱洗滌甲醇-甲酸溶液60mL

5、甲醇+40mL甲酸洗滌無水乙醇-氨水-水70mL乙醇+20mL氨水+10mL水 解吸附乙酸銨溶液1.54g乙酸銨，純水定容至1000mL，乙酸調(diào)PH至4流動相合成著色劑標準溶液濃度0.05mg/mL定量分析50%乙醇定容樣品其他乙酸、甲醇、氨水、蒸餾水水二、試劑與器材二、試劑與器材二、試劑與器材二、試劑與器材器材：器材：燒杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽濾瓶*2、針筒、溫度計、5mL玻璃離心管電子天平、水浴鍋三、實驗步驟三、實驗步驟取樣、脫氣取樣、脫氣 稱取飲料20g，倒入50mL燒杯，碳酸飲料用電爐加熱除去二氧化碳。（已脫氣）。2. 色素吸附色素吸附 稱取聚酰胺3g，用少許PH4的水（7

6、0）調(diào)成糊狀，加入待測樣品，攪拌5min。3. 除雜質(zhì)除雜質(zhì) 組裝好G3漏斗，將樣品倒入漏斗，抽濾； PH4的水（70）洗滌3次，每次20mL（洗滌沉淀物）； 甲醇-甲酸洗滌3次，每次20mL（洗滌天然色素）； 400mL PH4的水洗滌。4. 解吸附解吸附 更換抽濾瓶更換抽濾瓶。用乙醇-氨水-水溶液洗滌三次（5mL、10mL、5mL），收集解吸液。5. 樣品濃縮樣品濃縮 解吸液倒入蒸發(fā)皿中，80水浴蒸發(fā)至約2mL，以乙酸（一小滴）調(diào)節(jié)PH至6。收集樣品至玻璃離心管，加水定容至5mL。3g聚酰胺聚酰胺20g飲料飲料70 PH4水，糊狀加熱脫氣混合攪拌混合攪拌5minG3漏斗抽濾漏斗抽濾70 PH4水，水，20mL，洗，洗3次次甲醇甲醇-甲酸，甲酸，20mL，洗，洗3次次70 PH4水，水，400mL洗滌洗滌乙醇乙醇-氨水氨水-水，洗三次，水，洗三次，5ml、10mL、5mL更換抽濾瓶更換抽濾瓶收集濾液，收集濾液，80水浴至水浴至2mL乙酸調(diào)乙酸調(diào)PH至至6，離心管定容至，離心管定容至5mL，冰箱保存，冰箱保存抽濾過程注意抽濾過程注意攪拌、倒廢液攪拌、倒廢液清洗漏斗：自來水清洗漏斗：自來水-鹽酸鹽酸-蒸餾水蒸餾水目標物目標物6. 上機測定上機測定 3000rpm離心離心5min，取上層，取上層10L進高效液相色譜。進高效液相色