植物源農藥的提取分離及結構鑒定修改版

1、植物源農藥的提取分離及結構鑒植物源農藥的提取分離及結構鑒定定張龍來張龍來Email：2014.10.20 一、基本概念一、基本概念 1、提取提?。豪眠m當的溶劑或方法，將所：利用適當的溶劑或方法，將所要成分盡可能從原料中完全提出的過程。要成分盡可能從原料中完全提出的過程。 2、分離分離：將提取物中所含的各種成分一：將提取物中所含的各種成分一一分開，并將得到的單體加以精制的過一分開，并將得到的單體加以精制的過程。程。第一節(jié)第一節(jié) 植物源農藥的提取植物源農藥的提取 水水 親水性有機溶劑親水性有機溶劑 親脂性有機溶劑親脂性有機溶劑二、提取方法二、提取方法l超臨界流體萃取法（超臨界流體萃取法（SFE）

2、l水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法l溶劑提取法溶劑提取法l升華法升華法l壓榨法壓榨法溶劑溶劑 （一）溶劑提取法一）溶劑提取法 根據天然成分的溶解性不同，選用對根據天然成分的溶解性不同，選用對所需成分溶解度大而對其他成分溶解度小所需成分溶解度大而對其他成分溶解度小的溶劑，將所需成分從生物材料中溶解出的溶劑，將所需成分從生物材料中溶解出來的一種提取方法。來的一種提取方法。 溶劑提取是指溶劑進入生物體細胞，溶劑提取是指溶劑進入生物體細胞，溶解或分散其有用物質而變成浸出物的全溶解或分散其有用物質而變成浸出物的全過程。過程。 包括包括浸潤、解吸和擴散浸潤、解吸和擴散三個階段。三個階段。1、溶劑提取法的原理、溶劑

3、提取法的原理選擇溶劑依據選擇溶劑依據相似相溶相似相溶原理。原理。 浸潤：滲透階段浸潤：滲透階段 溶劑通過細胞壁滲透到細胞中。溶劑通過細胞壁滲透到細胞中。解吸：溶解階段解吸：溶解階段 細胞內容物與細胞組織之間有親和細胞內容物與細胞組織之間有親和 力，溶劑破除這種親和力。力，溶劑破除這種親和力。擴散：置換階段擴散：置換階段 利用細胞內的滲透力產生的壓差而抽利用細胞內的滲透力產生的壓差而抽提出來，用溶劑占領內容物的位置而將內提出來，用溶劑占領內容物的位置而將內容物置換出來。容物置換出來。 擴散過程表達式：擴散過程表達式：dtdxdcDFdsdt: 擴散時間擴散時間F：擴散面積，以粉碎度表示：擴散面積

4、，以粉碎度表示濃度差濃度差dxdcD： 擴散系數擴散系數rNRTD61ds: 在在dt時間內的擴散量時間內的擴散量 2、選擇溶劑的要點、選擇溶劑的要點 * 對所要成分溶解度大對所要成分溶解度大 * 沸點適中容易回收沸點適中容易回收 * 低毒安全低毒安全 * 廉價廉價 天然產物成分中，萜、甾等大環(huán)、稠環(huán)化天然產物成分中，萜、甾等大環(huán)、稠環(huán)化合物極性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等合物極性小，易溶于氯仿、乙醚等；糖、苷等易溶于水、乙醇等極性溶劑中；酸堿性成分因易溶于水、乙醇等極性溶劑中；酸堿性成分因存在狀態(tài)不同溶解性不同。存在狀態(tài)不同溶解性不同。 最常用的溶劑為乙醇。最常用的溶劑為乙醇。 3、溶劑

5、的分類、溶劑的分類 * 強極性溶劑：水強極性溶劑：水 * 親水性有機溶劑：親水性有機溶劑： 能與水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮）能與水任意混溶（甲醇、乙醇、丙酮） * 親脂性有機溶劑：親脂性有機溶劑： 不與水任意混溶，可分層（正丁醇、乙醚、不與水任意混溶，可分層（正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、石油醚）乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、環(huán)己烷、石油醚） 常用溶劑的極性大小順序：常用溶劑的極性大小順序： 石油醚石油醚四氯化碳四氯化碳苯苯氯仿氯仿乙醚乙醚乙酸乙酯乙酸乙酯正丁醇正丁醇丙酮丙酮乙醇（甲醇）乙醇（甲醇）Kb K=CU/CL CU、CL為被分離物質在上相和下相中濃度為被分離物質在上相

6、和下相中濃度 1、萃取法、萃取法 利用混和物中各成分在兩種互不相溶的溶劑利用混和物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數不同而達到分離的方法。中分配系數不同而達到分離的方法。 根據根據值的大小可決定分離采用的方法值的大小可決定分離采用的方法 100, 簡單的一次萃取，可基本分離。簡單的一次萃取，可基本分離。10，數次乃至，數次乃至10余次萃取，余次萃取，CCD法法2，100次以上萃取，次以上萃取，DCCC法，法，HSCCC法法1，不能分離，不能分離可以根據可以根據PC法計算法計算值，選擇理想的分離條件。值，選擇理想的分離條件。 2.沉淀分離法沉淀分離法 根據溶解度的不同，控制溶液條件使溶液中的

7、化根據溶解度的不同，控制溶液條件使溶液中的化合物或離子分離的方法統(tǒng)稱為沉淀分離法。方法合物或離子分離的方法統(tǒng)稱為沉淀分離法。方法的主要依據是溶度積原理的主要依據是溶度積原理。 根據沉淀劑的不同，沉淀分離也可以分成用無機根據沉淀劑的不同，沉淀分離也可以分成用無機沉淀劑的分離法、用有機沉淀劑的分離法和共沉沉淀劑的分離法、用有機沉淀劑的分離法和共沉淀分離富集法。沉淀分離法和共沉淀分離法的區(qū)淀分離富集法。沉淀分離法和共沉淀分離法的區(qū)別主要是：沉淀分離法主要使用于常量組分的分別主要是：沉淀分離法主要使用于常量組分的分離（毫克離（毫克 量級以上）；而共沉淀分離法主要使用量級以上）；而共沉淀分離法主要使用于

8、痕量組分的分離（小于于痕量組分的分離（小于1mg/mL）。）。 常用的沉淀分離方法及試劑常用的沉淀分離方法及試劑 1 、無機沉淀劑、無機沉淀劑 氫氧化物、硫化物、其它沉淀劑。氫氧化物、硫化物、其它沉淀劑。 2、有機沉淀劑、有機沉淀劑 草酸、銅試劑、銅鐵試。草酸、銅試劑、銅鐵試。3.結晶和重結晶結晶和重結晶 在化學里面，熱的飽和溶液冷卻后，溶質以晶體在化學里面，熱的飽和溶液冷卻后，溶質以晶體的形式析出，這一過程叫結晶。的形式析出，這一過程叫結晶。 重結晶是將晶體溶于溶劑或熔融以后，又重新從重結晶是將晶體溶于溶劑或熔融以后，又重新從溶液或熔體中結晶的過程。重結晶可以使不純凈溶液或熔體中結晶的過程。

9、重結晶可以使不純凈的物質獲得純化，或使混合在一起的鹽類彼此分的物質獲得純化，或使混合在一起的鹽類彼此分離。離。 重結晶提純法的一般過程重結晶提純法的一般過程 1、溶劑選擇、溶劑選擇 2、固體物質的溶解、固體物質的溶解 3、雜質的除去、雜質的除去 4、晶體的析出、晶體的析出 5、晶體的收集和洗滌、晶體的收集和洗滌 6、晶體的干燥、晶體的干燥4.膜分離膜分離 利用膜的選擇性分離實現料液的不同組分的利用膜的選擇性分離實現料液的不同組分的分離、純化、濃縮的過程稱作膜分離分離、純化、濃縮的過程稱作膜分離液膜分離過程分為乳液膜分離過程分為乳化液膜和固定液膜的分化液膜和固定液膜的分離過程；離過程；合成膜的分

10、離過程包合成膜的分離過程包括微過濾、超過濾、反括微過濾、超過濾、反滲透、氣體滲透分離、滲透、氣體滲透分離、滲透蒸發(fā)、滲析及電滲滲透蒸發(fā)、滲析及電滲析等過程。析等過程。 二：柱色譜1.吸附柱色譜 吸附分類吸附分類 物理吸附：物理吸附：無選擇性吸附，吸附無選擇性吸附，吸附-解吸附發(fā)生迅速，吸附解吸附發(fā)生迅速，吸附劑如劑如硅膠、氧化鋁、活性炭硅膠、氧化鋁、活性炭等；等；化學吸附：化學吸附：不可逆吸附，如堿性氧化鋁對酚酸性成分的不可逆吸附，如堿性氧化鋁對酚酸性成分的吸附；酸性硅膠對生物堿的吸附等；吸附；酸性硅膠對生物堿的吸附等；半化學吸附：半化學吸附：聚酰胺聚酰胺對酚酸類、醌類的氫鍵吸附。對酚酸類、醌

11、類的氫鍵吸附。 吸附原理：相似相吸吸附原理：相似相吸 影響吸附過程的三要素：影響吸附過程的三要素：吸附劑（固定相）吸附劑（固定相）溶質（被分離物質）溶質（被分離物質）溶劑（洗脫劑、展開劑、流動相）溶劑（洗脫劑、展開劑、流動相） 2、硅膠、氧化鋁、硅膠、氧化鋁 極性吸附劑極性吸附劑：載樣量大，吸附力強：載樣量大，吸附力強硅膠硅膠：有中性、酸性之分，適用于各類成分分離。：有中性、酸性之分，適用于各類成分分離。氧化鋁：有中性、酸性、堿性之分，不適合于分離氧化鋁：有中性、酸性、堿性之分，不適合于分離酸性成分，多用于分離生物堿。酸性成分，多用于分離生物堿。 被分離物質吸附力與結構的關系被分離物質吸附力與

12、結構的關系 被分離物質極性大，吸附力強，難洗脫，被分離物質極性大，吸附力強，難洗脫，Rf值小。值小。 官能團極性大小排列順序：官能團極性大小排列順序：-COOH Ar-OH R-OH R-NH2、RNHR、RNRR RCONRR RCHO RCOR RCOOR ROR RH 溶劑（洗脫劑）的極性與洗脫力的關系溶劑（洗脫劑）的極性與洗脫力的關系洗脫劑極性越大，洗脫力越強；洗脫劑極性越大，洗脫力越強； OOHOHCOOHOOOHOHCH3OHOOOHOHCH3O 大黃酸大黃酸大黃素大黃素大黃酚大黃酚酸性最強酸性最強酸性其次酸性其次酸性最弱酸性最弱溶于溶于NaHCO3溶于溶于Na2CO3溶于溶于Na

13、OH 例：從黃花夾竹桃果仁中分離到七種強心苷成分，例：從黃花夾竹桃果仁中分離到七種強心苷成分，根據極性大小推測從硅膠柱上的洗脫順序。根據極性大小推測從硅膠柱上的洗脫順序。 名稱名稱RR黃夾苷黃夾苷ACHO(D-glc)2黃夾苷黃夾苷BCH3(D-glc)2黃夾次苷黃夾次苷ACHOH黃夾次苷黃夾次苷BCH3H黃夾次苷黃夾次苷CCH2OHH黃夾次苷黃夾次苷DCOOHH單乙酰黃夾次苷單乙酰黃夾次苷BCH3H OOOHROOROOROCH3CH3單乙酰黃夾次苷單乙酰黃夾次苷B R = COCH3 , 其它其它R = H 3、 活性炭活性炭-非極性吸附劑非極性吸附劑 吸附力與結構的關系吸附力與結構的關系

14、 分子量大者分子量大者 分子量小者分子量小者芳香族芳香族 脂肪族，活性炭和芳香族均有平面型脂肪族，活性炭和芳香族均有平面型分子的緣故。分子的緣故。含含OH、COOH、NH2多者多者 少者少者 3、活性炭、活性炭-非極性吸附劑非極性吸附劑 溶劑的洗脫力溶劑的洗脫力 吡啶吡啶 15%酚酚/醇醇 7%酚酚/H2O 醇醇 含水醇含水醇 H2O 黃酮、生物堿的富集，糖的分離，脫色等。黃酮、生物堿的富集，糖的分離，脫色等。 應用應用 4、聚酰胺（、聚酰胺（Polyamide） 由己酰胺聚合成的一類高分子化合物。由己酰胺聚合成的一類高分子化合物。 H2CNHOCH2H2CCH2H2CCH2NH2COHCH2

15、NHOH2CCH2H2CCH2H2CNCH2OHOOOH分離原理：主要分離原理：主要通過通過酰胺酰胺與與酚、酚、酸、醌酸、醌等化合物等化合物形成氫鍵形成氫鍵，吸附，吸附能力取決于氫鍵能力取決于氫鍵的強弱。的強弱。 2.分配柱色譜分配柱色譜 液液-液柱色譜法，其固定相和流動相均為液液柱色譜法，其固定相和流動相均為液體，液態(tài)固定相又稱固定液，被涂漬在惰體，液態(tài)固定相又稱固定液，被涂漬在惰性材料載體上構成固定相。分配柱色譜法性材料載體上構成固定相。分配柱色譜法的優(yōu)點是：穩(wěn)定性高，重現性好，適用樣的優(yōu)點是：穩(wěn)定性高，重現性好，適用樣品的類型廣等。品的類型廣等。 固定相極性小于流動相固定相極性小于流動相

16、，如，如HPLC反相色譜柱、反相薄層反相色譜柱、反相薄層色譜板。色譜板。固定相固定相：硅膠的硅醇基與烷基結合，如：硅膠的硅醇基與烷基結合，如RP-2、RP-8、RP-18，親脂性親脂性：RP-18 RP-8 RP-2流動相流動相（洗脫劑）：（洗脫劑）：MeOH-H2O；CH3CN-H2O洗脫順序洗脫順序：分離極性大的成分：分離極性大的成分，極性大者先被洗脫出來，極性大者先被洗脫出來。 固定相的表面修飾固定相的表面修飾 RH-2RH-8RH-18化學修飾硅膠親水性表面親脂性表面3.離子交換色譜 離子交換色譜中的固定相是一些帶電荷的基團，離子交換色譜中的固定相是一些帶電荷的基團， 這些帶電基團通過

17、靜電相互作用與帶相反電荷的這些帶電基團通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結合。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子結合。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質量作用定律，這些離子將與結合在離子，按照質量作用定律，這些離子將與結合在固定相上的反離子進行交換。固定相基團帶正電固定相上的反離子進行交換。固定相基團帶正電荷的時候，其可交換離子為陰離子，這種離子交荷的時候，其可交換離子為陰離子，這種離子交換劑為陰離子交換劑；固定相的帶電基團帶負電換劑為陰離子交換劑；固定相的帶電基團帶負電荷，可用來與流動相交換的離子就是陽離子，這荷，可用來與流動相交換的離子就是陽離子，這種離子交換劑叫做陽離子交換劑

18、。種離子交換劑叫做陽離子交換劑。 陰離子交換柱的功能團主要是陰離子交換柱的功能團主要是NH2，及，及NH3 ：陽離子交換劑的功能團主要是：陽離子交換劑的功能團主要是SO3H及及COOH。其中。其中-NH3 離子交換柱及離子交換柱及-SO3H離子交換劑離子交換劑屬于強離子交換劑，它們在很廣泛的屬于強離子交換劑，它們在很廣泛的pH范圍內都范圍內都有離子交換能力；有離子交換能力；-NH2及及-COOH 離子交換柱屬于離子交換柱屬于弱離子交換劑，只有在一定的弱離子交換劑，只有在一定的pH值范圍內，才能值范圍內，才能有離子交換能力。離子交換色譜主要用于可電離有離子交換能力。離子交換色譜主要用于可電離化合

19、物的分離，例如，氨基酸自動分析儀中的色化合物的分離，例如，氨基酸自動分析儀中的色譜柱，多肽的分離、蛋白質的分離，核苷酸、核譜柱，多肽的分離、蛋白質的分離，核苷酸、核苷和各種堿基的分離等。苷和各種堿基的分離等。 4、凝膠層析、凝膠層析（Gel Penetration Chromatography, GPC） 葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠 交聯葡聚糖是由一定平均分子量的葡聚糖和交聯葡聚糖是由一定平均分子量的葡聚糖和交聯劑（一般為環(huán)氧氯丙烷）以醚橋的形式互相交聯劑（一般為環(huán)氧氯丙烷）以醚橋的形式互相交聯形成的三維空間網狀結構高分子材料，是水交聯形成的三維空間網狀結構高分子材料，是水不溶性的白色球狀顆粒，酸性

20、環(huán)境能水解，堿中不溶性的白色球狀顆粒，酸性環(huán)境能水解，堿中穩(wěn)定。穩(wěn)定。 在樣品通過一定孔徑的凝膠固定相時，由于在樣品通過一定孔徑的凝膠固定相時，由于流經路徑的不同，使不同相對分子量的組分得以流經路徑的不同，使不同相對分子量的組分得以分離的方法。分離的方法。 表面有孔隙，其大小決定于聚糖與交聯劑表面有孔隙，其大小決定于聚糖與交聯劑的配比及反應條件。的配比及反應條件。 商品型號即按凝膠的交聯度大小分類，并商品型號即按凝膠的交聯度大小分類，并以吸水量來表示，英文字母以吸水量來表示，英文字母G代表葡聚糖凝膠，代表葡聚糖凝膠，后面的數字表示每克凝膠吸水量，再乘以后面的數字表示每克凝膠吸水量，再乘以10的

21、的值，值，G-25的吸水量為每克的吸水量為每克2.5ml。 交聯度大交聯度大網狀結構越緊密網狀結構越緊密孔隙越小孔隙越小吸吸水膨脹越少。水膨脹越少。 型號型號吸水量吸水量（ml/g）床體積床體積（ml/g）分離范圍分離范圍最小溶脹時間最小溶脹時間肽與蛋白質肽與蛋白質多糖多糖室溫室溫沸水沸水G-101.023小于小于700小于小于70031G-151.52.53.5小于小于1500小于小于150031G-252.54610005000100500062G-505.091115003萬萬5001萬萬62G-757.5121530007萬萬10005萬萬243G-100101520400015萬萬1

22、00010萬萬485G-150152030500040萬萬100015萬萬725G-200203040500080萬萬100020萬萬725凝膠的型號與使用范圍凝膠的型號與使用范圍 層析原理層析原理 絕大部分在水溶液中進行，凝膠顆粒在適當絕大部分在水溶液中進行，凝膠顆粒在適當溶劑中浸泡，待充分膨脹后裝入層析柱，加樣后溶劑中浸泡，待充分膨脹后裝入層析柱，加樣后用同一溶液洗脫。在洗脫過程中，較小的分子滲用同一溶液洗脫。在洗脫過程中，較小的分子滲入凝膠，較大的分子隨溶液流動，分子量小的物入凝膠，較大的分子隨溶液流動，分子量小的物質（阻滯作用大）可通過凝膠網孔進入粒子內部，質（阻滯作用大）可通過凝膠網

23、孔進入粒子內部，然后擴散出來，故流程長，移動速度慢，后流出然后擴散出來，故流程長，移動速度慢，后流出色譜柱，分子量大的物質沉凝膠粒子間孔隙，隨色譜柱，分子量大的物質沉凝膠粒子間孔隙，隨洗脫液移動，流程短，移動速度快，先流出色譜洗脫液移動，流程短，移動速度快，先流出色譜柱。柱。 不同的化合物由于其大小差異，在流經不同的化合物由于其大小差異，在流經GPC柱時，不同柱時，不同分子量的化合物流經體積不同（大分子不能或難以進入凝膠分子量的化合物流經體積不同（大分子不能或難以進入凝膠網格結構的內部，直接從凝膠顆粒之間穿過，保留時間短；網格結構的內部，直接從凝膠顆粒之間穿過，保留時間短；而小分子恰恰相反，保

24、留時間較長）而得以分離而小分子恰恰相反，保留時間較長）而得以分離 。 常用術語常用術語Vt 床體積，凝膠裝柱以后，柱床所占的體積。床體積，凝膠裝柱以后，柱床所占的體積。Vo外水體積，柱床內存在于凝膠外面的水相外水體積，柱床內存在于凝膠外面的水相體積。體積。Vi內水體積，凝膠顆粒內部所含的水相體積。內水體積，凝膠顆粒內部所含的水相體積。Vg凝膠本身體積。凝膠本身體積。相互關系：相互關系：Vt= Vo+ Vi+ VgVe洗脫體積，自樣品加入時算起，至流出組洗脫體積，自樣品加入時算起，至流出組分最大濃度出現時，所流出的體積分最大濃度出現時，所流出的體積 。 同一類型化合物，洗脫特征與組分分子量同一類

25、型化合物，洗脫特征與組分分子量有關。有關。 Ve=K1-K2logM 說明不同組分流經凝膠柱時，按分子量大小說明不同組分流經凝膠柱時，按分子量大小順序流出，分子量大的，洗脫體積小，最先流出，順序流出，分子量大的，洗脫體積小，最先流出，當條件固定時，當條件固定時，Ve重現性很好。重現性很好。 按此特性可測大分子物質的分子量。按此特性可測大分子物質的分子量。 用已知分子量的物用已知分子量的物質分別相繼上柱（質分別相繼上柱（5mg），），流出液按每管流出液按每管24ml收集，收集，通過硫酸蒽酮顯色，再經通過硫酸蒽酮顯色，再經紫外檢測，分別求得洗脫紫外檢測，分別求得洗脫體積體積Ve。再用藍色葡聚糖。再

26、用藍色葡聚糖測出柱床的外水體積測出柱床的外水體積Vo，按按Ve /Vo與分子量對數關與分子量對數關系作圖，得標準曲線，最系作圖，得標準曲線，最后將待測物質分子量用少后將待測物質分子量用少水溶解上柱，在同樣條件水溶解上柱，在同樣條件下測定下測定Ve，根據，根據Ve/Vo，查標準曲線，測得物質分查標準曲線，測得物質分子量。子量。 局限性：局限性： 1、要有標準樣。、要有標準樣。 2、不同的待測物質、不同的待測物質要有不同的標準樣。要有不同的標準樣。 操作技術：操作技術：溶脹：溶脹：不同凝膠溶脹時間不一樣，不同凝膠溶脹時間不一樣，G-100室溫下最室溫下最小水化時間小水化時間72h，除微顆粒。目的：

27、充分吸水，各，除微顆粒。目的：充分吸水，各孔隙舒張，以利于物質分子通過?？紫妒鎻垼岳谖镔|分子通過。 裝柱：裝柱：柱內加少量洗脫液，排除底部氣泡，然后將柱內加少量洗脫液，排除底部氣泡，然后將凝膠漿倒入，讓其自然沉降，打開出口，柱床表面凝膠漿倒入，讓其自然沉降，打開出口，柱床表面不再下沉即緊密。裝好的柱應不含氣泡，柱床表面不再下沉即緊密。裝好的柱應不含氣泡，柱床表面平坦。平坦。 平衡：平衡：用用3倍床體積洗脫液讓柱平衡流動倍床體積洗脫液讓柱平衡流動2-3天，天，至流速恒定。至流速恒定。 加樣：加樣：平衡后，床表面應有平衡后，床表面應有12cm的洗脫液，的洗脫液，用吸管沿柱壁加入，打開出口，當上

28、面液體剛用吸管沿柱壁加入，打開出口，當上面液體剛好全部滲入柱內時，滴加洗脫液，注意不能振好全部滲入柱內時，滴加洗脫液，注意不能振動床表面。動床表面。 上樣品要體積小，濃度大，這樣峰形好。上樣品要體積小，濃度大，這樣峰形好。 洗脫：洗脫：一般用水和電解質溶液，如酸、堿、鹽的一般用水和電解質溶液，如酸、堿、鹽的溶液及緩沖溶液。加入溶液及緩沖溶液。加入5cm以上洗脫液時，可接高以上洗脫液時，可接高位瓶中的洗脫液，位瓶中的洗脫液， 洗脫分階段洗脫和梯度洗脫洗脫分階段洗脫和梯度洗脫收集：收集：分部收集器收集。分部收集器收集。 檢出：檢出：蛋白質、核苷酸、多肽用紫外光譜儀在蛋白質、核苷酸、多肽用紫外光譜儀

29、在280nm、260nm、230nm測吸光度值，以樣品體積測吸光度值，以樣品體積（或管數）為橫座標，吸光度為縱座標，畫出洗脫（或管數）為橫座標，吸光度為縱座標，畫出洗脫曲線。曲線。 5、大孔樹脂柱色譜、大孔樹脂柱色譜 大孔吸附樹脂的吸附實質為一種物體高度分散或大孔吸附樹脂的吸附實質為一種物體高度分散或表面分子受作用力不均等而產生的表面吸附現象表面分子受作用力不均等而產生的表面吸附現象，這種吸附性能是由于范德華引力或生成，這種吸附性能是由于范德華引力或生成氫鍵氫鍵的的結果。同時由于大孔吸附樹脂的多孔結構使其對結果。同時由于大孔吸附樹脂的多孔結構使其對分子大小不同的物質具有篩選作用。通過上述這分子

30、大小不同的物質具有篩選作用。通過上述這種吸附和篩選原理，有機化合物根據吸附力的不種吸附和篩選原理，有機化合物根據吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經一定溶同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經一定溶劑洗脫而達到分離、純化、除雜、濃縮等不同目劑洗脫而達到分離、純化、除雜、濃縮等不同目的。的。 吸附樹脂的表面發(fā)生吸附作用后，會使樹脂吸附樹脂的表面發(fā)生吸附作用后，會使樹脂表面上溶質的濃度高于溶劑內溶質的濃度，其結表面上溶質的濃度高于溶劑內溶質的濃度，其結果引起體系內放熱和自由能的下降果引起體系內放熱和自由能的下降。 大孔吸附樹脂按其極性大小和所選用的單體分子大孔吸附樹脂按其極性大小和所選用的

31、單體分子結構不同，可分為非極性、中極性和極性三類。結構不同，可分為非極性、中極性和極性三類。 （1）非極性大孔吸附樹脂）非極性大孔吸附樹脂 非極性大孔吸附樹脂是由非極性大孔吸附樹脂是由偶極矩偶極矩很小的單體聚合很小的單體聚合制得的不帶任何功能基，孔表的疏水性較強，可制得的不帶任何功能基，孔表的疏水性較強，可通過與小分子內的疏水部分的作用吸附溶液中的通過與小分子內的疏水部分的作用吸附溶液中的有機物，最適于極性溶劑中吸附非極性物質，也有機物，最適于極性溶劑中吸附非極性物質，也稱為芳香族吸附劑，例如苯乙烯、二乙烯苯聚合稱為芳香族吸附劑，例如苯乙烯、二乙烯苯聚合物。物。 （2）中等極性大孔吸附樹脂）中

32、等極性大孔吸附樹脂 中等極性大孔吸附樹脂是含酯基的吸附樹脂，且中等極性大孔吸附樹脂是含酯基的吸附樹脂，且多功能團的甲基丙烯酸酯作為交聯劑。其表面兼多功能團的甲基丙烯酸酯作為交聯劑。其表面兼有疏水和親水兩部分。既可極性溶劑中吸附非極有疏水和親水兩部分。既可極性溶劑中吸附非極性物質，又可由非極性溶劑中吸附極性物質，也性物質，又可由非極性溶劑中吸附極性物質，也稱為脂肪族吸附劑，例如聚丙烯酸酯型聚合物。稱為脂肪族吸附劑，例如聚丙烯酸酯型聚合物。 （3）極性大孔吸附樹脂）極性大孔吸附樹脂 極性大孔吸附樹脂是指含酰胺基、極性大孔吸附樹脂是指含酰胺基、氰基氰基、酚羥基、酚羥基等含氮、等含氮、氧氧、硫極性功能

33、基的吸附樹脂，它們通、硫極性功能基的吸附樹脂，它們通過過靜電靜電相互作用吸附極性物質，如丙烯酰胺。相互作用吸附極性物質，如丙烯酰胺。6.親和色譜親和色譜 親和色譜也稱為親和層析，是一種利用固定相的親和色譜也稱為親和層析，是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合能力的分子，并且它們的結合是可逆的，在改變能力的分子，并且它們的結合是可逆的，在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某

34、一分子，也可以用用來從混合物中純化或濃縮某一分子，也可以用來去處或減少混合物中某一分子的含量。來去處或減少混合物中某一分子的含量。 紙色譜（紙色譜（PC），也叫紙分配色譜（），也叫紙分配色譜（PPC，Paper Partition Chromatography） )1 ()1 ()1(1)1(1fafbfbfafbfbfafaBARRRRRRRRKK (為紙色譜定數為紙色譜定數) Rfa、Rfb為為A、B兩物質在兩物質在PC上的上的Rf值值 pH值值 對于酸性、堿性和兩性化合物，對于酸性、堿性和兩性化合物，pH值可以改值可以改變它們的存在狀態(tài)（游離型、解離型），分配比變它們的存在狀態(tài)（游離型、解離型），分配比受受pH的影響。的影響。 HA + H2O = A- + H3O+3HAOHAKapKa= pH - logA-/HApH = pKa + logA-/HAHA達到達到99%解離時，解離時，pH = pKa + 2HA達到達到99%游離時，游離時，pH = pKa - 2 2) 酸堿性成分的分離酸堿性成分的分離-pH梯度萃取法梯度萃取法 按酸堿性強弱的不同分離酸性、堿性、中按酸堿性強弱的不同分離酸性、堿性、中性物質，改變性物質，改變pH值使酸堿成分呈不同狀態(tài)。值使酸堿成分呈不同狀態(tài)。 如中藥大黃中的大