CombiFlashTM Sg100c快速制備色譜分離儀的圖文操作手冊

1、CombiFlashTM Sg100c快速制備色譜分離儀的圖文操作手冊一、 CombiFlashTM Sg100c快速制備色譜分離儀：檢測器的光學部分餾分收集器UA-6型紫外可見檢測器洗脫劑貯液罐色譜柱廢液罐計量泵色譜柱架Foxy Jr. 控制器 CombiFlashTM Sg100c快速制備分離色譜儀二、 功能和用途：1、 功能：本儀器配制了AC電機自動控制的無閥計量泵、液體樣品上樣的手動閥、固體樣品上樣柱接頭、144支試管的餾分收集器和高負載在線紫外UA-6檢測器和記錄儀，具有雙元線性或階梯式梯度洗脫模式、適用于正相4/12/40/120g 或130g色譜柱，可以處理4mg-13g的樣品；

2、2、 用途：分離制藥、生物和化學等行業(yè)性能相近的化合物。三、 操作步驟：（一） 系統(tǒng)啟動：（如需要更多的信息，請參考專用的操作手冊）1、 UA-6檢測器的設置：（1）、關上儀器前面右下角的峰分離器（PEAK SEPARATOR）開關。（2）、檢測器的紅色按鈕開關由“STANDBY”切換至“OPERATE”后，紅色按鈕右邊的指示燈亮呈紅色。（3）、把儀器上面光學部分右前方的基線調整（BASELINE ADJUST）旋鈕旋至MAX.OPERN。（4）、等15min左右，前面板UA-6型紫外指示燈變?yōu)榫G色后設置靈敏度（SENSITIVITY）。對于本儀器而言，一般選擇靈敏度為AUFS（absorba

3、nce units full scale）。（5）、調整記錄儀補償（RECORDER OFFSET）旋鈕的白色標志與頂端中心標志在一條直線上。（6）、按自動基線（AUTO BASELINE）按鈕后調整記錄儀補償旋鈕至10%（或所需的基線位置）。2、 泵的設置：梯度泵右側的流量（FLOW RATE）旋鈕用來調節(jié)洗脫劑的流量大小，泵前面流量指示器指示流量的近似值。當泵正在運行或已經(jīng)關閉的時候，流量是可以調整的。注：從到的軟鍵執(zhí)行每個鍵上面顯示行的功能。3、 泵的沖洗/清潔：（1）、將進樣閥下端管道從色譜柱上取下后放到廢液罐中；（2）、按“STANDBY/OPERATE”軟鍵以打開，此時顯示上次運行

4、的程序；（3）、按ADVANCE軟鍵顯示出主要的手動控制屏，操作并運行泵。如果在4s中內沒有進一步的操作，液晶屏將再退回到前一顯示屏幕。（4）、按Pump下面的軟鍵“C”后，Pump將以反色文本顯示；此時泵軟鍵“C”可以切換泵的開關，當“Pump”以反色文本顯示時表明泵正在運行。（5）、按“Acc”下面的“A”軟鍵可以顯示附屬控制屏，在此屏上可以改變儀器的附屬功能，。（6）、按“Grad”下面的“D”軟鍵可以手動更改洗脫劑B的百分比，。（7）、使用數(shù)字鍵或“-1”和“+1”軟鍵設置洗脫劑B的百分比為100%以清洗組分B的管道。持續(xù)按“-1”和“+1”軟鍵將循環(huán)顯示可設值的范圍，例98，99，1

5、00，0，1，（8）、按“Enter”下面的“E”鍵后，將用洗脫劑B沖洗/清潔梯度泵和輸出管道。當管件中開始出現(xiàn)洗脫劑時，可以執(zhí)行下一步。（9）、設置洗脫劑B的百分比為0%，將使用洗脫劑A清洗A的管道。（10）、按Enter軟鍵后將用洗脫劑A沖洗/清潔梯度泵和輸出管道。當管件中開始出現(xiàn)洗脫劑時，可以進行下一步操作。（11）、按“End”下面的“A”軟鍵后再按“Pump”下面的軟鍵“C” 就把泵關閉了，將顯示相同的正色文本，如下圖。（12）、再把管件連接到進樣閥的底部端口。洗脫劑的流動途徑和液體上樣圖4、 基線平衡和液體樣品法上樣：梯度泵經(jīng)過沖洗和清潔后，就可以進行脫氣、平衡色譜柱和進樣操作。按

6、照紫色文本標記調整進樣閥至正確的位置。（1）、參照下列步驟安裝色譜柱，通過上下接頭將色譜柱安裝到柱架上。根據(jù)柱子的長度可以調整下端的色譜底座，共有四個調整位置。拔出色譜柱底座并上下滑動至合適的位置。抬高上面彈簧式色譜柱底座，把上面的旋扣接頭塞到色譜柱的上端，輕輕地擰動柱子，當調整下端旋扣接頭與色譜柱匹配后緩慢地松開上端柱子底座，色譜柱架應當貼緊色譜柱。（2）、旋轉進樣閥至平衡/分離（EQUILIBRATE/SEPARATE）位置，如果還沒有打開就按“STANDBY/OPERATE”軟鍵以打開Foxy Jr.控制器。（3）、按ADVANCE軟鍵后進入含有Pump軟鍵的顯示屏幕，按Pump軟鍵后“

7、Pump”將以反色文本顯示，此時就啟動了泵，將用洗脫劑A沖洗色譜柱。（4）、當平衡色譜柱后，按ADVANCE軟鍵后再按Pump軟鍵“Pump”將和其他文本一樣以正色文本顯示，此時就把泵關閉了。（5）、旋轉進樣閥至進樣（INJECT）位置，用注射器通過進樣閥把液體樣品輕輕注在色譜柱的上面。旋轉進樣閥至平衡/分離（EQUILIBRATE/SEPARATE）位置。（6）、下一步開始編輯色譜分離程序。如果已經(jīng)建立程序，按Run下面的“A”軟鍵后就可以開始分離收集樣品。當運行完畢參照以下各步卸下色譜柱和樣品注入柱：隨儀器提供的RediSepTM 色譜柱只能使用一次，在處理用過的色譜柱之前應當將柱中的洗脫

8、劑排出；為了排出色譜柱和/或樣品注入柱中大部分洗脫劑可以先從洗脫劑貯液罐中拔出溶劑的進口管道，然后按STANDBY/OPERATE軟鍵打開Foxy Jr控制器，按“Pump”下面的軟件“C”來啟動泵，看到色譜柱變干和僅有少量液體流出廢液管時依次按ACVANCE、C軟鍵關閉泵，下次分離樣品前務必清洗泵的所有管道。洗脫劑的流動途徑和固體上樣圖5、 色譜柱的基線平衡和固體樣品法上樣：梯度泵經(jīng)疏通和清洗后，可用下面的操作步驟清潔泵及管路、平衡色譜柱和注入樣品，參照綠色文本標識調整進樣閥至正確的位置。（1）、參照4、（1）安裝色譜柱，（2）、樣品注入柱的安裝，將樣品注入柱推進進樣閥中，順時針旋轉樣品注入

9、柱90以使二者緊密結合。把色譜柱蓋帽扣在固體樣品進樣柱的柱頭上直到扣緊為止，然后旋轉蓋帽90以使二者結合緊密。（3）、轉動進樣閥至平衡基線（EQUILIBRATE）位置。如果沒有打開Foxy Jr.控制器，就按STANDBY/OPERATE軟鍵打開手動控制器。（4）、按ADVANCE軟鍵顯示帶有Pump軟鍵的屏幕，按Pump軟鍵使之以反色文本顯示。此時洗脫劑A將充滿色譜柱。（5）、當平衡好色譜柱后，依次按ADVANCE軟鍵、Pump軟鍵使之和其他文本一樣以正色文本顯示后就把泵關閉。（6）、旋轉進樣閥至上樣和分離（LOAD AND SEPARATE）位置。（7）、進行下一步操作，編輯Foxy J

10、r.的控制程序或選擇已經(jīng)存在的合適程序按Run軟鍵后開始運行分離樣品。（8）、當運行完畢參照以下各步卸下色譜柱和樣品注入柱：隨儀器提供的RediSepTM 色譜柱只能使用一次，在處理用過的色譜柱之前應當將柱中的洗脫劑排出；為了排出色譜柱和/或樣品注入柱中大部分洗脫劑可以先從洗脫劑貯液罐中拔出溶劑的進口管道，然后按STANDBY/OPERATE軟鍵打開Foxy Jr控制器，按“Pump”下面的軟件“C”來啟動泵，看到色譜柱變干和僅有少量液體流出廢液管時依次按ACVANCE、C軟鍵關閉泵，下次分離樣品前務必清洗泵的所有管道。（二） 操作程序的設置：1、簡介：本節(jié)是Foxy Jr.程序設置的基本指南

11、，能滿足大部分設置的需要。但是在程序實例中可能仍有很多額外選項和參數(shù)的設置不能介紹到。如需更多的信息請參考的本書目錄或Foxy Jr.操作手冊中第3節(jié)。注：除了采用本節(jié)所述控制Sg 100c系統(tǒng)外，還可以使用安裝在計算機上的PeakTrak 軟件控制，此時可以忽略本節(jié)參考PeakTrak的安裝指南和幫助文件設置分離程序和使用Sg 100c系統(tǒng)。2、分離程序實例：為了能快速掌握怎樣使用Foxy Jr.控制器編輯分離程序，可以按照下面的分步指南來完成。分離程序實例是建立在以下收集參數(shù)之上的：使用16mm試管；廢液或不需要的洗脫液通過進樣閥的控制直接流入廢液罐；當有吸收峰時每個試管的收集洗脫液時間為

12、9s，這是基于當泵流速為100ml/min時注滿15ml 16mm×100mm的試管所用時間的長短來計算的；當有吸收峰時采用峰檢測器來確定；運行時間的最大值為31min；峰寬值為持續(xù)約1min；梯度程序為0% B時持續(xù)5min，30% B持續(xù)25min，此后為0%（見下圖）。注：當設置程序時，軟鍵到執(zhí)行每個鍵上面所顯示行的功能，某些鍵的功能如選擇（Select）軟鍵是上下滾動于各選擇項的列表，+1和-1鍵是以1為單位遞增或遞減（+1和-1鍵在可選擇值間循環(huán)，如：98，99，100，0，1，），確認（Enter）軟鍵是用來存儲設置和進入下一畫面的。（1）、在主顯示屏上，按選擇程序2，按

13、清除軟鍵（Clear softkey），再按確認（Enter）鍵使程序回到默認狀態(tài)。（2）、按編輯（Edit）鍵后，按或選擇（Select）鍵設置類型（Type）為峰檢測（Peak detection），然后按確認（Enter）鍵。（3）、參數(shù)試管架類型（Rack Type）和最后一支試管（Last Tube）的數(shù)目根據(jù)試管架上試管的類型和數(shù)目設置。根據(jù)試管架上試管的大小和型號這些參數(shù)是需要改變的。按或選擇鍵設置架型號（Rack type）為16mm試管（Tubes），然后按確認；按、和軟鍵設置最后一支試管為第100支。（4）、按或選擇設置好每支試管的滴液時間長短（Fraction by Ti

14、me），然后按確認。注：每支試管的滴液時間（Fraction by Time）主要根據(jù)試管的大小和所用的流速來設置，此參數(shù)依照系統(tǒng)設置的需要而改變。（5）、按和設置每支試管的滴液時間（Fraction by Time）為9sec，按鍵默認流動延時為0sec，按鍵默認閥值為0=None。（6）、參數(shù)峰寬是吸收峰持續(xù)時間長短的估計值，為了達到最佳效果，峰寬值設置應為0.22min之間。按或選擇鍵設置峰寬（Peak Width）為1min，然后按確認，按軟鍵默認重啟動（Restart）為None。（7）、當運行開始時，所用的程序事件按照時間排列。只有多個事件被設置成同一時間發(fā)生時，依據(jù)次序運行。本軟

15、件允許在已經(jīng)存在的程序事件中添加事件，此事件被放在已有事件列的最后。設置某一事件Even為None后使用Clear鍵就可以刪除此事件。（8）、按或選擇鍵設置事件1（Event：1）為梯度變化（Grandient Change），然后按確認；按、和設置事件1梯度%B（Event：1 Grad. %B）為0, 運行時間為5:00min。（9）、按或選擇鍵設置事件2（Event：2）為梯度變化（Grandient Change），然后按確認；按、和設置事件2梯度%B（Event：2 Grad. %B）為30, 運行時間為5:00min。（10）、按或選擇鍵設置事件3（Event：3）為梯度變化（Gr

16、andient Change），然后按確認；按、和設置事件3梯度%B（Event：3 Grad. %B）為30, 運行時間為30:00min。（11）、按或選擇鍵設置事件4（Event：4）為梯度變化（Grandient Change），然后按確認；按、和設置事件4梯度%B（Event：4 Grad. %B）為0, 運行時間為30:01min。（12）、按或選擇鍵設置事件5（Event：5）為泵速設置（Pump speed chng），然后按確認；按默認5：Speed%為0=Run End，按、設置5：Speed%為0，31:00；按或結束（End）軟鍵后表明程序2就設置完成了3、運行：（1）

17、、通過數(shù)字鍵（1-9）選擇相對應的程序運行該程序，在顯示畫面中最上面一行的左側，“Pgm=*”表示所選用的程序號。（2）、按或運行（Run）軟鍵啟動程序。（3）、運行完成后，參照上述操作步驟卸下色譜柱和樣品注入柱。4、附加/額外功能：在運行過程中可以查看或改變以下參數(shù)：當儀器運行時軟鍵允許滴液部件的手動控制，按此軟鍵后在B、C、D和E軟鍵上面顯示屏上出現(xiàn)四個不同指向的按鈕，按其中之一鍵后，滴液部件將按所示方向移動。按或停止（Stop）軟鍵可以暫停當前操作，同時停止運行時間和泵，但是不影響閥的操作。按或繼續(xù)（Cont.）軟鍵可以恢復到先前操作，按或結束（End）軟鍵將停止當前的收集循環(huán)、滴液組件

18、將退回到右后角。洗脫劑將通過閥的改變而改流入廢液罐。按或排放（Drain）軟鍵將通過換向閥改變洗脫劑的流向至廢液罐。當洗脫劑處于被該向狀態(tài)時Drain以反色文本顯示。再次按Drain軟鍵后程序將返回到正常狀態(tài)。注：當排放時運行時間計入所設置的程序中。按或窗口（Wdw.）軟鍵將會顯示運行時間和當前的梯度百分比，見下圖。再次按此軟件或退回（Back）軟鍵后將回到正常的運行屏幕顯示。時間/窗口狀態(tài)（Time/Window Status）按或峰（Peak）軟鍵將顯示峰檢測器信息，如果程序未使用峰檢測，則Peak將不顯示。按Peak后可以看到目前水平和斜坡值。當檢測到峰時，Peak以反色文本顯示，如下圖

19、。再次按此軟鍵或退回（Back）軟鍵將回到正常的運行顯示屏。峰信息（Peak Information）按或查看（View）顯示正在運行程序的所有程序設置。在運行的任何時刻按View鍵后按Next軟鍵將依次查看下一個程序設置。當達到最后一個程序設置時，再按Next軟鍵返回到Foxy Jr.控制器的正常顯示屏幕。按RT/Wdw軟鍵兩次將略過所有的設置進入正常顯示屏幕。查看程序（Program Viewing）不能改變正在運行程序的任何參數(shù)。5、程序的復制：謹慎使用此功能。在選擇的程序號下，該程序內的所有事件設置將被完全清除。設置Pgm=目的程序號，按或清除（Clear）軟鍵，按或直到被復制的程序出

20、現(xiàn)在目的程序下，按或確認（Enter）軟鍵確認。6、樣品梯度設置的實例：下面的實例有助于不同梯度程序的創(chuàng)建，利用事件號（event #）、運行時間（elapsed time）和%B作圖標有助于程序設置，謹記段結束時間已經(jīng)過去或是從運行開始的總時間。（1）、傾斜式梯度程序（Ramp Gradient Program）：程序描述-在頭5min內洗脫劑為0%B，然后在25min內洗脫劑遞增到100%B 并保持到運行結束；程序事件：1：Grad. %B= 0, 5:00 2：Grad. %B=100, 25:00（2）、步長式梯度程序（Step Gradient Program）：程序描述：洗脫劑為3

21、0%B時洗脫5min，60%B時洗脫5min，然后在3min內遞增到90%B并洗脫5min，然后遞減到0%B并保持至洗脫運行結束。程序事件：1：Grad. %B= 30, 0:01；2：Grad. %B= 30, 5:00；3：Grad. %B= 60, 5:00；4：Grad. %B= 60, 11:00；5：Grad. %B= 90, 14:00；6：Grad. %B= 90, 19:00；7：Grad. %B= 00, 28:00。（3）、梯度程序的附加實例：a、等度洗脫：洗脫劑為30% B程序事件：1：Grad. %B= 30, 0:01；2：Grad. %B= 30,10:00；3：

22、Grad. %B= 0, 10:01。b、曲線梯度：在16min內洗脫劑從0% B遞增至100% B程序事件：1：Grad. %B= 5, 3:00；2：Grad. %B= 7, 4:00；2：Grad. %B= 12, 6:00；4：Grad. %B= 20, 8:00；5：Grad. %B= 32, 10:00；6：Grad. %B= 48, 12:00；7：Grad. %B= 70, 14:00；8：Grad. %B= 100, 16:00；9：Grad. %B= 0, 16:01。c、程序描述：在1h內100%洗脫劑1遞變?yōu)?00%洗脫劑2，然后將洗脫劑進液口1轉移至洗脫劑3中，在1h

23、內100%洗脫劑2遞變?yōu)?00%洗脫劑3，然后將洗脫劑進液口2轉移至洗脫劑4中，在1h內100%洗脫劑3遞變?yōu)?00%洗脫劑4。程序事件：1：Grad. %B= 100, 1:00:00；2：Output 1, On, 1:00:00；3：Grad. %B= 0, 2:00:00；4：Output 2, On, 2:00:00；5：Grad. %B= 100, 3:00:00；6：Grad. %B= 100, 3:00:01。d、程序描述：在5min內洗脫劑從5%遞增至20%B，再在10min時遞增至80%，最后在15min時遞增至95% B。注：除了具有相同時間設置的事件外，事件的先后順無關

24、緊要。程序事件：1：Grad. %B= 5, 0:01；2：Grad. %B= 80, 10:00；3：Grad. %B= 0, 15:01；4：Grad. %B= 95, 15:00；5：Grad. %B= 20, 5:00；（4）、梯度資料表:（三） 操作軟件Peak Trak的使用：1、雙擊桌面上Peak Trak軟件的快捷方式或從開始/所有程序/PeakTrak1/ PeakTrak2進入軟件操作的主窗口，見下圖。2、單擊運行樣品（Run Samples）彈出下面的設置運行（Set Up Runs）窗口，依次填寫上操作者（Operator）、色譜柱的描述（Column Descript

25、ion）、色譜柱編號（Column Lot#）、記錄參考（Notebook Reference）和注釋（Notes）后就可以進行下一步（Next）。單擊清除所有輸入項（Clear All Entries）可以刪除上面填寫的所有內容。單擊添加樣品（Add Sample）后，樣品號（Sample）后的數(shù)字由0變?yōu)?，依次輸入樣品標識（Sample ID）、描述（Description）、數(shù)量（Quantity）后可以進行下一步（Next）。再次單擊添加樣品后樣品號后的數(shù)字變?yōu)?，表明現(xiàn)在有兩個樣品，依次類推。選中要刪除的樣品號，單擊刪除樣品（Delete Sample）后可以刪除。如樣品1的樣品標

26、識、描述和數(shù)量都已設好，樣品2的和樣品1的一樣，只要單擊和前面相同（Same as Previous）就可以使二者的設置相同。做完實驗后，單擊清除所有樣品（Clear All Samples）即可清除所有樣品，此時樣品號后的數(shù)字為0。分別單擊瀏覽（Browse）后設置好保存數(shù)據(jù)和方法文件路徑。3、單擊方法編輯（Method Editor）后彈出方法編輯窗口，默認進入梯度洗脫窗口，見下圖。首先在溶劑A和B下面文本框中填寫上溶劑A和B的名稱，再按照已知洗脫程序設置各個事件，選擇運行時間和洗脫劑B的百分比后單擊添加（Add）后選定的時間和%B值就出現(xiàn)在Time %B下面的對話框中。選中要刪除的項后單

27、擊刪除（Delete）就可以刪除選定項。單擊試管和試管架（Rack & Tube）后彈出窗口如下，選中或設置好相關系數(shù)后，單擊運行參數(shù)（Run Parameters）后彈出窗口如下，設置完所有相關參數(shù)后單擊保存（Save）后彈出另存為窗口，選擇保存途徑和輸入文件名后單擊保存即可。單擊退出（Exit）后退回到下面窗口，單擊完成（Finish）后進入PeakTrak控制器（Peak Trak Monitor）窗口，見下圖。單擊運行（Run）后，即開始按照已設定程序分離樣品。此時運行（Run）鍵變?yōu)橹兄梗ˋbort）鍵，單擊中止鍵后彈出請確認（Please Confirm）窗口，詢問是否想中止，單擊是（Yes）后關閉PeakTrak控制器窗口退回到PeakTrak主窗口。4、單擊查看試管盤/試管架（Vie