第三章消毒與滅菌

1、第三章消毒與滅菌基本概念滅菌指殺滅物體表面和內(nèi)部的一切微生物，包括細菌的芽孢和真菌的孢子。消毒指殺滅物體中的病原微生物 ，它只要求達到消除傳染性的目的，而對非病原微生物及芽孢、孢子并不嚴格要求殺死。用來消毒的化學藥品稱消毒劑。 防腐指抑制物品中微生物繁殖的方法。用來防腐的化學藥品稱防腐劑，它與消毒劑無嚴格的界限，同種化學藥品高濃度時為消毒劑，低濃度時為防腐劑。 無菌是指沒有活微生物的狀態(tài)。防止微生物進入動物機體或其他物體的操作技術(shù)稱無菌操作。殺菌-即滅菌。抑菌-即防腐?？咕?包括防腐和殺菌。 第一節(jié)物理性滅菌、消毒及抑菌方法 一、熱力消毒、滅菌法 高溫殺菌的機理高溫對微生物有明顯的致死作用，高

2、溫可直接破壞菌體蛋白、核酸及酶系統(tǒng)，導致菌體死亡。高溫滅菌干熱滅菌濕熱滅菌（一）干熱滅菌法1、火焰滅菌法 用火直接燒死物體中的微生物，是一種最徹底的滅菌法。燒灼 接種環(huán)、試管口、瓶口等焚燒 動物尸體、污染廢棄物等 酒精燈（左）酒精燈（左） 電子火焰滅菌器（右）電子火焰滅菌器（右） 火焰滅菌轉(zhuǎn)盤（左）火焰滅菌轉(zhuǎn)盤（左） 無火焰高溫滅菌器（右）無火焰高溫滅菌器（右） 滅菌操作滅菌操作2、熱空氣滅菌法 又稱干烤滅菌，是在干烤箱中用熱空氣滅菌。該法以輻射傳導熱，穿透性差，需用較高溫度及較長時間。主要用于玻璃器皿、瓷器、金屬器械等的滅菌。通常用160170維持2h，能殺死一切微生物及芽孢。 （二）濕熱滅

3、菌（消毒）法包括以下5種煮沸 高壓蒸汽滅菌法巴氏消毒法間歇滅菌法流通蒸汽滅菌法1、煮沸 煮沸151520min20min可殺死細菌的繁殖體、真菌和病毒，但殺不死芽孢。此法常用于刀剪、注射器、針頭及橡膠制品的消毒。 煮沸消毒盒煮沸消毒盒 煮沸消毒器煮沸消毒器2、高壓蒸汽滅菌法 即利用高壓蒸汽滅菌器（高壓鍋）滅菌，是應(yīng)用最廣、最有效的滅菌法。用15磅的壓力（溫度為121.3）維持1520min，可殺死一切微生物及芽孢。一切耐高溫的物品均可用此法滅菌。 高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器3、巴氏消毒法 用于液態(tài)食品的一種消毒法，常用于牛奶、啤酒、果酒、葡萄酒和一些飲料。特點: 利用盡可能的低溫和短的時間，

4、最大限度的殺死食品中的病原菌和一般 雜菌，同時最大限度地保持食品的營養(yǎng)成分和風味不發(fā)生改變巴氏消毒的三種方法： 低溫維持法6265維持30min 高溫瞬時法7172保持15s 超高溫法132保持12s 巴氏消毒裝置巴氏消毒裝置二、輻射滅菌法 （一）非電離輻射 包括：紫外線日光可見光紅外線微波1、紫外線 波長200300nm的紫外線具有殺菌作用，其中253265nm段殺菌力最強。殺菌機理：主要破壞菌體細胞DNA的構(gòu)型，使DNA分子中間形成胸腺嘧啶二聚體，干擾DNA的復(fù)制，造成菌體的死亡，此外，紫外線也能破壞菌體蛋白和酶。缺點：穿透力差，普通玻璃、塵埃等均可阻擋紫外線，所以，紫外線只適合空間及物體

5、表面的消毒，如無菌室、手術(shù)室等空間、墻壁及實驗臺表面的消毒。 （二）電離輻射 包括放射性同位素的射線（、射線）、X射線等。小計量可誘發(fā)微生物變易，大計量具有抑菌及殺菌作用。在實際工作中主要是用X、射線，用于消毒、食品保鮮和微生物育種等方面。 三、超聲波殺菌機理l超聲波幾乎對所有的微生物都有殺滅作用，主要是以機械作用和氧化作用破壞菌體細胞壁、細胞膜，使內(nèi)容物逸出。用途l可用超聲波裂解菌體細胞，研究菌體的構(gòu)造、化學組成、核酸、抗原、酶等。也可用超聲波從組織中提取病毒。 四、濾過除菌濾過除菌是通過機械阻留作用除去液體及氣體中的細菌，所用裝置叫濾器。濾器上含有很多微細小孔，可使液體及氣體通過，細菌等大

6、于孔徑的物體不能通過，借以獲得無菌液體及氣體。用途主要用于不耐高溫的物體，如血清、毒素、抗毒素、酶、抗生素、維生素、氨基酸及特殊培養(yǎng)基等的除菌。濾器不能除去病毒、霉形體和L型細菌。濾器的種類與型號濾器的種類很多，每種又有許多不同的型號，型號的區(qū)別主要是濾膜孔徑大小不同。除菌濾器孔徑通常為0.20.22m。實驗室常用濾器耐酸玻璃濾器蔡氏濾器微孔濾膜 玻璃耐酸濾器玻璃耐酸濾器五、低溫抑菌法 低溫抑菌的機理大多數(shù)微生物對低溫抵抗力很強，在低溫條件下微生物的代謝活動降低到最低水平，生長繁殖停止，但仍可長時間保持生命。低溫在微生物學工作中的用途主要用于保存微生物，如：04保存細菌-20以下保存病毒 低溫

7、保存微生物注意事項有少數(shù)細菌和病毒對低溫特別敏感，如淋球菌、巴氏桿菌在4保存比室溫保存死亡更快，皰疹病毒在-20保存比4死亡更快。反復(fù)凍融容易引起微生物死亡。冷凍保存細菌時，溫度必須迅速降低，以免菌體內(nèi)的水分形成結(jié)晶冰而損傷細胞膜。 冷凍真空干燥法（凍干法）保存微生物及生物制品最好的方法方法：先將要保存的菌種加上保護劑（如甘油、蔗糖、脫脂乳、血清、二甲基亞楓等），裝到安瓿中，在凍干機中迅速冷凍、抽真空、干燥、封口。這樣保存的菌種經(jīng)多年不失去活性。 第二節(jié)化學消毒滅菌法一、化學消毒劑及防腐劑 消毒劑用于殺滅病原微生物的化學藥物。防腐劑也稱抑菌劑，是用于抑制微生物生長繁殖的化學藥物。二者統(tǒng)稱消毒防

8、腐劑 化學消毒防腐劑的種類：根據(jù)對菌體的作用分為： 使菌體蛋白變性或凝固的，如酚類（高濃度）、醇類、重金屬鹽類（高濃度）、酸堿類、醛類 損傷胞漿膜的，如酚類（低濃度）、表面活性劑、醇類等脂溶劑 干擾細菌酶系統(tǒng)和代謝的，如某些氧化劑、重金屬鹽類（低濃度） 改變核酸功能的，如染料、烷化劑等 使用方法化學消毒劑與防腐劑不僅可殺死病原菌，同時對動物的組織細胞也有損害作用，所以它只能外用，用于體表、環(huán)境及物體的消毒。浸泡擦拭氣體熏蒸噴霧及噴灑等選藥原則在實際工作中應(yīng)根據(jù)用途與消毒劑的特點來選擇藥品、使用方法和濃度。最理想的消毒劑應(yīng)是殺菌力強、價格低、無腐蝕性、能長期保存、對動物無毒性或毒性較小、無殘留或

9、對環(huán)境無污染的化學藥品。二、影響消毒劑作用的因素 1、消毒劑的性質(zhì)2、消毒劑的濃度3、作用時間與其他環(huán)境條件4、微生物的種類三、化學治療劑 用于消除動物體內(nèi)病原微生物或其他寄 生 物 的 化 學 藥 品 稱 化 學 治 療 劑（chemo-therapeutic agent）。如磺胺類藥物、呋喃類藥物和其他抗代謝藥物。這些藥物的作用有較強的選擇性，主要作用于病原微生物，而對機體毒副作用較小，主要用于臨床治療。 第三節(jié)生物因素對微生物的作用一、抗生素、細菌素和植物殺菌素的殺菌作用 （一）抗生素（antibiotics） 是某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類能殺死或抑制另一些微生物的化學物質(zhì)。其主要

10、來源于放線菌和霉菌，細菌產(chǎn)生的僅有多粘菌素、桿菌肽等少數(shù)幾種。目前發(fā)現(xiàn)的抗生素有2500多種，但臨床常用的僅幾十種。分為廣譜抗生素和窄譜抗生素?？股乜捎糜谥委熂毦腥竞鸵志?。 （二）細菌素（bacteriocin）是某些細菌產(chǎn)生的一類具有殺菌作用的蛋白質(zhì)，只能作用于同種細菌不同的菌株或與它有親緣關(guān)系的其他細菌。例如： 大腸菌素 作用大腸桿菌其他菌株和與它有親緣關(guān)系的志賀氏菌、沙門氏菌、克雷伯氏菌等。細菌素目前只用于細菌的分型和流行病學調(diào)查，對治療疾病意義不大。 （三）植物殺菌素（phytocide） 是某些植物中存在的殺菌物質(zhì)，如黃連、板藍根等都含有殺菌物質(zhì)。 二、噬菌體 噬菌體（bacte

11、riophage,phage）是寄生于細菌、放線菌、霉形體、螺旋體、真菌等其他微生物的一類病毒。在自然界分布及廣，凡是有上述微生物的地方，都有相應(yīng)種類的噬菌體。 1、噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu) 噬菌體有四種外形，即蝌蚪形、球形、絲狀和檸檬形。 典型的噬菌體呈蝌蚪形，由頭部和尾部組成。頭部由核酸和蛋白質(zhì)衣殼構(gòu)成，呈20面體對稱；尾部主要含蛋白質(zhì)，呈螺旋形，分尾領(lǐng)、尾鞘、尾髓、尾板、尾刺和尾絲幾部分，尾部有的能收縮，有的不能收縮。 2、噬菌體的增殖 噬菌體只能在活的敏感菌細胞內(nèi)增殖，并將菌體細胞裂解。其寄生生活有嚴格的菌種及菌型的特異性，即一種噬菌體只能寄生及裂解一種和它相應(yīng)的細菌，或僅作用于該種細菌的某一

12、型。 噬菌體的增殖分4個階段 吸附侵入生物合成成熟和釋放吸 附侵 入生物合成（復(fù)制和成熟）釋 放噬菌體生長跡象的觀察：噬菌體可使混濁的細菌液體培養(yǎng)物變清朗，在固體培養(yǎng)基上可形成噬菌斑。一個噬菌斑由一個噬菌體繁殖而成，不同噬菌體產(chǎn)生的噬菌斑大小、形態(tài)、邊緣和透明度均不同，所以，噬菌斑可用于噬菌體的鑒定、純種分離和計數(shù)。 3、噬菌體與寄主的關(guān)系 有些噬菌體在菌體細胞增殖后，迅速導致菌體裂解，此種噬菌體稱毒性噬菌體或烈性噬菌體。烈性噬菌體的溶解周期烈性噬菌體的溶解周期 有些噬菌體感染細菌后，并不馬上裂解細菌，而是將其基因整合到細菌的基因組中，與細菌的DNA一道復(fù)制，并隨細菌的分裂而傳給后代，此種噬菌

13、體叫溫和噬菌體，整合到細菌DNA上的噬菌體基因叫前噬菌體，帶有前噬菌體的細菌叫溶原性細菌。溫和噬菌體可能會在某個世代自發(fā)地從菌體DNA上脫離并復(fù)制 ，引起菌體裂解而釋放出噬菌體。 溫和噬菌體的增殖溫和噬菌體的增殖噬菌體的應(yīng)用 由于噬菌體感染具有菌種或菌型的特異性，故可用噬菌體進行細菌的鑒定和分型、檢測未知細菌、進行流行病學調(diào)查。此外，噬菌體也是分子生物學及基因工程研究的工具。 第四節(jié)微生物實驗室的生物安全一、生物安全的概念和一般要求（一）生物安全 是指與生物有關(guān)的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康可能產(chǎn)生的潛在的有害影響。而獸醫(yī)微生物實驗室的生物安全是指在轉(zhuǎn)移、檢查和處理病料、污染材料等過程中，避

14、免污染環(huán)境及對人員造成危害。 微生物實驗室的生物安全有三層含義是指防止病原微生物等及其他有害生物或物質(zhì)傳入實驗室（防止實驗室污染）是指防止病原微生物等傳出實驗室（防止散播傳染）是指實驗室人員的自身安全防護（防止自身感染）（二）實驗室生物安全的一般要求 安全要點主要包括： 1、生物安全的潛在危險在于處理臨床樣本，樣本的氣溶膠往往最容易污染實驗室并造成人員感染。所有送檢樣本都應(yīng)視為有傳染性并做相應(yīng)處理。不允許用嘴吸取液體，應(yīng)采用相應(yīng)器械2、涉及有害物質(zhì)的實驗室人員應(yīng)具備防范生物危害的知識，人員的數(shù)量及流動應(yīng)控制。實驗室人員必須穿戴全套防護服，甚至面罩、防護眼鏡等。這些用品用后應(yīng)做滅菌處理。要有良好

15、的衛(wèi)生習慣，尤其要注意洗手。實驗室內(nèi)不允許吃、喝、涂抹化妝品及裝隱形眼鏡。實驗室工作人員必須接種有關(guān)疫苗。3、對所有污染材料及水，包括樣本、試驗器材、動物等必須規(guī)定明確的消毒程序，并予實施。推薦使用含氯5.25%的消毒劑或其他消毒劑。4、最主要的防護并非設(shè)施，而是工作人員本身，造成事故的最常見原因主要是由于工作人員缺乏有關(guān)知識、訓練和粗心大意。5、只有經(jīng)培訓的人員才能處理動物，操作時動物應(yīng)予麻醉或鎮(zhèn)靜，避免傷害人及動物。6、實驗室中處理的微生物提取物，特別是DNA，亦可造成污染，必須注意。二、獸醫(yī)微生物實驗室 的生物安全分類目前國際公認的微生物實驗室分為生物安全（biosafety level ,BSL）1至4級。即：BSL-1實驗室 俗稱 P1實驗室BSL-4實驗室 P2