植物器官培養(yǎng)

1、2022-6-201第四章第四章 植物器官培養(yǎng)植物器官培養(yǎng)第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 第二節(jié)第二節(jié) 營養(yǎng)器官培養(yǎng)營養(yǎng)器官培養(yǎng)第三節(jié)第三節(jié) 繁殖器官培養(yǎng)繁殖器官培養(yǎng) 2022-6-202植物器官培養(yǎng)（植物器官培養(yǎng)（Organ Culture）是指對植物某一器官是指對植物某一器官的全部、部分或器官原基進行離體培養(yǎng)的技術。分為的全部、部分或器官原基進行離體培養(yǎng)的技術。分為營養(yǎng)器官營養(yǎng)器官（根、莖、葉）和（根、莖、葉）和繁殖器官繁殖器官（胚胎、種子、（胚胎、種子、花器官）培養(yǎng)?；ㄆ鞴伲┡囵B(yǎng)。第一節(jié)第一節(jié) 概述概述2022-6-203植植 物物 器器 官官 培培 養(yǎng)養(yǎng)營養(yǎng)器營養(yǎng)器官培養(yǎng)官培養(yǎng)繁殖器繁殖器官培

2、養(yǎng)官培養(yǎng)根培養(yǎng)根培養(yǎng)莖培養(yǎng)（莖培養(yǎng)（ 包括莖尖、莖段）包括莖尖、莖段）葉培養(yǎng)（包括葉原基、葉柄、葉培養(yǎng)（包括葉原基、葉柄、 葉鞘、葉片、子葉）葉鞘、葉片、子葉）花培養(yǎng)花培養(yǎng) （包括花托、花瓣、花絲、（包括花托、花瓣、花絲、 花柄、子房、花藥）花柄、子房、花藥）種子培養(yǎng)（包括成熟與未成熟）種子培養(yǎng)（包括成熟與未成熟）胚胎培養(yǎng)（包括幼胚、成熟胚、胚胎培養(yǎng)（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、胚珠、 子房、胚乳培養(yǎng)子房、胚乳培養(yǎng) ） 外植體形態(tài)發(fā)生形成完整植株的途徑外植體形態(tài)發(fā)生形成完整植株的途徑（一）外植體（一）外植體- -愈傷組織愈傷組織- -完整植株。完整植株。 具體又可分為三種：具體又可分為三種： 1

3、 1、愈傷組織、愈傷組織- -同時長芽和根同時長芽和根- -植株。植株。2 2、愈傷組織、愈傷組織- -莖莖- -根根- -植株。植株。3 3、愈傷組織、愈傷組織- -根根- -芽芽- -植株。植株。4 4、愈傷組織、愈傷組織- -體細胞胚體細胞胚- -植株植株第二節(jié)第二節(jié) 營養(yǎng)器官培養(yǎng)營養(yǎng)器官培養(yǎng)2022-6-206一、離體根的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng)二、莖尖的培養(yǎng)二、莖尖的培養(yǎng)* *三、莖段的培養(yǎng)三、莖段的培養(yǎng)四、離體葉的培養(yǎng)四、離體葉的培養(yǎng)*一、離體根的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng) （一）（一） 意義：意義： 生理代謝研究的優(yōu)良實驗體系生理代謝研究的優(yōu)良實驗體系 研究器官分化形態(tài)建成的良好體系研究器

4、官分化形態(tài)建成的良好體系 建立快速生長的根無性系建立快速生長的根無性系 進行誘變育種進行誘變育種2022-6-2071. 1. 培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇 White培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；2/3或或1/2 MS 和和 B5培養(yǎng)基培養(yǎng)基 注：離體根生長要求提供全部必需元素，蔗糖、硝態(tài)氮效注：離體根生長要求提供全部必需元素，蔗糖、硝態(tài)氮效果好，加入果好，加入VB1、VB6最重要，生長素對離體根影響不一致。最重要，生長素對離體根影響不一致。培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度2527，暗光培養(yǎng)。，暗光培養(yǎng)。2022-6-208（二）（二） 培養(yǎng)方法培養(yǎng)方法 離體根生長的營養(yǎng)要求n1、無機成分 要求培養(yǎng)基中有全部必要元素，因為它是離

5、體生長所需要的，一般的為MS、B5培養(yǎng)基。n2、氮源 氮源有銨態(tài)氮、硝態(tài)氮和可溶性有機氮如氨基酸或酰胺等，其中以硝態(tài)氮的效果最好。加入含各種氨基酸的水解酪蛋白，能促進離體根的生長。n3、碳源 以蔗糖的效果最佳，幾乎為葡萄糖的10倍。蔗糖的濃度為23%。n4、維生素 維生素以B1和B6最為重要，缺少它根的生長受到阻礙，而加入它可使根的生長成倍的加快。B1的使用濃度為0.1-1.0mg/L為宜。n5、生長物質 對離體根的生長而言，生長素的效應最為明顯，在一般情況，加入適量的生長素能促進根的生長，其反應和需要量因植物種而異：n6、溫度和光照 黑暗有利于根的形成，溫度一般在16-25n7、PH 根發(fā)生

6、和生長所需的PH范圍一般為5.0-6.02. 2. 無性繁殖系的建立無性繁殖系的建立 種子消毒種子消毒 接種接種待根伸長后從根尖一端切取長待根伸長后從根尖一端切取長1 1.2cm.2cm的根尖的根尖接種于培養(yǎng)基接種于培養(yǎng)基發(fā)育出側根發(fā)育出側根待側待側根生長約根生長約1 1周后切取側根的根尖進行擴大培養(yǎng)周后切取側根的根尖進行擴大培養(yǎng)又迅速又迅速生長并長出側根生長并長出側根切下進行培養(yǎng)，如此反復切下進行培養(yǎng)，如此反復得到得到從單個根尖衍生而來的離體根的無性系。從單個根尖衍生而來的離體根的無性系。 3. 培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件 暗光和溫度暗光和溫度25-27。2022-6-20114、根的間接增殖n第一步

7、在脫分化培養(yǎng)基上誘導形成愈傷組織，如胡楊的根段培養(yǎng)，可誘導形成白色愈傷組織。n第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導形成芽的分化，如胡楊從綠色愈傷組織分化出小植株。一、離體根的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng) 胡蘿卜根培養(yǎng)5、培養(yǎng)方式 離體根的培養(yǎng)方式有三種類型。 第一種固體培養(yǎng)法，即將根尖接種在固體培養(yǎng)基上，根依靠培養(yǎng)基中的養(yǎng)分和生長物質而不斷生長。 第二種是液體培養(yǎng)法，把根尖接種在無瓊脂的液體培養(yǎng)基中，經(jīng)常振蕩使根獲得充足的氧氣。 第三種是固體-液體培養(yǎng)法，就是把根基部插入固體瓊脂培養(yǎng)基中，根尖浸在液體培養(yǎng)基中，根尖生長而根不斷的伸長和分枝。 2022-6-2015二、莖尖的培養(yǎng)二、莖尖的培養(yǎng)* *（一）莖尖培養(yǎng)

8、概念及類型（一）莖尖培養(yǎng)概念及類型（二）病毒在植物體內的分布（二）病毒在植物體內的分布（三）莖尖培養(yǎng)方法及步驟（三）莖尖培養(yǎng)方法及步驟 ( (一一) )莖尖培養(yǎng)概念及類型莖尖培養(yǎng)概念及類型 莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)：切取莖的先端部分或莖尖分生組織部分，進行：切取莖的先端部分或莖尖分生組織部分，進行無菌培養(yǎng)。無菌培養(yǎng)。 莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小可分為：莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小可分為： 微莖尖培養(yǎng)微莖尖培養(yǎng): : 帶有帶有1-21-2個葉原基的生長點個葉原基的生長點, , 其長度不超其長度不超過過 0.5mm0.5mm。 2022-6-2016 普通莖尖培養(yǎng)：較大的莖尖普通莖尖培養(yǎng)：較大的莖尖

9、( (如幾如幾mmmm到幾十到幾十mm)mm)、芽尖及側、芽尖及側芽。芽。 這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。這種培養(yǎng)技術簡單，操作方便，這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。這種培養(yǎng)技術簡單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時間短莖尖容易成活，成苗所需時間短 。 莖尖培養(yǎng)的意義：莖尖培養(yǎng)的意義： 普通莖尖培養(yǎng)技術簡單，操作方便，易成活，成苗普通莖尖培養(yǎng)技術簡單，操作方便，易成活，成苗 時間短，加快繁殖。時間短，加快繁殖。 微莖尖培養(yǎng)可獲得脫毒苗；微莖尖培養(yǎng)可獲得脫毒苗；2022-6-2017v病毒侵染植株的葉片后，經(jīng)過一段時間，即向附近的細胞增殖轉移。轉移速度很慢，每小時只有幾微米。當葉片內病毒濃度增大到一定量時，

10、就轉移到韌皮部，隨后通過維管束轉移到其它部分。由于病毒轉移速度慢，加上莖尖分生組織無維管束，病毒只能通過胞間連絲傳遞，趕不上細胞分裂和生長的速度，所以生長點的病毒數(shù)量極少，幾乎檢測不出。莖尖培養(yǎng)時，切取的莖尖越小，帶病毒的可能性就越小。莖尖脫毒的基本原理莖尖脫毒的基本原理 ( (二二) )病毒在植物體內的分布病毒在植物體內的分布（三）莖尖培養(yǎng)方法及步驟（三）莖尖培養(yǎng)方法及步驟2022-6-2020取材取材材料處理材料處理及消毒及消毒培培 養(yǎng)養(yǎng)接種接種馴化移栽馴化移栽直接取材：在生長旺盛、枝直接取材：在生長旺盛、枝條健壯、無病的母株上選生條健壯、無病的母株上選生長不久、雜菌污染少的頂梢長不久、雜

11、菌污染少的頂梢（1 12 2cmcm）（）（取前可噴殺菌取前可噴殺菌藥，可頂芽或側芽）。藥，可頂芽或側芽）。從試管苗獲取。從試管苗獲取。2022-6-20211 1、 取材取材取取1-2頂梢頂梢2022-6-20222 2、材料處理及消毒、材料處理及消毒 將采集到的莖尖切成將采集到的莖尖切成0.5-1.0cm0.5-1.0cm長長去葉（休眠去葉（休眠芽預先剝除鱗片）芽預先剝除鱗片） 流水沖洗流水沖洗2-4h 2-4h 7575的酒的酒精中處理精中處理30s 30s 稀釋稀釋2020倍的次氯酸鈉中浸倍的次氯酸鈉中浸5-8min(5-8min(取取自老枝條上的可適當延長時間）自老枝條上的可適當延長

12、時間）用無菌水沖洗數(shù)次，用無菌水沖洗數(shù)次，準備接種。準備接種。 3 3、接種接種 接種前再剝掉一些葉片，使莖尖接種前再剝掉一些葉片，使莖尖0.5cm 0.5cm 接種接種 要求：隨切隨接，動作迅速。要求：隨切隨接，動作迅速。 亦可將切下莖尖材亦可將切下莖尖材 料在料在1 15% 5% V VC C液中浸一下。液中浸一下。2022-6-20234 4、培養(yǎng)的方法和程序培養(yǎng)的方法和程序（1）培養(yǎng)基）培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基 MS、White、 B5、 Heller培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 蔗糖作碳源效果好，濃度蔗糖作碳源效果好，濃度23%。 激素（激素（ 2，4-D，IAA， NAA ）和有機添加物有

13、明顯）和有機添加物有明顯影響。但激素濃度以影響。但激素濃度以0.1mg/L為宜，不要太高。為宜，不要太高。2022-6-2024生長太慢：生長太慢：莖尖不增大莖尖不增大變綠變綠細胞逐漸老化細胞逐漸老化休眠休眠 原因原因: 生長素濃度太低；溫度過低或過高；生長素濃度太低；溫度過低或過高；生長太快：生長太快：莖尖迅速增大莖尖迅速增大愈傷組織愈傷組織喪失成苗能力喪失成苗能力 原因原因: 生長素濃度過高；光照太弱或溫度太高生長素濃度過高；光照太弱或溫度太高； 生長正常：生長正常：莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色 逐漸變綠，并伸長，葉原基發(fā)育成可見的小

14、葉，逐漸變綠，并伸長，葉原基發(fā)育成可見的小葉， 進而形成小苗。進而形成小苗。2022-6-2025莖尖生長狀態(tài)莖尖生長狀態(tài)（2 2）初代培養(yǎng)條件）初代培養(yǎng)條件 每天每天 光照光照16h16h， 光強度光強度1500-30001x1500-30001x， 溫度溫度252522 2022-6-2026（3 3） 繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng) 莖尖長成的新梢莖尖長成的新梢切成小段切成小段增殖培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)基中 1個月左右個月左右新梢又可切成小段新梢又可切成小段再轉入新培養(yǎng)基再轉入新培養(yǎng)基建立和維持了莖尖無性系。建立和維持了莖尖無性系。 （即微型扦插）（即微型扦插） 繼代培養(yǎng)可用繼代培養(yǎng)可用MS培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。

15、2022-6-2027 （4 4） 誘導生根誘導生根 采用采用12MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基 加入一定的生長素類調節(jié)物質，如加入一定的生長素類調節(jié)物質，如NAA、IBA等。等。新梢基部浸入新梢基部浸入50或或100mg/l的的IBA溶液處理溶液處理4-8h，然后轉移到無激素的生根培養(yǎng)基中。然后轉移到無激素的生根培養(yǎng)基中。2022-6-2028(5) (5) 馴化移栽入土馴化移栽入土 在生根培養(yǎng)在生根培養(yǎng)1 1個月左右個月左右生長健壯而發(fā)達的根系生長健壯而發(fā)達的根系煉苗煉苗移栽移栽 管理（溫、光、濕、氣）管理（溫、光、濕、氣）2022-6-2029 指不帶芽和帶一個以上定芽或不定芽（包括塊莖、球莖指不帶芽

16、和帶一個以上定芽或不定芽（包括塊莖、球莖在內）的幼莖切段的無菌培養(yǎng)。在內）的幼莖切段的無菌培養(yǎng)。 2022-6-2030三、莖段培養(yǎng)三、莖段培養(yǎng)莖段培養(yǎng)用于快速繁殖的優(yōu)點莖段培養(yǎng)用于快速繁殖的優(yōu)點培養(yǎng)技術簡單易行，繁殖速度較快，每年可增殖105-1012株苗；加速良種和珍貴植物的繁殖，芽生芽方式增殖的苗木質量好，且無病，性狀均一；解決不能用種子繁殖的無性繁殖植物的快速繁殖的問題，且可節(jié)省種株；試管苗便于運輸和防止種苗帶菌傳播，有利于國際種質交流；試管苗可用于保存某些難以用種子保存的種質資源。 （一）定義：（一）定義： 離體葉培養(yǎng)指包括葉原基、葉柄、葉離體葉培養(yǎng)指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子

17、葉在內的葉組織的無鞘、葉片、子葉在內的葉組織的無菌培養(yǎng)。菌培養(yǎng)。 它大多經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再它大多經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再由愈傷組織分化出芽和根。由愈傷組織分化出芽和根。 其中葉片培養(yǎng)是一個典型的代表。其中葉片培養(yǎng)是一個典型的代表。 2022-6-2032四、離體葉的培養(yǎng)四、離體葉的培養(yǎng)* *（二）意義：（二）意義： 1.1.是繁殖稀有名貴品種的有效手段；是繁殖稀有名貴品種的有效手段； 2.2.可用于研究形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題。可用于研究形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題。2022-6-2033（三）葉片的離體培養(yǎng)方法（三）葉片的離體培養(yǎng)方法 發(fā)育方式：葉片培養(yǎng)再生

18、成完整植株有兩種方式：發(fā)育方式：葉片培養(yǎng)再生成完整植株有兩種方式： 是直接誘導形成芽和根是直接誘導形成芽和根完整植株；完整植株； 是先誘導形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化形成芽和根是先誘導形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化形成芽和根完整植株。完整植株。 其中，以第二種方式最為常見。其中，以第二種方式最為常見。2022-6-2034葉片離體培養(yǎng)發(fā)育方式（成苗途徑）葉片離體培養(yǎng)發(fā)育方式（成苗途徑）2022-6-2035葉原基葉原基葉鞘葉鞘葉片葉片子葉子葉葉柄葉柄愈傷組織愈傷組織芽和根芽和根試管苗試管苗 不定芽不定芽 1. 1. 材料選擇及滅菌材料選擇及滅菌 取植物的幼嫩葉片，切割成適當大?。ㄈ≈参锏挠啄?/p>

19、葉片，切割成適當大?。?3cm23cm），），在流水中沖洗干凈。再用在流水中沖洗干凈。再用7575酒精浸泡約酒精浸泡約10s10s 飽和漂白粉液中浸飽和漂白粉液中浸3-15min3-15min，或在，或在0.10.1升汞中浸升汞中浸3-3-5min 5min 無菌水沖洗數(shù)次無菌水沖洗數(shù)次無菌的干濾紙上吸無菌的干濾紙上吸干水分干水分接種。接種。 注：細嫩與成熟葉片消毒時間不同注：細嫩與成熟葉片消毒時間不同2022-6-20362.2.接種接種 外植體大?。和庵搀w大?。?.5cm0.5cm2 2 薄片（葉柄、子葉）薄片（葉柄、子葉）上表皮朝上接種培養(yǎng)基。最好帶葉脈，注意極性上表皮朝上接種培養(yǎng)基。最

20、好帶葉脈，注意極性2022-6-20373.3.培養(yǎng)培養(yǎng) （1）培養(yǎng)基：）培養(yǎng)基： MS、B5、White 、N6；蔗糖蔗糖3%； 2.4D利于愈傷組織形成，利于愈傷組織形成，NAA抑制芽形成，利于根發(fā)生，抑制芽形成，利于根發(fā)生，KT、6-BA利于芽形成。利于芽形成。 愈傷組織誘導：愈傷組織誘導：BA 1-3mg/L,NAA 0.25-1mg/L； 分化培養(yǎng)：分化培養(yǎng)：CTK 2 mg/L； 生根培養(yǎng)：生根培養(yǎng)：NAA 0.51.0 mg/L 2022-6-2038(2)(2)培養(yǎng)過程：培養(yǎng)過程： 培養(yǎng)約培養(yǎng)約2周至周至4周周形成愈傷組織形成愈傷組織再分化培養(yǎng)基上再分化培養(yǎng)基上（附加（附加6-

21、BA 2mgL ）進行分化培養(yǎng)）進行分化培養(yǎng)約約10d左右，愈左右，愈傷組織開始轉綠出現(xiàn)綠色芽點傷組織開始轉綠出現(xiàn)綠色芽點發(fā)育成無根苗發(fā)育成無根苗生生根培養(yǎng)基（附加根培養(yǎng)基（附加 NAA0.5-l mg/L ） 發(fā)育形成完整植發(fā)育形成完整植株。株。2022-6-2039(3)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)條件： 溫度：溫度：252 光照時間：光照時間：10-12h， 光照強度：光照強度：1500-3000 Lx 。2022-6-2040 葉的培養(yǎng)比胚，莖尖和莖段培養(yǎng)難度大。葉的培養(yǎng)比胚，莖尖和莖段培養(yǎng)難度大。 首先要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼葉比成熟葉易首先要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子

22、葉比葉片易培養(yǎng)。培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)。 其次要添加適當?shù)纳L素和細胞分裂素，保證利于葉其次要添加適當?shù)纳L素和細胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。組織的脫分化和再分化。 2022-6-2041第三節(jié)第三節(jié) 生殖器官的培養(yǎng)生殖器官的培養(yǎng)2022-6-2042一、花器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)二、種子的培養(yǎng)二、種子的培養(yǎng)三、胚胎的培養(yǎng)三、胚胎的培養(yǎng)*2022-6-2043一、花器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)1. 1. 定義：定義： 花器官培養(yǎng)指整個花器及其花器官培養(yǎng)指整個花器及其組成部分如花托、花瓣、花組成部分如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等的絲、花柄、子房、花藥等的無菌培養(yǎng)。無菌培養(yǎng)。

23、 2022-6-2044一、花器官的培養(yǎng)（花蕾）一、花器官的培養(yǎng)（花蕾）2 2、意義：、意義： 通過離體花芽培養(yǎng)可了解整體植物和內源激素在花芽性別通過離體花芽培養(yǎng)可了解整體植物和內源激素在花芽性別決定中所起的作用決定中所起的作用 可以了解花器各部分對果實和種子發(fā)育的作用可以了解花器各部分對果實和種子發(fā)育的作用 內、外源激素在果實種子發(fā)育過程中的調控作用內、外源激素在果實種子發(fā)育過程中的調控作用 生產(chǎn)上也可用于珍貴品種的擴大繁殖。生產(chǎn)上也可用于珍貴品種的擴大繁殖。2022-6-20452022-6-2046二、種子培養(yǎng)二、種子培養(yǎng)2022-6-20471.1.定義：定義： 種子培養(yǎng)是指受種子培養(yǎng)

24、是指受精后發(fā)育完全的精后發(fā)育完全的成熟種子和發(fā)育成熟種子和發(fā)育不完全的未成熟不完全的未成熟種子的無菌培養(yǎng)。種子的無菌培養(yǎng)。2. 2. 意義意義 ：可以打破種子休眠，可以打破種子休眠，促進萌發(fā)；促進萌發(fā)； 通過胚胎拯救解決遠緣雜種通過胚胎拯救解決遠緣雜種敗育性，產(chǎn)生后代；敗育性，產(chǎn)生后代；快速繁殖苗木快速繁殖苗木 優(yōu)點：植株分化容易，優(yōu)點：植株分化容易，無菌操作方便無菌操作方便2022-6-2048 定義：定義：植物胚胎培養(yǎng)是指對植物的胚植物胚胎培養(yǎng)是指對植物的胚( (幼胚、成熟胚幼胚、成熟胚) )、子房、胚珠和胚乳進行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植株子房、胚珠和胚乳進行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植株

25、的技術。的技術。2022-6-2049三、胚胎的培養(yǎng)三、胚胎的培養(yǎng)*胚胎培養(yǎng)已有近百年的歷史：胚胎培養(yǎng)已有近百年的歷史：19041904年的年的HaningHaning最早成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣椒的胚，最早成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣椒的胚，并萌發(fā)形成小苗。并萌發(fā)形成小苗。3030年代年代 成功地把蘭科植物的胚培養(yǎng)成小植株。成功地把蘭科植物的胚培養(yǎng)成小植株。4040年代在蘋果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、馬鈴薯、年代在蘋果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、馬鈴薯、甘藍與大白菜的種間雜種的胚胎培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)甘藍與大白菜的種間雜種的胚胎培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)及子房與胚珠培養(yǎng)均取得了不同程度的進展及子房與胚珠培養(yǎng)均取得了不同

26、程度的進展2022-6-2050（一）胚胎培養(yǎng)的意義（一）胚胎培養(yǎng)的意義克服遠緣雜種的不育性克服遠緣雜種的不育性 ；使胚發(fā)育不全的植物獲得后代；使胚發(fā)育不全的植物獲得后代； 縮短育種年限縮短育種年限 ；研究與胚發(fā)育有關的內外因素。研究與胚發(fā)育有關的內外因素。2022-6-2051（二）離體胚培養(yǎng)（二）離體胚培養(yǎng) 離體胚培養(yǎng)包括胚胎發(fā)生過程中不同發(fā)育期的胚，一離體胚培養(yǎng)包括胚胎發(fā)生過程中不同發(fā)育期的胚，一般可分為成熟胚和幼胚培養(yǎng)般可分為成熟胚和幼胚培養(yǎng)。2022-6-20521.1.成熟胚培養(yǎng)成熟胚培養(yǎng) 指子葉期后至發(fā)育完全的胚。指子葉期后至發(fā)育完全的胚。培養(yǎng)較易成功，在含有大量無機元素和糖的基

27、本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)較易成功，在含有大量無機元素和糖的基本培養(yǎng)基上，就能正常生長成幼苗。就能正常生長成幼苗。將成熟或未成熟種子用將成熟或未成熟種子用70酒精進行幾秒鐘的表面消毒酒精進行幾秒鐘的表面消毒無菌水沖洗無菌水沖洗3-4次次無菌條件下進行解剖，取出胚并接種無菌條件下進行解剖，取出胚并接種在適當?shù)呐囵B(yǎng)基上培養(yǎng)。在適當?shù)呐囵B(yǎng)基上培養(yǎng)。2022-6-2053 培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：White Tukey MS無機鹽無機鹽+糖糖(1-2%)+生長輔助物質生長輔助物質(激素、激素、AA、活性炭、維生素等活性炭、維生素等)2022-6-2054幼胚是指子葉期以前的幼小胚。幼胚是指子葉期以前的幼小胚。由于幼胚培

28、養(yǎng)在遠緣雜交育種上有極大的利用價值，由于幼胚培養(yǎng)在遠緣雜交育種上有極大的利用價值，其研究應用越來越深入廣泛。其研究應用越來越深入廣泛。幼胚培養(yǎng)技術：心形期胚或更早期的胚（長度僅幼胚培養(yǎng)技術：心形期胚或更早期的胚（長度僅0.10.10.20.2mmmm）胚越小就越難培養(yǎng)胚越小就越難培養(yǎng) , ,幼胚培養(yǎng)成功的有大麥、薺菜、幼胚培養(yǎng)成功的有大麥、薺菜、甘蔗、甜菜、胡蘿卜等甘蔗、甜菜、胡蘿卜等 2022-6-2055 2. 2. 幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)：幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)：（1 1）未成熟胚胎的培養(yǎng)有三種不同的發(fā)育）未成熟胚胎的培養(yǎng)有三種不同的發(fā)育方式：方式：a. a. 繼續(xù)進行正常的胚胎發(fā)育，維持繼

29、續(xù)進行正常的胚胎發(fā)育，維持“胚性生長胚性生長”；b. b. 早熟萌發(fā)，即培養(yǎng)后迅速萌發(fā)成幼苗；早熟萌發(fā)，即培養(yǎng)后迅速萌發(fā)成幼苗；c. c. 胚在培養(yǎng)基中發(fā)生細胞增殖形成愈傷組織，并由此胚在培養(yǎng)基中發(fā)生細胞增殖形成愈傷組織，并由此再分化形成多個胚狀體或芽原基。再分化形成多個胚狀體或芽原基。 2022-6-2056（2 2）幼胚培養(yǎng)技術）幼胚培養(yǎng)技術幼胚培養(yǎng)的操作方法與成熟胚培養(yǎng)方法基本相同。幼胚培養(yǎng)的操作方法與成熟胚培養(yǎng)方法基本相同。值得注意值得注意的是切取幼胚必須在高倍解剖鏡下進行，的是切取幼胚必須在高倍解剖鏡下進行，操作時要細心，盡量取出完整的胚。操作時要細心，盡量取出完整的胚。幼胚培養(yǎng)成功

30、的關鍵，是提供幼胚所必需的營養(yǎng)幼胚培養(yǎng)成功的關鍵，是提供幼胚所必需的營養(yǎng)和環(huán)境條件。和環(huán)境條件。2022-6-2057 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 幼胚對培養(yǎng)基要求較高，常用的培養(yǎng)基有幼胚對培養(yǎng)基要求較高，常用的培養(yǎng)基有TukeyTukey，NitchNitch、 MSMS，B5B5培養(yǎng)基；培養(yǎng)基；2022-6-2058通常存在的影響條件如下：通常存在的影響條件如下：生長調節(jié)物質生長調節(jié)物質 不同植物的胚培養(yǎng)需要的生長物質不同。不同植物的胚培養(yǎng)需要的生長物質不同。如如IAAIAA可明顯促進向日葵胚的生長；可明顯促進向日葵胚的生長；IAAIAA，KtKt的共同作用可促進薺菜幼胚的生長；的共同作用可促進薺菜幼胚

31、的生長；一般認為一般認為IAAIAA可使胚的長度增加；可使胚的長度增加；加入加入BABA可提高胚的生存機會；可提高胚的生存機會；2022-6-2059天然提取物的作用天然提取物的作用 椰乳對胚培養(yǎng)有一定的促進作用（番茄胚在含有椰乳對胚培養(yǎng)有一定的促進作用（番茄胚在含有50%50%椰乳的培養(yǎng)基中可維持生長椰乳的培養(yǎng)基中可維持生長 ）一些瓜類的胚乳提取物能促進胚生長的能力。一些瓜類的胚乳提取物能促進胚生長的能力。 2022-6-2060溫光條件溫光條件 對于大多數(shù)植物的胚來說，在對于大多數(shù)植物的胚來說，在25-3025-30為宜為宜 早熟果樹如桃的種胚，必須經(jīng)過一定的低溫春化階段早熟果樹如桃的種胚

32、，必須經(jīng)過一定的低溫春化階段才能正常萌發(fā)生長，而馬鈴薯胚以才能正常萌發(fā)生長，而馬鈴薯胚以2020為好。光照可為好。光照可以促進某些植物胚的轉綠，利于胚芽生長，而黑暗則以促進某些植物胚的轉綠，利于胚芽生長，而黑暗則利于胚根生長。因此以光暗交替培養(yǎng)較為有利利于胚根生長。因此以光暗交替培養(yǎng)較為有利。2022-6-2061其它條件其它條件 胚培養(yǎng)中除要求較高的蔗糖（胚培養(yǎng)中除要求較高的蔗糖（4.5%4.5%）濃度、高）濃度、高滲透壓以外，還要求較高濃度的氨基酸及無機鹽。滲透壓以外，還要求較高濃度的氨基酸及無機鹽。 2022-6-20622022-6-2063(三三)胚珠培養(yǎng)胚珠培養(yǎng). .定義：定義：胚

33、珠培養(yǎng)是將授粉的子房在無菌條件下解剖后，取胚胚珠培養(yǎng)是將授粉的子房在無菌條件下解剖后，取胚珠置于培養(yǎng)基培養(yǎng)的過程。有時也把胚珠連同胎座一珠置于培養(yǎng)基培養(yǎng)的過程。有時也把胚珠連同胎座一起取下來培養(yǎng)。起取下來培養(yǎng)。2022-6-2064柱頭柱頭花柱花柱子房子房花?；ü；ㄍ谢ㄍ谢ńM成花組成2022-6-2065胚囊胚囊卵細胞卵細胞珠心珠心珠珠 孔孔反足細胞反足細胞珠珠 被被胚珠胚珠極核極核 株柄株柄2022-6-20662.2.意義：意義： 胚珠培養(yǎng)可以解決象蘭科植物成熟胚較小不易培養(yǎng)的胚珠培養(yǎng)可以解決象蘭科植物成熟胚較小不易培養(yǎng)的問題。問題。 另一方面在未受精的胚珠培養(yǎng)中，可誘發(fā)大孢子發(fā)另一方面在未受精的胚珠培養(yǎng)中，可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體，用于單倍體育種。育成單倍體，用于單倍體育種。 3.3.培養(yǎng)技術：培養(yǎng)技術： 從花中取出子房從花中取出子房 70%酒精消毒酒精消毒30秒秒 無菌水沖洗無菌水沖洗 5%次氯酸鈉液中滅菌次氯酸鈉液中滅菌10分鐘分鐘 無菌水沖洗數(shù)次無菌水沖洗數(shù)次 在無菌條件下進行解剖在無菌條件下進行解剖 取出胚珠取出胚珠 放在培養(yǎng)基上放在培養(yǎng)基上 培養(yǎng)培養(yǎng) 基本培養(yǎng)基：用基本培養(yǎng)基：用Nistch培養(yǎng)基培養(yǎng)基 MS、N6、B5等培養(yǎng)基