微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一 普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌染色與形態(tài)觀察第一部分：顯微鏡的使用一、目的要求1熟悉普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、油鏡的使用原理和顯微鏡的維護(hù)方法。2學(xué)會(huì)正確使用油鏡觀察細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊構(gòu)造。3了解各種顯微鏡的主要特征。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造微生物實(shí)驗(yàn)室中最常用的是普通光學(xué)顯微鏡，它的構(gòu)造可分為機(jī)械部分和光學(xué)部分。1、機(jī)械部分普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡的機(jī)械部分通常包括以下幾個(gè)部分：目鏡、鏡筒、基座回轉(zhuǎn)器、物鏡、載物臺(tái)、光圈、聚光器、光源、鏡臂、細(xì)調(diào)節(jié)器、粗調(diào)節(jié)器等。2、光學(xué)部分：目鏡、物鏡、聚光器、光圈、光源。（二）放大倍數(shù)標(biāo)本首先經(jīng)物鏡放大，在目鏡的焦距平面上形成一個(gè)實(shí)

2、像，再經(jīng)過(guò)目鏡放大成最終的虛像?？偟姆糯蟊稊?shù)是物鏡放大倍數(shù)與目鏡放大倍數(shù)的乘積。物鏡的放大倍數(shù)愈大，其工作距離（物鏡鏡頭到標(biāo)本片之間的距離）愈短，這時(shí)光圈就要打開(kāi)得愈大。顯微鏡的放大倍數(shù)放大倍數(shù)總的放大倍數(shù)低倍鏡高倍鏡油鏡物鏡1045100目鏡1010101004501000（三）分辨距離與分辨力顯微鏡的性能受物鏡的分辨距離或分辨力所限制。分辨距離即透鏡所能分辨的兩個(gè)物點(diǎn)之間的最小距離，分辨距離愈小，透鏡的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距離來(lái)衡量顯微鏡的分辨力。 R=0.61/N.A式中：R-分辨距離； -作用光的波長(zhǎng)；N.A-數(shù)值口徑。一些介質(zhì)的折射率介 質(zhì)折射率空氣水玻璃香柏油1

3、13551.56三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一） 材料：顯微鏡，香柏油，擦鏡紙。（二） 方法：細(xì)菌很小，須使用油鏡方可觀察到。油鏡是顯微鏡上最重要的部件之一，觀察時(shí)與玻片非常接近，稍不小心即可壓碎玻片，更嚴(yán)重的是損壞鏡頭，故必須極其仔細(xì)地學(xué)習(xí)油鏡的使用方法：1、為使低倍鏡取得最適之光源，可將低倍鏡頭調(diào)節(jié)到離載物臺(tái)約1cm的高度，將聚光器提高，光圈完全打開(kāi)，然后調(diào)節(jié)電壓旋鈕至視野最合適。2、 滴一滴香柏油，固定于載物臺(tái)上，用推動(dòng)器調(diào)節(jié)到載物臺(tái)正中。在雙目側(cè)視下，下旋粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭浸入油中幾乎與標(biāo)本片相接觸。然后眼睛從目鏡觀察（如光線不足，可適當(dāng)增大電源電壓），徐徐上旋粗調(diào)節(jié)器至看到模糊物像之后，再用細(xì)調(diào)節(jié)

4、器調(diào)節(jié)以使物像清晰。如鏡頭已離開(kāi)油面還未看到物像，則再重新操作。3、 更換標(biāo)本時(shí)應(yīng)先提高油鏡頭，再更換玻片，切勿隨意移動(dòng)顯微鏡的位置。4、 油鏡觀察完畢后，按“顯微鏡保護(hù)”中（6）項(xiàng)處理。5、 最后將油鏡各部分還原，聚光器下降，反光鏡垂直于鏡座，鏡頭轉(zhuǎn)成八字形，以免與聚光器發(fā)生碰撞。四、思考題1、使用顯微鏡時(shí)為何調(diào)節(jié)下列構(gòu)造？反光鏡，光圈，聚光器，粗調(diào)節(jié)器，細(xì)調(diào)節(jié)器，鏡頭回轉(zhuǎn)器。答：聚光器的位置之升降可影響視野的明亮度，上升則視野明亮，下降則光線減弱。光圈的放大或縮小也可控制視野明亮程度。粗調(diào)節(jié)器和細(xì)調(diào)節(jié)器均是調(diào)節(jié)焦距的裝置。鏡頭回轉(zhuǎn)器為裝置物鏡和轉(zhuǎn)換物鏡之用。2、使用不同放大倍數(shù)的物鏡時(shí)，工

5、作距離與光圈的關(guān)系。如何利用這一原理用好顯微鏡？答：物鏡的放大倍數(shù)愈大，其工作距離（物鏡鏡頭到標(biāo)本片之間的距離）愈短。標(biāo)本首先經(jīng)物鏡放大，在目鏡的焦距平面上形成一個(gè)實(shí)像，再經(jīng)過(guò)目鏡放大成最終的虛像?？偟姆糯蟊稊?shù)是物鏡放大倍數(shù)與目鏡放大倍數(shù)的乘積。3、為何要選用與玻璃折射率相似的香柏油作為油鏡的介質(zhì)？油鏡的原理是什么？答：香柏油只在使用油鏡頭時(shí)（100倍物鏡）使用，因?yàn)楫?dāng)鏡與裝片之間的介質(zhì)為空氣時(shí)，由于空氣（n= 1.52）的折射率不同，光線會(huì)發(fā)生折射，不僅使進(jìn)入物鏡的光線減少，降低了視野的照明度，而且會(huì)減少鏡口角。當(dāng)以香柏油（n=1.515）為介質(zhì)時(shí)，由于它的折射率與玻璃相近，光線經(jīng)過(guò)載玻片后

6、可直接通過(guò)香柏油進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射，不僅增加了視野的照明度，更重要的是通過(guò)增加數(shù)值孔徑達(dá)到提高分辨率的目的。可見(jiàn)光的波長(zhǎng)平均為0.55m。當(dāng)使用數(shù)值孔徑為0.65的高倍鏡時(shí)，它能辨別兩點(diǎn)之間的距離為 0.42m；而使用數(shù)值孔徑為1.25的油鏡時(shí)，能辨別兩點(diǎn)之間的距離則為0.22m。選用香柏油是因?yàn)樗恼凵渎适?.5154、顯微鏡有哪幾種？各自的主要特征是什么？答：光學(xué)顯微鏡中除明視野顯微鏡外，還有暗視野顯微鏡、相差顯微鏡和熒光顯微鏡；除光學(xué)顯微鏡外，還有電子顯微鏡。暗視野顯微鏡：在普通光學(xué)顯微鏡載物臺(tái)下安裝一個(gè)暗視野聚光器即成暗視野顯微鏡。相差顯微鏡：相差顯微鏡成像的原理和普通光學(xué)顯微鏡一樣

7、，所不同的是相差顯微鏡包括有環(huán)狀光闌、裝有相板的相差物鏡和全軸調(diào)整望遠(yuǎn)鏡三個(gè)特殊部分。熒光顯微鏡：熒光顯微鏡的主要特征是以紫外線為光源，當(dāng)照射到用熒光素標(biāo)記的細(xì)菌時(shí)，熒光素吸收了紫外線的能量后，再發(fā)射出可見(jiàn)的橙、黃、淺綠色熒光。由于用熒光素標(biāo)記的菌體各種結(jié)構(gòu)中的溶解、吸附或化合情況不一，于是發(fā)出不同色調(diào)和亮度的熒光，從而可以觀察細(xì)菌的不同結(jié)構(gòu)。電子顯微鏡：電子顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)和工作原理與普通光學(xué)顯微鏡非常相似，不同的是用電子流代替光線，用電磁圈代替透鏡聚焦。第二部分：細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查方法一、目的要求1、 了解不染色標(biāo)本檢查法，用懸滴法觀察活細(xì)菌及其動(dòng)力。2、 熟悉染色標(biāo)本的制備過(guò)程，掌握革蘭氏染

8、色法及其結(jié)果判斷，了解革蘭氏染色法原理。3、 了解其它常用染色法。二、實(shí)驗(yàn)原理檢查細(xì)菌形態(tài)的主要工具是顯微鏡，可根據(jù)不同目的將細(xì)菌染色或不染色進(jìn)行鏡檢。常用的堿性染料有結(jié)晶紫、美藍(lán)、堿性復(fù)紅等。染色法又分單染色法和復(fù)染色法兩大類。單染色法即僅用一種染料著色，所有的細(xì)菌均被染成一種顏色，無(wú)鑒別細(xì)菌的作用。復(fù)染色法又稱鑒別染色法，通常用二種或二種以上的染料著色，由于不同種類的細(xì)菌或同種細(xì)菌的不同組成結(jié)構(gòu)對(duì)染料有不同的反應(yīng)性而被染成不同的顏色，從而有鑒別細(xì)菌的作用。2、 最常用的細(xì)菌復(fù)染色法是革蘭氏染色法（Gram stain）。通過(guò)革蘭氏染色法操作，可把細(xì)菌分成兩大類：革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)

9、菌。凡能使第一種染料結(jié)晶紫保留藍(lán)色的細(xì)菌叫革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，凡被灑精脫色后染上對(duì)比顏料沙黃或稀釋復(fù)紅而呈紅色的細(xì)菌叫做革蘭氏陰性細(xì)菌。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）染色標(biāo)本的制備及觀察1、復(fù)染色法（革蘭氏染色法）材料：葡萄球菌瓊脂培養(yǎng)物 1支大腸桿菌瓊脂培養(yǎng)物 1支革蘭氏染液一套：結(jié)晶紫、95%酒精、路哥氏碘液、稀釋復(fù)紅各1瓶。玻片，接種環(huán)，酒精燈，吸水紙等。方法：（1）涂片 用葡萄球菌和大腸桿菌混合涂片。 取玻片一塊，拭凈。 用無(wú)菌接種環(huán)取生理鹽水一滴，放在玻片中央（如被檢材料是液體，可不加生理鹽水）。 左手斜持菌種試管，右手將菌種試管棉塞稍加轉(zhuǎn)動(dòng)，以便拔下。 右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌后，用右手小拇指拔開(kāi)

10、菌種試管棉塞，試管口通過(guò)火焰，將接種環(huán)插入試管中取菌少許（切不可多，更不可將培養(yǎng)基刮下）。 試管口再通過(guò)火焰，塞好棉塞。 將接種環(huán)上的細(xì)菌加入玻片上之水滴內(nèi)，磨勻，涂成直徑為1cm大小的薄菌膜。 接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌。.（2）干燥 涂片置于空氣中，使其自然干燥。（3）固定 干燥后將涂片在火焰上緩緩?fù)ㄟ^(guò)三次，此為“固定”。目的是使細(xì)菌粘于玻片上，染色和水沖時(shí)不易脫落；且細(xì)菌為蛋白質(zhì)，被熱凝固可保持完整形態(tài)。（4）染色 初染媒染脫色復(fù)染 加結(jié)晶紫染液于標(biāo)本上，使其覆滿標(biāo)本，染12分鐘。 細(xì)水沖洗。 加路哥氏碘溶液經(jīng)1分鐘。 水洗。 加95%酒精于玻片上來(lái)回流動(dòng)，傾去酒精。如此重復(fù)23次（約30秒鐘）。

11、 水洗。 加稀釋復(fù)紅染液，染約1分鐘。 水洗，用吸水紙吸干。（5）鏡檢 革蘭氏陽(yáng)性菌在結(jié)晶紫著色后不易被酒精脫色，故仍為深藍(lán)色或紫色；革蘭氏陰性菌在結(jié)晶紫著色后易被酒精脫色，故經(jīng)稀釋復(fù)紅復(fù)染后成紅色。三、實(shí)驗(yàn)記錄革蘭氏染色過(guò)程：取玻片一塊，在玻片上滴三小滴水（有一定的距離），分別用接種環(huán)取EC（大腸桿菌）和BS（金黃色葡萄球菌）與兩邊的水滴上，并混勻，灼燒接種環(huán)后再分別取EC和BS于中間的水滴上混勻（即中間水滴是兩種菌的混合物），并在酒精燈下灼燒至干（小心不要將玻片炸裂），用結(jié)晶紫進(jìn)行初染，細(xì)水沖洗后，加路哥氏碘液進(jìn)行媒染，水洗后加酒精脫色23次，水沖洗后加稀釋復(fù)紅染液復(fù)染一分鐘，水洗，并用吸

12、水紙吸干。大腸桿菌為革蘭氏陰性菌，染色后呈紫紅色。普葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，染色后呈現(xiàn)藍(lán)紫色。以下為實(shí)驗(yàn)觀測(cè)圖：四、思考題1染色法在微生物學(xué)上有何實(shí)際意義？染色法可以更方便的觀察細(xì)菌的具體形態(tài)，更方便觀察細(xì)菌，革蘭氏染色法有更重要的意義，可以鑒別細(xì)菌，把眾多的細(xì)菌分為兩大類，革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，在實(shí)驗(yàn)方面，可以通過(guò)殺死陽(yáng)性或陰性菌而得到目的菌。2比較復(fù)染色法與單染色法的優(yōu)缺點(diǎn)。答：?jiǎn)稳旧ǎ簝?yōu)點(diǎn)：僅用一種染料著色，所有的細(xì)菌均被染成一種顏色，簡(jiǎn)單方便，可用來(lái)觀察細(xì)菌的形態(tài)和排列方式。缺點(diǎn)：但無(wú)鑒別細(xì)菌的作用。復(fù)染色法：優(yōu)點(diǎn)：用二種或二種以上的染料著色，由于不同種類的細(xì)菌或同種細(xì)菌的不同

13、組成結(jié)構(gòu)對(duì)染料有不同的反應(yīng)性而被染成不同的顏色，從而有鑒別細(xì)菌的作用。缺點(diǎn)：使用試劑較多，過(guò)程較單染色法更復(fù)雜繁瑣。3以革蘭氏染色法為例，說(shuō)明它至少要涉及幾種試劑？各起何作用？答：至少用到4種試劑。結(jié)晶紫溶液進(jìn)行初染，路哥氏碘液進(jìn)行媒染，95%酒精進(jìn)行脫色，稀釋復(fù)紅染液進(jìn)行復(fù)染。4要確證一個(gè)未知細(xì)菌的革蘭氏染色性質(zhì)，你可用什么方法來(lái)說(shuō)明你的結(jié)果是可靠的？答：通過(guò)在顯微鏡下的菌體被染的顏色可以判斷，凡能使第一種染料結(jié)晶紫保留藍(lán)色的細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，凡被灑精脫色后染上對(duì)比顏料沙黃或稀釋復(fù)紅而呈紅色的細(xì)菌為革蘭氏陰性細(xì)菌。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的的制備滅菌及接種技術(shù)培養(yǎng)基的制備和滅菌一、

14、目的要求掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基應(yīng)具備的條件及其制備方法。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工配制的供給細(xì)菌或其它微生物生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。微生物的種類雖然繁多，但對(duì)基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和水分等的要求卻有共同性。這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是：提供合成菌體和代謝產(chǎn)物的原料；提供生命活動(dòng)必需的能量；調(diào)節(jié)代謝環(huán)境。作為培養(yǎng)基必須具備下列條件：含有適當(dāng)?shù)乃趾鸵欢ㄅ浔鹊倪m宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。具有合適的酸堿度（pH值）。有適當(dāng)?shù)奈锢頎顟B(tài)：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基必須經(jīng)滅菌成為無(wú)菌狀態(tài)后方能使用。利用培養(yǎng)基對(duì)細(xì)菌等進(jìn)行人工培養(yǎng)，在微生物學(xué)上有重要意義。例如，細(xì)菌純培養(yǎng)物的分離、培養(yǎng)，細(xì)菌生物學(xué)

15、特性的研究、分類鑒定，菌種保藏等都需要利用培養(yǎng)基進(jìn)行人工培養(yǎng)。同時(shí)在傳染病的診斷、生物制品的研制、發(fā)酵生產(chǎn)，以及利用細(xì)菌等作為工具進(jìn)行的其它學(xué)科的研究中（如遺傳學(xué)、基因工程等），都離不開(kāi)培養(yǎng)基的應(yīng)用和細(xì)菌的人工培養(yǎng)?；A(chǔ)培養(yǎng)基一般指的是營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，它通常由蛋白胨（主要作為氮源）、牛肉浸膏（作為碳源、氮源、維生素和無(wú)機(jī)鹽）、氯化鈉（無(wú)機(jī)鹽并具有維持一定的滲透壓的作用）和水所組成?；A(chǔ)培養(yǎng)基含有大多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。另外，根據(jù)培養(yǎng)基的組成和使用目的菌不同，還有加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)基等。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）馬丁培養(yǎng)基的配制：葡萄糖10.0 g、蛋白胨5.0

16、 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 1.0 g 、硫酸鎂(MgSO47H2O) 0.5 g、孟加拉紅33.4 mg、蒸餾水1000 mL、實(shí)驗(yàn)中使用的是已經(jīng)配制好的培養(yǎng)基粉，稱取36g，加入1000ml水，分裝在兩個(gè)500ml的錐形瓶中，包扎，置于高溫滅菌鍋中121 下滅菌30 min。滅菌后進(jìn)行倒平板備用。四、思考題1液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基各有何功用？答：液體培養(yǎng)基：組分均一，適宜各類微生物的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)。廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究及大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中，有利于廣泛獲得大量菌體或代謝產(chǎn)物。固體培養(yǎng)基： 瓊脂固體培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于微生物的分離培養(yǎng)、菌種鑒定和保藏。半固體培養(yǎng)基：用于觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)、菌

17、種鑒定及測(cè)定噬菌體的效價(jià)等。2細(xì)菌的人工培養(yǎng)需要哪些條件，在微生物學(xué)上有何重要意義？答：需要基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：如碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和水分等。細(xì)菌純培養(yǎng)物的分離、培養(yǎng)，細(xì)菌生物學(xué)特性的研究、分類鑒定，菌種保藏等都需要利用培養(yǎng)基進(jìn)行人工培養(yǎng)。同時(shí)在傳染病的診斷、生物制品的研制、發(fā)酵生產(chǎn)，以及利用細(xì)菌等作為工具進(jìn)行的其它學(xué)科的研究中（如遺傳學(xué)、基因工程等），都離不開(kāi)培養(yǎng)基的應(yīng)用和細(xì)菌的人工培養(yǎng)。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)三 自然界中微生物的分離與純化一、目的要求1、學(xué)習(xí)并掌握從自然界中分離微生物的方法。2、掌握細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌的分離純化方法；二、基本原理土壤是微生物生活的大本營(yíng)，是尋

18、找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多；其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥、偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線菌數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實(shí)驗(yàn)從土壤中分離細(xì)菌、放線菌和霉菌；自面肥或酒曲或果園土分離酵母菌。從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。常用的是平板分離法和劃線分離法，純化該微生物，直至得到純菌株。平板分離法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋，使其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)

19、的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。該法雖然操作繁瑣，但可獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)（如活菌制劑），以及食品、飲料和水等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測(cè)。三、實(shí)驗(yàn)材料（一）菌源1、土樣：選定采土地點(diǎn)后，鏟去表土層23 cm，取310 cm深層土壤10 g，裝入已滅過(guò)菌的牛皮紙袋內(nèi)，封好袋口，并記錄取樣地點(diǎn)、環(huán)境及日期。土樣采集后應(yīng)及時(shí)分離，凡不能立即分離的樣品，應(yīng)保存在低溫、干燥條件下，盡量減少其中菌相的變化。（二）培養(yǎng)基（制平板）1、馬丁培養(yǎng)基：葡萄糖10.0 g、蛋白胨5.0 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 1.0 g 硫酸鎂(MgSO47H2O) 0.5 g、孟加拉

20、紅33.4 mg、蒸餾水1000 mL、121 30 min滅菌。（三）無(wú)菌水配制無(wú)菌水，分裝于250 mL錐形瓶，每瓶裝99 mL），每瓶?jī)?nèi)裝44粒玻璃珠。分裝試管、每管裝9 mL（每組4支），121滅菌20min。（四）其他物品：無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌移液管、無(wú)菌玻璃涂棒、稱量紙、藥勺、橡皮頭、10酚溶液。四、操作步驟（一）稀釋涂布平板分離法（1）制備土壤稀釋液稱取土樣10 g，放入到盛有99 mL無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水并裝有玻璃珠的三角瓶中，置搖床振蕩1020 min，使土壤均勻分散成土壤懸液（101）。用1 mL的無(wú)菌移液管從中吸取1mL土壤懸液，移入到分裝有9 mL無(wú)菌水的試管中，吸吹3次，振蕩均勻（102）。用同樣方法依次制成102104的土壤稀釋液（為避免稀釋過(guò)程誤差，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，最好每一個(gè)稀釋度更換一支移液管）。（2）涂布法分離依前法向無(wú)菌培養(yǎng)皿中傾倒已融化的培養(yǎng)基，待平板冷凝后，用無(wú)菌移液管分別吸取上述10-1、10-2、10-3、10-4四個(gè)稀釋度菌懸液0.2 mL，依次滴加于相應(yīng)編號(hào)已制備好的培養(yǎng)基平板上，用無(wú)菌玻璃涂棒涂勻（一定要多涂幾遍，涂到菌液均勻分布為止，切忌用力過(guò)猛將菌液直接推向平板邊緣或?qū)⑴囵B(yǎng)基劃破）。將平板倒置于恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察結(jié)果。（二）平板菌落形態(tài)及個(gè)體形態(tài)觀察從不同平板上選擇不同類型菌落用肉眼觀察