微生物知識及消毒與滅菌知識培訓(xùn)

1、. .一、微生物的特點一、微生物的特點n分布范圍廣n生長速度快n生存能力強微生物包括：. 我們所生活的環(huán)境中，到處都存在著大量的微生物。在一般空氣中，微生物達8003500個/m3，在土壤中達1500108個/g，在嚴重污染的水中可達107個/ml。（飲用水要求細菌總數(shù)100個/ml，大腸桿菌3個/ml。經(jīng)水塔或貯水池貯存后，短期內(nèi)可繁殖至105106個/ml。）人的頭皮上有140萬個/cm2，兩手上約有440萬個，1g指甲污垢有38億個，1g糞便可達101000億個?？梢哉f微生物是無處不在，無處不有。許多以前被人們認為是極端（高溫、高壓、強酸、強堿、低溫等）甚至是致死的環(huán)境，現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)生活著

2、各種類型的微生物（稱為極端微生物）。事實說明，微生物有特別頑強的生存、繁殖和變異能力來適應(yīng)環(huán)境。 .二、微生物特點二、微生物特點n種類多、分布廣種類多、分布廣n微生物在地球上幾乎無處不有，無孔不入，人的皮膚上，口腔，腸道里都有許多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各種微生物生長繁殖的大本營，約占微生物總量的70-90%，任意取一把土或一粒土，就是一個微生物世界，不論數(shù)量或種類均最多。在肥沃的土壤中，每克土含有20億個微生物，即使是貧瘠的土壤，每克土中也含有35億個微生物?？諝饫飸腋≈鵁o數(shù)細小的塵埃和水滴，它們是微生物在空氣中的藏身之地。哪里塵埃多，哪里的微生物就多。n迄今為止，我們知道

3、的微生物約有10萬種，目前已知的種類只占地球上實際存在的微生物總數(shù)的20%，人類生產(chǎn)和生活中僅開發(fā)利用了已發(fā)現(xiàn)微生物種數(shù)的1%。 .n個體小、面積大個體小、面積大n生物的個體極其微小，必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍，乃至數(shù)萬倍才能看清。桿菌的寬度是微米，因此80個桿菌“肩并肩”地排列成橫隊，也只有一根頭發(fā)絲的寬度。桿菌的長度約2微米，故1500個桿菌頭尾銜接起來僅有一顆芝麻長。 物體的表面積和體積之比稱為比表面積。大腸桿菌的比表面積是人的30萬倍。 .n吸收多、轉(zhuǎn)化快吸收多、轉(zhuǎn)化快n微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代，如細菌一般每2030分鐘既可分裂一次；n微

4、生物的食譜非常廣泛，凡是動植物能利用的營養(yǎng)，微生物都能利用，大量的動植物不能利用的物質(zhì)，甚至劇毒的物質(zhì)，微生物照樣可以視為美味佳肴。如大腸桿菌在合適條件下，每小時可以消耗相當于自身重量2000倍的糖，而人體則需要40年之久。 .n適應(yīng)強、易變異適應(yīng)強、易變異n多數(shù)細菌能耐0196的低溫；在海洋深處的某些硫細菌可在250300的高溫條件下正常生長；一些嗜鹽細菌甚至能在飽和鹽水中正常生活；產(chǎn)芽孢細菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年。由于微生物繁殖快，也可在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量變異的后代。正是由于這個特性，人們才能夠按照自己的要求不斷改良在生產(chǎn)上應(yīng)用的微生物，如青霉素生產(chǎn)菌的發(fā)酵水平由每毫升2

5、0單位上升到近10萬單位，利用變異和育種得到如此大幅度的產(chǎn)量提高。 .三、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)三、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)n微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類：n原核細胞型原核細胞型：細菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等n真核細胞型真核細胞型：真菌n非細胞型非細胞型：病毒 噬菌體 . 芽孢桿菌 （細菌）. 淡水中的螺旋菌 spirochetes . .蠟樣芽孢桿菌（細菌）. 支原體掃描電鏡圖片支原體支原體（mycoplasma）以前被認為是最小的能獨立存活的原核生物，以前也被認為是地球上迄今為止被發(fā)現(xiàn)的最小的細胞生物。全世界90%的豬體內(nèi)寄生著支原體。.立克次氏體（r

6、ickettsiae），一種微小的寄生的細菌。上圖是動物的淋巴細胞，紅色的是寄生的立克次氏體。. 青霉是種真菌，屬于子囊菌。 有的能產(chǎn)生青霉素，救了無數(shù)人的命。 產(chǎn)生無性孢子。.根霉（Rhizopus)是種真菌，屬于接合菌。能產(chǎn)生無性孢子菌絲體的直徑約12 um黑的是孢子囊 . 噬菌體SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒 禽流感病毒愛滋病毒. 粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 沙門氏菌的菌落特征 銅綠假單孢菌的菌落特征 弗氏志賀氏菌的菌落特征 粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 .放線菌的菌落特征 A：諾爾斯氏鏈霉菌； B：皮疽諾卡氏菌； C：酒紅指孢囊菌； D：游動放線菌； E：小單胞菌； F：皺雙孢馬杜拉放線菌產(chǎn)

7、抗菌素的放線菌的菌落特征A：卡特利鏈霉菌； B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈霉菌；E：除蟲鏈霉菌； F：生磺酸鏈霉菌. 各種曲霉的菌落 . 各種病原真菌的菌落 青霉的菌落 青霉的菌落 . 各種酵母菌的菌落 啤酒酵母的菌落 紅酵母的菌落 .四、微生物的營養(yǎng)四、微生物的營養(yǎng)n水分水分：水占細胞漿的70%90%，是細胞的重要組成成分。較普遍的觀點認為，只有在含水的環(huán)境中微生物才能存活。但也有人發(fā)現(xiàn)在無水碳氫化合物中微生物可長期存活。n碳源碳源：碳源是構(gòu)成細胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來自有機碳化合物如糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機酸等（同時利用其化學(xué)能），屬異養(yǎng)型；有些微生物不需

8、有機碳化合物，以CO2為碳源，屬自養(yǎng)型（分為光能自養(yǎng)型和化能自養(yǎng)型）。.n氮源氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。n無機鹽類無機鹽類：細菌所需無機鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵需要量較多，其他只需微量。n生長因子生長因子：生長因子是某些微生物生長發(fā)育所必需，而其自身又不能合成的一類營養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、嘌呤和嘧啶。.五、微生物生長的影響因素五、微生物生長的影響因素n1、營養(yǎng)物n2、PH值n3、溫度n4、氧氣n5、滲透壓n6、表面張力.六、消毒與滅菌六、消毒與滅菌n消毒與滅菌是微生物實驗技術(shù)中最基本的操作，從事藥品生產(chǎn)和檢驗的人員都應(yīng)當了解消

9、毒與滅菌的方法及其意義，嚴格遵守操作規(guī)程，否則會影響產(chǎn)品質(zhì)量，危害患者安全。.概念概念n無菌不存在活的生物（GMP指南）。n “無菌”從定義上來說是一個絕對的概念，但遺憾的是，在科學(xué)和技術(shù)高度發(fā)展的今天，藥品的絕對無菌即做不到，也無法加以證實。然而，無菌制劑的安全性要求人們設(shè)定無菌的相對標準。FDA、歐洲制藥工業(yè)界曾將百萬分之一微生物污染率作為滅菌產(chǎn)品“無菌”的相對標準，它和蒸汽滅菌后產(chǎn)品中微生物存活的概率為 10-6（即產(chǎn)品的無菌保證值為6），系同一標準的不同表示法。這一標準于1980起收錄于USP 中，如今已為世界各國普遍接受和采用。.概念概念n滅菌使達到無菌狀態(tài)的方法（GMP指南）。用物

10、理或化學(xué)方法殺滅傳播媒介上所有的微生物，使其達到無菌（GB）。通常是指殺滅或除去全部活的微生物（包括繁殖體和芽孢）。n消毒用物理或化學(xué)方法殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物，使其達到無害化（GB）。通常是指殺死病原微生物的繁殖體，但不能破壞其芽孢。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。.概念概念n無菌制劑不存在活的微生物的制劑（GMP指南）。n非無菌制劑所含活的微生物量符合衛(wèi)生學(xué)標準的制劑（GMP指南）。.常用消毒劑常用消毒劑 n 70%75%乙醇水溶液；n 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油，用于皮膚、器具等消毒；n異丙醇 75%水溶液，用于皮膚、器具等消毒；n甲醛 37%40%甲醛液8

11、9ml，再加入45g高錳酸鉀，每m3熏蒸量，密閉1224h，刺激性強；n戊二醛 2%水溶液，用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒，可殺芽孢和病毒，毒性較輕；.常用消毒劑常用消毒劑n新潔爾滅（苯扎溴銨） 0.1%水溶液，用于皮膚、粘膜、器具等消毒，有清潔和消毒雙重功效，抗菌譜較窄；n杜滅芬（消毒寧） 0.05%0.1%水溶液，用于皮膚、器具等消毒；n過氧乙酸 a、 0.2%0.5%水溶液；b、新配0.5%水溶液；c 、1g/m3； 用于器具等消毒，抗菌譜廣，可用于皮膚消毒殺滅某些病毒；熏蒸，但性質(zhì)不穩(wěn)定。n乳酸 a、0.331mol/L；b、 熏蒸或與等量苯酚合用熏蒸 噴霧，用于空氣消毒，有強

12、殺菌作用；熏蒸，密閉12h以上。n麝香草酚 5%麝香草酚溶于50%乙醇，噴灑墻面、地面，殺霉菌。.干熱滅菌干熱滅菌n常見的有火焰、燒灼、干烤和紅外線滅菌等。n火焰、燒灼：通常用于實驗室無菌操作中金屬或其它耐火材料制成的器具的滅菌。n干烤和紅外線：利用干熱空氣或熱輻射進行滅菌。一般135145需35h，160170需2h以上，170180需1h以上，180200需0.51h。除熱原，則需25030min，或20045min，1802h?？諝鈧鳠崧?，穿透力不強，故干熱滅菌時間長。干熱滅菌時烤箱內(nèi)裝入物品應(yīng)留有空隙，以利空氣流動，否則使箱內(nèi)溫度不均，部分物品滅菌不徹底。.濕熱滅菌濕熱滅菌n通過熱蒸汽

13、或沸水使蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物的方法。濕熱穿透力強，滅菌效果較干熱好。n煮沸或流通蒸汽滅菌：常壓下沸水和蒸汽的溫度是100，一般處理3060min可殺死細菌繁殖體，但不能完全殺滅芽孢。此法適用于不能高壓蒸汽滅菌的物品。n低溫間隙滅菌（巴斯德滅菌法）：將物品先用6080加熱（或煮沸）1h，然后置2025保存24h（或常溫過夜），使其中殘存的芽孢萌發(fā)成繁殖體，再用以上條件滅菌，如此反復(fù)三次。本法適用于不耐高溫或高溫下易變質(zhì)的物品，但很費時。.高壓蒸汽滅菌（熱壓滅菌）高壓蒸汽滅菌（熱壓滅菌）n超過一個大氣壓時，水的沸點高于100，反之亦然。高壓蒸汽滅菌就是通過加壓提高蒸汽溫度，滅菌效果最好。它簡便、

14、經(jīng)濟、可靠、無毒，是最可靠、應(yīng)用最廣泛的滅菌法。此法適用于耐高溫和潮濕的物品。n常用條件為：115.5 、30min； 121.5 、20min； 126.5、 15min。.注意事項注意事項 na.必須完全排出滅菌器內(nèi)的空氣。否則會影響滅菌器內(nèi)溫度達到規(guī)定的要求。nb. 注意被滅菌物品的溫度。滅菌器內(nèi)溫度與被滅菌物品的溫度一般是一致的，但在蒸汽輸入過快時，后者可能低于前者，所以升溫時要有一定的預(yù)熱時間。另外，降溫過快易引起玻璃炸裂。因此，對于一種滅菌產(chǎn)品，應(yīng)制定一固定的滅菌曲線（像凍干曲線一樣）。nc. 定期檢查滅菌器內(nèi)溫度的準確性。.化學(xué)滅菌化學(xué)滅菌n利用化學(xué)試劑形成的氣體來殺滅微生物的方法。常用的滅菌劑為環(huán)氧乙烷（又稱氧化乙烯）。環(huán)氧乙烷是廣譜殺菌劑，能殺滅細菌、芽孢和多種病毒，還能殺死昆蟲及蟲卵。但由于環(huán)氧乙烷易燃易爆且有毒（有致變異性），用于藥品方面極有限，多用于醫(yī)療器械、塑料制品等滅菌。（不能用于橡膠和乳膠手套，能將其溶解。 .濾過除菌濾過除菌n利用細菌不能通過致密孔濾材的原理，除去對熱不穩(wěn)定的藥品溶液或液體物質(zhì)中的細菌的方法。過濾法