艾滋病初篩實驗室生物安全

1、埃博拉出血熱 n 埃博拉出血熱是一種嚴(yán)重的急性傳染病，埃博拉出血熱患者血液中有較高的病毒載量，可能發(fā)生人-人傳播和院內(nèi)感染,病死率高。埃博拉出血熱傳播途徑n直接接觸傳播是本病最主要的傳播途徑?？梢酝ㄟ^接觸病人或被感染動物的體液、分泌物、排泄物及其污染物等而感染。臨床表現(xiàn)n埃博拉出血熱的臨床表現(xiàn)和其他一些病毒性出血熱相似，需要通過實驗室進(jìn)行確診。在目前階段，以對病人血液標(biāo)本檢測為主。一 檢測對象n包括留觀病例、疑似病例和確診病例，病例定義參見國家衛(wèi)生計生委制定的埃博拉出血熱相關(guān)病例診斷和處置路徑。二、標(biāo)本采集保存和運輸 n（一）標(biāo)本采集 用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3mL，標(biāo)記后4保存

2、，填寫標(biāo)本采集登記表。留觀病例、疑似病例采集4管，其中2管送指定的具有埃博拉出血熱檢測資質(zhì)的實驗室進(jìn)行埃博拉病毒檢測，2管保存于樣本采集單位或所在省疾病預(yù)防控制機構(gòu)，待排除埃博拉病毒感染后用于其他病原體的篩查；確診病例采集恢復(fù)期血標(biāo)本，送國家疾控中心病毒病所進(jìn)行檢測。（二）標(biāo)本保存、運送n未分離血清的全血標(biāo)本應(yīng)4保存，并盡快分離血清；血清標(biāo)本長期保存應(yīng)置于-70以下，標(biāo)本保存不超過1周可置-20。n標(biāo)本運輸應(yīng)按照相關(guān)生物安全規(guī)定，采取A類包裝，低溫冷藏運輸，避免反復(fù)凍融三、檢測內(nèi)容 n埃博拉病毒核酸檢測、埃博拉病毒抗原檢測和IgM、IgG抗體檢測。四、實驗室檢測方法 n（一）病原學(xué)檢測 1核酸

3、檢測：為目前早期診斷、早期發(fā)現(xiàn)埃博拉出血熱病例的主要檢測方法。采用熒光定量 PCR 進(jìn)行病毒核酸檢測，患者標(biāo)本中擴增到特異性核酸，可確診埃博拉病毒感染。傳統(tǒng)RT-PCR因易出現(xiàn)污染使用受限，但可以獲得病毒基因序列。 發(fā)病后3天內(nèi)，血標(biāo)本中埃博拉病毒核酸檢出率低，檢測陰性不能排除埃博拉病毒感染，應(yīng)結(jié)合病例的流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)進(jìn)行綜合判斷。發(fā)病后310天血標(biāo)本病毒核酸檢出率高，檢測陰性可排除埃博拉病毒感染。 n2. 病毒抗原檢測：用酶聯(lián)免疫法檢測埃博拉病毒核蛋白抗原。病毒抗原檢測陽性可確診。發(fā)病后3天內(nèi)，血標(biāo)本中埃博拉病毒抗原檢出率低，檢測陰性不能排除埃博拉病毒感染，發(fā)病后310天血標(biāo)本病毒抗原

4、檢出率高。（二）血清學(xué)檢測n 1. 血清特異性IgM抗體：采用捕獲法ELISA方法檢測。IgM抗體陽性可確診。 2.血清特異性IgG抗體：目前采用間接法ELISA檢測IgG抗體。單份血清埃博拉病毒IgG抗體陽性提示曾感染埃博拉病毒，雙份血清埃博拉病毒IgG抗體陽轉(zhuǎn)或恢復(fù)期滴度較急性期4倍或者以上增高者可確診n（三）結(jié)果的報告、復(fù)核和反饋 埃博拉病毒檢測機構(gòu)應(yīng)將所有陽性和部分陰性血清標(biāo)本送中國疾病預(yù)防控制中心病毒病所進(jìn)行復(fù)核檢測。實驗室檢測結(jié)果應(yīng)及時反饋標(biāo)本送檢單位，并盡快上報上級主管部門五、生物安全 n按照病原微生物實驗室生物安全管理條例等相關(guān)規(guī)定要求，做好生物安全工作。（一）實驗室檢測n 1

5、凡涉及埃博拉病毒的分離、培養(yǎng)和動物實驗，需在生物安全4級（BSL-4/ABSL-4）實驗室內(nèi)進(jìn)行。涉及未經(jīng)培養(yǎng)有感染性材料的實驗活動，需在BSL-3實驗室內(nèi)進(jìn)行。血清學(xué)檢測應(yīng)在BSL-3實驗室內(nèi)，且標(biāo)本需先601小時滅活后，再進(jìn)行后續(xù)實驗操作。核酸檢測時, 需在BSL-3實驗室內(nèi)加入核酸提取裂解液,完成病毒RNA提取，并對裝有病毒RNA樣品管的外表面進(jìn)行徹底消毒后，可在BSL-3實驗室以外進(jìn)行擴增檢測。 2在進(jìn)行感染性材料操作時，每次標(biāo)本份數(shù)不宜過多，每份標(biāo)本量不宜過大。（二）生物安全防護(hù)n 在實驗室處理感染性標(biāo)本時，應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)范在BSL-3實驗室內(nèi)進(jìn)行。實驗室工作人員應(yīng)穿著遮蓋全身的個

6、人防護(hù)裝備，包括防滲漏防護(hù)服、N95或以上口罩、防護(hù)目鏡、防護(hù)面罩、乳膠手套等，當(dāng)需進(jìn)行感染性標(biāo)本離心、較大量標(biāo)本（10 mL）分裝處理等時應(yīng)使用正壓頭盔。實驗人員有體表開放式傷口時不宜參加實驗活動。n涉及感染性材料的離心應(yīng)使用有密封蓋的離心桶或轉(zhuǎn)頭進(jìn)行標(biāo)本離心，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開離心轉(zhuǎn)頭放入或取出裝有標(biāo)本的離心管。在標(biāo)本的采集、包裝和實驗室檢測等過程中所產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，可能具有生物危險性，應(yīng)當(dāng)按照醫(yī)療廢物管理條例和醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法等相關(guān)規(guī)定及時處理。埃博拉出血熱相關(guān)標(biāo)本采集、包裝、運輸n埃博拉出血熱(Ebola hemorrhagic fever)是由埃博拉病毒(Ebola v

7、irus)引起的一種急性出血性傳染病。人主要通過接觸病人或感染動物的體液、分泌物和排泄物等而感染，臨床表現(xiàn)主要為突起發(fā)熱、出血和多臟器損害，病死率可高達(dá)50%-90%。n2014年，在幾內(nèi)亞、利比里亞和塞拉利昂等西非國家發(fā)生歷史上最嚴(yán)重的埃博拉出血熱暴發(fā)疫情。本病潛伏期為221天，通常為810天。一、生物安全防護(hù)n 所有樣本的采集或處理應(yīng)遵守醫(yī)院感染管理規(guī)范和病原微生物實驗室生物安全管理條例等相關(guān)生物安全規(guī)定，在標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防的基礎(chǔ)上采用飛沫和接觸隔離的預(yù)防措施。n樣本采集時，應(yīng)嚴(yán)格按照BSL-3級實驗室規(guī)定做好個人防護(hù)。應(yīng)穿戴醫(yī)用防護(hù)服、可遮蓋口鼻的醫(yī)用防護(hù)口罩(N95)、雙層乳膠手套、護(hù)目鏡、頭

8、部面部保護(hù)罩、專用橡膠靴等。二、標(biāo)本采集（一）采集時間 一般發(fā)病后2周內(nèi)，可在患者血標(biāo)本中檢測到病毒核酸和抗原，發(fā)病后310天的標(biāo)本核酸和抗原的檢出率高。在發(fā)病后數(shù)月內(nèi)，可在特定分泌物中持續(xù)檢出病毒。最早可從發(fā)病后2天的患者血清中檢出特異性IgM抗體，IgM抗體可維持?jǐn)?shù)月。發(fā)病后7-10天可檢出Ig G抗體，康復(fù)者Ig G抗體可維持?jǐn)?shù)年。發(fā)病10-14天以后的標(biāo)本病毒特異性抗體的檢出率高。應(yīng)根據(jù)不同檢測目的確定采樣時間，疑似患者排除埃博拉病毒感染需采集發(fā)病3天以后的血標(biāo)本。 （二）標(biāo)本采集n 1. 采血場所應(yīng)在相對獨立的場所，病人房間和服務(wù)間及外側(cè)環(huán)境相比應(yīng)符合負(fù)壓要求，配備二級生物安全柜。如

9、果不具備上述條件，可用相鄰的房間提供足夠的安全空間，備有除了病人常規(guī)護(hù)理的材料外應(yīng)具備手套、防護(hù)服和防護(hù)面具等，同時要裝備有洗手的設(shè)施和裝有消毒液的桶。n2.采集埃博拉出血熱患者血樣會給醫(yī)護(hù)人員帶來風(fēng)險，應(yīng)由經(jīng)過生物安全防護(hù)培訓(xùn)的人員執(zhí)行，采血時應(yīng)2人在場。3.采用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3mL，采集后用封口膜封閉管口，標(biāo)記清楚后放入自封袋或50mL離心管內(nèi)，并在自封袋或離心管外表面再清楚標(biāo)記，4保存，填寫標(biāo)本采集登記表。n4.留觀病例和疑似病例應(yīng)在發(fā)病3天后，采集靜脈血4管，其中2管送指定的具有埃博拉出血熱檢測資質(zhì)的實驗室進(jìn)行埃博拉病毒檢測，2管保存于樣本采集單位或所在省疾病預(yù)防

10、控制機構(gòu)，待排除埃博拉病毒感染后用于其他病原體的篩查。 5.確診病例采集恢復(fù)期血標(biāo)本，包括并不限于出院前標(biāo)本2份，每份2管，采集時間間隔不少于48小時。三、標(biāo)本包裝、運輸n。（一）所有疑似埃博拉病毒相關(guān)感染性標(biāo)本的運輸應(yīng)按照病原微生物實驗室生物安全管理條例和人間傳染的病原微生物名錄等相關(guān)規(guī)定，采取A類包裝，符合UN2814要求。按照三重包裝系統(tǒng)包裝：第一層包裝為自封袋或50mL離心管；第二層包裝為防水、防漏的安全殼容器；第三層為運輸包裝組成。封在防漏自封袋或離心管內(nèi)的樣本應(yīng)首先放置在耐用、防水防漏的第二層安全殼容器中，用吸水紙等填充物將封好的標(biāo)本固定好。安全殼容器和外包裝須與IATA危險物品條

11、例包裝制度650相符合。n（二）寫明標(biāo)本的詳細(xì)情況、運送者及預(yù)期接收者地址，并密封在塑料袋里，用膠布分別粘在外層容器里面和外面并留檔以便追蹤，方便實驗室操作人員查對標(biāo)本數(shù)量。（三）樣本運輸之前，應(yīng)按相關(guān)生物安全規(guī)定先和樣本接收單位相關(guān)生物安全負(fù)責(zé)人聯(lián)系，辦理相關(guān)手續(xù)，運送日確定后即通知接收實驗室標(biāo)本運送的時間和運輸方式。四、樣本保存和銷毀n（一）實驗室檢測埃博拉病毒陽性血標(biāo)本，應(yīng)根據(jù)病原微生物實驗室生物安全管理條例等相關(guān)生物安全規(guī)定保存在-70以下，實行“雙人雙鎖”管理和取樣“審批”制度。（二）實驗室檢測埃博拉病毒陰性血標(biāo)本，應(yīng)所采集疑似患者或密切接觸者完全排除埃博拉病毒感染后，轉(zhuǎn)入其他血清庫

12、保存或銷毀。n（三）所有血清銷毀時，均應(yīng)在冰箱內(nèi)取出后，在生物安全柜內(nèi)，待其自然融化后，置于含有效消毒劑內(nèi)浸泡，然后高壓滅活。（四）所有銷毀樣本均應(yīng)在相應(yīng)數(shù)據(jù)庫清單內(nèi)標(biāo)明，銷毀的時間和操作人，陰性樣本滅活記錄保存1年以后可以清除，陽性樣本的銷毀記錄應(yīng)保存5年以上。醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露與職業(yè)安全n一些傳染病感染者外表無特異性臨床表現(xiàn)，如果醫(yī)務(wù)人員相關(guān)知識了解較少、防護(hù)意識不強，認(rèn)為自己不可能接觸這樣的病人，加上難以改掉的長期現(xiàn)成的不規(guī)范診斷治療操作習(xí)慣，又不注意職業(yè)防護(hù)，必然導(dǎo)致職業(yè)暴露危險性的增加。職業(yè)暴露是指有關(guān)工作人員是指有關(guān)工作人員, ,如醫(yī)護(hù)人員、實驗室工作人員如醫(yī)護(hù)人員、實驗室工作人員以

13、及預(yù)防保健人員、羈押場所管理人員等，在工以及預(yù)防保健人員、羈押場所管理人員等，在工作中意外地被感染者或患者的血液、體液污染了作中意外地被感染者或患者的血液、體液污染了破損的皮膚或粘膜，或被含病毒的血液、體液、破損的皮膚或粘膜，或被含病毒的血液、體液、培養(yǎng)物污染了的針頭及其它銳器刺破皮膚，有可培養(yǎng)物污染了的針頭及其它銳器刺破皮膚，有可能被病毒感染的情況。能被病毒感染的情況。職業(yè)暴露源暴露的潛在污染源包括：血液、血性體液、精液、暴露的潛在污染源包括：血液、血性體液、精液、陰道分泌物、腦脊液、胸膜液、腹水、心包液、陰道分泌物、腦脊液、胸膜液、腹水、心包液、滑膜液、羊水和組織或病毒培養(yǎng)液等一切有可滑膜

14、液、羊水和組織或病毒培養(yǎng)液等一切有可見血液污染的體液。見血液污染的體液。職業(yè)暴露主要途徑1.1.皮膚損傷：針刺損傷注入了感染病毒的血液，是皮膚損傷：針刺損傷注入了感染病毒的血液，是醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)中發(fā)生暴露的主要途徑，皮膚的切醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)中發(fā)生暴露的主要途徑，皮膚的切割傷也較為常見。完整的皮膚接觸病毒，感染病割傷也較為常見。完整的皮膚接觸病毒，感染病毒的危險性相當(dāng)?shù)?，至今尚未見報道有?jīng)此途徑毒的危險性相當(dāng)?shù)?，至今尚未見報道有?jīng)此途徑感染者。感染者。2.2.粘膜暴露：粘膜接觸病毒的血液、羊水等，濺入眼、粘膜暴露：粘膜接觸病毒的血液、羊水等，濺入眼、鼻等部位。鼻等部位。職業(yè)暴露的高危人群n外科、口腔科

15、、婦產(chǎn)科等醫(yī)生；外科、口腔科、婦產(chǎn)科等醫(yī)生；n護(hù)理人員；護(hù)理人員；n實驗室技術(shù)人員；實驗室技術(shù)人員；n尸檢人員；尸檢人員；n警務(wù)人員。警務(wù)人員。 1.1.工作人員對職業(yè)暴露的危險性缺乏認(rèn)識，工作人員對職業(yè)暴露的危險性缺乏認(rèn)識，思想不夠重視（不少人存在著僥幸心理，思想不夠重視（不少人存在著僥幸心理，認(rèn)為自己不可能接觸到認(rèn)為自己不可能接觸到HIV/AIDSHIV/AIDS）；缺乏）；缺乏對突變、突發(fā)、緊急事件時應(yīng)采取的必要對突變、突發(fā)、緊急事件時應(yīng)采取的必要防范措施、處置技能和心理準(zhǔn)備。防范措施、處置技能和心理準(zhǔn)備。 職業(yè)暴露的原因1 1. .工作人員缺乏必要的防護(hù)設(shè)備。工作人員缺乏必要的防護(hù)設(shè)備

16、。2 2. .工作人員不按規(guī)范操作工作人員不按規(guī)范操作, ,存在不規(guī)范的操作習(xí)存在不規(guī)范的操作習(xí)慣。慣。3. 3. 病毒感染者有意無意地對工作人員發(fā)生損傷病毒感染者有意無意地對工作人員發(fā)生損傷行為。行為。1. 皮膚或粘膜有傷口皮膚或粘膜有傷口2. 有體液交換發(fā)生有體液交換發(fā)生3. 要達(dá)到一定的病毒量要達(dá)到一定的病毒量 1. 發(fā)生職業(yè)暴露者發(fā)生職業(yè)暴露者 傷口的性質(zhì)及暴露范圍的大小傷口的性質(zhì)及暴露范圍的大小,暴露范圍越大暴露范圍越大,感染機會越大感染機會越大; 2. 發(fā)生職業(yè)暴露者傷口是否為開放性暴露或是否發(fā)生職業(yè)暴露者傷口是否為開放性暴露或是否刺破了靜脈或動脈刺破了靜脈或動脈;影響暴露后果的因

17、素3.3.發(fā)生職業(yè)暴露者傷口的深度是否有可見的發(fā)生職業(yè)暴露者傷口的深度是否有可見的血液從傷口溢出；血液從傷口溢出；4.4.感染者感染者/ /病人體內(nèi)的病毒載量越高感染性越病人體內(nèi)的病毒載量越高感染性越強；強；5.5.暴露時間越長感染概率越大；暴露時間越長感染概率越大；6.6.暴露后及時采取適當(dāng)?shù)奶幚泶胧┍┞逗蠹皶r采取適當(dāng)?shù)奶幚泶胧? ,則感染的則感染的可能性大大降低?？赡苄源蟠蠼档?。職業(yè)暴露后的處理n局部緊急處理n報告與評估n暴露后預(yù)防用藥n暴露后隨訪n職業(yè)暴露防范原則緊急處理緊急處理(1) (1) 用肥皂和水清洗污染的皮膚，用清水、生理鹽水沖洗口用肥皂和水清洗污染的皮膚，用清水、生理鹽水沖洗

18、口腔、眼睛等粘膜腔、眼睛等粘膜; ;(2) (2) 如有傷口，應(yīng)輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，直如有傷口，應(yīng)輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，直至組織液發(fā)白至組織液發(fā)白, ,再用肥皂水和流動水沖洗再用肥皂水和流動水沖洗, ,禁止進(jìn)行傷口的禁止進(jìn)行傷口的局部擠壓局部擠壓. .(3) (3) 傷口沖洗后傷口沖洗后, ,應(yīng)用消毒液（如應(yīng)用消毒液（如70%70%酒精，酒精，0.2-0.5%0.2-0.5%過氧乙過氧乙酸，酸，0.5%0.5%碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎傷口。被暴露碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎傷口。被暴露的粘膜的粘膜, ,應(yīng)當(dāng)反復(fù)用生理鹽水沖洗干凈。應(yīng)當(dāng)反復(fù)用生理鹽水沖洗干凈。報

19、告評估n報告科室領(lǐng)導(dǎo)、主管部門n報告內(nèi)容：暴露發(fā)生時間、地點、經(jīng)過、暴露方式、暴露具體部位、損傷程度、暴露源種類n請專業(yè)人士評估職業(yè)暴露防范原則n所有醫(yī)務(wù)人員均應(yīng)接受安全教育n遵守標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防原則，建立屏障意識n所有的醫(yī)療設(shè)備應(yīng)定時消毒你，加強消毒滅菌效果的質(zhì)控n安全處理醫(yī)療廢物n有條件的給醫(yī)務(wù)人員注射疫苗標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防的基本概念n隔離對象：將所有病人血液、體液、分泌物、排泄物視為有傳染性，需要隔離n保護(hù)：實施雙向保護(hù)，防止疾病雙向傳播n隔離措施：根據(jù)傳播途徑建立接觸、空氣、分沫隔離措施堅持普遍性防護(hù)原則 WHOWHO推薦的普遍性防護(hù)原則認(rèn)為，在推薦的普遍性防護(hù)原則認(rèn)為，在為病人提供醫(yī)療服務(wù)時，無論是病

20、人還為病人提供醫(yī)療服務(wù)時，無論是病人還是醫(yī)務(wù)人員的血液和體液，也不論他們是醫(yī)務(wù)人員的血液和體液，也不論他們是陽性還是陰性，都應(yīng)當(dāng)作為具有潛在是陽性還是陰性，都應(yīng)當(dāng)作為具有潛在傳染源加以防護(hù)。傳染源加以防護(hù)。生物安全防護(hù)生物安全防護(hù) 是指避免生物危險因子，特別是指避免生物危險因子，特別是偶然的和有意利用的生物因子，是偶然的和有意利用的生物因子，對生物體包括實驗室工作者在內(nèi)對生物體包括實驗室工作者在內(nèi)的人員的傷害和對環(huán)境的污染的的人員的傷害和對環(huán)境的污染的意識和措施。意識和措施。 生物安全實驗室防護(hù)水平生物安全實驗室防護(hù)水平 由一級防護(hù)屏障（安全設(shè)備）和二級防護(hù)屏障由一級防護(hù)屏障（安全設(shè)備）和二級防護(hù)屏障（實驗室設(shè)施）組合構(gòu)成四級（動物）生物安全實（實驗室設(shè)施）組合構(gòu)成四級（動物）生物安全實驗室防護(hù)水平驗室防護(hù)水平 。 n一級生物安全實驗室一級生物安全實驗室 BSL-1BSL-1n二級生物安全實驗室二級生物安全實驗室 BSL-2BSL-2n三級生物安全實驗室三級生物安全實驗室 BSL-3BSL-3n四級生