利用食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的研究

1、食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的研究的研究報(bào)告人指導(dǎo)老師研究目的和意義研究目的和意義據(jù)中國(guó)食用菌協(xié)會(huì)不完全，像河南、山東等7省，年產(chǎn)量超過(guò)萬(wàn)噸，占全國(guó)總產(chǎn)的63%；像江西、湖北等9省年產(chǎn)為50100萬(wàn)噸，由此可見(jiàn)我國(guó)食用菌栽培面積廣泛。研究目的和意義研究目的和意義 那么每年產(chǎn)生的食用菌那么每年產(chǎn)生的食用菌菌渣又將如何處理呢？菌渣又將如何處理呢？研究目的和意義研究目的和意義研究目的和意義研究目的和意義 然而，以上然而，以上6 6種處理方法，在農(nóng)村還未真種處理方法，在農(nóng)村還未真正使用；目前所使用的處理方法為：正使用；目前所使用的處理方法為：(1) (1) 當(dāng)作垃圾丟棄于農(nóng)村的路旁、河

2、流；當(dāng)作垃圾丟棄于農(nóng)村的路旁、河流；(2) (2) 作為燃料燃燒。作為燃料燃燒。開(kāi)發(fā)菌渣發(fā)酵飼料的意義開(kāi)發(fā)菌渣發(fā)酵飼料的意義保護(hù)環(huán)境、提高資源利用率降低畜牧養(yǎng)殖成本維持農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)和食用菌產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展技術(shù)路線(xiàn)技術(shù)路線(xiàn)食用菌菌渣的主要成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值食用菌菌渣的主要成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值主要成分的檢測(cè)主要成分的檢測(cè)含水量含水量粗蛋白粗蛋白粗脂肪粗脂肪粗纖維粗纖維粗灰分粗灰分無(wú)氮浸出物無(wú)氮浸出物磷磷鈣鈣常壓干燥法凱氏定氮法索氏抽提法酸堿洗滌法高溫灼燒無(wú)氮浸出物(%)=1- (粗蛋白%+ 粗脂肪%+粗纖維%+粗灰分%)定磷試劑法EDTA 絡(luò)合滴定法食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初

3、步研究纖維素降解菌的篩選及酶活力測(cè)定纖維素降解菌的富集、分離及純化1富集富集分離分離純化純化 稱(chēng)取50g木屑香菇菌渣加入250mL的三角瓶中，加入適量自來(lái)水，使其含水量達(dá)到60%左右，2830培養(yǎng)20d。 稱(chēng)取1g經(jīng)富集的木屑香菇菌渣倒入含玻璃珠的99mL無(wú)菌水中，28下震蕩均勻并浸泡1h，按照常規(guī)稀釋分離方法，均勻涂布在羧甲基纖維素（CMC）培養(yǎng)基上，2830恒溫倒置培養(yǎng)，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)。 待菌落長(zhǎng)出后，根據(jù)各個(gè)菌落的形態(tài)特征點(diǎn)接至相應(yīng)的常規(guī)培養(yǎng)基斜面上（牛肉膏-蛋白胨培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基），2830恒溫倒置培養(yǎng)，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)，進(jìn)行多次轉(zhuǎn)接，直到獲得純種。食用菌菌渣進(jìn)行

4、飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究纖維素降解菌的篩選及酶活力測(cè)定纖維素降解菌的篩選纖維素降解菌的篩選2初篩初篩 將純化后的但菌落分別接種到纖維素剛果紅培養(yǎng)基上28恒溫倒置培養(yǎng)。復(fù)篩復(fù)篩 采用濾紙降解率法：待菌落長(zhǎng)出后，挑選生長(zhǎng)快、紅色濃郁且水解圈大的菌落分別接種于細(xì)菌濾紙培養(yǎng)液、放線(xiàn)菌濾紙培養(yǎng)液、霉菌濾紙培養(yǎng)液中。細(xì)菌濾紙培養(yǎng)液置于371 培養(yǎng) 2d；放線(xiàn)菌濾紙培養(yǎng)液和霉菌濾紙培養(yǎng)液中置于28 培養(yǎng) 7d；然后將培養(yǎng)物連三角瓶一起烘干，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)，稱(chēng)取濾紙片的重量。濾紙降解率的計(jì)算公式如下：=100%YXY降解率食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步

5、研究纖維素降解菌的篩選及酶活力測(cè)定木屑香菇菌渣固體發(fā)酵木屑香菇菌渣固體發(fā)酵3 稱(chēng)取50 g粉碎的木屑香菇菌菌渣裝入250mL的三角瓶中，121滅菌半小時(shí)，待其冷卻至室溫時(shí)，將篩選出來(lái)的細(xì)菌、放線(xiàn)菌、霉菌菌液分別接入三角瓶中，細(xì)菌組置于371 140 r/min培養(yǎng)；放線(xiàn)菌和霉菌組置于28 140 r/min培養(yǎng) 7d；細(xì)菌組每隔4 h取一次樣，放線(xiàn)菌和霉菌組從第24 h開(kāi)始每隔4 h取一次樣稱(chēng)取1 g，4 保存?zhèn)溆谩Ｊ秤镁M(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究纖維素降解菌的篩選及酶活力測(cè)定纖維素酶活性的測(cè)定纖維素酶活性的測(cè)定4纖維素粗酶液纖維素粗酶液的制備的制備纖維素酶活纖

6、維素酶活性測(cè)定性測(cè)定食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究木質(zhì)素降解真菌的篩選及酶活力測(cè)定木質(zhì)素降解菌的篩選木質(zhì)素降解菌的篩選1富集富集分離分離純化純化復(fù)篩復(fù)篩稱(chēng)取50g木屑香菇菌渣加入250mL的三角瓶中，加入適量自來(lái)水，使其含水量達(dá)到60%左右，2830培養(yǎng)20d。稱(chēng)取1 g經(jīng)富集的木屑香菇菌渣倒入含玻璃珠的99mL無(wú)菌水中，28 下震蕩均勻并浸泡1h，按照常規(guī)稀釋分離方法，均勻涂布在培養(yǎng)基1上，2830恒溫倒置培養(yǎng)，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)。待菌落長(zhǎng)出后，觀(guān)察菌落形態(tài)特征，挑選出能夠在平板上生長(zhǎng)并產(chǎn)生變色圈的菌株。將其接種于PDA培養(yǎng)基上，2830恒溫倒置培養(yǎng)，每個(gè)處理

7、三個(gè)重復(fù)，進(jìn)行多次轉(zhuǎn)接，直到獲得純種。將純菌株分別接種PDA培養(yǎng)基斜面上，28培養(yǎng)7d后備用有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，微生物若能夠在含愈創(chuàng)木酚的培養(yǎng)基上產(chǎn)生紅棕色的變色圈，則說(shuō)明該微生物具有降解木質(zhì)素的能力。將上述獲得的純種接種于培養(yǎng)基2上，28 培養(yǎng)7 d，觀(guān)察其菌落直徑（d1）、變色圈直徑（d2），并計(jì)算菌落直徑與變色圈直徑的比值（d1/ d2）。選出對(duì)木質(zhì)素有較強(qiáng)降解作用的菌種。食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究木質(zhì)素降解真菌的篩選及酶活力測(cè)定木屑香菇菌渣固體發(fā)酵木屑香菇菌渣固體發(fā)酵2稱(chēng)取稱(chēng)取50 g50 g粉碎的木屑香菇菌菌渣裝入粉碎的木屑香菇菌菌渣裝入250mL2

8、50mL的三角的三角瓶中，瓶中，121 121 滅菌半小時(shí)，待其冷卻至室溫時(shí)，將篩滅菌半小時(shí)，待其冷卻至室溫時(shí)，將篩選出來(lái)的對(duì)木質(zhì)素降解能力最強(qiáng)的儀株真菌接入三角選出來(lái)的對(duì)木質(zhì)素降解能力最強(qiáng)的儀株真菌接入三角瓶中，保持適合的含水量，置于瓶中，保持適合的含水量，置于28 140 r/min28 140 r/min培培養(yǎng)。每隔養(yǎng)。每隔3 3天取樣，連續(xù)取樣天取樣，連續(xù)取樣30 d30 d，4 4 保存?zhèn)溆?。保存?zhèn)溆?。Lip MnPLac木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定 反應(yīng)體系為：酒石酸鈉緩沖溶液、藜蘆醇、粗酶液， H2O2室溫啟動(dòng)反應(yīng)，在310nm的波長(zhǎng)下測(cè)定前3min內(nèi)的吸

9、光值的增加量。酶活力單位的定義：每克樣品中每分鐘吸光值增加0.001 所需要的酶量，定義為 1 個(gè)活力單位（U）。食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究木質(zhì)素降解菌酶活性的測(cè)定木質(zhì)素降解菌酶活性的測(cè)定2Lip MnPLac食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究木質(zhì)素降解菌酶活性的測(cè)定木質(zhì)素降解菌酶活性的測(cè)定2錳過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定 反應(yīng)體系為：乳酸鈉緩沖溶液、MnSO4 水溶液、粗酶液， H2O2室溫啟動(dòng)反應(yīng)，在240 nm的波長(zhǎng)下測(cè)定前3 min內(nèi)的吸光值的增加量。酶活力單位的定義：每克樣品中每分鐘吸光值增加0.001 所需要的酶量，定義為

10、 1 個(gè)活力單位（U）。Lip MnPLac木質(zhì)素降解菌酶活性的測(cè)定木質(zhì)素降解菌酶活性的測(cè)定2食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究漆漆酶活性的測(cè)定 取0.5 mM 的ABTS溶液（2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸溶液) 2 mL，再加入 2 mL粗酶液，室溫下反應(yīng)，在420 nm的波長(zhǎng)下測(cè)定前3 min內(nèi)的吸光值的增加量。酶活力單位的定義：每克樣品中每分鐘吸光值增加0.001 所需要的酶量，定義為 1 個(gè)活力單位（U）。食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究食用菌菌渣進(jìn)行飼料發(fā)酵的初步研究復(fù)合菌株混合發(fā)酵木屑香菇菌渣纖維素降解菌木質(zhì)素降解菌啤酒酵母1 11

11、11 1：混菌發(fā)酵木屑香菇菌渣經(jīng)混菌發(fā)酵后在畜禽木屑香菇菌渣經(jīng)混菌發(fā)酵后在畜禽中的應(yīng)用效果中的應(yīng)用效果菌渣發(fā)酵飼料的安全性檢測(cè)黃曲霉素B1的檢測(cè)1毒性的初步判斷2木屑香菇菌渣經(jīng)混菌發(fā)酵后在畜禽木屑香菇菌渣經(jīng)混菌發(fā)酵后在畜禽中的應(yīng)用效果中的應(yīng)用效果在畜禽中的應(yīng)用效果發(fā)酵菌渣對(duì)肉牛育肥效果的影響1發(fā)酵菌渣對(duì)奶牛產(chǎn)奶量的影響2發(fā)酵菌渣對(duì)大耳兔增重效果的影響3食用菌菌渣的主要成分分析表食用菌菌渣的主要成分分析表由此可見(jiàn)，食用菌菌渣中水分的含量大約在8.4724.14%之間粗蛋白的含量大約在6.5612.17%之間粗纖維的含量大約在2.729.07%之間粗脂肪的含量大約在0.913.18%之間粗灰分的含

12、量大約在2.7736.01%之間無(wú)氮浸出物的含量大約在34.2174.01%之間鈣的含量大約在0.23 4.33%之間磷的含量大約在0.05 0.81%之間ResultsResults木屑香菇菌渣纖維素降解菌的篩選結(jié)果 通過(guò)富集、分離、純化、初篩和復(fù)篩，最終篩選出4株對(duì)纖維素分解能力較強(qiáng)的菌株，其中包括1株細(xì)菌、1株放線(xiàn)菌和2株真菌，其中真菌b在初篩時(shí)形成較大的水解圈（見(jiàn)下圖） 4株菌對(duì)濾紙片的降解率如圖所示：細(xì)菌和放線(xiàn)菌的濾紙降解率較低分別為6.43%和8.04%，兩株真菌的濾紙降解率較高，其中真菌a對(duì)濾紙的降解率為19.79%、真菌b對(duì)濾紙的降解率高達(dá)24.12%，由此可見(jiàn)真菌b應(yīng)該是一株

13、理想的纖維素降解菌。Results木屑香菇菌渣纖維素降解菌酶活力的測(cè)定木屑香菇菌渣纖維素降解菌酶活力的測(cè)定細(xì)菌Results木屑香菇菌渣木質(zhì)素降解菌的篩選及酶活力木屑香菇菌渣木質(zhì)素降解菌的篩選及酶活力菌落直徑和變色圈直徑的比值測(cè)定結(jié)果菌落直徑和變色圈直徑的比值測(cè)定結(jié)果(dl/d2)由圖可以看出，4號(hào)菌株菌絲生長(zhǎng)速度較快，那么在相同時(shí)間內(nèi)，菌絲的生長(zhǎng)量較多，那么分解木質(zhì)素的速度也應(yīng)該更快Results木屑香菇菌渣纖維素降解菌酶活力的測(cè)定Results木屑香菇菌渣經(jīng)混菌發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)成分的變化 經(jīng)過(guò)混菌發(fā)酵，木屑香菇菌渣中粗蛋白的含量由原來(lái)的6.56%增加到了 17.41%；木屑香菇菌渣中粗纖維的含量

14、由原來(lái)的20.91%降為9.24%；木屑香菇菌渣中粗脂肪和粗灰分的含量變化不大；木屑香菇菌渣中無(wú)氮浸出物的含量由原來(lái)的34.21%增加到了50.98%。此外，由于啤酒酵母的作用，經(jīng)發(fā)酵后的木屑香菇菌渣還散發(fā)出淡淡的香味。Results木屑香菇菌渣經(jīng)混菌發(fā)酵后在畜禽中的應(yīng)用效果黃曲霉素B1檢測(cè)為陰性1毒性的初步判斷結(jié)果無(wú)毒2Results木屑香菇菌渣經(jīng)混菌發(fā)酵后在畜禽中的應(yīng)用效果 發(fā)酵菌渣對(duì)肉牛育肥效果的影響1發(fā)酵菌渣對(duì)奶牛產(chǎn)奶量的影響2發(fā)酵菌渣對(duì)大耳兔增重效果的影響3組別每頭日均產(chǎn)奶量(kg/d頭)每頭總產(chǎn)奶量(kg/頭)對(duì)照組23.110.97693.303.71 實(shí)驗(yàn)組23.011.02690.304.27 Results結(jié)論與展望結(jié)論與展望v 本研究篩選出來(lái)兩株分別用于降解纖維素和木質(zhì)素的菌株，然后再將這兩株菌株和已有的啤酒酵母等比例混合用于混菌發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)混菌發(fā)酵，木屑香菇菌渣中粗蛋白的含量由原來(lái)的6.56%增加到了 17.41%；木屑香菇菌渣中粗纖維的含量由原來(lái)的20.91%降為9.24%。此