微柱凝膠檢測技術(shù)

1、微柱凝膠檢測技術(shù)在輸血前微柱凝膠檢測技術(shù)在輸血前相容性試驗中的應(yīng)用相容性試驗中的應(yīng)用主要內(nèi)容一、血凝試驗技術(shù)發(fā)展二、在血型檢測中的應(yīng)用三、在抗體篩查中的應(yīng)用四、在交叉配血中的應(yīng)用一、血凝試驗技術(shù)發(fā)展一、血凝試驗技術(shù)發(fā)展o血凝實驗：是指抗體和紅細(xì)胞在液體介質(zhì)中發(fā)生的肉眼可見的凝集反應(yīng)。根據(jù)介質(zhì)的不同可以分為下列5種n鹽水法n凝聚胺法n酶介質(zhì)凝集試驗n試管抗人球蛋白法nMGIA- Coombs試驗（微柱凝膠） 鹽水介質(zhì)法l是最早最簡單的方法。是最早最簡單的方法。l懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見

2、的凝集。l主要檢測主要檢測IgM類抗體（類抗體（ABO系統(tǒng)、抗系統(tǒng)、抗E）。）。鹽水介質(zhì)法鹽水介質(zhì)法結(jié)果分析：先觀察有無溶血、再觀察有無凝。n要求：細(xì)胞濃度25%、血清與細(xì)胞比例、反應(yīng)溫度、弱凝集分析優(yōu)點：簡便、快捷、直觀、成本低。缺點：n不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體n人為因素影響大聚凝胺試驗原理：MPT法是利用陰離子溶液和聚凝胺減少 紅細(xì)胞表面的陽離子層及Zeta電位，促 進IgG與紅細(xì)胞的結(jié)合，縮短紅細(xì)胞之間 的距離而使紅細(xì)胞凝集。聚凝胺試驗+ + +聚凝胺聚凝胺+無凝集無凝集+有凝集反應(yīng)有凝集反應(yīng)- - - - - 枸櫞酸納枸櫞酸納- - - - -聚凝胺試驗o優(yōu)點n簡便快捷，可用于某些不完全抗體

3、檢測。o缺點n它受冷凝集、肝素等因素的影響較大n靈敏度低，對抗-K漏檢n人為影響因素大o振搖的力度和解聚的時間需要嚴(yán)格掌握，要求輕輕轉(zhuǎn)動試管并同時觀察結(jié)果，觀察時間不應(yīng)超過1 min，弱凝集用力振搖或放置時間稍長便可能消失。o試驗結(jié)果需在顯微鏡下觀察，故對操作者的技術(shù)要求較高，也增加了結(jié)果判斷的不確定性。 聚凝胺試驗o凝聚胺技術(shù)在交叉配血中具有快速檢出凝聚胺技術(shù)在交叉配血中具有快速檢出 IgG 抗體能力，抗體能力，但近年來隨著對臨床無效輸血的深入研究發(fā)現(xiàn)，凝聚胺但近年來隨著對臨床無效輸血的深入研究發(fā)現(xiàn)，凝聚胺試劑對弱的、效價低的試劑對弱的、效價低的 Rh 血型系統(tǒng)的抗體有漏檢的血型系統(tǒng)的抗體有

4、漏檢的情況，且不同廠家、不同批號的凝聚胺試劑在抗體的檢情況，且不同廠家、不同批號的凝聚胺試劑在抗體的檢出率均存在一定的差異。出率均存在一定的差異。酶介質(zhì)凝集試驗o原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，使紅細(xì)胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，使IgG分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。o常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶。酶介質(zhì)凝集試驗o優(yōu)點n可以增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性 Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯。o缺點n會破壞一些抗原的結(jié)構(gòu)(M、N、Fya、Fyb)n酶液批次不同，孵育時間均不同n操作復(fù)雜n少數(shù)人

5、對酶液過敏Coombs試驗o人紅細(xì)胞表面抗原與不完全抗體結(jié)合（常是IgG類抗體），不完全抗體致敏紅細(xì)胞，由于該不完全抗體分子質(zhì)量小，而且兩個Fab段擴張角度小，不能使相鄰紅細(xì)胞橋聯(lián)，紅細(xì)胞仍處于分散狀態(tài)，不出現(xiàn)肉眼可見的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。在反應(yīng)體系中，加入針對該抗體的抗體，即抗-抗體，該抗-抗體Fab段結(jié)合相鄰紅細(xì)胞上不完全抗體Fc段，出現(xiàn)肉眼可見的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，該抗-抗體即稱之為抗人球蛋白抗體。Coombs試驗 直接直接Coombs試驗試驗 用于檢測已粘附在紅細(xì)胞表面的不完全抗體。即將受檢紅細(xì)胞充分洗滌后，將抗球蛋白試劑加入已結(jié)合有抗體的受檢紅細(xì)胞懸液中，即可見細(xì)胞凝集。Coombs試驗試驗

6、 間接間接Coombs試驗試驗 用于檢測游離在血清中的不完全抗體。即將待測血清標(biāo)本加入具有特異抗原的紅細(xì)胞懸液中，如果抗原抗體相應(yīng)則發(fā)生結(jié)合，再加入抗球蛋白抗體，則出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集Coombs試驗oCoombs試驗是理論上最明確、最準(zhǔn)確的方法，是國際公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)。但是由于其繁瑣的操作，又不能同時對多份標(biāo)本檢測，只能將該試驗用在少數(shù)標(biāo)本的確定中，很難臨床常規(guī)開展。微柱凝膠檢測技術(shù)1990年，法國人年，法國人Y. Lapierre發(fā)表文章介紹了一項免疫學(xué)檢測新發(fā)表文章介紹了一項免疫學(xué)檢測新技術(shù)：將抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合，即微柱凝膠免疫技術(shù)：將抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合，即微柱凝膠

7、免疫實驗。該技術(shù)的本質(zhì)是血凝試驗，即紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔內(nèi)的實驗。該技術(shù)的本質(zhì)是血凝試驗，即紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的免疫凝集反應(yīng)。凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的免疫凝集反應(yīng)。 原理n微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集試驗，也可稱之微柱凝膠血凝試驗微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集試驗，也可稱之微柱凝膠血凝試驗（Microcolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHA），）， 在在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成紅細(xì)胞凝集團塊。在一定離微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，形成紅細(xì)胞凝集團塊。在一定離心力下，該凝集團塊位于膠表面或膠

8、中；而紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為心力下，該凝集團塊位于膠表面或膠中；而紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為分散的紅細(xì)胞，在同樣的離心力下，紅細(xì)胞沉降到微柱管尖底部。分散的紅細(xì)胞，在同樣的離心力下，紅細(xì)胞沉降到微柱管尖底部。廣闊應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測紅細(xì)胞抗原抗體檢測多種病原微生物檢測多種病原微生物檢測腫瘤標(biāo)志物檢測腫瘤標(biāo)志物檢測神經(jīng)內(nèi)分泌因子檢測神經(jīng)內(nèi)分泌因子檢測血小板抗原抗體檢測血小板抗原抗體檢測MGIAMGIA應(yīng)用ABO血型檢測；Rh血型抗原檢測；不規(guī)則抗體篩檢；交叉配血；HDN檢測；血小板抗體篩檢；血小板交叉配血。特點及優(yōu)點1.簡單，不需洗滌，對陰性結(jié)果不需確證試驗，解決了 Coombs試驗因

9、為程序復(fù)雜費時等原因未能在臨床常規(guī)應(yīng)用問題。2.使不完全抗體檢測理論“金標(biāo)準(zhǔn)”成為臨床的“金標(biāo)準(zhǔn)”。3.多份標(biāo)本一次離心出結(jié)果，有利于臨床大量標(biāo)本檢測。4.另外還具備準(zhǔn)確、敏感、標(biāo)本用量少、結(jié)果保存時間長、易于標(biāo)準(zhǔn)化、操作更安全等優(yōu)點。特點及優(yōu)點結(jié)果清晰、易于判讀，準(zhǔn)確度、敏感性高，標(biāo)準(zhǔn)化加樣、規(guī)范化操作，排除了傳統(tǒng)方法人為因素的干擾。不足較傳統(tǒng)方法成本稍高；抗體篩查、配血須經(jīng)孵育過程，耗時較傳統(tǒng)方法稍長，不適用于緊急輸血。二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用ABO、RhD血型定型檢測 進行ABO正反定型試驗、D抗原檢測，包括了臨床血型的常規(guī)檢測項目，并設(shè)有質(zhì)控孔。 操作簡單，結(jié)果清晰

10、、 準(zhǔn)確，尤其對弱抗原和 亞型的檢有傳統(tǒng)的方法 無法比擬的敏感性，成 為臨床血型檢測的常規(guī) 方法。 二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用Rh血型抗原檢測 進行D、C、c、E、e五種主要抗原檢測，達(dá)到最大相容性輸血。二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用注意事項： 要求標(biāo)準(zhǔn)化加樣、規(guī)范化操作，可排出了傳統(tǒng)方法中人 為因素的影響； 按要求準(zhǔn)備標(biāo)本，防止溶血、纖維蛋白等影響結(jié)果； 按要求準(zhǔn)備試劑卡，防止由于試劑卡問題影響結(jié)果。 二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用常見問題分析及處理： 陰性對照孔假陽性： 首先觀察標(biāo)本，是否有溶血、細(xì)胞黏連等情況；了解臨床信息，是否可能有自身凝集

11、、冷凝集等情況；試劑卡是否平衡； 樣本細(xì)胞進行洗滌、必要時可以進行溫鹽水洗滌，重新準(zhǔn)備試劑卡，按標(biāo)準(zhǔn)操作流程重復(fù)試驗。 二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用陽性結(jié)果反應(yīng)較弱： 由于老年、新生兒、腫瘤、白血病等導(dǎo)致抗原抗體反應(yīng)減弱。 首先判斷正反定型是否相符，如相符只是反應(yīng)較弱、不影響出結(jié)果； 也可以采取一些增強反應(yīng)：正定型反應(yīng)較弱：可采取增加細(xì)胞濃度、室溫孵育等方法；反定型反應(yīng)較弱：可采取增加血漿量、4孵育等方法。二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用混合凝集： 首先要判斷是否為真正意義上的混合凝集： 如凝膠表面出現(xiàn)類似一條紅線、并非真

12、正陽性；多數(shù)由于纖維蛋白、細(xì)胞破碎等引起；洗滌細(xì)胞、重新處理血漿可以解決。 如凝膠中有散在分布，判斷為弱陽性反應(yīng)。 如為標(biāo)準(zhǔn)的混合凝集，首先排除操作問題，如取血漿時 帶有自身細(xì)胞，可能引起反定型出現(xiàn)混合凝集；另外就是樣本問題，如：近期輸血、妊娠，造血干細(xì)胞移植、白血病、亞型等。二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用 正反定型不符： 建議采用“三步法”進行分析、確證。第一步：復(fù)查ABO血型，排除人為因素、操作失 誤。重新采集血樣、核對試劑和器材。第二步：將需定型病人歸納進五大類33種原因分 類表，“對號入座”，逐一排除，剩下幾條 不能排除者第三步

13、：針對剩下的幾種不能排除的因素，設(shè)計 針對性實驗來驗證。二、在血型檢測中的應(yīng)用二、在血型檢測中的應(yīng)用在血型檢測時出現(xiàn)問題，較簡單的常規(guī)處理主要有：洗滌細(xì)胞重復(fù)試驗，O細(xì)胞、自身細(xì)胞做反定，增加細(xì)胞濃度、血漿量，4、室溫孵育后再離心等。三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用不規(guī)則抗體是指不符合ABO 血型系L andsteiner 法則的血型抗體, 也就是抗-A、抗-B 以外的血型抗體, 其中多為IgG 抗體。不規(guī)則抗體主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生, 在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞, 必須通過特殊介質(zhì)(如酶、抗人球蛋白、凝聚胺等) 才能使致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反

14、應(yīng)。目前, 臨床上報道的交叉配血不合大多數(shù)是由于患者血液中不規(guī)則抗體的存在而引起的。國內(nèi)報道的溶血性輸血反應(yīng)共126例, 其中檢測出不規(guī)則抗體121例, 占溶血性輸血反應(yīng)原因的96%。輸血前不規(guī)則抗體篩查可以避免因輸血引起的溶血反應(yīng), 確保臨床輸血安全。三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用臨床輸血技術(shù)規(guī)范規(guī)定：交叉配血不合；有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接收多次輸血者；需要進行抗體篩選試驗。主要是在配血前，利用標(biāo)準(zhǔn)篩檢細(xì)胞檢測患者血漿中的抗體。檢測細(xì)胞的要求 不能將多人份紅細(xì)胞混合，一定要用2-3人份的試劑紅細(xì)胞，以避免紅細(xì)胞混合后，對弱抗原紅細(xì)胞的稀釋。 美國FDA對注冊和

15、批準(zhǔn)作為商品供應(yīng)的用作不規(guī)則抗體篩檢的試劑紅細(xì)胞的要求為必須表達(dá)：D、C、E、c、e、M、N、S、s，Pl、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb，JKa、JKb。三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用通過實踐發(fā)現(xiàn),對申請輸血患者進行常規(guī)抗體篩選后,篩選結(jié)果陰性者交叉配血能在很短間內(nèi)完成,很少出現(xiàn)不合現(xiàn)象,大大提高了配血成功率;對陽性者則進行進一步抗體鑒定,提前準(zhǔn)備相合血液,以保證體內(nèi)有不規(guī)則抗體的患者及時用血,避免由血型不合引起的輸血反應(yīng),收到了滿意效果。另外，部分血型系統(tǒng)的抗原、抗體具有劑量效應(yīng)（如Rh）,在交叉配血中可能出現(xiàn)漏檢的情況（如雜合子可能不出現(xiàn)陽性反應(yīng)）,在抗

16、體篩查試驗中由于使用標(biāo)準(zhǔn)篩檢細(xì)胞，排除了劑量效應(yīng)的影響。三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用不規(guī)則抗體篩檢微柱凝膠檢測技術(shù)沿用抗人球蛋白的原理，將傳統(tǒng)抗人球蛋白試驗轉(zhuǎn)移到凝膠卡中，對患者血漿抗體進行篩查，解決了傳統(tǒng)方法因操作復(fù)雜費時的問題，應(yīng)用于臨床常規(guī)檢測。三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用注意事項：按要求準(zhǔn)備標(biāo)本，上清澄清；標(biāo)準(zhǔn)化加樣，先加篩檢細(xì)胞，后加血漿；注意加樣后需要37孵育15min，再離心。三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用三、在不規(guī)則抗體篩查中的應(yīng)用常見問題分析、處理：假陽性： 如凝膠表面出現(xiàn)紅線、尖底部細(xì)胞呈陰性、呈疑似混合凝集，多為纖維蛋

17、白影響或標(biāo)準(zhǔn)篩檢細(xì)胞有溶血破碎情況；洗滌細(xì)胞、重新處理血漿可以解決。 如凝膠中有很少細(xì)胞散在分布，需重復(fù)試驗加以確認(rèn)；在冬天氣溫較低時可能引起細(xì)胞活性降低、造成假陽性（拖尾）；可以考慮適當(dāng)延長孵育時間（一般延長5min）。四、在交叉配血中的應(yīng)用四、在交叉配血中的應(yīng)用 檢測受血者血清中抗體和獻血者紅細(xì)胞抗原為主側(cè)交叉配血試驗，以及檢測受血者紅細(xì)胞和獻血者血清中抗體為次側(cè)交叉配血試驗相容性，對其中是不完全抗體的，只能應(yīng)用間接抗人球蛋白試驗確定其相容性。 ABO血型抗體是完全抗體，但更多的臨床有意義抗體是不完全抗 體，如Rh、Kidd、Duffy等血型抗體。如有輸血史、妊娠史（包括流產(chǎn)史）、應(yīng)用過血

18、液制品史等情況的患者輸血前都應(yīng)該進行檢測不完全抗體的交叉配血試驗。四、在交叉配血中的應(yīng)用四、在交叉配血中的應(yīng)用交叉配血 含有抗人球蛋白試劑，可同時檢出IgM 和IgG類抗體，另有加入抗C3d 的品種，使臨床輸血更安全，杜絕輸血反應(yīng)的發(fā)生。 經(jīng)過孵育，排除 傳統(tǒng)方法冷凝集 的干擾。四、在交叉配血中的應(yīng)用四、在交叉配血中的應(yīng)用 通過凝聚胺配血法和微柱凝膠卡配血法的結(jié)果比較，100例交叉配血實驗中，凝聚胺法有3例發(fā)生凝集反應(yīng)，其中1例為受血者血液標(biāo)本纖維蛋白去除不完全，1例為受血者血液標(biāo)本高冷凝集素，1例為主側(cè)不凝集、次測凝集，經(jīng)抗人球蛋白試驗呈陽性；微柱凝膠法有5例發(fā)生凝集反應(yīng)，其中1例為受血者血

19、液標(biāo)本纖維蛋白去除不完全，1例為受血者血液標(biāo)本高冷凝集素，3例為主側(cè)不凝集、次測凝集，經(jīng)抗人球蛋白試驗均呈陽性。四、在交叉配血中的應(yīng)用四、在交叉配血中的應(yīng)用注意事項：按要求準(zhǔn)備標(biāo)本，血辮血樣要離心；主、次側(cè)加樣成分；加樣順序，先加紅細(xì)胞懸液、后加血漿；可以使用低離子液配制紅細(xì)胞懸液，增強反應(yīng)。四、在交叉配血中的應(yīng)用四、在交叉配血中的應(yīng)用配血不合配血不合標(biāo)本準(zhǔn)備標(biāo)本準(zhǔn)備血型影響血型影響方法選擇方法選擇免疫性原免疫性原因因非免疫性非免疫性原因原因其他其他 多種因素相互交織標(biāo)本準(zhǔn)備正確的交叉配血結(jié)果來源于正確的血液標(biāo)本n嚴(yán)禁從靜脈輸液部位采集標(biāo)本。因為不僅所用藥物會對配血結(jié)果產(chǎn)生影響，而且稀釋的血液

20、標(biāo)本配血時極易發(fā)生前帶或后滯現(xiàn)象。n血標(biāo)本應(yīng)代表患者當(dāng)前的免疫學(xué)狀態(tài)，必須采用輸血前 3 天內(nèi)的標(biāo)本。血型影響在引起配血不合或溶血性輸血反應(yīng)的原因中 nRh 系統(tǒng)的免疫抗體位居第 1 位（占 50. 75%）n其次是自身抗體（占 41. 79%，主要發(fā)生在自身免疫性溶血性貧血病例中）n第 3 位才是 ABO 和 Rh 以外其他系統(tǒng)抗體（僅占7. 46%血型影響 由不規(guī)則抗體引起配血不合共由不規(guī)則抗體引起配血不合共53例例,占總數(shù)占總數(shù)581份標(biāo)本份標(biāo)本的的8.43%;單一抗體單一抗體48例例,占占90.4%;復(fù)合抗體復(fù)合抗體5例例,占占9.6%。Rh系統(tǒng)系統(tǒng)35例例,占占66. 04%; MN

21、Ss系統(tǒng)系統(tǒng)15例例,占占28.3%;抗抗A1 2例例,占占3.74%;Diego 1例例,占占1.88%免疫性原因n免疫性原因主要由機體產(chǎn)生不規(guī)則抗體或自身抗體所造成的，交叉配血時表現(xiàn)為主側(cè)凝集或主次側(cè)均可發(fā)生凝集。國內(nèi)報道的交叉配血不合主要由不規(guī)則抗體所致，占61.5%，而其中又以抗-E和抗-C多見。免疫性原因 自身抗體引起的交叉配血不合，包括冷凝集和溫型自身抗體導(dǎo)致的非特異性凝集。主要見于自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡所致的自身免疫性溶血性貧血或肝硬化的病人，這種類型引起的交叉配血不合主次側(cè)均可凝集。n對于冷凝集現(xiàn)象可以采用自身對照和 37 水浴以及遞增鹽水溫度洗滌患者紅細(xì)胞等方法排除

22、非特異性凝集的干擾。n對于溫型自身抗體可以采用吸散和放散試驗后取患者的紅細(xì)胞與血清和同型的洗滌紅細(xì)胞進行交叉配血。n自身免疫性溶血性貧血、急性溶血時，應(yīng)盡量避免輸血。非免疫性原因n非免疫性原因是由于血清蛋白紊亂、白球蛋白倒置或者是某些藥物破壞了紅細(xì)胞表面的zeta 電位，從而使紅細(xì)胞呈串錢狀凝集，交叉配血時主要表現(xiàn)為主側(cè)凝集。非免疫性原因 鏡下紅細(xì)胞扁平而表面相互依附，呈串錢狀堆集的有21 例，因不是真正的凝集， 紅細(xì)胞膜完整。查看患者病例，2例為多發(fā)性骨髓瘤患者，5例為肝病患者 （蛋白倒置），14例分別因出血、創(chuàng)傷休克或術(shù)后，有補充血容量而輸右旋糖肝史。n血清蛋白紊亂及白球蛋白比例倒置引起的

23、假凝集。多發(fā)性骨髓瘤患者、肺癌患者、肝癌患者、鉤蟲病。n藥物引起的交叉配血不合。因出血、創(chuàng)傷休克或術(shù)后，有補充血容量而輸右旋糖肝史、應(yīng)用VitC和 KCl 也可引起。其他oTF抗原（T多凝集紅細(xì)胞）n正常情況下，人紅細(xì)胞TF抗原為隱蔽抗原，不暴露，但是在細(xì)菌感染時，細(xì)菌分泌的神經(jīng)氨酸酶可使紅細(xì)胞膜TF抗原暴露。正常人血清中均含有抗-TF抗體（自然發(fā)生的抗體），與TF抗原暴露的紅細(xì)胞均發(fā)生血凝反應(yīng)，稱之T多凝集現(xiàn)象。此外一些腫瘤、白血病患者的紅細(xì)胞也發(fā)生TF抗原暴露。n對于腸套疊、腸梗阻、敗血癥和菌血癥患者的紅細(xì)胞血型檢測，應(yīng)用單克隆抗體-A/-B血型試劑，其中不含有-T，才能正確判斷血型。n在

24、細(xì)菌感染患者，特別是腸套疊、腸梗阻患者以及對腫瘤、白血病患者輸血前交叉配血時，一定要高度重視次側(cè)管，避免漏檢TF暴露的紅細(xì)胞。具體原因分析及處理主側(cè)不合： 患者血漿原因： 有針對供者紅細(xì)胞的抗體(抗體鑒定) 有自身抗體(自身抗體配血法，如吸收放散等處理后配血) 有冷凝集素(升溫后配血) 有血漿蛋白紊亂(加鹽水稀釋) 供者紅細(xì)胞原因： 直抗陽性(換供者) 全/多凝集(換供者) 其他： 藥物抗體(罕見，用藥史，停藥后配血)具體原因分析及處理次側(cè)不合：供血者血漿原因：（換供者） 針對患者紅細(xì)胞的抗體 自身抗體 冷凝集素 血漿蛋白紊亂患者紅細(xì)胞的原因： 直抗陽性(45度放散后再配血)(常見原因) 全凝集或多凝集 粘附免疫球蛋白(洗滌紅細(xì)胞)常規(guī)處理方法建議采用“三步法”：第一步，排除人為因素/操作失誤和供者血液不合格 1、人為因素/操作失誤 1) 標(biāo)本污染, 標(biāo)本取錯或加錯; 2)試劑 不規(guī)范, 試劑污染; 3)操作不規(guī)范, 或未嚴(yán)格按照試劑說明書操作; 4) 采用AHG試驗時的離心力不標(biāo)準(zhǔn)或過大。 2、供者血液不合格 1 )供者紅細(xì)胞直接抗球蛋白試驗; 2)供者紅細(xì)胞+ AB 型血清試驗(排除全凝集或多凝集)。常