流感嗜血桿菌

1、 腸道桿菌腸道桿菌(enteric bacilli) 一大群居住在人和動物腸道中生物學性狀近似一大群居住在人和動物腸道中生物學性狀近似 的的桿菌桿菌, , 廣泛分布于水、土壤或腐物中。廣泛分布于水、土壤或腐物中。 分類學上的地位分類學上的地位: :伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊 ( (第版第版) )的第的第大類的兼性厭氧大類的兼性厭氧桿菌。桿菌。 多數(shù)是腸道的正常菌群多數(shù)是腸道的正常菌群, ,少數(shù)為致病菌少數(shù)為致病菌 至少有至少有3030個菌屬，個菌屬，120120多個菌種多個菌種腸道桿菌共同特點腸道桿菌共同特點v形態(tài)結構形態(tài)結構 G中小桿菌，無芽孢，多數(shù)有周鞭毛（除志中小桿菌，無芽

2、孢，多數(shù)有周鞭毛（除志賀菌屬、克雷伯菌屬、鼠疫耶爾森菌和賀菌屬、克雷伯菌屬、鼠疫耶爾森菌和EIEC），無芽胞，少數(shù)菌屬細菌可形成莢膜。），無芽胞，少數(shù)菌屬細菌可形成莢膜。及菌毛及菌毛v培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性 需氧或兼性厭氧需氧或兼性厭氧營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基可生長，菌落相似，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基可生長，菌落相似，形成灰白色中等大小形成灰白色中等大小S型菌落。型菌落。v生化反應生化反應發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、或產(chǎn)酸產(chǎn)氣；發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、或產(chǎn)酸產(chǎn)氣；乳糖發(fā)酵試驗：非致病菌乳糖發(fā)酵試驗：非致病菌 +，致病菌，致病菌 -（除外變形（除外變形桿菌）。觸酶陽性；氧化酶陰性；硝酸鹽還原為桿菌）。觸酶陽性；氧化酶陰性

3、；硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。亞硝酸鹽。EMB（伊紅伊紅美蘭培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭美蘭培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭選擇作用選擇作用（弱選）（弱選）大腸埃希菌大腸埃希菌（非致病菌）（非致病菌）乳糖乳糖發(fā)酵發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)酸伊紅伊紅結合結合美蘭美蘭形成紫黑色金屬光形成紫黑色金屬光澤化合物澤化合物有色的乳糖發(fā)酵菌落有色的乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌等傷寒沙門菌等（致病菌）（致病菌）乳糖乳糖不發(fā)酵不發(fā)酵伊紅美蘭不能結合伊紅美蘭不能結合無色的乳糖不發(fā)酵菌落無色的乳糖不發(fā)酵菌落EMB平板上的平板上的E.coliSS培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑乳糖、中性紅指示劑、膽

4、鹽、煌綠等抑制劑選擇抑制作選擇抑制作用用（強選）（強選）大腸埃希菌大腸埃希菌 產(chǎn)酸產(chǎn)酸 桃紅色乳糖發(fā)酵菌落桃紅色乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌傷寒沙門菌 無色乳糖不發(fā)酵菌落無色乳糖不發(fā)酵菌落膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及G+菌，提高腸道致病菌檢出率菌，提高腸道致病菌檢出率乳糖乳糖發(fā)酵發(fā)酵中性紅中性紅呈紅色呈紅色乳糖乳糖不發(fā)酵不發(fā)酵微生物檢驗微生物檢驗1.分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)2.鑒定鑒定（1）初步鑒定：確定腸桿菌科的細菌，應采用葡萄糖氧化-發(fā)酵試驗及氧化酶試驗與弧菌科和非發(fā)酵菌加以鑒別；腸桿菌科細菌的分群，多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗，將腸桿菌科的細菌分為三個類群；選擇生化

5、反應進行屬種鑒別。KIA和MIU將細菌初步定屬。（2）最后鑒定：根據(jù)生化反應的結果初步定屬、種，再根據(jù)血清凝集反應才能作出最后判斷。甲基紅試驗甲基紅試驗v原理：細菌分解糖，產(chǎn)生丙酮酸，進一步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基pH維持在4.4以下，加入甲基紅后，使甲基紅呈現(xiàn)紅色反應。此為甲基紅試驗陽性。v培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水v試劑：甲基紅試劑v結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： v應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸大量混合酸大量混合酸pH降至降至4.4以下以下甲基紅試劑甲基紅試劑培養(yǎng)基培養(yǎng)基變紅變紅甲基紅試驗甲基紅試驗甲基紅試驗

6、V-P試驗v原理：細菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酰甲基甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基結合，生成紅色化合物。v培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水v結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： v應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅VP試驗脫酸葡萄糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅脫酸靛基質(zhì)試驗靛基質(zhì)試驗v原理：細菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)

7、（吲哚），靛基質(zhì)與試劑對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。v培養(yǎng)基：蛋白胨水v試劑：靛基質(zhì)試劑（含對二甲基氨基苯甲醛）v結果：加入試劑后，培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色液面：+ 培養(yǎng)基液面為黃色： v應用：用于腸道桿菌的鑒定靛基質(zhì)試驗原理靛基質(zhì)試驗原理色氨酸酶色氨酸酶色氨酸色氨酸 靛基質(zhì)靛基質(zhì)（吲哚）（吲哚） 玫瑰靛基質(zhì)玫瑰靛基質(zhì)（玫瑰吲哚）（玫瑰吲哚）對二甲基氨基苯甲醛對二甲基氨基苯甲醛靛基質(zhì)試驗尿素酶試驗尿素酶試驗v原理：產(chǎn)生脲酶的細菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。v培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基v試劑：酚紅指示劑v結果：培養(yǎng)基變紅：+v 培養(yǎng)基不變色：-v應用：腸桿菌科屬間鑒定尿素酶試驗原理

8、尿素酶試驗原理尿素尿素尿素酶尿素酶氨氨+CO2培養(yǎng)基培養(yǎng)基pH升高升高酚紅呈堿性變色酚紅呈堿性變色枸櫞酸鹽利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗v原理：某些細菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽 作為唯一碳源，細菌生長過程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽和分解銨鹽生成的氨，使培養(yǎng)基變堿，是指示劑呈堿性反應。v培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽培養(yǎng)基v試劑：溴麝香草酚藍（pH6.0以下呈黃色，pH7.6以上呈藍色）v結果：培養(yǎng)基變藍：+ 培養(yǎng)基不變色：v應用：腸桿菌科屬間鑒別枸櫞酸鹽利用試驗原理枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH下降溴麝香草酚藍 呈堿性變色培養(yǎng)基變藍培養(yǎng)基22埃希菌屬埃希菌屬 埃希菌屬（埃希菌屬（

9、EscherichiaEscherichia）有）有6 6個種，個種，只有大腸埃希只有大腸埃希菌（菌（E E. .colicoli）是臨床最常見、最重要的一個菌種。是臨床最常見、最重要的一個菌種。 大腸埃希菌是腸道中重要的正常菌群；大腸埃希菌是腸道中重要的正常菌群； 在宿主免疫力下降或細菌侵入腸外組織器官后即在宿主免疫力下降或細菌侵入腸外組織器官后即可成為可成為機會致病菌機會致病菌，引起腸道外感染；，引起腸道外感染； 一些血清型的大腸埃希菌具有致病性，能導致人一些血清型的大腸埃希菌具有致病性，能導致人類胃腸炎；類胃腸炎； 在環(huán)境衛(wèi)生和食品衛(wèi)生學中常被用作糞便污染的在環(huán)境衛(wèi)生和食品衛(wèi)生學中常被用

10、作糞便污染的衛(wèi)生學檢測指標衛(wèi)生學檢測指標。23生物學性狀生物學性狀v中等大小的中等大小的G-G-桿菌、無芽胞、有周鞭毛、菌毛桿菌、無芽胞、有周鞭毛、菌毛v營養(yǎng)要求不高。腸道鑒別培養(yǎng)基形成有色菌落營養(yǎng)要求不高。腸道鑒別培養(yǎng)基形成有色菌落，SSSS平板上呈紅色大菌落平板上呈紅色大菌落v發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，分解蔗糖因菌株而異，尿素酶試驗陰性。，分解蔗糖因菌株而異，尿素酶試驗陰性。吲哚、甲基紅、吲哚、甲基紅、V-PV-P、枸櫞酸鹽試驗（、枸櫞酸鹽試驗（IMViCIMViC試試驗）為驗）為+ + - -+ + - -?？耸想p糖鐵瓊脂（克氏雙糖

11、鐵瓊脂（KIAKIA）：斜面和底層均產(chǎn)酸產(chǎn)）：斜面和底層均產(chǎn)酸產(chǎn)氣，氣，H H2 2S S（- -）。）。動力動力- -吲哚吲哚- -尿素（尿素（MIUMIU）培養(yǎng)基為）培養(yǎng)基為+ + -+ + -。24志賀菌（志賀菌（Shigella)Shigella) 人類細菌性痢疾的病原菌，俗稱人類細菌性痢疾的病原菌，俗稱痢疾桿菌痢疾桿菌一、生物學性狀一、生物學性狀v形態(tài)與染色：形態(tài)與染色：G G、短小桿菌、無芽胞，無、短小桿菌、無芽胞，無鞭毛，無莢膜，有菌毛。鞭毛，無莢膜，有菌毛。v培養(yǎng)特性：培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求低，營養(yǎng)要求低，SSSS平板上呈無色半平板上呈無色半透明菌落透明菌落v生化反應：生化反應：葡

12、萄糖葡萄糖+ +，乳糖，乳糖- - H H2 2S - S - ，動力，動力- - 可與沙門菌、大腸埃希菌區(qū)別?？膳c沙門菌、大腸埃希菌區(qū)別。25培養(yǎng)培養(yǎng)SS平板平板有色菌落有色菌落無色菌落無色菌落26v抗原構造及分類：抗原構造及分類： O O抗原（分類依據(jù)）抗原（分類依據(jù)）：包括群和型特異性抗：包括群和型特異性抗原原A A群群: :痢疾志賀氏菌痢疾志賀氏菌 B B群群: :福氏志賀氏菌福氏志賀氏菌 C C群群: :鮑氏志賀氏菌鮑氏志賀氏菌 D D群群: :宋內(nèi)氏志賀氏菌宋內(nèi)氏志賀氏菌 K K抗原抗原無分類意義無分類意義v抵抗力：抵抗力：比其它腸道桿菌弱，糞便標本立即比其它腸道桿菌弱，糞便標本立

13、即送檢；易形成抗藥性。送檢；易形成抗藥性。沙門菌屬沙門菌屬 是腸桿菌科中最復雜的菌屬，有是腸桿菌科中最復雜的菌屬，有2000種以種以上血清型上血清型 對人類有致病性對人類有致病性 腸熱癥腸熱癥傷寒沙門菌，甲型副傷寒沙門菌傷寒沙門菌，甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌、希氏沙門菌、肖氏沙門菌、希氏沙門菌 食物中毒食物中毒鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌、腸炎沙門菌 敗血癥敗血癥豬霍亂沙門菌最常見豬霍亂沙門菌最常見生物學性狀生物學性狀v形態(tài)染色形態(tài)染色符合腸桿菌特點，多為周毛菌，有菌毛符合腸桿菌特點，多為周毛菌，有菌毛傷寒桿菌的周身鞭毛傷寒桿菌的周身鞭毛 培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性

14、 EMB、SS上呈無色透明乳糖不發(fā)酵菌落上呈無色透明乳糖不發(fā)酵菌落麥康凱培養(yǎng)基上的傷寒桿菌菌落麥康凱培養(yǎng)基上的傷寒桿菌菌落EMB培養(yǎng)基，上為培養(yǎng)基，上為E.coli，下為傷寒桿菌下為傷寒桿菌v生化反應生化反應乳糖（乳糖（-），葡萄糖（），葡萄糖（+），多數(shù)），多數(shù)H2S+，動力動力+，尿素（，尿素（-）v抗原結構抗原結構O抗原抗原特異性低、穩(wěn)定、分群（組）特異性低、穩(wěn)定、分群（組）H抗原抗原特異性高，不穩(wěn)定，分型特異性高，不穩(wěn)定，分型Vi抗原（毒力抗原）抗原（毒力抗原）不穩(wěn)定，可阻止不穩(wěn)定，可阻止“O”凝集凝集流感嗜血桿菌名稱由來與流感的關系是流感時繼發(fā)感染的常見細菌嗜血桿菌屬（Haemoph

15、ilus） 根據(jù)根據(jù)BergysBergys鑒定細菌學手冊鑒定細菌學手冊第九版（第九版（19941994）記載，嗜）記載，嗜血桿菌屬列為群血桿菌屬列為群5 5中的亞群中的亞群3 3，其中和臨床有關的有，其中和臨床有關的有9 9個種即：個種即： 流感嗜血桿菌（流感嗜血桿菌（H.influenzaeH.influenzae） 副流感嗜血桿菌（副流感嗜血桿菌（H .H .parainfluenzaeparainfluenzae） 溶血嗜血桿菌（溶血嗜血桿菌（H .H .haemolyticushaemolyticus） 副溶血嗜血桿菌（副溶血嗜血桿菌（H .H .parahemolyticuspar

16、ahemolyticus） 杜克嗜血桿菌（杜克嗜血桿菌（H .H .ducreyiducreyi） 埃及嗜血桿菌（埃及嗜血桿菌（H .H .aegyptiusaegyptius） 嗜沫嗜血桿菌（嗜沫嗜血桿菌（H .H .aphrophilusaphrophilus） 副嗜沫嗜血桿菌（副嗜沫嗜血桿菌（H .H .paraphrophilusparaphrophilus） 遲緩嗜血桿菌（遲緩嗜血桿菌（H .H .segnissegnis）代表菌：流感嗜血桿菌（代表菌：流感嗜血桿菌（H .H .influenzaeinfluenzae） 1.1. 初次分離為初次分離為GG短小桿菌短小桿菌；2.2.陳

17、舊培養(yǎng)基或恢復其病灶中，具有多形性陳舊培養(yǎng)基或恢復其病灶中，具有多形性（球桿、長桿或絲狀）（球桿、長桿或絲狀）; ;3.3.無芽胞，無鞭毛，不能運動無芽胞，無鞭毛，不能運動; ;4.4.毒力株（粘液型菌株）在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)毒力株（粘液型菌株）在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上，基上，6 68h8h有明顯莢膜有明顯莢膜，在陳舊培養(yǎng)物，在陳舊培養(yǎng)物中莢膜消失。中莢膜消失。 流感嗜血桿菌（流感嗜血桿菌（H.influenzae）需養(yǎng)菌。培養(yǎng)較難。需養(yǎng)菌。培養(yǎng)較難。培養(yǎng)基中需加入血液，以提供培養(yǎng)基中需加入血液，以提供X因子和因子和V因子因子 （巧克力色培養(yǎng)基）（巧克力色培養(yǎng)基） X因子因子 血紅素血紅素 V因子因子

18、 輔酶輔酶或輔酶或輔酶培養(yǎng)特性巧克力色平板上培養(yǎng)：經(jīng)巧克力色平板上培養(yǎng)：經(jīng)3535，181824h24h培養(yǎng)形成微培養(yǎng)形成微小（小（0.50.50.8mm0.8mm）無色透明，不溶血，呈露滴樣小）無色透明，不溶血，呈露滴樣小菌落。菌落。 48h48h后形成灰白色較大的菌落。后形成灰白色較大的菌落。培養(yǎng)特性 當流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌在同一血平板上培當流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌在同一血平板上培養(yǎng)時，由于金黃色葡萄球菌能合成較多的養(yǎng)時，由于金黃色葡萄球菌能合成較多的V V因子，并彌因子，并彌散到培養(yǎng)基里，可促進流感嗜血桿菌生長，故散到培養(yǎng)基里，可促進流感嗜血桿菌生長，故在金黃在金黃色葡萄球菌菌落周圍菌落較大，而離金黃葡萄球菌越色葡萄球菌菌落周圍菌落較大，而離金黃葡萄球菌越遠者則流感嗜血桿菌的菌落越小。遠者則流感嗜血桿菌的菌落越小。衛(wèi)星現(xiàn)象（衛(wèi)星現(xiàn)象（satellite phenomen