選修專題二植物細(xì)胞工程復(fù)習(xí)PPT課件

1、1、微型繁殖（一）植物繁殖新途徑：（一）植物繁殖新途徑：保持優(yōu)良品種的遺傳特性保持優(yōu)良品種的遺傳特性; ;因?yàn)槭牵o(wú)性繁殖）因?yàn)槭牵o(wú)性繁殖）；高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖，有利于工廠化培養(yǎng)；選繁殖，有利于工廠化培養(yǎng)；選材少，培養(yǎng)周期短，繁殖率高，材少，培養(yǎng)周期短，繁殖率高，便于自動(dòng)化管理；便于自動(dòng)化管理； 與傳統(tǒng)繁殖技術(shù)相比，有何特點(diǎn)？第1頁(yè)/共45頁(yè)作物脫毒材料及原因: :莖尖或根尖細(xì)胞這些部位含病毒極少，甚至無(wú)病毒。2 作物脫毒（培育無(wú)病毒植株）作物脫毒（培育無(wú)病毒植株）第2頁(yè)/共45頁(yè) 通過(guò)植物組織培養(yǎng)的方法獲得的通過(guò)植物組織培養(yǎng)的方法獲得的胚狀體、不定芽、頂芽

2、和胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽腋芽等材料外面包被著人工薄膜，在適宜的條件下可以發(fā)芽成等材料外面包被著人工薄膜，在適宜的條件下可以發(fā)芽成幼苗的種子幼苗的種子。 后代無(wú)性狀分離，保持優(yōu)良特性后代無(wú)性狀分離，保持優(yōu)良特性不受季節(jié)、氣候和地域的限制不受季節(jié)、氣候和地域的限制易于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸易于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸（人工胚乳中加入適量的無(wú)機(jī)鹽、碳水化合物和蛋白質(zhì)；另外還有農(nóng)藥、抗生素、有益菌等）人工種皮 胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽組成：優(yōu)點(diǎn)為促胚狀體的發(fā)育可加哪些物質(zhì)？第3頁(yè)/共45頁(yè)選擇選擇親本親本有性有性雜交雜交F1代代單倍體單倍體植植 株株誘誘 導(dǎo)導(dǎo)染色體加倍染色體加倍可可 育育純合子純合子選擇所選擇所需類型需

3、類型u 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)明顯縮短育種年限，加速育種進(jìn)程明顯縮短育種年限，加速育種進(jìn)程后代都是純合子，能穩(wěn)定遺傳后代都是純合子，能穩(wěn)定遺傳花粉離花粉離體培養(yǎng)體培養(yǎng)二二. .作物的新品種培育作物的新品種培育第4頁(yè)/共45頁(yè)在植物組織培養(yǎng)的過(guò)程中，由于培養(yǎng)的細(xì)胞一直處于不在植物組織培養(yǎng)的過(guò)程中，由于培養(yǎng)的細(xì)胞一直處于不斷的分生狀態(tài)，因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力（如斷的分生狀態(tài)，因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力（如射線、化學(xué)物質(zhì)等）的影響而產(chǎn)生突變。射線、化學(xué)物質(zhì)等）的影響而產(chǎn)生突變。（2 2）突變體的利用）突變體的利用：2. 2.突變體的利用突變體的利用篩選對(duì)人們有利突變體, ,進(jìn)而培育新品種（1）突變體的

4、產(chǎn)生第5頁(yè)/共45頁(yè)比較：比較：?jiǎn)伪扼w育種：?jiǎn)伪扼w育種：突變體的利用：突變體的利用：植物體細(xì)胞雜交育種植物體細(xì)胞雜交育種第6頁(yè)/共45頁(yè)（三）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)（三）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)(1)(1)種類種類: :蛋白質(zhì)蛋白質(zhì), ,脂肪脂肪, ,糖類糖類, ,藥物藥物, ,香料香料, ,生物堿等生物堿等(2)(2)技術(shù)技術(shù): :植物的組織培養(yǎng)植物的組織培養(yǎng). . 植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)第7頁(yè)/共45頁(yè)專題2 細(xì)胞工程湖北省咸寧高中湖北省咸寧高中高三生物備課組高三生物備課組第8頁(yè)/共45頁(yè)考考 綱綱 要要 求求 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) B B 動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞

5、克隆 A A 細(xì)胞融合與單克隆抗體細(xì)胞融合與單克隆抗體 A A第9頁(yè)/共45頁(yè)所依據(jù)的理論基礎(chǔ) 植物細(xì)胞工程通常采用的技 術(shù) 手 段 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性第10頁(yè)/共45頁(yè)一、植物組織培養(yǎng)的基本原理一、植物組織培養(yǎng)的基本原理植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性原因：原因：表現(xiàn)的條件：表現(xiàn)的條件：在植物體中未表現(xiàn)的原因：在植物體中未表現(xiàn)的原因：每個(gè)細(xì)胞都含有本物種的全部遺傳信息，每個(gè)細(xì)胞都含有本物種的全部遺傳信息，都具有發(fā)育成一個(gè)完整個(gè)體的潛能。都具有發(fā)育成一個(gè)完整個(gè)體的潛能。離體離體無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境適宜的培養(yǎng)基適宜的

6、培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物激素營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物激素) 適宜的環(huán)境條件適宜的環(huán)境條件(溫度等溫度等)在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，基因在特定的時(shí)空條件下選擇性表達(dá)的在個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，基因在特定的時(shí)空條件下選擇性表達(dá)的結(jié)果。結(jié)果。操作水平：操作水平：細(xì)胞水平、細(xì)胞器水平細(xì)胞水平、細(xì)胞器水平第11頁(yè)/共45頁(yè)二、植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的材料：植物組織培養(yǎng)的材料：達(dá)到無(wú)菌要求采取的方法：達(dá)到無(wú)菌要求采取的方法：幼嫩的細(xì)胞、組織、器官（植物的莖尖、根尖、葉、花藥）幼嫩的細(xì)胞、組織、器官（植物的莖尖、根尖、葉、花藥）操作人員：酒精棉球擦手消毒、無(wú)菌操作操作人員：酒精棉球擦手消毒、無(wú)菌操作操作器械：超凈工作臺(tái)、無(wú)菌濾紙、瓷

7、磚、解剖刀、培養(yǎng)瓶進(jìn)行消毒操作器械：超凈工作臺(tái)、無(wú)菌濾紙、瓷磚、解剖刀、培養(yǎng)瓶進(jìn)行消毒外植體：酒精消毒外植體：酒精消毒無(wú)菌水沖洗無(wú)菌水沖洗次氯酸鈉處理次氯酸鈉處理無(wú)菌水沖洗無(wú)菌水沖洗培養(yǎng)基殺菌培養(yǎng)基殺菌:高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌第12頁(yè)/共45頁(yè)植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分成分無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分：礦質(zhì)元素：礦質(zhì)元素有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分： 碳源：蔗糖碳源：蔗糖( (能夠提供植物細(xì)胞新陳代謝所需的營(yíng)養(yǎng) 物質(zhì)，同時(shí)還能夠維持培養(yǎng)基適當(dāng)?shù)臐B透壓。) 含含N N物質(zhì)：包括維生素和某些有機(jī)添加物物質(zhì)：包括維生素和某些有機(jī)添加物植物激素植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素等：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分

8、裂素等瓊脂瓊脂：起支持作用，凝固劑：起支持作用，凝固劑第13頁(yè)/共45頁(yè)外植體：外植體：從活植物體上切下進(jìn)行培養(yǎng)的那部分從活植物體上切下進(jìn)行培養(yǎng)的那部分 組織或器官（常取幼嫩的組織或器官）組織或器官（常取幼嫩的組織或器官）切取切取接種接種第14頁(yè)/共45頁(yè)植物組織培養(yǎng)的一般過(guò)程植物組織培養(yǎng)的一般過(guò)程第15頁(yè)/共45頁(yè)脫分化：已分化的細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)的細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成分生狀態(tài)細(xì)胞的過(guò)程細(xì)胞的過(guò)程。愈傷組織：愈傷組織：排列疏松而無(wú)規(guī)則，高度液泡化排列疏松而無(wú)規(guī)則，高度液泡化且無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞且無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞思考：思考：1、脫分化

9、前后，細(xì)胞的形態(tài)是否改變，、脫分化前后，細(xì)胞的形態(tài)是否改變，細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)組成是否改變？細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)組成是否改變？2、脫分化過(guò)程，所需要的條件有哪些？、脫分化過(guò)程，所需要的條件有哪些？3、脫分化培養(yǎng)基中對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的、脫分化培養(yǎng)基中對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例要求是怎樣的？比例要求是怎樣的？形態(tài)改變，遺傳物質(zhì)不變。形態(tài)改變，遺傳物質(zhì)不變。離體、無(wú)菌、適宜的培養(yǎng)基和溫度、避光離體、無(wú)菌、適宜的培養(yǎng)基和溫度、避光生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例適中適中，能強(qiáng)烈刺激愈傷組織形成。，能強(qiáng)烈刺激愈傷組織形成。第16頁(yè)/共45頁(yè)再分化愈傷組織在愈傷組織在分化培養(yǎng)基分化培養(yǎng)基上，被重

10、新誘導(dǎo)分化出上，被重新誘導(dǎo)分化出胚狀體或叢芽胚狀體或叢芽的過(guò)程。的過(guò)程。思考：思考：1、分化培養(yǎng)基，與形成愈傷組織的培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基，與形成愈傷組織的培養(yǎng)基成分上的主要區(qū)別是什么？成分上的主要區(qū)別是什么？2誘導(dǎo)產(chǎn)生根和產(chǎn)生芽時(shí)，對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的配比要求分別是怎樣的？誘導(dǎo)產(chǎn)生根和產(chǎn)生芽時(shí)，對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的配比要求分別是怎樣的？3、再分化過(guò)程中，所需要的條件有哪些？、再分化過(guò)程中，所需要的條件有哪些？主要區(qū)別是激素的配比。主要區(qū)別是激素的配比。另外，脫分化和再分化與植物激素的種類、另外，脫分化和再分化與植物激素的種類、濃度及使用的先后順序均有關(guān)系。濃度及使用的先后順序均有關(guān)系。生長(zhǎng)素

11、生長(zhǎng)素/ /細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素11有利于生根；生長(zhǎng)素有利于生根；生長(zhǎng)素/ /細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素11時(shí)，有利于生芽。時(shí)，有利于生芽。適宜的溫度、適宜的培養(yǎng)基、適宜的適宜的溫度、適宜的培養(yǎng)基、適宜的光照光照、無(wú)菌、無(wú)菌生長(zhǎng)發(fā)育生長(zhǎng)發(fā)育再生根再生根第17頁(yè)/共45頁(yè)生長(zhǎng)發(fā)育生長(zhǎng)發(fā)育 試管苗的形成試管苗的形成第18頁(yè)/共45頁(yè)移移 栽栽經(jīng)過(guò)煉經(jīng)過(guò)煉苗的小苗的小苗，可苗，可以和一以和一般植物般植物一樣進(jìn)一樣進(jìn)行大規(guī)行大規(guī)模栽培模栽培第19頁(yè)/共45頁(yè)1.（2011年江蘇卷.16）下列有關(guān)植物組織培養(yǎng)的敘述，正確的是 ( )A愈傷組織是一團(tuán)有特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞B二倍體植株的花粉經(jīng)脫分化與再分化后

12、得到穩(wěn)定遺傳的植株C用人工薄膜將胚狀體、愈傷組織等分別包裝可制成人工種子D植物耐鹽突變體可通過(guò)添加適量NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選而獲得D2.（2011上海生命科學(xué)卷22）下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)的表述，錯(cuò)誤的是（ ）A外植體可以來(lái)自于植物的任何細(xì)胞B培養(yǎng)應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行C以花粉作為外植體可得到單倍體植株D不同階段的培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例不同A第20頁(yè)/共45頁(yè)(1)(1)(2)(3)(4)(5)三、植物體細(xì)胞雜交過(guò)程三、植物體細(xì)胞雜交過(guò)程(1)(1)去壁，分離原生質(zhì)體去壁，分離原生質(zhì)體(2)(2)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合( (原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性) (3)(3)再生細(xì)胞壁（再生細(xì)

13、胞壁（雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志）(4)(4)（5 5）植物組織培養(yǎng)（脫分化、再分化）植物組織培養(yǎng)（脫分化、再分化）去壁的常用方法去壁的常用方法：酶解法（纖維素酶、果膠酶等）酶解法（纖維素酶、果膠酶等）物理法：離心、振動(dòng)、電刺激等物理法：離心、振動(dòng)、電刺激等化學(xué)法：聚乙二醇（化學(xué)法：聚乙二醇（PEGPEG） 原生質(zhì)體融合方法原生質(zhì)體融合方法：雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志：雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志：新細(xì)胞壁的形成新細(xì)胞壁的形成植物體細(xì)胞雜交完成的標(biāo)志：植物體細(xì)胞雜交完成的標(biāo)志：雜種植株的形成雜種植株的形成第21頁(yè)/共45頁(yè)2.利用多倍體育種能獲得這種白菜利用多倍體育種能獲得這種白菜-甘藍(lán)嗎？怎樣獲得？

14、甘藍(lán)嗎？怎樣獲得？2N=142N=141.植物體細(xì)胞雜交得到的白菜甘藍(lán)是幾倍體、幾個(gè)染色體組、多少染色體，是否植物體細(xì)胞雜交得到的白菜甘藍(lán)是幾倍體、幾個(gè)染色體組、多少染色體，是否可育？可育？是四倍體、四個(gè)染色體組、是四倍體、四個(gè)染色體組、28條染色體、可育條染色體、可育能，先讓兩者進(jìn)行有性雜交，對(duì)雜交所得種子在萌發(fā)成幼能，先讓兩者進(jìn)行有性雜交，對(duì)雜交所得種子在萌發(fā)成幼苗時(shí)，用秋水仙素處理，使其染色體加倍，恢復(fù)育性。苗時(shí)，用秋水仙素處理，使其染色體加倍，恢復(fù)育性。思考：思考：第22頁(yè)/共45頁(yè)植物體細(xì)胞雜交意義？ 與有性雜交相比，克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙與有性雜交相比，克服不同生物遠(yuǎn)緣雜

15、交不親和的障礙,擴(kuò)大遺傳重組的范圍。擴(kuò)大遺傳重組的范圍。番茄番茄-馬鈴薯理想植株馬鈴薯理想植株目前還不能讓雜種植物完全按照人們的需要表目前還不能讓雜種植物完全按照人們的需要表達(dá)親本的優(yōu)良性狀如：番茄達(dá)親本的優(yōu)良性狀如：番茄- -馬鈴薯馬鈴薯尚未解決的問(wèn)題？第23頁(yè)/共45頁(yè)知識(shí)分析:(1)植物體細(xì)胞雜交 若兩個(gè)不同品種的植物細(xì)胞A、B進(jìn)行融合，A含有2X條染色體，2個(gè)染色體組，基因型為Aabb，B含有2Y條染色體，2個(gè)染色體組，其基因型為ccDd，則新植株應(yīng)為四倍體，其體細(xì)胞中染色體數(shù)為2X2Y，基因型為AabbccDd，從中不難看出，體細(xì)胞雜交即兩個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞，不管染色體數(shù)、基因組還

16、是染色體組都采用直接相加的方法。(2)植物有性雜交 有性雜交的結(jié)果：子代細(xì)胞中染色體數(shù)，基因型分別為“XY”、“AbcD”或“abcD”或“Abcd”或“abcd”，即先減半再相加。(3)有性生殖過(guò)程中符合孟德爾遺傳定律，而植物體細(xì)胞雜交則不符合孟德爾遺傳定律。第24頁(yè)/共45頁(yè)植物的組織培養(yǎng)和植物的體細(xì)胞雜交比較名稱植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性過(guò)程注意事項(xiàng)選材：選取根尖、莖尖、形成層部位、最容易誘導(dǎo)脫分化光照：脫分化過(guò)程不需光照，再分化過(guò)程一定要有光整個(gè)過(guò)程要在無(wú)菌條件下去細(xì)胞壁的方法：酶解法，所用的酶是纖維素酶和果膠酶人工誘導(dǎo)融合的方法：物

17、理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：用聚乙二醇(PEG)誘導(dǎo)第25頁(yè)/共45頁(yè)3.科學(xué)家用植物體細(xì)胞雜交方法，將番茄的原生質(zhì)體和馬鈴薯的原生質(zhì)體融合，成功地培育出了“番茄馬鈴薯”雜種植株，如圖，其中表示過(guò)程，英文字母表示細(xì)胞、組織或植株。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)實(shí)現(xiàn)過(guò)程的技術(shù)是 ，在此之前使用_ 酶處理細(xì)胞以除去細(xì)胞壁。如果將已除去細(xì)胞壁的植物細(xì)胞放入等滲溶液中，細(xì)胞是何形狀？ 。過(guò)程如放在神舟七號(hào)飛船上則更易進(jìn)行，這是因?yàn)?。與過(guò)程密切相關(guān)的具有單層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器為 。原生質(zhì)體融合纖維素酶和果膠呈圓球形太空中無(wú)重力干擾，更易進(jìn)行細(xì)胞融合高爾基體第26頁(yè)/共45頁(yè)(2)在利用雜種細(xì)胞培育成為雜種植株

18、的過(guò)程中，依據(jù)的原理是_ _，其中過(guò)程相當(dāng)于_過(guò)程，涉及的分裂方式為_。若利用此技術(shù)生產(chǎn)治療癌癥的抗癌藥物紫杉醇，培養(yǎng)將進(jìn)行到_(填字母編號(hào))。(3)若番茄細(xì)胞含m條染色體，馬鈴薯細(xì)胞含n條染色體，則“番茄馬鈴薯”細(xì)胞內(nèi)含_條染色體；若雜種細(xì)胞培育成為“番茄馬鈴薯”植株為四倍體，則此雜種植株的花粉經(jīng)離體培育得到的植株屬于_倍體植株。細(xì)胞的全能性脫分化有絲分裂emn單第27頁(yè)/共45頁(yè)(4)如果形成c細(xì)胞的a、b細(xì)胞都是番茄細(xì)胞，那么更簡(jiǎn)單的得到番茄植株f的處理方法是 。用秋水仙素處理萌發(fā)的種子或幼苗第28頁(yè)/共45頁(yè)動(dòng) 物 細(xì) 胞 工 程第29頁(yè)/共45頁(yè)、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境(如何控制？)、必備

19、營(yíng)養(yǎng)成分(應(yīng)注意什么問(wèn)題？)、溫度和PH(作用？ ) 、氣體成分(有哪些？分別有什么作用？) 1. 1.原理原理2.2.材料選擇及原因材料選擇及原因: :3.3.一般過(guò)程一般過(guò)程4.4.培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件: :5.5.主要應(yīng)用主要應(yīng)用幼齡動(dòng)物的組織、器官或動(dòng)物胚胎；幼齡動(dòng)物的組織、器官或動(dòng)物胚胎；細(xì)胞分化程度低，分裂能力強(qiáng)。細(xì)胞分化程度低，分裂能力強(qiáng)。細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)見(jiàn)書46頁(yè)第30頁(yè)/共45頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件: :1 1）無(wú)菌無(wú)毒）無(wú)菌無(wú)毒 的環(huán)境：的環(huán)境：適宜的溫度：人和哺乳動(dòng)物細(xì)胞最適溫度為: : 36.5

20、36.50.50.5。適宜的PHPH：7.2-7.47.2-7.4液體合成培養(yǎng)基：（糖、氨基酸）、促生長(zhǎng)因子、 （水、無(wú)機(jī)鹽、微量元素）等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。4 4）氣體環(huán)境：2 2）營(yíng)養(yǎng)：3 3）溫度和pHpH：“95“95空氣+5+5COCO2 2”的混合氣體培養(yǎng)箱。氧氣是細(xì)胞代謝必須的；COCO2 2維持培養(yǎng)液的PHPH。對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無(wú)菌處理；培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過(guò)程中污染；定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。使用時(shí)需要注意的問(wèn)題？為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)必須加入血清？第31頁(yè)/共45頁(yè)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官的組織、器官

21、細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞代細(xì)胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)50代細(xì)胞代細(xì)胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株無(wú)限傳代無(wú)限傳代細(xì)胞系細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞胰蛋白酶胰蛋白酶加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液過(guò)程細(xì)胞產(chǎn)生接觸抑制，停止增殖，出現(xiàn)第一次危機(jī)分瓶培養(yǎng)分瓶培養(yǎng)細(xì)胞增殖緩慢，細(xì)胞增殖緩慢，甚至停止，出現(xiàn)甚至停止，出現(xiàn)第二次危機(jī)第二次危機(jī)遺傳物質(zhì)突變遺傳物質(zhì)突變貼壁生長(zhǎng)剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶作用？用量？處理時(shí)間？第32頁(yè)/共45頁(yè) 大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體） 作為基因工程中的受體細(xì)胞 用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性 培養(yǎng)正?；蚋鞣N病變細(xì)胞，用于生理、病理、藥理等方面的研究。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的

22、應(yīng)用：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用：第33頁(yè)/共45頁(yè)細(xì)胞的全能性細(xì)胞群細(xì)胞株、細(xì)胞系植株培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、血清、血漿蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基狀態(tài)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較第34頁(yè)/共45頁(yè)4(2010浙江理綜，4)下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是 ()A培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞B克隆培養(yǎng)法培養(yǎng)過(guò)程中多數(shù)細(xì)胞的基因型會(huì)發(fā)生改變C二倍體細(xì)胞的傳代培養(yǎng)次數(shù)通常是無(wú)限的D惡性細(xì)胞系的細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)D D5(2009浙江高考，浙江高考，1)用動(dòng)、植物成

23、體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是下列敘述正確的是 ()A都須用都須用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱B都須用液體培養(yǎng)基都須用液體培養(yǎng)基C都要在無(wú)菌條件下進(jìn)行都要在無(wú)菌條件下進(jìn)行D都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性C C第35頁(yè)/共45頁(yè) 概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物原理：原理：供體細(xì)胞的選擇及原因：供體細(xì)胞的選擇及原因：受體細(xì)胞的選擇及原因：受體細(xì)胞的選擇及原因：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性取供體動(dòng)物

24、的體細(xì)胞培養(yǎng),一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型選擇減中期的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞細(xì)胞大,易于操作;卵黃多,營(yíng)養(yǎng)豐富,為發(fā)育提供充足的營(yíng)養(yǎng);細(xì)胞質(zhì)中含有某種能激發(fā)動(dòng)物細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)第36頁(yè)/共45頁(yè)類型：類型：操作流程：操作流程：胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植應(yīng)用：存在問(wèn)題：1、加速家畜的遺傳改良，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育、加速家畜的遺傳改良，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種、保護(hù)瀕危物種3、生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白、生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白4、克隆器官作為器官移植的供體、克隆器官作為器官移植的供體1、成活率低2、克隆動(dòng)物的健康問(wèn)題3、克隆動(dòng)

25、物食品的安全性問(wèn)題二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物使用的技術(shù)手段：體細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植體細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植第37頁(yè)/共45頁(yè)三、動(dòng)物細(xì)胞融合三、動(dòng)物細(xì)胞融合原理：原理：誘導(dǎo)融合方法：誘導(dǎo)融合方法：應(yīng)用：應(yīng)用：細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性物理方法物理方法(細(xì)胞融合效率高、傷害小、易操作細(xì)胞融合效率高、傷害小、易操作)化學(xué)方法化學(xué)方法生物方法：滅活的病毒生物方法：滅活的病毒最重要的應(yīng)用是制備單克隆抗體最重要的應(yīng)用是制備單克隆抗體第38頁(yè)/共45頁(yè)四、單克隆抗體的制備四、單克隆抗體的制備1、傳統(tǒng)技術(shù)生產(chǎn)抗體的方法及缺點(diǎn)？、傳統(tǒng)技術(shù)生

26、產(chǎn)抗體的方法及缺點(diǎn)？2、為什么要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的效應(yīng)、為什么要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的效應(yīng)B淋淋巴細(xì)胞？巴細(xì)胞？3、體外培養(yǎng)條件下，、體外培養(yǎng)條件下， B淋巴細(xì)胞的缺點(diǎn)？怎樣解決這一問(wèn)題？淋巴細(xì)胞的缺點(diǎn)？怎樣解決這一問(wèn)題？傳統(tǒng)的方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生傳統(tǒng)的方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生 抗體，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體?？贵w，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體。缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差每一個(gè)每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體。淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體。 體外培養(yǎng)條件下，體外培養(yǎng)條件下，

27、B淋巴細(xì)胞不可能無(wú)限增殖。淋巴細(xì)胞不可能無(wú)限增殖。如果把一種如果把一種B淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，所得到的融合細(xì)胞就能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的行融合，所得到的融合細(xì)胞就能大量增殖，產(chǎn)生足夠數(shù)量的特異性抗體特異性抗體第39頁(yè)/共45頁(yè)思考：思考：1 1、本過(guò)程利用了哪些生物技術(shù)？、本過(guò)程利用了哪些生物技術(shù)？細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2 2、整個(gè)制備過(guò)程中兩次篩選的目的和方法? ?第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（從3 3種主要融合細(xì)胞中）選擇性培養(yǎng)基上, 漿細(xì)胞、瘤細(xì)胞、BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞都會(huì)死亡,只有融合的雜種細(xì)胞

28、(雜交瘤細(xì)胞)才能生長(zhǎng)第二次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。多孔培養(yǎng)板上分開進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)與常規(guī)抗體相比，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備的優(yōu)點(diǎn)。3、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：4、單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體第40頁(yè)/共45頁(yè)單克隆抗體的應(yīng)用作為診斷試劑：?jiǎn)慰寺】贵w最廣泛的用途是作為體外診斷試劑。準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于癌癥治療，也有少量用于其他疾病治療?？芍瞥伞吧飳?dǎo)彈”（導(dǎo)向作用），將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，既消滅了癌細(xì)胞又不會(huì)傷害健康細(xì)胞,也減少了用藥劑量。第41頁(yè)/共45頁(yè)6.(066.(06江蘇江蘇) )下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。（1 1）_技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2 2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HATHAT培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。目的是培養(yǎng)基。目的是 。為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從。