枯草芽孢桿菌增殖

1、枯草芽孢桿菌增殖培養(yǎng)基優(yōu)枯草芽孢桿菌增殖培養(yǎng)基優(yōu)化化 1989 年美國(guó)食品與藥物管理局FDA 公布了42 種可直接用于畜禽生產(chǎn)的微生物,應(yīng)用較多的為乳酸桿菌、糞鏈球菌、酵母菌和芽孢桿菌。從動(dòng)物生產(chǎn)和飼料工業(yè)特點(diǎn)看,芽孢桿菌比其他有益微生物有更多的優(yōu)點(diǎn),因而其研究和應(yīng)用受到廣泛重視。目前枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌應(yīng)用較多。由枯草芽孢桿菌制備而成的微生態(tài)制劑具有如下優(yōu)良特性: 1) 能調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌群平衡,改善腸道微生態(tài)環(huán)境,促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和提高抗病力。 2) 在不利環(huán)境條件下能以孢子形式存在,在飼料制粒、貯存及胃酸環(huán)境中仍能保持高活性。 3)能刺激動(dòng)物免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育,激活淋巴細(xì)胞,提高免疫球蛋

2、白和抗體水平,增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫功能,提高機(jī)體免疫力。 4) 能自身合成消化性酶類,如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纖維素酶等,與內(nèi)源消化酶共同發(fā)揮作用,促進(jìn)養(yǎng)分的消化吸收。文章以一株枯草芽孢桿菌為研究對(duì)象,對(duì)其搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,為其規(guī)?；l(fā)酵提供依據(jù)。芽孢桿菌能產(chǎn)生芽孢，在沸水中加熱不會(huì)失去生理活性，但是不能產(chǎn)生芽孢的細(xì)菌會(huì)失去活性，因而得到芽孢菌屬，經(jīng)過進(jìn)一步的分離及生理生化鑒定得到枯草芽孢桿菌。菌種的分離和純化土樣的采集：取土壤表層5-10cm下的肥土100g左右，把采得的土壤放入紙袋帶回實(shí)驗(yàn)室分離。平板的制備：溶化三角瓶中的牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基，以每皿20ml左右倒6個(gè)平板

3、。稀釋分離法：稱取肥土5g放入含有45ml水的三角瓶中，搖動(dòng)片刻，然后將此瓶用小火加熱至懸濁液沸騰，維持15min。而后靜止5min，吸取上層液0.1ml加入到含有4.5ml無(wú)菌水的試管中，制成1:100濃度的懸液，然后分別吸取10-2 和 10-3土壤懸濁液各0.2ml滴加到上述牛肉湯蛋白胨培養(yǎng)基平板上（每種稀釋度2皿），用涂布棒均勻涂布，并將培養(yǎng)基倒置于37恒溫培養(yǎng)1-2天。挑菌及純化：從上述分離的平板上分別挑取2個(gè)單菌落中部分菌體，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上劃線純化，經(jīng)菌落特征的觀察和鏡檢，確定是芽孢桿菌屬純種后，從中選擇一株轉(zhuǎn)接于牛肉膏蛋白胨斜面上，置37培養(yǎng)1-2天后備用。（菌體應(yīng)呈桿狀

4、，具芽孢，寬度一致；菌落顏色、形狀、質(zhì)地、透明度等均一致）菌種活化將保存的菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基,37 培養(yǎng)24 h ,備用。種子液的制備取一環(huán)活化的菌種,接入裝量為50 mL 種子培養(yǎng)基的250 mL 三角瓶中,37 ,180 r/ min 培養(yǎng)18 h。種子培養(yǎng)基蛋白胨1 % ,酵母浸出物0. 5 % ,氯化鈉1 % ,自然pH?；A(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基蔗糖1 % ,蛋白胨1 % ,磷酸氫二鈉0. 2 % ,磷酸二氫鈉0. 2 % ,pH 7. 0。搖瓶培養(yǎng)分別取1 mL 種子液,接入盛有50 mL 發(fā)酵培養(yǎng)基的200 mL 三角瓶中(接種量為2 % ,V/ V) 。置搖床中,30 振蕩培養(yǎng)12 h

5、,轉(zhuǎn)速為160 r/ min ,進(jìn)行單因素和正交實(shí)驗(yàn)的發(fā)酵條件研究。碳源分別用1 %葡萄糖、淀粉、玉米淀粉和麥芽糖等量替代基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蔗糖制成培養(yǎng)基。采用搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件,12 h 后測(cè)定發(fā)酵液中的活菌含量以確定最佳碳源。氮源分別用1 %酵母浸出物、牛肉膏、尿素、氯化銨、酵母浸出物+ 胰蛋白胨(11) 、酵母浸出物+ 胰蛋白胨+ 氯化銨(221) 及酵母浸出物+ 胰蛋白胨+ 尿素(221) 替代基礎(chǔ)發(fā)酵液1 %的胰蛋白胨。采用搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件,12 h 后測(cè)定發(fā)酵液中的活菌含量,以確定最佳氮源。無(wú)機(jī)鹽分別用0. 4 %硫酸錳、硫酸鎂、硫酸鐵、氯化鈉、氯化鈣及不加無(wú)機(jī)鹽的空白,替代等量的基礎(chǔ)發(fā)酵液中磷酸二氫鈉(0. 2 %) + 磷酸氫二鈉(0. 2 %) 。采用搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件,12 h 后測(cè)定發(fā)酵液中的活菌含量,以確定最佳無(wú)機(jī)鹽。測(cè)定方法活菌總數(shù)測(cè)定采用稀