食品添加劑的檢驗(yàn)

1、第八章第八章 食品添加劑的檢驗(yàn)食品添加劑的檢驗(yàn) 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 食品添加劑食品添加劑是食品的生產(chǎn)加工過(guò)程中向是食品的生產(chǎn)加工過(guò)程中向食品中添加的化學(xué)合成的或天然的物質(zhì)。我食品中添加的化學(xué)合成的或天然的物質(zhì)。我國(guó)食品衛(wèi)生法規(guī)定食品添加劑是指為改善食國(guó)食品衛(wèi)生法規(guī)定食品添加劑是指為改善食品的品質(zhì)和色、香、味以及防腐和加工工藝品的品質(zhì)和色、香、味以及防腐和加工工藝的需要而加入食品中的天然或化學(xué)合成物質(zhì)。的需要而加入食品中的天然或化學(xué)合成物質(zhì)。為保證食品添加劑的食用安全，使用時(shí)要遵循如為保證食品添加劑的食用安全，使用時(shí)要遵循如下原則：下原則：(1)經(jīng)過(guò)規(guī)定的食品毒理學(xué)安全評(píng)價(jià)，證明在使用經(jīng)過(guò)規(guī)

2、定的食品毒理學(xué)安全評(píng)價(jià)，證明在使用限量?jī)?nèi)長(zhǎng)期使用對(duì)人體安全無(wú)毒。限量?jī)?nèi)長(zhǎng)期使用對(duì)人體安全無(wú)毒。(2)不影響食品感官性質(zhì)和原味，對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)成分不影響食品感官性質(zhì)和原味，對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)成分不應(yīng)有破壞作用。不應(yīng)有破壞作用。(3)食品添加劑應(yīng)有嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有害雜質(zhì)不食品添加劑應(yīng)有嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有害雜質(zhì)不得超過(guò)允許限量。得超過(guò)允許限量。(4)不得由于使用食品添加劑而降低良好的不得由于使用食品添加劑而降低良好的加工措施和衛(wèi)生要求。加工措施和衛(wèi)生要求。(5)不得由于使用食品添加劑掩蓋食品的缺不得由于使用食品添加劑掩蓋食品的缺陷作為偽造的手段。陷作為偽造的手段。(6)未經(jīng)衛(wèi)生部允許的嬰兒食品不得加入食未經(jīng)衛(wèi)

3、生部允許的嬰兒食品不得加入食品添加劑。品添加劑。第二節(jié)第二節(jié) 食品防腐劑的檢驗(yàn)食品防腐劑的檢驗(yàn)防腐劑是能抑制微生物活動(dòng)、防止食品腐敗變質(zhì)防腐劑是能抑制微生物活動(dòng)、防止食品腐敗變質(zhì)的一類食品添加劑。在我國(guó)，防腐劑一般可以分為的一類食品添加劑。在我國(guó)，防腐劑一般可以分為4大類：大類：酸性防腐劑酸性防腐劑如苯甲酸、山梨酸、丙酸和他如苯甲酸、山梨酸、丙酸和他們的鹽；們的鹽；酯性防腐劑酯性防腐劑如沒(méi)食子酸酯、抗壞血酸棕櫚如沒(méi)食子酸酯、抗壞血酸棕櫚酸酯等；酸酯等；無(wú)機(jī)鹽防腐劑無(wú)機(jī)鹽防腐劑如含硫的亞硫酸鹽、焦亞硫如含硫的亞硫酸鹽、焦亞硫酸鹽等；酸鹽等；生物防腐劑生物防腐劑如乳酸鏈球菌素、溶菌素等。如乳酸鏈球

4、菌素、溶菌素等。 常用的常用的防腐劑防腐劑有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對(duì)羥基苯甲酸酯，以上三種防及其鉀鹽、對(duì)羥基苯甲酸酯，以上三種防腐劑主要用于醬油、醋、果汁、汽水、果腐劑主要用于醬油、醋、果汁、汽水、果醬、果子露和罐頭等。此外還有二氧化硫，醬、果子露和罐頭等。此外還有二氧化硫，用于葡萄酒、果酒。丙酸鈣主要用于面包、用于葡萄酒、果酒。丙酸鈣主要用于面包、糕點(diǎn)、醬油、醋、黃油和乳制品。糕點(diǎn)、醬油、醋、黃油和乳制品。苯甲酸、山梨酸及對(duì)羥基苯甲酸酯檢驗(yàn)苯甲酸、山梨酸及對(duì)羥基苯甲酸酯檢驗(yàn)樣品處理樣品處理 從食品中提取苯甲酸、山梨酸最常用的方法是蒸氣從食品中提取苯甲酸、山梨

5、酸最常用的方法是蒸氣蒸餾法或乙醚萃取法。蒸餾法或乙醚萃取法。 當(dāng)樣品加酸酸化后，其中的苯甲酸鈉鹽、山梨酸鈉當(dāng)樣品加酸酸化后，其中的苯甲酸鈉鹽、山梨酸鈉鹽轉(zhuǎn)變?yōu)楸郊姿岷蜕嚼嫠?，在酸性條件下可隨水蒸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)楸郊姿岷蜕嚼嫠?，在酸性條件下可隨水蒸氣餾出，導(dǎo)入堿性吸收液中，然后酸化。用乙醚萃氣餾出，導(dǎo)入堿性吸收液中，然后酸化。用乙醚萃取游離酸，揮干乙醚，加適當(dāng)?shù)娜軇┤芙鈿堅(jiān)闳∮坞x酸，揮干乙醚，加適當(dāng)?shù)娜軇┤芙鈿堅(jiān)?，便可進(jìn)行測(cè)定?？蛇M(jìn)行測(cè)定。 有時(shí)食品中的其它干擾物質(zhì)存在時(shí)對(duì)提取會(huì)造成麻煩，因此有時(shí)食品中的其它干擾物質(zhì)存在時(shí)對(duì)提取會(huì)造成麻煩，因此在提取苯甲酸、山梨酸之前應(yīng)先進(jìn)行樣品處理，目的是為了在提

6、取苯甲酸、山梨酸之前應(yīng)先進(jìn)行樣品處理，目的是為了防止提取過(guò)程中出現(xiàn)乳化現(xiàn)象而損失苯甲酸、山梨酸，并消防止提取過(guò)程中出現(xiàn)乳化現(xiàn)象而損失苯甲酸、山梨酸，并消除苯甲酸、山梨酸以外的酸性物質(zhì)給測(cè)定帶來(lái)的誤差。具體除苯甲酸、山梨酸以外的酸性物質(zhì)給測(cè)定帶來(lái)的誤差。具體處理方法如下：處理方法如下： 除二氧化碳除二氧化碳 碳酸飲料中二氧化碳可用超聲法除去。碳酸飲料中二氧化碳可用超聲法除去。 除酒精除酒精 因酒精既可溶于乙醚，又可溶于水，當(dāng)用乙醚提取因酒精既可溶于乙醚，又可溶于水，當(dāng)用乙醚提取苯甲酸時(shí)便容易乳化，故應(yīng)先加熱揮去酒精，再將樣品酸化苯甲酸時(shí)便容易乳化，故應(yīng)先加熱揮去酒精，再將樣品酸化后用乙醚提取苯甲

7、酸。后用乙醚提取苯甲酸。 除脂肪除脂肪 因脂肪易溶于乙醚，而脂肪酸也能消耗堿，因脂肪易溶于乙醚，而脂肪酸也能消耗堿，當(dāng)用酸堿滴定法分析苯甲酸時(shí)會(huì)帶來(lái)正誤差。通常當(dāng)用酸堿滴定法分析苯甲酸時(shí)會(huì)帶來(lái)正誤差。通常在堿性條件下用乙醚提取出脂肪，然后再加酸酸化，在堿性條件下用乙醚提取出脂肪，然后再加酸酸化，并用乙醚提取苯甲酸。并用乙醚提取苯甲酸。 除蛋白質(zhì)除蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)是高分子化合物，結(jié)構(gòu)既有親脂蛋白質(zhì)是高分子化合物，結(jié)構(gòu)既有親脂基團(tuán)又有親水基團(tuán)，當(dāng)用乙醚提取苯甲酸時(shí)，蛋白基團(tuán)又有親水基團(tuán)，當(dāng)用乙醚提取苯甲酸時(shí)，蛋白質(zhì)的存在會(huì)導(dǎo)致乳化而給分離苯甲酸帶來(lái)困難。除質(zhì)的存在會(huì)導(dǎo)致乳化而給分離苯甲酸帶來(lái)困難。除

8、蛋白質(zhì)的方法很多，例如鹽析、加蛋白質(zhì)沉淀劑、蛋白質(zhì)的方法很多，例如鹽析、加蛋白質(zhì)沉淀劑、透析等。透析等。 樣品經(jīng)酸化后，蒸餾法提取山梨酸、苯甲酸和樣品經(jīng)酸化后，蒸餾法提取山梨酸、苯甲酸和對(duì)羥基苯甲酸酯，這一方法在基體復(fù)雜的食品對(duì)羥基苯甲酸酯，這一方法在基體復(fù)雜的食品中得到廣泛應(yīng)用。通過(guò)對(duì)大量不同樣品的分析，中得到廣泛應(yīng)用。通過(guò)對(duì)大量不同樣品的分析，蒸餾法的提取率一般在蒸餾法的提取率一般在75-95之間。蒸餾之間。蒸餾法可以將防腐劑從含氯化鈉和酒石酸的基質(zhì)中法可以將防腐劑從含氯化鈉和酒石酸的基質(zhì)中提取出來(lái)，導(dǎo)入至二氯甲烷提取出來(lái)，導(dǎo)入至二氯甲烷-水的混合溶液水的混合溶液（75：25）中，防腐劑被

9、提取到有機(jī)相中，經(jīng)）中，防腐劑被提取到有機(jī)相中，經(jīng)濃縮后進(jìn)行濃縮后進(jìn)行GC分析。分析。（）氣相色譜法（）氣相色譜法 苯甲酸和山梨酸可以被氣相色譜法直接測(cè)定，一般用極性固定相苯甲酸和山梨酸可以被氣相色譜法直接測(cè)定，一般用極性固定相進(jìn)行分離。如果將苯甲酸、山梨酸衍生為酯（甲酯、丁酯）或硅進(jìn)行分離。如果將苯甲酸、山梨酸衍生為酯（甲酯、丁酯）或硅醚的形式，則用非極性固定相分離。醚的形式，則用非極性固定相分離。 例：例： Graveland用用3磷酸磷酸-乙醚溶液提取面包里的山梨酸和苯甲酸，乙醚溶液提取面包里的山梨酸和苯甲酸，離心后上清液作為樣液進(jìn)行離心后上清液作為樣液進(jìn)行GC測(cè)定，色譜柱為測(cè)定，色譜柱

10、為2m2mm的玻的玻璃柱，內(nèi)填璃柱，內(nèi)填Carbowax 20M/對(duì)苯二甲酸固定液涂漬在對(duì)苯二甲酸固定液涂漬在60-80目目Chromosorb W 擔(dān)體上，柱溫以擔(dān)體上，柱溫以5/min從從100升高到升高到210，載氣為氮?dú)廨d氣為氮?dú)?5mL/min。丙酸、山梨酸和苯甲酸在。丙酸、山梨酸和苯甲酸在25min內(nèi)完成內(nèi)完成分離，最低檢出量為分離，最低檢出量為5ng。 （2）液相色譜法 苯甲酸、山梨酸和對(duì)羥基苯甲酸酯可以用苯甲酸、山梨酸和對(duì)羥基苯甲酸酯可以用HPLC直接測(cè)定。直接測(cè)定。添加劑樣品提取方法流動(dòng)相及色譜柱回收率/%苯甲酸、山梨酸苯甲酸、山梨酸苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、對(duì)羥基苯甲酸酯、

11、丙酸苯甲酸、山梨酸調(diào)味品等飲料果醬、調(diào)味品、飲料、腌菜、人造黃油果汁、飲料、乳制品、醬、冷食等膜過(guò)濾超聲脫氣、膜過(guò)濾飽和硫酸銨水蒸氣蒸餾膜濾及乙醚提取25mmol/L NaH2PO4-甲醇（3：7）；TSKGEL ODS-80Tm柱甲醇0.02mol/L乙酸銨（3：7）；C18柱0.025mol/L磷酸（pH7.2）-甲醇（95：5）；Inertsil-pH柱甲醇-0.02mol/L乙酸銨（5：95）；ODS C18柱104-10898-11382-10195-101（3）薄層色譜法薄層色譜法苯甲酸、苯甲酸鈉經(jīng)分離提純后，用薄層層析分離，在苯甲酸、苯甲酸鈉經(jīng)分離提純后，用薄層層析分離，在紫外光

12、下或顯色后與標(biāo)準(zhǔn)比較定性與概略定量。紫外光下或顯色后與標(biāo)準(zhǔn)比較定性與概略定量。（4 4）紫外分光光度法紫外分光光度法苯甲酸、苯甲酸鈉在酸性溶液中蒸發(fā)出來(lái)后，在重鉻酸苯甲酸、苯甲酸鈉在酸性溶液中蒸發(fā)出來(lái)后，在重鉻酸鉀硫酸溶液中氧化除去揮發(fā)性的雜質(zhì)及山梨酸，再進(jìn)行鉀硫酸溶液中氧化除去揮發(fā)性的雜質(zhì)及山梨酸，再進(jìn)行蒸餾分離，蒸餾液在波長(zhǎng)蒸餾分離，蒸餾液在波長(zhǎng) 225 nm處測(cè)光密度與標(biāo)準(zhǔn)比處測(cè)光密度與標(biāo)準(zhǔn)比較定量本法適用于醬油、醬菜、果汁、果醬等樣品。較定量本法適用于醬油、醬菜、果汁、果醬等樣品。第三節(jié)第三節(jié) 食品發(fā)色劑的檢驗(yàn)食品發(fā)色劑的檢驗(yàn)發(fā)色劑及保護(hù)劑，是能與食品中的呈色物質(zhì)作用，發(fā)色劑及保護(hù)劑，

13、是能與食品中的呈色物質(zhì)作用，在食品加工、保藏等過(guò)程中不致分解、破壞。呈現(xiàn)在食品加工、保藏等過(guò)程中不致分解、破壞。呈現(xiàn)良好色澤的物質(zhì)。一般發(fā)色肉和肉制品，采用亞硝良好色澤的物質(zhì)。一般發(fā)色肉和肉制品，采用亞硝酸鹽產(chǎn)生的一氧化氮與肉中的肌紅蛋白和血紅蛋白酸鹽產(chǎn)生的一氧化氮與肉中的肌紅蛋白和血紅蛋白結(jié)合，生成一種具有鮮紅色的亞硝基肌紅蛋白和亞結(jié)合，生成一種具有鮮紅色的亞硝基肌紅蛋白和亞硝基血紅蛋白所致。硝基血紅蛋白所致。 亞硝酸鹽亞硝酸鹽是添加劑種急性毒性較強(qiáng)的物質(zhì)之一，其次亞硝酸鹽是添加劑種急性毒性較強(qiáng)的物質(zhì)之一，其次亞硝酸鹽為亞硝基化合物的前體，具有致癌性，因此對(duì)其用量及殘留量為亞硝基化合物的前體

14、，具有致癌性，因此對(duì)其用量及殘留量有嚴(yán)格的要求。有嚴(yán)格的要求。 抗壞血酸與亞硝酸鹽抗壞血酸與亞硝酸鹽有高度親和力，在體內(nèi)能防止亞硝化作用，有高度親和力，在體內(nèi)能防止亞硝化作用，因此在肉類腌制時(shí)添加適量的抗壞血酸，有可能防止生成致癌因此在肉類腌制時(shí)添加適量的抗壞血酸，有可能防止生成致癌物質(zhì)。物質(zhì)。 雖然硝酸鹽和亞硝酸鹽的使用受到了很大限制，但至今國(guó)內(nèi)外雖然硝酸鹽和亞硝酸鹽的使用受到了很大限制，但至今國(guó)內(nèi)外仍在繼續(xù)使用。其原因是亞硝酸鹽對(duì)保持腌制肉制品的色、香、仍在繼續(xù)使用。其原因是亞硝酸鹽對(duì)保持腌制肉制品的色、香、味有特殊作用，迄今未發(fā)現(xiàn)理想的替代物質(zhì)。更重要的是亞硝味有特殊作用，迄今未發(fā)現(xiàn)理想

15、的替代物質(zhì)。更重要的是亞硝酸鹽對(duì)肉毒梭狀芽孢桿菌的抑制作用。酸鹽對(duì)肉毒梭狀芽孢桿菌的抑制作用。 硝酸鹽和亞硝酸鹽的測(cè)定方法硝酸鹽和亞硝酸鹽的測(cè)定方法 主要有比色法、氣相色譜法和液相色譜法。主要有比色法、氣相色譜法和液相色譜法。（1）鹽酸萘乙二胺法（測(cè)亞硝酸鹽）鹽酸萘乙二胺法（測(cè)亞硝酸鹽） 樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，在弱酸條件下，樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，在弱酸條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅紫色染料，乙二胺偶合形成紅紫色染料，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。本法檢出下限為本法檢出下限為0.1mg/kg。（2）鎘

16、柱法（測(cè)硝酸鹽用） 樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，溶液通過(guò)鎘柱，使其中的硝酸根離子還樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，溶液通過(guò)鎘柱，使其中的硝酸根離子還原成亞硝酸根離子，在弱酸性條件下，亞硝酸根與對(duì)氨基苯磺酸重氮化原成亞硝酸根離子，在弱酸性條件下，亞硝酸根與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅紫色染料，測(cè)得亞硝酸鹽總量，由總后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅紫色染料，測(cè)得亞硝酸鹽總量，由總量減去亞硝酸鹽含量即得硝酸鹽含量。量減去亞硝酸鹽含量即得硝酸鹽含量。（3 3）氣相色譜法）氣相色譜法 測(cè)定前要進(jìn)行衍生化以形成易揮發(fā)性的物質(zhì)。測(cè)定前要進(jìn)行衍生化以形成易揮發(fā)性的物質(zhì)。 硝酸鹽的測(cè)定通常是將

17、其衍生為硝基苯，用熱裂解檢測(cè)器測(cè)定，檢測(cè)限為硝酸鹽的測(cè)定通常是將其衍生為硝基苯，用熱裂解檢測(cè)器測(cè)定，檢測(cè)限為100-200100-200g/kgg/kg。 亞硝酸根衍生物的分離一般采用非極性固定相。亞硝酸根衍生物的分離一般采用非極性固定相。（4）液相色譜法 硝酸根和亞硝酸根的液相色譜測(cè)定方法，大多硝酸根和亞硝酸根的液相色譜測(cè)定方法，大多采用陰離子交換法分離，然后以抑制型電導(dǎo)或采用陰離子交換法分離，然后以抑制型電導(dǎo)或紫外檢測(cè)。用離子交換色譜法分析食品中硝酸紫外檢測(cè)。用離子交換色譜法分析食品中硝酸根和亞硝酸根不僅簡(jiǎn)便、快速，而且選擇性好、根和亞硝酸根不僅簡(jiǎn)便、快速，而且選擇性好、準(zhǔn)確度高。準(zhǔn)確度高

18、。第四節(jié)第四節(jié) 食品甜味劑的檢驗(yàn)食品甜味劑的檢驗(yàn)我們賦予食品甜味為主要目的的食品添加劑為甜我們賦予食品甜味為主要目的的食品添加劑為甜味劑，分為天然甜味劑和合成甜味劑兩大類。天然味劑，分為天然甜味劑和合成甜味劑兩大類。天然甜味劑安全性高，合成甜味劑的安全性需進(jìn)一步證甜味劑安全性高，合成甜味劑的安全性需進(jìn)一步證明，現(xiàn)在尚要嚴(yán)格檢驗(yàn)。由于合成甜味劑的味甜，明，現(xiàn)在尚要嚴(yán)格檢驗(yàn)。由于合成甜味劑的味甜，且價(jià)格低，現(xiàn)在仍然大量使用。且價(jià)格低，現(xiàn)在仍然大量使用。 天然甜味劑主要是從植物組織中提取出來(lái)的甜味物天然甜味劑主要是從植物組織中提取出來(lái)的甜味物質(zhì)，近年也采用人工合成法獲得。它可分為糖醇類質(zhì)，近年也采用

19、人工合成法獲得。它可分為糖醇類和非糖類。和非糖類。 糖醇類：木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇等糖醇類：木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇等 非糖類：甜菊糖苷、甘草、奇異果素、索馬甜等。非糖類：甜菊糖苷、甘草、奇異果素、索馬甜等。 人工甜味劑主要是一些具有甜味但又不是糖類的物人工甜味劑主要是一些具有甜味但又不是糖類的物質(zhì)。它的品種很多，其中質(zhì)。它的品種很多，其中磺胺類有糖精、甜蜜素磺胺類有糖精、甜蜜素等；二肽類有阿斯巴甜、阿力甜等；蔗糖的衍等；二肽類有阿斯巴甜、阿力甜等；蔗糖的衍生物有三氯蔗糖、帕拉金糖、果糖低聚糖等。生物有三氯蔗糖、帕拉金糖、果糖低聚糖等。糖精糖精 糖精是廣泛使用的人工甜味劑

20、，我國(guó)規(guī)定糖精最大使用量糖精是廣泛使用的人工甜味劑，我國(guó)規(guī)定糖精最大使用量為為0.15g/kg。 糖精的甜味是蔗糖的糖精的甜味是蔗糖的500倍，但食后會(huì)有一種金屬余味，倍，但食后會(huì)有一種金屬余味，通常與甜蜜素配伍使用。由于糖精對(duì)人體并無(wú)營(yíng)養(yǎng)作用，通常與甜蜜素配伍使用。由于糖精對(duì)人體并無(wú)營(yíng)養(yǎng)作用，也不是食品中的天然成分，應(yīng)盡量少或不用。對(duì)嬰幼兒食也不是食品中的天然成分，應(yīng)盡量少或不用。對(duì)嬰幼兒食品、病人食品和大量食用的主食食品不得使用。品、病人食品和大量食用的主食食品不得使用。（）比色法（）比色法 糖精經(jīng)氯仿、苯提取分離后，與酚和硫酸于糖精經(jīng)氯仿、苯提取分離后，與酚和硫酸于175加熱，轉(zhuǎn)化加熱，

21、轉(zhuǎn)化成酚磺酞，然后用碳酸氫鈉處理，形成的紅色在成酚磺酞，然后用碳酸氫鈉處理，形成的紅色在558nm波長(zhǎng)波長(zhǎng)測(cè)定測(cè)定 ，和標(biāo)準(zhǔn)比較而定量。，和標(biāo)準(zhǔn)比較而定量。（）紫外吸收光譜法（）紫外吸收光譜法 食品中的糖精鈉用透析法進(jìn)行透析，用乙醚提取，轉(zhuǎn)至食品中的糖精鈉用透析法進(jìn)行透析，用乙醚提取，轉(zhuǎn)至aHCO3溶液中加鹽酸和鋅粉進(jìn)行還原生成二氧化苯并異噻唑溶液中加鹽酸和鋅粉進(jìn)行還原生成二氧化苯并異噻唑啉，此還原生成物用紫外吸收光譜法進(jìn)行定性定量測(cè)定。啉，此還原生成物用紫外吸收光譜法進(jìn)行定性定量測(cè)定。（）薄層層析法（）薄層層析法 糖精在酸性條件下，用乙醚提取，濃縮后經(jīng)薄層層析分離，糖精在酸性條件下，用乙醚提

22、取，濃縮后經(jīng)薄層層析分離，自薄層板上刮下，定量溶解，酸化后在波長(zhǎng)自薄層板上刮下，定量溶解，酸化后在波長(zhǎng)207nm測(cè)定。測(cè)定。（）納氏比色法（）納氏比色法 糖精先經(jīng)薄層分離，自薄層板上刮下，定量溶解后，加糖精先經(jīng)薄層分離，自薄層板上刮下，定量溶解后，加 2SO4 和和H2O2 消化，使成為銨鹽，然后和碘化汞、碘化鉀的復(fù)消化，使成為銨鹽，然后和碘化汞、碘化鉀的復(fù)鹽鹽(HgI22KI)反應(yīng)生成黃色化合物，用銨鹽為標(biāo)準(zhǔn)，間接求出反應(yīng)生成黃色化合物，用銨鹽為標(biāo)準(zhǔn)，間接求出糖精的含量。糖精的含量。（5）氣相色譜法）氣相色譜法 GC法測(cè)定糖精（鈉）是將樣品酸化后，用乙酸乙酯提取糖精，法測(cè)定糖精（鈉）是將樣品

23、酸化后，用乙酸乙酯提取糖精，提取液濃縮后，用甲基化試劑衍生成甲基化合物，用提取液濃縮后，用甲基化試劑衍生成甲基化合物，用GC測(cè)定。測(cè)定。（6）液相色譜法）液相色譜法 HPLC法測(cè)定汽水、果汁、配制酒類中糖精鈉為我國(guó)國(guó)家標(biāo)法測(cè)定汽水、果汁、配制酒類中糖精鈉為我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中的第一法（準(zhǔn)方法中的第一法（GB/T 5009.28-2003),樣品處理相對(duì)簡(jiǎn)單，樣品處理相對(duì)簡(jiǎn)單，將樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，用氨水（將樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，用氨水（1：1）調(diào)）調(diào)pH值約值約7，過(guò)濾后就可以進(jìn)樣分析。，過(guò)濾后就可以進(jìn)樣分析。第五節(jié)第五節(jié) 食品著色劑的檢驗(yàn)食品著色劑的檢驗(yàn)具有鮮艷色澤的食品會(huì)引起人

24、的食欲，也會(huì)令人具有鮮艷色澤的食品會(huì)引起人的食欲，也會(huì)令人感官有享受之感。但如果食品出現(xiàn)褪色或變色現(xiàn)象感官有享受之感。但如果食品出現(xiàn)褪色或變色現(xiàn)象就應(yīng)該加強(qiáng)色澤的保護(hù)和改善。我們稱以食品著色就應(yīng)該加強(qiáng)色澤的保護(hù)和改善。我們稱以食品著色為主的食品添加劑為著色劑，亦稱色素。為主的食品添加劑為著色劑，亦稱色素。著色劑按其來(lái)源分天然和合成兩類。用人著色劑按其來(lái)源分天然和合成兩類。用人工合成方法值得的著色劑一般色澤鮮艷，著工合成方法值得的著色劑一般色澤鮮艷，著色力強(qiáng)，監(jiān)牢度大，穩(wěn)定，成本低，因而被色力強(qiáng)，監(jiān)牢度大，穩(wěn)定，成本低，因而被廣泛使用。天然著色劑來(lái)源于植物或微生物，廣泛使用。天然著色劑來(lái)源于植物

25、或微生物，安全性大大高于合成著色劑，部分甚至有藥安全性大大高于合成著色劑，部分甚至有藥理作用，因而研究開(kāi)發(fā)日益增加，應(yīng)用廣泛。理作用，因而研究開(kāi)發(fā)日益增加，應(yīng)用廣泛。我國(guó)允許使用的天然著色劑主要有植物色素（甜我國(guó)允許使用的天然著色劑主要有植物色素（甜菜紅、姜黃、葉綠素銅鈉鹽、辣椒紅、胡蘿卜素、菜紅、姜黃、葉綠素銅鈉鹽、辣椒紅、胡蘿卜素、可可殼色素等）、昆蟲(chóng)類色素（蟲(chóng)膠紅色素）、微可可殼色素等）、昆蟲(chóng)類色素（蟲(chóng)膠紅色素）、微生物色素（紅曲色素）。我國(guó)批準(zhǔn)使用的合成色素生物色素（紅曲色素）。我國(guó)批準(zhǔn)使用的合成色素主要有莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、檸檬黃、主要有莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、檸檬黃

26、、日落黃、靛藍(lán)、亮藍(lán)等。日落黃、靛藍(lán)、亮藍(lán)等。 合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原料，合成色素多以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過(guò)磺化、硝化、偶氮化等一系列有機(jī)反應(yīng)化合經(jīng)過(guò)磺化、硝化、偶氮化等一系列有機(jī)反應(yīng)化合而成。因此，食用合成色素多為含有而成。因此，食用合成色素多為含有R-N=N-R鍵、苯環(huán)或氧雜蒽結(jié)構(gòu)化合物，它們對(duì)人體存在鍵、苯環(huán)或氧雜蒽結(jié)構(gòu)化合物，它們對(duì)人體存在一定的不安全性或者產(chǎn)生有害作用。一定的不安全性或者產(chǎn)生有害作用?！疤K丹紅蘇丹紅”風(fēng)波風(fēng)波“蘇丹紅蘇丹紅”型色素是一種人造化學(xué)制劑，全球型色素是一種人造化學(xué)制劑，全球多數(shù)國(guó)家都禁止將其用于食品生產(chǎn)。這種色素多數(shù)國(guó)家都禁止將其

27、用于食品生產(chǎn)。這種色素常用于工業(yè)方面，比如溶解劑、機(jī)油、蠟和鞋常用于工業(yè)方面，比如溶解劑、機(jī)油、蠟和鞋油等產(chǎn)品的染色?？茖W(xué)家通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，油等產(chǎn)品的染色?？茖W(xué)家通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，“蘇蘇丹紅丹紅”會(huì)導(dǎo)致鼠類患癌，它在人類肝細(xì)胞研究會(huì)導(dǎo)致鼠類患癌，它在人類肝細(xì)胞研究中也顯現(xiàn)出可能致癌的特性。中也顯現(xiàn)出可能致癌的特性。 蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類、油溶性的化工染蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類、油溶性的化工染色劑，色劑，1896年科學(xué)家達(dá)迪將其命名為蘇丹紅并沿年科學(xué)家達(dá)迪將其命名為蘇丹紅并沿用至今。蘇丹紅被大量地用在工業(yè)、化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)用至今。蘇丹紅被大量地用在工業(yè)、化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，用于機(jī)油、汽車蠟和鞋油等

28、工業(yè)產(chǎn)品，以及生域，用于機(jī)油、汽車蠟和鞋油等工業(yè)產(chǎn)品，以及生化毒理學(xué)研究的著色劑等?；纠韺W(xué)研究的著色劑等。 目前，蘇丹紅系列常見(jiàn)目前，蘇丹紅系列常見(jiàn)4種，其中二號(hào)、三號(hào)和四種，其中二號(hào)、三號(hào)和四號(hào)均為一號(hào)的化學(xué)衍生物。蘇丹紅一號(hào)為暗紅色；號(hào)均為一號(hào)的化學(xué)衍生物。蘇丹紅一號(hào)為暗紅色；二號(hào)為紅色；三號(hào)為有綠色光澤的棕紅色；四號(hào)為二號(hào)為紅色；三號(hào)為有綠色光澤的棕紅色；四號(hào)為深褐色。深褐色。1995年，歐盟和其他一些國(guó)家已開(kāi)始禁止在食品中添年，歐盟和其他一些國(guó)家已開(kāi)始禁止在食品中添加蘇丹紅一號(hào)；我國(guó)加蘇丹紅一號(hào)；我國(guó)1996年出臺(tái)的年出臺(tái)的食品添加劑使用食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中不包含蘇丹紅及

29、其系列色素（標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)中不包含蘇丹紅及其系列色素（標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有公布的添加劑不準(zhǔn)用于食品中）。有公布的添加劑不準(zhǔn)用于食品中）。2003年年6月，歐盟月，歐盟規(guī)定所有進(jìn)口的辣椒及其制品必須檢測(cè)蘇丹紅項(xiàng)目，規(guī)定所有進(jìn)口的辣椒及其制品必須檢測(cè)蘇丹紅項(xiàng)目，確定未添加后方可進(jìn)口，并要求成員國(guó)對(duì)市場(chǎng)上銷售確定未添加后方可進(jìn)口，并要求成員國(guó)對(duì)市場(chǎng)上銷售的辣椒及其制品進(jìn)行隨機(jī)抽樣檢測(cè)。的辣椒及其制品進(jìn)行隨機(jī)抽樣檢測(cè)。2005年年3月，國(guó)內(nèi)已經(jīng)證實(shí)的月，國(guó)內(nèi)已經(jīng)證實(shí)的“涉紅涉紅”產(chǎn)品名單：產(chǎn)品名單：肯德基肯德基 肯德基新奧爾良烤翅、新奧爾良烤雞腿堡調(diào)料肯德基新奧爾良烤翅、新奧爾良烤雞腿堡調(diào)料亨氏美味源亨氏美味源(廣州

30、廣州)食品有限公司食品有限公司 美味源桂林辣椒油和美味源金嘜桂林辣椒醬美味源桂林辣椒油和美味源金嘜桂林辣椒醬麥當(dāng)勞麥當(dāng)勞 麥當(dāng)勞西部燒烤調(diào)味汁麥當(dāng)勞西部燒烤調(diào)味汁 調(diào)味料調(diào)味料麥當(dāng)勞地戎芥末蛋黃醬麥當(dāng)勞地戎芥末蛋黃醬 調(diào)味料調(diào)味料麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁(普通脂肪型普通脂肪型) 調(diào)味料調(diào)味料麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁麥當(dāng)勞凱馓調(diào)味汁(低脂肪型低脂肪型) 調(diào)味料調(diào)味料廣州田洋食品有限公司廣州田洋食品有限公司 田洋牌田洋牌“辣椒紅一號(hào)辣椒紅一號(hào)”復(fù)合食品添加劑復(fù)合食品添加劑河北邯鄲中進(jìn)天然色素有限公司河北邯鄲中進(jìn)天然色素有限公司 辣椒精辣椒精珠海市珠海市“公仔公仔DOLL”牌產(chǎn)品牌產(chǎn)品 公仔日式碗面

31、公仔日式碗面牛肉味公仔米粉牛肉味公仔米粉 勁辣牛肉味公仔面勁辣牛肉味公仔面公仔拉面屋紅燒牛肉公仔拉面屋紅燒牛肉(兩種兩種) 公仔拉面屋紅油排骨公仔拉面屋紅油排骨 牛肉味公仔面牛肉味公仔面長(zhǎng)沙長(zhǎng)沙“壇壇鄉(xiāng)壇壇鄉(xiāng)”調(diào)料食品有限公司調(diào)料食品有限公司 “壇壇鄉(xiāng)壇壇鄉(xiāng)”牌風(fēng)味辣椒蘿卜含有牌風(fēng)味辣椒蘿卜含有“蘇丹紅蘇丹紅四號(hào)四號(hào)” 2006年年11月，河北白洋淀的月，河北白洋淀的“紅心鴨蛋紅心鴨蛋”蘇丹紅事件蘇丹紅事件 2006年年12月，陜西出產(chǎn)辣椒面再現(xiàn)蘇丹紅月，陜西出產(chǎn)辣椒面再現(xiàn)蘇丹紅 食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法高效液相色譜法(GB/T 196812005)

32、范圍范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)。 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中蘇丹紅本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅蘇丹紅的高效液相色譜測(cè)定方法。的高效液相色譜測(cè)定方法。 方法最低檢測(cè)限：蘇丹紅方法最低檢測(cè)限：蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇、蘇丹紅丹紅均為均為 10 ug/kg 。方法要點(diǎn)方法要點(diǎn) 樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色譜譜紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。樣品處理樣品處理1. 紅辣椒粉等粉狀樣品

33、紅辣椒粉等粉狀樣品 稱取稱取1 g5g（準(zhǔn)確至（準(zhǔn)確至0.001g）樣品于三角瓶中，加入）樣品于三角瓶中，加入10mL30mL正己正己烷，超聲烷，超聲5min，過(guò)濾，用，過(guò)濾，用10mL正己烷洗滌殘?jiān)鼣?shù)次，至洗出液無(wú)色，合正己烷洗滌殘?jiān)鼣?shù)次，至洗出液無(wú)色，合并正己烷液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至并正己烷液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5mL以下，慢慢加入氧化鋁層析柱中，以下，慢慢加入氧化鋁層析柱中，為保證層析效果，在柱中保持正己烷液面為為保證層析效果，在柱中保持正己烷液面為2mm左右時(shí)上樣，在全程的層左右時(shí)上樣，在全程的層析過(guò)程中不應(yīng)使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗濃縮瓶，一并注入層析柱。析過(guò)程中不應(yīng)使柱干涸，用

34、正己烷少量多次淋洗濃縮瓶，一并注入層析柱?？刂蒲趸X表層吸附的色素帶寬宜小于控制氧化鋁表層吸附的色素帶寬宜小于0.5cm，待樣液完全流出后，視樣，待樣液完全流出后，視樣品中含油類雜質(zhì)的多少用品中含油類雜質(zhì)的多少用10mL30mL正己烷洗柱，直至流出液無(wú)色，棄正己烷洗柱，直至流出液無(wú)色，棄去全部正己烷淋洗液，用含去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液丙酮的正己烷液60mL洗脫，收集、濃縮后，洗脫，收集、濃縮后，用丙酮轉(zhuǎn)移并定容至用丙酮轉(zhuǎn)移并定容至5mL，經(jīng)，經(jīng)0.45m有機(jī)濾膜過(guò)濾后待測(cè)。有機(jī)濾膜過(guò)濾后待測(cè)。2. 紅辣椒油、火鍋料、奶油等油狀樣品紅辣椒油、火鍋料、奶油等油狀樣品 稱取稱取0.

35、5 g2g（準(zhǔn)確至（準(zhǔn)確至0.001g）樣品于小燒杯中，加入適量正己烷溶解）樣品于小燒杯中，加入適量正己烷溶解（約（約1 mL10mL），難溶解的樣品可于正己烷中加溫溶解。按），難溶解的樣品可于正己烷中加溫溶解。按1中中“慢慢慢加入到氧化鋁層析柱慢加入到氧化鋁層析柱 過(guò)濾后待測(cè)過(guò)濾后待測(cè)”操作。操作。3. 辣椒醬、番茄沙司等含水量較大的樣品辣椒醬、番茄沙司等含水量較大的樣品 稱取稱取10 g20g（準(zhǔn)確至（準(zhǔn)確至0.01g）樣品于離心管中，加）樣品于離心管中，加10mL20mL水將水將其分散成糊狀，含增稠劑的樣品多加水，加入其分散成糊狀，含增稠劑的樣品多加水，加入30mL正己烷：丙酮正己烷：丙

36、酮 = 3：1，勻漿勻漿5min, 3000rpm離心離心10min, 吸出正己烷層，于下層再加入吸出正己烷層，于下層再加入20mL2次正己烷勻漿，離心，合并次正己烷勻漿，離心，合并3次正己烷，加入無(wú)水硫酸鈉次正己烷，加入無(wú)水硫酸鈉5g 脫水，過(guò)濾后脫水，過(guò)濾后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干并保持于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干并保持5分鐘，用分鐘，用5mL正己烷溶解殘?jiān)?，按正己烷溶解殘?jiān)?，?中中“慢慢加入到氧化鋁層析柱慢慢加入到氧化鋁層析柱 過(guò)濾后待測(cè)過(guò)濾后待測(cè)”操作。操作。4. 香腸等肉制品香腸等肉制品 稱取粉碎樣品稱取粉碎樣品10g20g（準(zhǔn)確至（準(zhǔn)確至0.01g）于三角）于三角瓶中，加入瓶中，加入60mL

37、正己烷充分勻漿正己烷充分勻漿5min，濾出清，濾出清液，再以液，再以20mL2次正己烷勻漿，過(guò)濾。合并次正己烷勻漿，過(guò)濾。合并3次次濾液，加入濾液，加入5g無(wú)水硫酸鈉脫水，過(guò)濾后于旋轉(zhuǎn)蒸無(wú)水硫酸鈉脫水，過(guò)濾后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸至發(fā)儀上蒸至5mL以下，按以下，按1中中“慢慢加入到氧化鋁慢慢加入到氧化鋁層析柱中層析柱中 過(guò)濾后待測(cè)過(guò)濾后待測(cè)”操作。操作。推薦色譜條件推薦色譜條件1. 儀器條件儀器條件 色譜柱：色譜柱： Zorbax SB-C18 3.5 m 4.6mm150mm （或相當(dāng)型號(hào)色譜柱）（或相當(dāng)型號(hào)色譜柱） 流動(dòng)相：溶劑流動(dòng)相：溶劑A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈甲酸的水溶液：乙腈 = 8

38、5：15; 溶劑溶劑B 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20 梯度洗脫：流速梯度洗脫：流速:1mL/min 柱溫：柱溫：30 檢測(cè)波長(zhǎng)：蘇丹紅檢測(cè)波長(zhǎng)：蘇丹紅 478nm ；蘇丹紅；蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅、蘇丹紅 520nm ；于蘇丹紅；于蘇丹紅出峰后切換。進(jìn)樣量出峰后切換。進(jìn)樣量10l。2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線 吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL ，用正己烷定容至，用正己烷定容至25mL，此標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為，此標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56g/mL,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3. 計(jì)算計(jì)

39、算 按公式（按公式（1）計(jì)算蘇丹紅含量）計(jì)算蘇丹紅含量 R=CV /M （1） R樣品中蘇丹紅含量，單位為毫克每千克（樣品中蘇丹紅含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；）； C由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中蘇丹紅的濃度由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中蘇丹紅的濃度 (g/mL)； V樣液定容體積，單位為毫升（樣液定容體積，單位為毫升（mL）；）； M樣品質(zhì)量，單位為克（樣品質(zhì)量，單位為克（g）。）。蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)色譜圖蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)色譜圖孔雀石綠 一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、孔雀綠，易一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、孔雀綠，易溶于水，溶液呈藍(lán)綠色?？兹甘G是一種有效殺滅霉菌的染溶于水，溶液呈藍(lán)綠色

40、?？兹甘G是一種有效殺滅霉菌的染料類藥物，具有相當(dāng)好的殺真菌效果。由于魚(yú)類在運(yùn)輸中易料類藥物，具有相當(dāng)好的殺真菌效果。由于魚(yú)類在運(yùn)輸中易發(fā)生碰撞，造成魚(yú)鱗脫落而引起魚(yú)體真菌感染，以致出現(xiàn)霉發(fā)生碰撞，造成魚(yú)鱗脫落而引起魚(yú)體真菌感染，以致出現(xiàn)霉?fàn)€、死亡等現(xiàn)象，孔雀石綠恰恰可以治療這些魚(yú)類碰撞傷。爛、死亡等現(xiàn)象，孔雀石綠恰恰可以治療這些魚(yú)類碰撞傷。因價(jià)格廉、容易得、用量少、療效高，在過(guò)去水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病因價(jià)格廉、容易得、用量少、療效高，在過(guò)去水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治中曾被廣泛使用。一些不法商販濫用孔雀石綠，包括在防治中曾被廣泛使用。一些不法商販濫用孔雀石綠，包括在運(yùn)輸前使用孔雀石綠溶液對(duì)車廂進(jìn)行消毒，不少儲(chǔ)放活

41、魚(yú)的運(yùn)輸前使用孔雀石綠溶液對(duì)車廂進(jìn)行消毒，不少儲(chǔ)放活魚(yú)的魚(yú)池也采用這種方式進(jìn)行消毒。魚(yú)池也采用這種方式進(jìn)行消毒。 科研結(jié)果表明，孔雀石綠具有高毒素、高殘留和致癌、科研結(jié)果表明，孔雀石綠具有高毒素、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用，有致畸、致突變等副作用，有“蘇丹紅第二蘇丹紅第二”之稱。鑒于之稱。鑒于孔雀石綠的危害性，美國(guó)、英國(guó)、日本等許多國(guó)家已禁孔雀石綠的危害性，美國(guó)、英國(guó)、日本等許多國(guó)家已禁止將其用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。我國(guó)也于止將其用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。我國(guó)也于2002年年5月將孔雀石綠月將孔雀石綠列入列入食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單中，禁止中，禁止用于所有食品動(dòng)物

42、。用于所有食品動(dòng)物。 但是但是,事實(shí)上包括我國(guó)和英國(guó)在內(nèi)的許多禁用孔雀石綠的事實(shí)上包括我國(guó)和英國(guó)在內(nèi)的許多禁用孔雀石綠的國(guó)家，從對(duì)市場(chǎng)上銷售的魚(yú)類等水產(chǎn)品中孔雀石綠的監(jiān)國(guó)家，從對(duì)市場(chǎng)上銷售的魚(yú)類等水產(chǎn)品中孔雀石綠的監(jiān)測(cè)情況來(lái)看測(cè)情況來(lái)看,仍有在魚(yú)場(chǎng)中非法使用孔雀石綠的現(xiàn)象。仍有在魚(yú)場(chǎng)中非法使用孔雀石綠的現(xiàn)象。 被孔雀石綠浸過(guò)的甲魚(yú)被孔雀石綠浸過(guò)的甲魚(yú) 水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定GB/T 198572005范圍范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠（雀石綠（Leucomalachite g

43、reen）、結(jié)晶紫及其）、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié)晶紫代謝物隱色結(jié)晶紫(Leucocrystal violet)殘留量的殘留量的液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜的測(cè)定方法。串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于鮮活水產(chǎn)品及其制品中孔雀石綠及其本標(biāo)準(zhǔn)適用于鮮活水產(chǎn)品及其制品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié)晶代謝物隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié)晶紫殘留量的檢驗(yàn)。紫殘留量的檢驗(yàn)。 原理原理 試樣中的殘留物用乙腈試樣中的殘留物用乙腈-乙酸銨緩沖溶液提乙酸銨緩沖溶液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷層，經(jīng)中性氧化鋁和

44、陽(yáng)離子固相柱凈化烷層，經(jīng)中性氧化鋁和陽(yáng)離子固相柱凈化后用液相色譜后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。量。 液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法串聯(lián)質(zhì)譜法 樣品制備樣品制備 1 鮮活水產(chǎn)品鮮活水產(chǎn)品 a) 提取提取 稱取稱取5.00g已搗碎樣品于已搗碎樣品于50mL離心管中，加入離心管中，加入200L混合內(nèi)混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入11mL乙腈，超聲波振蕩提取乙腈，超聲波振蕩提取2min，8000r/min 勻漿提取勻漿提取30s，4000 r/min離心離心5min，上清液轉(zhuǎn)，上清液轉(zhuǎn)移至移至25mL比色管中；另取一比色管中；另取一50 mL離心管加入離心管加

45、入11mL乙腈，乙腈，洗滌勻漿刀頭洗滌勻漿刀頭10s，洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎，洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，漩渦混勻器上振蕩離心管中的沉淀，漩渦混勻器上振蕩30s，超聲波振蕩，超聲波振蕩5min，4000r/min離心離心5min，上清液合并至，上清液合并至25mL比色管中，用乙比色管中，用乙腈定容至腈定容至25.0mL，搖勻備用。，搖勻備用。 b) 凈化凈化 移取移取5.00mL樣品溶液加至已活化的中性氧化鋁柱樣品溶液加至已活化的中性氧化鋁柱上，用上，用KD濃縮瓶接收流出液，濃縮瓶接收流出液，4mL乙腈洗滌中性乙腈洗滌中性氧化鋁柱，收集全部流出液，氧化鋁柱，收

46、集全部流出液，45旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約1mL，殘液用乙腈定容至，殘液用乙腈定容至1.00mL，超聲振蕩，超聲振蕩5min, 加入加入1.0mL5mmol/L乙酸銨，超聲振蕩乙酸銨，超聲振蕩1min，樣液，樣液經(jīng)經(jīng)0.2m濾膜過(guò)濾后供液相色譜濾膜過(guò)濾后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。2 加工水產(chǎn)品加工水產(chǎn)品 c) 提取提取 稱取稱取5.00g已搗碎樣品于已搗碎樣品于100mL離心管中，加入離心管中，加入200L混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次加入液，依次加入1mL鹽酸羥胺、鹽酸羥胺、2mL 對(duì)對(duì)-甲苯磺酸、甲苯磺酸、2mL 乙酸銨緩沖溶乙酸銨緩沖溶液和液和40mL乙腈，勻漿乙腈，

47、勻漿2min(10000r/min)，離心，離心3min(3000r/min)，將，將上清液轉(zhuǎn)移到上清液轉(zhuǎn)移到250mL分液漏斗中，用分液漏斗中，用20mL乙腈重復(fù)提取殘?jiān)淮?，合乙腈重?fù)提取殘?jiān)淮?，合并上清液。于分液漏斗中加入并上清液。于分液漏斗中加?0二氯甲烷、二氯甲烷、35mL水，振搖水，振搖2min，靜置分層，收集下層有機(jī)層于靜置分層，收集下層有機(jī)層于150mL梨形瓶中，再用梨形瓶中，再用20mL二氯甲烷萃二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷層，取一次，合并二氯甲烷層，45旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。 d) 凈化凈化 將中性氧化鋁柱串接在陽(yáng)離子交換柱上方。將中性氧化鋁柱串接在陽(yáng)離子交換柱

48、上方。6mL乙腈分三次（每次乙腈分三次（每次2mL），用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物，并依次過(guò)柱，控制陽(yáng)離），用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物，并依次過(guò)柱，控制陽(yáng)離子交換柱流速不超過(guò)子交換柱流速不超過(guò)0.6mL/min，再用，再用2mL乙腈淋洗中性氧化鋁柱后，乙腈淋洗中性氧化鋁柱后，棄去中性氧化鋁柱。依次用棄去中性氧化鋁柱。依次用3mL 2%（v/v）甲酸溶液、）甲酸溶液、3mL乙腈淋洗乙腈淋洗陽(yáng)離子交換柱，棄去流出液。用陽(yáng)離子交換柱，棄去流出液。用4mL 5%（v/v）乙酸銨甲醇溶液）乙酸銨甲醇溶液 洗脫，洗脫，洗脫流速為洗脫流速為1mL/min，用，用10mL刻度試管收集洗脫液，用水定容至刻

49、度試管收集洗脫液，用水定容至10.0mL，樣液經(jīng)，樣液經(jīng)0.2m濾膜過(guò)濾后供液相色譜濾膜過(guò)濾后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件串聯(lián)質(zhì)譜條件 a) 色譜柱：色譜柱：C18柱，柱，50mm2.1mm（i.d.），粒度），粒度3m； b) 流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈 + 5mmol/L乙酸銨乙酸銨 = 75+25(v/v)； c) 流速：流速：0.2mL/min； d) 柱溫：柱溫：35； e) 進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：10L； f) 離子源：電噴霧離子源：電噴霧ESI，正離子；，正離子； g) 掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM； h) 霧化氣、窗簾氣、輔助

50、加熱氣、碰撞氣均為高純氮?dú)?；使用前?yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈霧化氣、窗簾氣、輔助加熱氣、碰撞氣均為高純氮?dú)?；使用前?yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求；敏度達(dá)到檢測(cè)要求；i) 噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度；噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度； j) 監(jiān)測(cè)離子對(duì)：孔雀石綠監(jiān)測(cè)離子對(duì)：孔雀石綠m/z 329/313（定量離子）、（定量離子）、329/208；隱色孔雀石綠；隱色孔雀石綠m/z 331/316（定（定量離子）、量離子）、331/239; 結(jié)晶紫結(jié)晶紫m/z 372/356（定量離子）、（定量離子）、372/251；隱色結(jié)晶紫；隱色結(jié)晶

51、紫m/z 374/359（定量離子）、（定量離子）、374/238；氘代孔雀石綠；氘代孔雀石綠 m/z 334/318（定量離子）（定量離子）; 氘代隱色孔雀石綠氘代隱色孔雀石綠 m/z 337/322（定量離子）。（定量離子）。 液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定 按照液相色譜按照液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定樣品和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定樣品和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以色譜峰面積按內(nèi)標(biāo)法定量，孔雀石綠和結(jié)晶紫以氘代孔雀以色譜峰面積按內(nèi)標(biāo)法定量，孔雀石綠和結(jié)晶紫以氘代孔雀石綠為內(nèi)標(biāo)物計(jì)算，隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫以氘代隱色石綠為內(nèi)標(biāo)物計(jì)算，隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫以氘代隱色孔雀石綠為

52、內(nèi)標(biāo)物計(jì)算?？兹甘G為內(nèi)標(biāo)物計(jì)算。 在上述色譜條件下孔雀石綠、氘代在上述色譜條件下孔雀石綠、氘代孔雀石綠、結(jié)晶紫、氘代隱色孔雀石綠、隱色孔雀石綠和隱孔雀石綠、結(jié)晶紫、氘代隱色孔雀石綠、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的參考保留時(shí)間分別為色結(jié)晶紫的參考保留時(shí)間分別為2.27min、2.30min、2.88min、5.21min、5.31min、5.61min?？兹甘G、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫、氘代孔雀石綠和氘代隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫、氘代孔雀石綠和氘代隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)的離子流圖離子流圖 液相色譜液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證串聯(lián)質(zhì)譜確證 按照液相色譜按照液相色譜-

53、串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定樣品和串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別計(jì)算樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別計(jì)算樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中非定量離子對(duì)與定量離子對(duì)色譜峰溶液中非定量離子對(duì)與定量離子對(duì)色譜峰面積的比值，僅當(dāng)兩者數(shù)值的相對(duì)偏差小面積的比值，僅當(dāng)兩者數(shù)值的相對(duì)偏差小于于25%時(shí)方可確定兩者為同一物質(zhì)。時(shí)方可確定兩者為同一物質(zhì)。 高效液相色譜法高效液相色譜法 原理原理 試樣中的殘留物用乙腈試樣中的殘留物用乙腈-乙酸鹽緩沖混合液乙酸鹽緩沖混合液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷層并濃縮，經(jīng)酸性氧化鋁柱凈化后，甲烷層并濃縮，經(jīng)酸性氧化鋁柱凈化后，高效液相色譜高效液

54、相色譜-PbO2柱后衍生測(cè)定，外標(biāo)法柱后衍生測(cè)定，外標(biāo)法定量。定量。 樣品制備樣品制備 1. 提取提取 稱取稱取5.00 g樣品于樣品于50 mL離心管內(nèi)，加入離心管內(nèi)，加入1.5 mL 20%的鹽酸的鹽酸羥胺溶液、羥胺溶液、2.5 mL 1.0 mol/L的對(duì)的對(duì)-甲苯磺酸溶液、甲苯磺酸溶液、5.0 mL乙乙酸鹽緩沖溶液，用勻漿機(jī)以酸鹽緩沖溶液，用勻漿機(jī)以10 000 r/min的速度均質(zhì)的速度均質(zhì)30 s，加，加入入10 mL乙腈劇烈震搖乙腈劇烈震搖30 s。加入。加入5g酸性氧化鋁，再次震蕩酸性氧化鋁，再次震蕩30 s。 3 000 r/min離心離心10 min。把上清液轉(zhuǎn)移至裝有。把

55、上清液轉(zhuǎn)移至裝有10 mL 水和水和2 mL 二甘醇的二甘醇的100 mL離心管中。然后在離心管中。然后在50 mL離心管離心管中加入中加入10 mL乙腈，重復(fù)上述操作，合并乙腈層。乙腈，重復(fù)上述操作，合并乙腈層。 2. 凈化凈化 在離心管中加入在離心管中加入15 mL 二氯甲烷二氯甲烷,振蕩振蕩10 s， 3 000 r/min離離心心10 min， 將二氯甲烷層轉(zhuǎn)移至將二氯甲烷層轉(zhuǎn)移至100 mL的梨形瓶中，再用的梨形瓶中，再用5 mL乙腈、乙腈、10 mL 二氯甲烷重復(fù)上述操作一次，合并二氯甲二氯甲烷重復(fù)上述操作一次，合并二氯甲烷層于烷層于100 mL梨形瓶中。梨形瓶中。45旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約

56、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約1 mL，用，用2.5 mL乙腈溶解殘?jiān)?。乙腈溶解殘?jiān)?將酸性氧化鋁柱安裝在固相萃取裝置上，將梨形瓶中的溶液將酸性氧化鋁柱安裝在固相萃取裝置上，將梨形瓶中的溶液轉(zhuǎn)移到柱上，再用乙腈洗滌瓶?jī)纱?，每次轉(zhuǎn)移到柱上，再用乙腈洗滌瓶?jī)纱?，每?.5 mL, 把洗滌液把洗滌液依次通過(guò)柱，控制流速不超過(guò)依次通過(guò)柱，控制流速不超過(guò)0.6mL/min，收集全部流出液，收集全部流出液，45旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，殘液準(zhǔn)確用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，殘液準(zhǔn)確用0.5 mL乙腈溶解，過(guò)乙腈溶解，過(guò)0.45m 濾膜，濾液供液相色譜測(cè)定。濾膜，濾液供液相色譜測(cè)定。 液相色譜條件液相色譜條件 a) 色譜柱：色譜柱： C18柱，

57、柱，250 mm 4.6mm（i.d.），）， 粒粒度度5m，在，在C18色譜柱和檢測(cè)器之間連接色譜柱和檢測(cè)器之間連接25% PbO2氧化柱氧化柱; b) 流動(dòng)相：乙腈和乙酸銨緩沖溶液流動(dòng)相：乙腈和乙酸銨緩沖溶液 ； c) 流速：流速：1.0 mL/min; d) 柱溫：室溫柱溫：室溫; e) 檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：618 nm(孔雀石綠孔雀石綠); 588 nm(結(jié)晶紫結(jié)晶紫); f) 進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：50 L。 液相色譜測(cè)定液相色譜測(cè)定 根據(jù)樣液中被測(cè)孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫根據(jù)樣液中被測(cè)孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫或隱色結(jié)晶紫含量情況，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作或隱色結(jié)晶紫含量情況，選

58、定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中孔雀石綠、隱色孔雀溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫或隱色結(jié)晶紫響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)石綠、結(jié)晶紫或隱色結(jié)晶紫響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液等體積參插進(jìn)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液等體積參插進(jìn)樣測(cè)定。在上述色譜條件下，孔雀石綠、結(jié)晶紫、樣測(cè)定。在上述色譜條件下，孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的保留時(shí)間約為隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的保留時(shí)間約為6.10min、7.88min、17.77min、18.22min?？兹甘G、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜圖孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)

59、晶紫、隱色結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜圖 合成色素的檢測(cè)合成色素的檢測(cè)樣品的處理和吸附分離樣品的處理和吸附分離1.1. 樣品應(yīng)先除去酒精、脂肪、蛋白質(zhì)、淀粉和二氧樣品應(yīng)先除去酒精、脂肪、蛋白質(zhì)、淀粉和二氧化碳。酒精可用加熱法除去，二氧化碳可用振搖化碳。酒精可用加熱法除去，二氧化碳可用振搖法或超聲法除去，淀粉吸附的色素可用洗脫法將法或超聲法除去，淀粉吸附的色素可用洗脫法將色素洗下來(lái)。色素洗下來(lái)。2.2. 然后在酸性條件下（然后在酸性條件下（pH4pH45)5)用脫脂羊毛或聚酰胺用脫脂羊毛或聚酰胺吸附色素。吸附色素。3.3. 反復(fù)用檸檬酸酸化的反復(fù)用檸檬酸酸化的pHpH為為4 4的熱水清洗吸附物，以的熱水

60、清洗吸附物，以除去水溶性雜質(zhì)。除去水溶性雜質(zhì)。4.4. 用用10%10%氨水氨水- -乙醇溶液洗脫色素，收集洗脫液。乙醇溶液洗脫色素，收集洗脫液。（1 1）薄層色譜法（定性）薄層色譜法（定性） 是目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法是目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 5009.35-2003推推薦的色素的吸附與解吸附方法。在酸性條件薦的色素的吸附與解吸附方法。在酸性條件下，聚酰胺或脫脂羊毛能與水溶性酸性色素下，聚酰胺或脫脂羊毛能與水溶性酸性色素結(jié)合，在堿性條件下又能解吸附，將解析下結(jié)合，在堿性條件下又能解吸附，將解析下來(lái)的色素用紙色譜或薄層色譜進(jìn)行分離。來(lái)的色素用紙色譜或薄層色譜進(jìn)行分離。 將跑出來(lái)的色素斑點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行