中國胃癌HER檢測-指南解讀-鄭杰

1、中國胃癌中國胃癌HER2HER2檢測指南解讀檢測指南解讀（20112011版）版）概述概述本指南推薦本指南推薦IHCIHC與與FISHFISH和（或）和（或）DSISHDSISH相結(jié)合的檢測策略相結(jié)合的檢測策略o胃癌有必要進(jìn)行準(zhǔn)確的胃癌有必要進(jìn)行準(zhǔn)確的HER2HER2檢測檢測oHER2HER2狀態(tài)檢測首先選用免疫組織化學(xué)法（狀態(tài)檢測首先選用免疫組織化學(xué)法（IHCIHC）oIHC 3+IHC 3+的病例視為的病例視為HER2HER2陽性陽性oIHC 2+IHC 2+的病例建議進(jìn)一步行原位雜交（的病例建議進(jìn)一步行原位雜交（ISHISH：FISHFISH和或和或DSISHDSISH）檢測，檢測，IH

2、C 2+/ISH+IHC 2+/ISH+的病例視為的病例視為HER2HER2陽性陽性oIHC 1+IHC 1+和和IHC 0 IHC 0 病例，病例，IHC 2+/ISH - IHC 2+/ISH - 病例視為病例視為HER2HER2陰性陰性o胃癌胃癌HER2HER2檢測應(yīng)在有能力的實驗室進(jìn)行檢測應(yīng)在有能力的實驗室進(jìn)行o檢測質(zhì)量取決于標(biāo)本的采集、處理過程、檢測質(zhì)量取決于標(biāo)本的采集、處理過程、IHC/ISH IHC/ISH 檢測方法和評檢測方法和評判標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行判標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行問題一1. 1. 請問您所在的醫(yī)院胃癌HER2檢測是否屬于常規(guī)檢測項目？A.是B.否C.不清楚問題二請問您所在的醫(yī)院，由誰決定

3、是否做胃癌HER2免疫組化檢測？A. 病理科B. 外科C. 腫瘤內(nèi)科D. 消化內(nèi)鏡室問題三請您對多學(xué)科合作對胃癌HER2檢測的重要性打分（0-5重要性逐漸遞增），請按投票器選擇A. 0 B. 1C. 2D. 3E. 4F. 5胃癌胃癌HER2檢測檢測切片切片脫水包埋固定固定 HER2 HER2檢測的相關(guān)流程檢測的相關(guān)流程切片檢測判讀標(biāo)本標(biāo)本收取收取問題四貴單位胃癌手術(shù)標(biāo)本送到病理科處理的時間？貴單位胃癌手術(shù)標(biāo)本送到病理科處理的時間？A 30分鐘內(nèi)B 1小時內(nèi)C 2小時內(nèi)D 2小時E 不清楚 問題五貴單位手術(shù)標(biāo)本固定時間？貴單位手術(shù)標(biāo)本固定時間？A.不固定直接取材B.固定時間在8小時內(nèi)C.固定時

4、間在12小時左右（過夜）D.固定時間12-24小時E.不清楚標(biāo)本類型o 原發(fā)病灶的原發(fā)病灶的手術(shù)切除標(biāo)本手術(shù)切除標(biāo)本o 原發(fā)病灶的原發(fā)病灶的胃鏡活檢標(biāo)本胃鏡活檢標(biāo)本l建議取建議取6-86-8塊，以獲得塊，以獲得足夠的樣本組織足夠的樣本組織，多點活檢多點活檢對對準(zhǔn)確的檢測有必要準(zhǔn)確的檢測有必要o 切除標(biāo)本離體后切除標(biāo)本離體后20203030分鐘內(nèi)分鐘內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記、切開、固定等進(jìn)行標(biāo)記、切開、固定等初步處理后，及時送病理科初步處理后，及時送病理科o 活檢標(biāo)本的大小活檢標(biāo)本的大小2x2x2mm2x2x2mm3 3o 原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，建議使

5、用建議使用手術(shù)切除組織進(jìn)行檢測手術(shù)切除組織進(jìn)行檢測標(biāo)本采集問題六貴單位送檢標(biāo)本采用何種固定液？貴單位送檢標(biāo)本采用何種固定液？A.不用固定液，直接送病理科B.10%福爾馬林固定液（蒸餾水配）C.10%福爾馬林固定液（中性緩沖液配）D.10%甲醛固定液E.不清楚標(biāo)本固定o 采用新鮮配制采用新鮮配制10%10%中性緩沖福爾馬林中性緩沖福爾馬林作為固定液作為固定液o 固定液的量應(yīng)為組織的固定液的量應(yīng)為組織的1010倍倍o 手術(shù)切除標(biāo)本的固定時間為手術(shù)切除標(biāo)本的固定時間為8 848h48h ( (至少至少1h/mm1h/mm組織組織) )o 活檢標(biāo)本的固定時間活檢標(biāo)本的固定時間不超過不超過24h24h

6、( (至少至少1h/mm1h/mm組織組織) )o 不宜使用其它固定液，非不宜使用其它固定液，非10%10%中性緩沖福爾馬林制劑中性緩沖福爾馬林制劑可能會妨礙可能會妨礙IHCIHC和和ISHISH檢測的可靠性檢測的可靠性o 不宜用微波快速固定組織不宜用微波快速固定組織規(guī)范的標(biāo)本固定是規(guī)范的標(biāo)本固定是HER2檢測質(zhì)量的保障；保存良好的組織檢測質(zhì)量的保障；保存良好的組織形態(tài)，防止細(xì)胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失形態(tài)，防止細(xì)胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失標(biāo)本準(zhǔn)備固定1小時固定52小時固定4小時固定2周固定時間影響固定時間影響HER2染色結(jié)果染色結(jié)果固定22小時圖片由 of A Morey, St Vincents Ho

7、spital, NSW, Australia提供固定較差示例：乳腺癌固定較差示例：乳腺癌HER2 IHC檢測檢測o 固定較差會導(dǎo)致染色結(jié)果的異質(zhì)性o 胞質(zhì)染色可能是由固定較差導(dǎo)致圖片由 W Hanna提供固定較差示例：胃癌固定較差示例：胃癌HER2 IHC檢測檢測o 固定不完全會導(dǎo)致假陽性檢查結(jié)果o 胞質(zhì)染色可能由于使用了不恰當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞綀D片由Targos Molecular Pathology.提供固定較差示例：固定較差示例：HER2 ISH檢測檢測圖片由 Abbott/Vysis.提供p固定不完全 - SISH，“空核”p固定不完全導(dǎo)致探針信號較弱或缺失p過度染色會導(dǎo)致持續(xù)性自發(fā)熒光 探針

8、信號可能較弱或缺失HER2檢測HER2HER2過表達(dá)的檢測過表達(dá)的檢測HER2HER2擴增的檢測擴增的檢測n 免疫組織化學(xué)染色方法免疫組織化學(xué)染色方法（IHC）l 自動化自動化n 原位雜交方法原位雜交方法 （ISH）l FISHl Dual SISH實驗室總體要求o 應(yīng)當(dāng)在有條件的實驗室進(jìn)行，擁有試驗所需的儀器應(yīng)當(dāng)在有條件的實驗室進(jìn)行，擁有試驗所需的儀器和設(shè)備及空間條件和設(shè)備及空間條件o 實驗室掌握包括標(biāo)本的制備、抗體的選擇、抗原修實驗室掌握包括標(biāo)本的制備、抗體的選擇、抗原修復(fù)方法及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測預(yù)處理復(fù)方法及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測預(yù)處理方法及其它相關(guān)技術(shù)方法及其它相關(guān)

9、技術(shù)o 實驗室經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì)量控制程序驗證，實驗室經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì)量控制程序驗證，建立完善的建立完善的實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作流程（實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOPSOP） o 實驗室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過合格培訓(xùn)實驗室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過合格培訓(xùn)HER2檢測-IHCp IHCIHC方法方法l 試驗方法根據(jù)實驗室條件可以選擇手工染試驗方法根據(jù)實驗室條件可以選擇手工染 色、半自動染色和全自動免疫組化染色色、半自動染色和全自動免疫組化染色l 建議使用全自動染色方法建議使用全自動染色方法p 建議使用建議使用我國相關(guān)部門我國相關(guān)部門（SFDASFDA）批準(zhǔn)的試劑盒）批準(zhǔn)的試劑盒p 自行組配和分裝的

10、抗體必須經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì)自行組配和分裝的抗體必須經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì) 量控制程序驗證，并與權(quán)威機構(gòu)批準(zhǔn)的檢測試劑盒進(jìn)量控制程序驗證，并與權(quán)威機構(gòu)批準(zhǔn)的檢測試劑盒進(jìn) 行比對，以保證檢測結(jié)果的可靠性行比對，以保證檢測結(jié)果的可靠性IHCIHC抗體抗體結(jié)果判讀和分析普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡p 病理醫(yī)生需要經(jīng)過培訓(xùn)p IHC評分標(biāo)準(zhǔn)和乳腺癌有所不同p 樣本：活檢組織和切除組織有所不同p 觀察：高異質(zhì)性需要全面觀察所有腫瘤組織p 溝通：結(jié)果不確定時需要與腫瘤科醫(yī)生溝通IHCIHC判讀標(biāo)準(zhǔn)判讀標(biāo)準(zhǔn)（參照ToGA經(jīng)驗，所有圖片來自SCC）0 0 無 反 應(yīng) 或 腫 瘤 細(xì) 胞

11、膜 染 色無 反 應(yīng) 或 腫 瘤 細(xì) 胞 膜 染 色 1 0 % 1+ 1+ 10%腫瘤細(xì)胞微弱或隱約膜染色，腫瘤細(xì)胞微弱或隱約膜染色，細(xì)胞膜僅部分區(qū)域著色細(xì)胞膜僅部分區(qū)域著色2+2+ 10%腫瘤細(xì)胞弱到中度的完全或腫瘤細(xì)胞弱到中度的完全或細(xì)胞基底部和兩側(cè)邊膜染色細(xì)胞基底部和兩側(cè)邊膜染色3+3+ 10%腫瘤細(xì)胞完全性或基底部和腫瘤細(xì)胞完全性或基底部和兩側(cè)邊膜強染色（對兩側(cè)邊膜強染色（對3+的病例同時的病例同時表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）IHCIHC結(jié)果判讀時應(yīng)注意：細(xì)胞質(zhì)著色應(yīng)忽略不計，正常胃黏膜上皮細(xì)胞不應(yīng)著色結(jié)果判讀時應(yīng)注意：細(xì)胞質(zhì)著色應(yīng)忽略不計，正常胃黏膜

12、上皮細(xì)胞不應(yīng)著色HER2檢測-IHCo 原位雜交檢測方法（原位雜交檢測方法（ISHISH） 熒光原位雜交（熒光原位雜交（FISH ） 雙色銀染原位雜交（雙色銀染原位雜交（Dual SISH， DSISH）o 探針探針建議使用我國相關(guān)部門（建議使用我國相關(guān)部門（SFDASFDA）批準(zhǔn)的試劑盒）批準(zhǔn)的試劑盒FISH，HER2紅色信號增多，局部呈紅色信號增多，局部呈簇狀，簇狀，CEP17信號信號1-2個，個，比值比值7.2，有擴增（，有擴增（100）FISH，HER2和和CEP17信號各信號各1-2個，比值個，比值1.65，無擴增（，無擴增（100） FISHFISH：嚴(yán)格按照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)程序執(zhí)行：嚴(yán)

13、格按照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)程序執(zhí)行HER2檢測-FISH圖片來自圖片來自SCCDSISH HER2黑色信號擴增，呈簇狀；黑色信號擴增，呈簇狀；CEP17紅色信號紅色信號1-2個；比值個；比值15，有，有擴增擴增(100)DSISH HER2和和CEP17信號各信號各1-2個，個，比值比值0.8，無擴增，無擴增(100)DSISHDSISH：實驗室應(yīng)先進(jìn)行嚴(yán)格的對比試驗和程序優(yōu)化：實驗室應(yīng)先進(jìn)行嚴(yán)格的對比試驗和程序優(yōu)化 嚴(yán)格按照所用全自動染色儀器的優(yōu)化程序和嚴(yán)格按照所用全自動染色儀器的優(yōu)化程序和SOPSOP執(zhí)行執(zhí)行HER2檢測-DSISH圖片來自圖片來自SCCSCC請問貴院是否有統(tǒng)一的HER2檢測病理報告

14、格式？A. 是B. 否問題七檢測報告內(nèi)容胃癌HER2 IHC/ISH檢測報告臨床信息：臨床信息： 姓名 性別 年齡 門診住院號 送檢醫(yī)師聯(lián)系方式 檢測日期 年 月 日標(biāo)本信息：標(biāo)本信息： 病理號/蠟塊號 標(biāo)本類型： 手術(shù)切除 活檢腫瘤部位： 胃食道交界處 胃底 胃體 胃竇 幽門管 轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本固定液種類（10中性緩沖福爾馬林）是否標(biāo)本離體至固定時間(如有記錄) 分鐘標(biāo)本固定的時間(如有記錄) 分鐘組織學(xué)類型/分級 Laurn分型 臨床分期 T N M HER2 IHC 檢測報告檢測信息：檢測信息：抗體信息(克隆號生產(chǎn)商) 檢測方法 手工/半自動 全自動 對照設(shè)置情況 3+ 0 樣本量是否足夠用于

15、評估是否具有膜著色的腫瘤細(xì)胞的百分比 %著色的異質(zhì)性有無腫瘤細(xì)胞膜染色模式 完整 基底和側(cè)膜（U-shaped) 兩者皆有判讀結(jié)果：判讀結(jié)果：0 l+ 2+ 3+ 無法判讀結(jié)論：結(jié)論：陽性；不確定；陰性；無法判讀檢測人員：技術(shù)員檢測人員：技術(shù)員 病理醫(yī)師病理醫(yī)師 HER2 ISH 檢測報告 檢測信息：檢測信息：探針信息(生產(chǎn)商/商品號) 檢測方法 對照設(shè)置情況 陽性對照 陰性對照 樣本量是否足夠用于評估是否IHC檢測結(jié)果0 l+ 2+ 3+ 無法判讀判讀結(jié)果：判讀結(jié)果： 用于評估的腫瘤細(xì)胞數(shù)量 HER2信號總數(shù)CEPl7信號總數(shù) HER2信號數(shù)平均值細(xì)胞核 CEPl7信號數(shù)平均值細(xì)胞核 17號

16、染色體是否為多體是否結(jié)論：結(jié)論： 陽性陽性( (擴增擴增) ) 陰性陰性( (無擴增無擴增) ) 無法判讀無法判讀 檢測人員：檢測人員：技術(shù)員技術(shù)員 病理醫(yī)生病理醫(yī)生 實驗室質(zhì)量控制 （1）n HER2蛋白和基因擴增的檢測均應(yīng)在內(nèi)、外部質(zhì)量控制良好的病理實驗室進(jìn)行n 檢測必須嚴(yán)格按照指南要求執(zhí)行，以保證結(jié)果可靠n 不具備HER2檢測條件的單位應(yīng)按照指南要求，妥善處理和準(zhǔn)備好標(biāo)本，提供給有質(zhì)量保證的病理實驗室進(jìn)行檢測實驗室質(zhì)量控制 （2）實驗室內(nèi)、外部質(zhì)量控制和SOP的主要要求如下n 準(zhǔn)備開展GC HER2檢測的實驗室應(yīng)選擇12家已較好開展該項檢測的實驗進(jìn)行25100例標(biāo)本的對比驗證n 或通過參

17、加有關(guān)外部質(zhì)量控制活動來實現(xiàn)，外部質(zhì)控陽性和陰性結(jié)果的一致性應(yīng)達(dá)到90以上，每年應(yīng)進(jìn)行12次n 從事GC HER2檢測的實驗室技術(shù)人員和病理醫(yī)師應(yīng)進(jìn)行必要的培訓(xùn)和資格考核實驗室質(zhì)量控制 （3）n 實驗室應(yīng)建立完善的SOP，并做好每次檢測情況的記錄和存檔工作n 任何改變操作程序和試劑的行為均應(yīng)重新進(jìn)行嚴(yán)格的驗證n 內(nèi)部質(zhì)控應(yīng)包括同一組織不同批次染色結(jié)果的重復(fù)性分析，每次染色陽性、陰性對照的設(shè)置，如有可能還應(yīng)沒置包括低表達(dá)低擴增對照n 檢測相關(guān)的儀器和設(shè)備需定期維護(hù)、校驗p 類似乳腺癌類似乳腺癌p 亮視野檢測方法有優(yōu)勢亮視野檢測方法有優(yōu)勢Her2檢測流程檢測流程樣本收集樣本收集鏡下觀察鏡下觀察p

18、異質(zhì)性高異質(zhì)性高p 需要觀察需要觀察整張整張切片切片檢測所需時間檢測所需時間p 胃癌進(jìn)展快，宜及時獲得結(jié)果胃癌進(jìn)展快，宜及時獲得結(jié)果p 多學(xué)科多學(xué)科參與參與結(jié)果判讀結(jié)果判讀p 與乳腺癌有所不同與乳腺癌有所不同胃癌HER2HER2檢測： 基本過程和特殊性p 數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫瘤組織的瘤組織的活檢活檢標(biāo)本標(biāo)本 p 具有代表性的具有代表性的手術(shù)切除手術(shù)切除標(biāo)標(biāo)本本o 多學(xué)科協(xié)作共同努力多學(xué)科協(xié)作共同努力 醫(yī)生和技術(shù)員醫(yī)生和技術(shù)員o 知識更新和觀念改變知識更新和觀念改變 患者和醫(yī)生患者和醫(yī)生多學(xué)科協(xié)作檢測HER2：臨床醫(yī)生之角色 采樣采樣 手術(shù)和胃鏡活檢（手術(shù)和胃鏡活檢（6-8塊組織）塊組織） 固定固定 10%中性緩沖福爾馬林中性緩沖福爾馬林 樣本送檢（離體時間）樣本送檢（離體時間）30分鐘分鐘 結(jié)果解讀結(jié)果解讀 HER2 + IHC 0 1+ 2+ 3+ HER2 陽性陽性多學(xué)科協(xié)作檢測HER2：病理醫(yī)生之角色Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145. 檢測結(jié)果分析檢測結(jié)果分析檢查備檢標(biāo)本是