無菌工藝驗證-培養(yǎng)基模擬灌裝試驗

1、培養(yǎng)基灌裝試驗方案培養(yǎng)基灌裝試驗方案Luisa Stoppa無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會 Nanjing, the Peoples Republic of China 16-20 November 20092 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培訓目的培訓目的l 評估無菌生產(chǎn)模擬試驗（培養(yǎng)基灌裝或肉湯灌裝）l 了解在培養(yǎng)基灌裝試驗方案設(shè)計過程中的關(guān)鍵點，以符合法規(guī)要求 l 學會如何對失敗進行評估，以及可能帶來的后果 l 在團隊中進行討論3 |無菌

2、藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009無菌生產(chǎn)工藝無菌生產(chǎn)工藝:培訓目的培訓目的4 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養(yǎng)基灌裝的原則培養(yǎng)基灌裝的原則l 為什么無菌工藝的驗證必須符合制藥行業(yè)的規(guī)范？“無菌藥品”的含義是“沒有活體微生物” 在無菌檢測過程中，實際上并沒有對每個產(chǎn)品進行檢測，所以應(yīng)采取所有努力減少污染的風險(潔凈廠房、 HVAC 、

3、壓差、清洗程序、監(jiān)測計劃)盡管采取這些措施，但污染永遠是一個潛在的風險，因為無菌工藝操作是在一個受控但是非滅菌的環(huán)境中進行的，并且樣品取樣數(shù)量太小，所以只有嚴重污染才可能被發(fā)現(xiàn)。5 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養(yǎng)基灌裝的原則培養(yǎng)基灌裝的原則l 制藥相關(guān)法規(guī) :- 法規(guī)：FDA “,無菌生產(chǎn)工藝 生產(chǎn)無菌藥品的行業(yè)指南 cGMP” - - EU GMP Part I 附錄 1 - PIC/S PI 007-2 “無菌生產(chǎn)工藝驗證指南”l 雖然培養(yǎng)基灌裝試驗必

4、須復制無菌生產(chǎn)條件，但是模擬試驗與藥品實際生產(chǎn)過程采取完全相同的方式是不可能的。 什么培養(yǎng)基？灌裝多少數(shù)量？多長時間？ 6 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養(yǎng)基灌裝的原則培養(yǎng)基灌裝的原則l 在無菌生產(chǎn)工藝中，最大的風險來源于潔凈室中人員的操作，所以操作人員必須參加培養(yǎng)基灌裝試驗。操作人員需要什么樣的資質(zhì)？以及什么時候可以確認操作人員的合格性？ l 在無菌灌裝操作中，應(yīng)進行環(huán)境監(jiān)測。 是否需要額外的監(jiān)測措施？ 7 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會

5、Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009培養(yǎng)基灌裝的原則培養(yǎng)基灌裝的原則l 通常情況下，應(yīng)該包括產(chǎn)品實際操作過程中可能發(fā)生的“最差條件” 必須考慮可能采取那些干預措施 ?8 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009清洗設(shè)備清洗設(shè)備隧道烘箱隧道烘箱灌裝設(shè)備灌裝設(shè)備壓塞機壓塞機壓蓋機壓蓋機模擬試驗模擬試驗: 液體無菌灌裝生產(chǎn)線液體無菌灌裝生產(chǎn)線9 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會N

6、anjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009模擬試驗模擬試驗: 培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案l 需要考慮的關(guān)鍵因素 :試驗的數(shù)量和頻率 培養(yǎng)基 (產(chǎn)品的替代品)灌裝的數(shù)量容器 (玻璃瓶) 體積灌裝體積生產(chǎn)速度(或 灌裝速度)灌裝過程的持續(xù)時間工作班次監(jiān)測措施 干預措施 常規(guī)的和非常規(guī)的培養(yǎng)方法可接受標準10 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009模擬試驗模擬試驗: 培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案11

7、 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 試驗的次數(shù)和頻率 培養(yǎng)基模擬試驗的初始驗證，至少需要成功的連續(xù)進行 3 次獨立的模擬試驗（建議在不同的工作日進行試驗）。 首次驗證后，培養(yǎng)基模擬試驗通常每年進行2次。當生產(chǎn)線發(fā)生變更，并且經(jīng)過評估可能對無菌生產(chǎn)工藝有潛在危險時，應(yīng)當進行額外的培養(yǎng)基灌裝試驗。 培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案12 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of Chin

8、a, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 培養(yǎng)基 (1/3)培養(yǎng)基必須適應(yīng)廣譜微生物的生長，包括需氧菌、酵母菌和霉菌（非選擇性培養(yǎng)基）。推薦使用大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基(SCD) ，以及大豆胰蛋白胨肉湯(TSB).如果產(chǎn)品在缺氧條件、通常在氮氣保護下灌裝時，需要使用厭氧培養(yǎng)基:液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM).培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案13 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 培養(yǎng)基(2/3)培養(yǎng)基必須適應(yīng)微生物的生長（促生長試驗）。

9、被試驗的微生物可以從藥典 (美國、歐盟、日本)中選擇。另外推薦使用12種最常見的環(huán)境分離菌。 通常情況，在培養(yǎng)結(jié)束后，一些玻璃瓶（從生產(chǎn)開始、中間、結(jié)束時取樣）進行微生物接種，接種量100CFU，分別培養(yǎng)3天（細菌）和5天（酵母菌和霉菌）。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案14 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 培養(yǎng)基(3/3)如果培養(yǎng)基中含有動物源性成分，可能導致朊蛋白污染。那么很重要的是，培養(yǎng)基供應(yīng)商能夠提供證明，確認相關(guān)物質(zhì)來源于沒有牛海綿狀腦?。?/p>

10、BSE-free）的國家 。另一種方法是可以使用從植物中提取的TSB培養(yǎng)基。 SDC 粉末通常遭受支原體的污染，并且無法在無菌過濾中去除。在這種情況下，可以在粉末灌裝前，對粉末進行滅菌（使用射線）。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案15 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 灌裝數(shù)量 灌裝的數(shù)量應(yīng)該能夠真實的反應(yīng)批量；但允許根據(jù)需要，采取最低灌裝數(shù)量，前提是應(yīng)足以反應(yīng)操作員工疲勞時對產(chǎn)品質(zhì)量潛在的影響 ，并且足以體現(xiàn)了盡可能發(fā)生的干預措施。一些法規(guī)中建議應(yīng)該

11、根據(jù)批量確定灌裝的數(shù)量。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案16 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 容器體積(1/2)應(yīng)該考慮到灌裝容器的極端尺寸。最大的容器（通常由于充填體積較大而導致最小的充填速度）通常開口較大，所以從環(huán)境中微生物侵入的潛在風險是最大的。最小的容器（通常由于充填體積較小而導致最大的充填速度）體現(xiàn)了最大的操作難度；小的容器更容易破碎，穩(wěn)定性差，在設(shè)備中更容易破裂或堵塞。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案17 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查

12、員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 容器體積(2/2) 在最初的驗證中，可以二次選用最大的容器，第三次選用最小的容器。在日常的評估中，其它規(guī)格尺寸的容器也應(yīng)該包括在驗證計劃中。不能使用琥珀色的容器，而應(yīng)該使用透明的容器，保證可以目視檢測到微生物的生長。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案18 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 灌裝體積培養(yǎng)基灌裝體積

13、不需要與現(xiàn)實中常規(guī)的灌裝體積一致。 應(yīng)確定足夠的灌裝體積，保證可以充分接觸到容器密封部位的表面(當它倒置和旋轉(zhuǎn)時)，并且足以目視檢測到微生物在培養(yǎng)后的生長情況。 較小的容器不能灌裝的太滿，因為容器上部的空間中應(yīng)保持足夠的空氣，以支持需氧微生物的生長（通常應(yīng)該保留25%的空間）。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案19 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 生產(chǎn)線 (或 灌裝) 速度培養(yǎng)基灌裝的速度，應(yīng)符合實際生產(chǎn)的灌裝速度范圍。如果超過了限度，應(yīng)該進行評估。

14、每次模擬試驗中確定的速度應(yīng)該是符合要求的。較高的生產(chǎn)速度，可以適用于生產(chǎn)過程中經(jīng)常受到干擾或手工操作較多的生產(chǎn)工藝。 較低的生產(chǎn)速度，可以應(yīng)用于在無菌區(qū)域中無菌部件長時間暴露的生產(chǎn)工藝。 在灌裝生產(chǎn)線的起始驗證中，一次可以選用最低速度，另外二次可以選用最高速度。在生產(chǎn)線的日常評估中，模擬試驗的速度應(yīng)該進行變換。 培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案20 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 灌裝的持續(xù)時間 即使使用最精確的模型模擬實際生產(chǎn)運行，其他的因素也需要

15、考慮，以確保其合理性。 通常情況，培養(yǎng)基灌裝的時間應(yīng)該足夠長，能夠包括所有的必需的干擾、生產(chǎn)中斷，以及反應(yīng)出潛在的人員疲勞，一個典型的培養(yǎng)基灌裝可以至少是3-4小時。 一次理想的培養(yǎng)基灌裝應(yīng)該灌裝比實際產(chǎn)品生產(chǎn)時更多的數(shù)量（所有的批次均應(yīng)大于5000個單位）。對于非常大的批量或較長的生產(chǎn)過程，通常使用一些空白樣品（空的或者灌水）以維持模擬試驗的動態(tài)環(huán)境。這些技術(shù)可以應(yīng)用于持續(xù)多個工作日的工藝驗證，用于驗證可以批準的最長的生產(chǎn)周期。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案 21 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 1

16、6-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 工作班次需要進行無菌工藝操作的每個操作員工都必須參與培養(yǎng)基灌裝試驗。 設(shè)備和生產(chǎn)線的操作員工應(yīng)該每年參加不少于一次的模擬試驗；其它操作員工比如設(shè)備工程師和環(huán)境取樣人員也應(yīng)該采取相同的方式。 應(yīng)該確定無菌操作間可以最多容納的操作人員數(shù)量。當一個公司有多個班次工作時，第二個班次、第三個班次也應(yīng)該包括在培養(yǎng)基灌裝試驗的計劃中。 如果手工操作（灌裝），每條生產(chǎn)線的員工都應(yīng)該參加開始的三次驗證；在再驗證（每6個月1次）過程中，至少有一條生產(chǎn)線的員工參加。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案 22 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing,

17、 the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 環(huán)境監(jiān)測措施在許多法規(guī)和制藥規(guī)范中，都提出了對微生物的要求。 在試驗過程中，可以使用主動采樣或被動采樣的方法進行空氣采樣；表面采樣最好在無菌操作結(jié)束后進行。另外還應(yīng)該對操作人員進行監(jiān)測。 在培養(yǎng)灌裝過程中，微生物監(jiān)測（空氣、表面、人員）和懸浮粒子監(jiān)測應(yīng)該按照各自的操作規(guī)程有效的進行。有時候，取樣點的數(shù)量可以較日常監(jiān)測適當增加。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案 23 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of Ch

18、ina, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 干預措施 常規(guī)的和非常規(guī)的-干預措施應(yīng)該模擬實際運行時可能發(fā)生的情況；培養(yǎng)基灌裝記錄中應(yīng)該記錄所有發(fā)生的干預措施，以及被移走產(chǎn)品的數(shù)量。 常規(guī)的干預措施：對于無菌生產(chǎn)線的安裝，如果已經(jīng)滅菌的部件脫離保護措施而被安裝的話，是一個潛在危險。因此，開始灌裝的容器更容易反映出無菌設(shè)備裝配的潛在問題。 其它的常規(guī)干預措施：膠塞供給， 移走掉落的玻璃瓶, 移走堵塞的膠塞，人員的停頓，換手套，環(huán)境的監(jiān)測。 非常規(guī)的干預措施（意外發(fā)生）：玻璃瓶破裂，灌裝針頭的更換或重新安裝，稱量調(diào)整的干預，傳感器故障，傳輸帶的調(diào)整。 培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案

19、 24 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 培養(yǎng)方法任何灌裝的產(chǎn)品都應(yīng)該在培養(yǎng)前進行檢查，發(fā)現(xiàn)任何不合格品（如容器密封性存在問題或完整性不好）時，都應(yīng)該被剔除并記錄。 行業(yè)規(guī)范中不同的要求: 全部樣品應(yīng)在20-35(2.5)下培養(yǎng)14天。通常在 20-25下 培養(yǎng) 7 天，然后在30-35下培養(yǎng) 7 天；或者在30-35培養(yǎng) 7 天后，再轉(zhuǎn)移到 20-25培養(yǎng) 7 天。關(guān)于培養(yǎng)條件的選擇，補充一個沒有形成共識的建議，在培養(yǎng)過程的前半個周期，將所有產(chǎn)品

20、進行倒置后培養(yǎng)；然后在剩余時間內(nèi)，將產(chǎn)品恢復直立位置后進行培養(yǎng)。 培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案 25 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 可接受標準試驗的目標是不出現(xiàn)長菌（陽性為0），但置信度為95時，污染率應(yīng)小于0.1% (在5000個灌裝單位中，大約有1個被污染)。FDA 和PDA 要求，不管試驗的數(shù)量，被污染的產(chǎn)品數(shù)量都應(yīng)該是0。很重要的一點，培養(yǎng)基灌裝試驗的失敗是十分罕見的。發(fā)生任何微生物污染時，均應(yīng)進行調(diào)查。培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案 2

21、6 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009l 關(guān)鍵因素: 可接受標準培養(yǎng)基灌裝方案培養(yǎng)基灌裝方案 Filled units per runContaminated units permitted (action level)30000475016300277503915041051051184061315071443081571091696010表格顯示了培養(yǎng)基灌裝試驗中，不同灌裝數(shù)量時，按照置信度為95、污染率應(yīng)小于0.1%計算，可以允許的最大污染數(shù)。 加拿大衛(wèi)生部

22、Health Canada27 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染污染l 發(fā)生失敗 (污染)時，必須確定最根本的原因，或者至少是最可能的原因。l 能夠?qū)ξ⑸镞M行分離和鑒別（鑒定到種鑒定到種），這一點非常重要。l 實施適當?shù)募m偏措施和預防措施 l 必須評估失敗對已經(jīng)放行批次（如果有的話）的影響 l 當糾偏措施實施后，應(yīng)該進行一次新的培養(yǎng)基灌裝試驗，以確認其有效性 28 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples R

23、epublic of China, 16-20 November 2009污染污染 率率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 在灌裝過程中污染率上升 這表明污染可能來源于液體培養(yǎng)基 (如與培養(yǎng)基貯罐非無菌連接，在循環(huán)管路中受到污染)。很重要的是，在灌裝結(jié)束后，保持培養(yǎng)基貯罐處于無菌狀態(tài)，當?shù)鹊脚囵B(yǎng)基灌裝結(jié)果時，可以核實這樣的假設(shè)。29 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 在灌裝過程

24、中污染率下降這表明污染發(fā)生于生產(chǎn)設(shè)備中（ 膠塞容器/ 軌道, 計量泵 / 針頭)，在灌裝過程中污染被部分或全部“清洗掉”。30 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 在灌裝過程中污染率出現(xiàn)尖峰一個尖峰（在短時段的一些產(chǎn)品被污染）可能與在灌裝過程中不正確操作導致的關(guān)鍵失誤有關(guān)。對于這個原因，很關(guān)鍵的是必須知道被污染產(chǎn)品灌裝的準確時間，以及當時實施的干預措施（灌裝操作過程的錄像是非常有用的）31 |無菌藥

25、品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 污染率出現(xiàn)尖峰后，呈上升趨勢 與前面的例子相同，但如果錯誤的干預措施能夠影響到液體的管路/回路時（如培養(yǎng)基貯罐的變化，泵或針的替換）32 |無菌藥品生產(chǎn)SFDA GMP 檢查員高級研討會Nanjing, the Peoples Republic of China, 16-20 November 2009污染率污染率灌裝過程灌裝過程(時間或灌裝量時間或灌裝量)污染污染l 孤立事件(試驗中少數(shù)污染)不幸的是，這些現(xiàn)象是最普通的，也是最難調(diào)查的。如果這種現(xiàn)象在多次試驗中反復出現(xiàn)，可能說明這個工藝存在“環(huán)境噪聲”，所以需要根本的措施（