第四章第一節(jié)染菌的防止

1、第四章第四章 發(fā)酵工業(yè)的無菌技術(shù)發(fā)酵工業(yè)的無菌技術(shù)思考題思考題1 1、染菌對發(fā)酵有什么危害，哪些原因會引起、染菌對發(fā)酵有什么危害，哪些原因會引起染菌？染菌以后應(yīng)采取什么措施？染菌？染菌以后應(yīng)采取什么措施？ 2、簡述好氧發(fā)酵時無菌空氣制備的工藝流、簡述好氧發(fā)酵時無菌空氣制備的工藝流程與要求。程與要求。什么是染菌？什么是染菌？發(fā)酵過程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它菌生長發(fā)酵過程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它菌生長繁殖。繁殖。一、發(fā)酵工業(yè)的無菌處理一、發(fā)酵工業(yè)的無菌處理 滅菌滅菌（sterilizationsterilization）是指用物理或化學(xué)）是指用物理或化學(xué)方法殺滅或去除物料或設(shè)備中一切有生命物方

2、法殺滅或去除物料或設(shè)備中一切有生命物質(zhì)的過程。質(zhì)的過程。滅菌實質(zhì)上可分殺菌和溶菌兩種，前者指滅菌實質(zhì)上可分殺菌和溶菌兩種，前者指菌體雖死，但形體尚存，后者則指菌體殺死菌體雖死，但形體尚存，后者則指菌體殺死后，其細胞發(fā)生溶化、消失的現(xiàn)象后，其細胞發(fā)生溶化、消失的現(xiàn)象 。消毒消毒（disinfectiondisinfection）是指用化學(xué)或物理）是指用化學(xué)或物理的方法殺滅或去除病原微生物的過程，它一的方法殺滅或去除病原微生物的過程，它一般只能殺死營養(yǎng)細胞而不能殺滅細菌芽孢。般只能殺死營養(yǎng)細胞而不能殺滅細菌芽孢。消毒是一種采用較溫和的理化因素，僅殺消毒是一種采用較溫和的理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)

3、部一部分對人體有害的病原死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的病原菌，而對被消毒的物體基本無害的措施。菌，而對被消毒的物體基本無害的措施。除菌除菌（degermingdegerming）是用過濾方法除去空氣）是用過濾方法除去空氣或液體中的微生物及其孢子或液體中的微生物及其孢子 。防腐防腐（antisepsisantisepsis）就是利用某種理化因）就是利用某種理化因素完全抑制霉腐微生物的生長繁殖，從而達素完全抑制霉腐微生物的生長繁殖，從而達到防止食品等發(fā)生霉腐的措施。到防止食品等發(fā)生霉腐的措施。如低溫、缺氧、干燥、高滲、添加防腐劑等。消毒與滅菌的區(qū)別消毒與滅菌的區(qū)別消毒與滅菌在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用消

4、毒與滅菌在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用二、發(fā)酵工業(yè)污染的防治策略二、發(fā)酵工業(yè)污染的防治策略（一）（一）污染的危害污染的危害（二）（二）污染的防治污染的防治 1.1.染菌的不良后果染菌的不良后果 （1 1）使發(fā)酵培養(yǎng)基因雜菌的消耗而損失，造成生產(chǎn)能力）使發(fā)酵培養(yǎng)基因雜菌的消耗而損失，造成生產(chǎn)能力下降直至倒罐，造成巨大經(jīng)濟損失下降直至倒罐，造成巨大經(jīng)濟損失（2 2）由于雜菌的污染，對產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量造成嚴重）由于雜菌的污染，對產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量造成嚴重的影響，如產(chǎn)物收率降低或產(chǎn)品質(zhì)量下降。的影響，如產(chǎn)物收率降低或產(chǎn)品質(zhì)量下降。（3 3）雜菌的代謝改變原反應(yīng)體系的）雜菌的代謝改變原反應(yīng)體系的PHPH，使發(fā)酵發(fā)

5、生異常，使發(fā)酵發(fā)生異常變化，變化，（4 4）雜菌分解產(chǎn)物，使生產(chǎn)失敗。）雜菌分解產(chǎn)物，使生產(chǎn)失敗。（5 5）細菌發(fā)生噬菌體感染，細菌細胞被裂解，導(dǎo)致整個）細菌發(fā)生噬菌體感染，細菌細胞被裂解，導(dǎo)致整個發(fā)酵生產(chǎn)的失敗。發(fā)酵生產(chǎn)的失敗。2、染菌危害的具體分析染菌危害的具體分析（1 1）染菌對不同菌種發(fā)酵的影響）染菌對不同菌種發(fā)酵的影響A細菌細菌v谷氨酸：發(fā)酵周期短，培養(yǎng)基不太豐富，較谷氨酸：發(fā)酵周期短，培養(yǎng)基不太豐富，較少染雜菌，但噬菌體威脅大。少染雜菌，但噬菌體威脅大。v肌苷：缺陷型生產(chǎn)菌，培養(yǎng)基豐富，易染菌肌苷：缺陷型生產(chǎn)菌，培養(yǎng)基豐富，易染菌，營養(yǎng)成分迅速被消耗，嚴重抑制菌生長和，營養(yǎng)成分迅速

6、被消耗，嚴重抑制菌生長和合成代謝產(chǎn)物。合成代謝產(chǎn)物。B. 霉菌霉菌vPenG：青霉素水解酶上升，：青霉素水解酶上升，PenG迅速破壞，迅速破壞，發(fā)酵一無所獲。發(fā)酵一無所獲。v檸檬酸：檸檬酸：pH2.0，不易染菌，主要防止前期染，不易染菌，主要防止前期染菌。菌。C. 酵母菌酵母菌: 易污染細菌以及野生酵母菌易污染細菌以及野生酵母菌 D. 疫苗：疫苗：無論污染的是活菌、死菌或內(nèi)外毒素，無論污染的是活菌、死菌或內(nèi)外毒素，都應(yīng)全部廢棄。都應(yīng)全部廢棄。（1）染菌對不同菌種發(fā)酵的影響染菌對不同菌種發(fā)酵的影響（2）染菌種類對發(fā)酵的影響染菌種類對發(fā)酵的影響v青霉素：怕染細短產(chǎn)氣桿菌青霉素：怕染細短產(chǎn)氣桿菌v鏈

7、霉素：怕染細短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿菌鏈霉素：怕染細短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿菌v四環(huán)素：怕染雙球菌、芽孢桿菌和莢膜桿菌四環(huán)素：怕染雙球菌、芽孢桿菌和莢膜桿菌v檸檬酸：怕染青霉菌檸檬酸：怕染青霉菌v肌苷（酸）：怕染芽孢桿菌肌苷（酸）：怕染芽孢桿菌v谷氨酸：怕染噬菌體，易造成連續(xù)污染谷氨酸：怕染噬菌體，易造成連續(xù)污染v污染噬菌體污染噬菌體 噬菌體的感染力強，傳播蔓延迅速，噬菌體的感染力強，傳播蔓延迅速，也較防治，故危害極大。也較防治，故危害極大。 污染噬菌體后，可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度污染噬菌體后，可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度下降，嚴重的造成斷種，被迫停產(chǎn)下降，嚴重的造成斷種，被迫停產(chǎn)。 污染其它雜菌污染其它

8、雜菌 有些雜菌會使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，有些雜菌會使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵過程的通氣攪拌。過程的通氣攪拌。 有的雜菌會使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使有的雜菌會使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使pH下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。 芽孢桿菌耐熱，不易殺死。芽孢桿菌耐熱，不易殺死。 由于接種量較小，生產(chǎn)菌生長一開始不占優(yōu)勢，而且容易污染雜菌。如如在此階段染菌，應(yīng)將培養(yǎng)液全部廢棄。在此階段染菌，應(yīng)將培養(yǎng)液全部廢棄。（3 3）、不同）、不同染菌對發(fā)酵的影響染菌對發(fā)酵的影響種子擴大培養(yǎng)期染菌種子擴大培養(yǎng)期染菌發(fā)酵前期染菌

9、發(fā)酵前期染菌發(fā)酵前期最易染菌。發(fā)酵前期最易染菌。原因原因 ： 發(fā)酵前期菌量不很多，發(fā)酵前期菌量不很多，與雜菌沒有競爭優(yōu)與雜菌沒有競爭優(yōu)勢勢；且還未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，且還未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，抵御雜抵御雜菌能力弱。菌能力弱。在這個時期要特別警惕以防止染菌的發(fā)生。在這個時期要特別警惕以防止染菌的發(fā)生。措施：措施： 可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補料量，用酸可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補料量，用酸堿調(diào)堿調(diào)pH值，縮短培養(yǎng)周期等措施予以補救。如果前值，縮短培養(yǎng)周期等措施予以補救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補加一些營養(yǎng)，重

10、新接種再用。加一些營養(yǎng)，重新接種再用。處理方法應(yīng)根據(jù)各種發(fā)酵的特點和具體情況來決定。 發(fā)酵中期染菌發(fā)酵中期染菌 原因：發(fā)酵中期染菌會嚴重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜原因：發(fā)酵中期染菌會嚴重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜菌大量產(chǎn)酸，培養(yǎng)液菌大量產(chǎn)酸，培養(yǎng)液pHpH下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至會發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至會使已產(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時也會使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生使已產(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時也會使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。大量泡沫。措施：措施： 降溫培養(yǎng)，減少補料，密切注意代謝變化情降溫培養(yǎng)，減少補料，密切注意代謝變化情況。如果發(fā)

11、酵單位到達一定水平可以提前放罐，或者況。如果發(fā)酵單位到達一定水平可以提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌。菌罐，抑制雜菌。發(fā)酵后期染菌發(fā)酵后期染菌發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能別是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能力。因此如果染菌不多，對生產(chǎn)影響不大。力。因此如果染菌不多，對生產(chǎn)影響不大。如果染菌嚴重，又破壞性較大，可以提前放如果染菌嚴重，又破壞性較大，可以提前放罐。罐。1 1）發(fā)酵染菌對過濾的影響）發(fā)酵染菌對過濾的影響染菌的發(fā)酵液

12、一般染菌的發(fā)酵液一般發(fā)粘發(fā)粘，菌體大多數(shù)自溶，菌體大多數(shù)自溶，所以在發(fā)酵液過濾時不能或很難形成濾餅，導(dǎo)所以在發(fā)酵液過濾時不能或很難形成濾餅，導(dǎo)致致過濾困難過濾困難。污染雜菌的種類對過濾的影響程度有差異污染雜菌的種類對過濾的影響程度有差異如污染霉菌時，影響較小，而污染細菌時很難如污染霉菌時，影響較小，而污染細菌時很難過濾。由于過濾困難，過濾時間拉長，過濾。由于過濾困難，過濾時間拉長，影響發(fā)影響發(fā)酵液儲罐和過濾設(shè)備的周轉(zhuǎn)使用酵液儲罐和過濾設(shè)備的周轉(zhuǎn)使用，破壞了生產(chǎn)破壞了生產(chǎn)平衡。平衡。染菌發(fā)酵液還會因過濾困難而染菌發(fā)酵液還會因過濾困難而大幅度降低過濾大幅度降低過濾收率，收率，直接影響提取總收率。直

13、接影響提取總收率。2）發(fā)酵染菌對提取的影響）發(fā)酵染菌對提取的影響染菌發(fā)酵液中含有比正常發(fā)酵液更多的水溶性蛋白染菌發(fā)酵液中含有比正常發(fā)酵液更多的水溶性蛋白和其它雜質(zhì)。和其它雜質(zhì)。如果采用有機溶劑萃取的提煉工藝，則極易發(fā)生乳如果采用有機溶劑萃取的提煉工藝，則極易發(fā)生乳化，很難使水相和溶劑相分離，影響進一步提純?；?，很難使水相和溶劑相分離，影響進一步提純。如果采用直接用離子交換樹脂的提取工藝，如鏈霉如果采用直接用離子交換樹脂的提取工藝，如鏈霉素、慶大霉素，染菌后大量雜菌黏附在離子交換樹脂素、慶大霉素，染菌后大量雜菌黏附在離子交換樹脂表面，或被離子交換樹脂吸附，大大降低離子交換樹表面，或被離子交換樹脂

14、吸附，大大降低離子交換樹脂的交換容量，而且有的雜菌很難用水沖洗干凈，洗脂的交換容量，而且有的雜菌很難用水沖洗干凈，洗脫時與產(chǎn)物一起進入洗脫液，影響進一步提純。脫時與產(chǎn)物一起進入洗脫液，影響進一步提純。v如果絲狀菌發(fā)酵被產(chǎn)酸菌污染：如果絲狀菌發(fā)酵被產(chǎn)酸菌污染：則則pH不斷下降不斷下降，菌絲大量自溶，發(fā)酵液粘度增加，過濾困難。，菌絲大量自溶，發(fā)酵液粘度增加，過濾困難。v 處理方法：將發(fā)酵液加熱后再加助濾劑；先加絮處理方法：將發(fā)酵液加熱后再加助濾劑；先加絮凝劑使蛋白質(zhì)凝聚后沉淀。凝劑使蛋白質(zhì)凝聚后沉淀。v雜菌分泌較多蛋白質(zhì)雜質(zhì)時，對發(fā)酵后處理過程中采雜菌分泌較多蛋白質(zhì)雜質(zhì)時，對發(fā)酵后處理過程中采用溶

15、媒萃取的提取工藝非常不利，使水相和溶媒之間用溶媒萃取的提取工藝非常不利，使水相和溶媒之間極易發(fā)生乳化極易發(fā)生乳化 （二）雜菌污染的防治（二）雜菌污染的防治1. 染菌的檢查與判斷染菌的檢查與判斷染菌的檢查方法：染菌的檢查方法：v顯微鏡檢查法顯微鏡檢查法 鏡檢出雜菌需要一定時間鏡檢出雜菌需要一定時間v平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法：菌落：菌落 噬菌體檢查可采用雙層平板法：噬菌斑噬菌體檢查可采用雙層平板法：噬菌斑v肉湯培養(yǎng)檢查法肉湯培養(yǎng)檢查法 v發(fā)酵過程的異?，F(xiàn)象判斷：發(fā)酵過程的異?，F(xiàn)象判斷：v溶解氧、溶解氧、pHpH、尾氣中的、尾氣中的COCO2 2含量、發(fā)酵液黏度含量、

16、發(fā)酵液黏度、顏色等的異常變化，都可能是發(fā)生染菌的、顏色等的異常變化，都可能是發(fā)生染菌的重要信息。重要信息。v溶解氧水平的異常變化溶解氧水平的異常變化vpH異常變化異常變化12v尾氣中尾氣中CO2含量異常含量異常2、污染原因分析、污染原因分析 v主要原因：主要原因： 種子帶菌種子帶菌 無菌空氣帶菌無菌空氣帶菌 設(shè)備滲漏設(shè)備滲漏 滅菌不徹底滅菌不徹底 操作失誤操作失誤 技術(shù)管理不善技術(shù)管理不善v 染菌原因染菌原因 染菌百分率染菌百分率%種子帶菌或懷疑種子帶菌種子帶菌或懷疑種子帶菌 9.64接種時罐壓跌零接種時罐壓跌零 0.19培養(yǎng)基滅菌不透培養(yǎng)基滅菌不透 0.79總空氣系統(tǒng)有菌總空氣系統(tǒng)有菌 19

17、.96泡沫冒頂泡沫冒頂 0.48夾套穿孔夾套穿孔 12.36盤管穿孔盤管穿孔 5.89接種管穿孔接種管穿孔 0.39閥門滲漏閥門滲漏 1.45攪拌軸密封滲漏攪拌軸密封滲漏 2.09罐蓋漏罐蓋漏 1.54其它設(shè)備滲漏其它設(shè)備滲漏 10.13操作原因操作原因 10.15 原因不明原因不明 24.94日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來抗生素發(fā)酵染菌原因分析日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來抗生素發(fā)酵染菌原因分析上海第三制藥廠染菌原因分析上海第三制藥廠染菌原因分析 染菌原因染菌原因 染菌百分率染菌百分率%種子帶菌種子帶菌 14.15盤管穿孔盤管穿孔 14.20閥門滲漏閥門滲漏 23.30空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有

18、菌 10.0管理不善管理不善 25.80其它其它 7.49原因不明原因不明 5.78 管理不善而染菌管理不善而染菌，經(jīng)分析有下表所列原因：，經(jīng)分析有下表所列原因： 染菌原因染菌原因 染菌百分率染菌百分率%進罐前未做設(shè)備嚴密度檢查進罐前未做設(shè)備嚴密度檢查 25.8接種違反操作規(guī)程接種違反操作規(guī)程 25.8檢修質(zhì)量缺乏驗收制度檢修質(zhì)量缺乏驗收制度 19.35操作不熟練操作不熟練 19.35配料違反工藝規(guī)程配料違反工藝規(guī)程 6.45調(diào)度不當調(diào)度不當 3.25耐熱芽孢桿菌：耐熱芽孢桿菌：滅菌不徹底；滅菌不徹底；球菌或無芽孢桿菌：球菌或無芽孢桿菌：種子染菌、設(shè)備滲種子染菌、設(shè)備滲漏、漏、無菌空氣帶菌無菌

19、空氣帶菌 、操作失誤、操作失誤；淺綠色雜菌：淺綠色雜菌：冷水管滲漏；冷水管滲漏；霉菌：霉菌：滅菌不徹底或操作問題；滅菌不徹底或操作問題；酵母菌：酵母菌：糖液滅菌不徹底或放置時間較糖液滅菌不徹底或放置時間較長長 種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌和設(shè)備滅菌不徹底、種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌和設(shè)備滅菌不徹底、設(shè)備或管道有死角。設(shè)備或管道有死角。補料的料液滅菌不徹底或補料管道、閥門滲補料的料液滅菌不徹底或補料管道、閥門滲漏，漏，操作不合理，操作不合理，一般不會是種子問題。一般不會是種子問題。數(shù)個發(fā)酵罐感染相同雜菌：數(shù)個發(fā)酵罐感染相同雜菌：空氣系統(tǒng)；空氣系統(tǒng)；個別罐連續(xù)感染雜菌：個別罐連續(xù)感染雜菌：設(shè)備問題；設(shè)備問題；不

20、是系統(tǒng)問題，而是該罐本身的問題。不是系統(tǒng)問題，而是該罐本身的問題。如如種子帶種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底、罐有滲漏、分過濾器失菌、培養(yǎng)基滅菌不徹底、罐有滲漏、分過濾器失效。效。個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌：設(shè)備問題設(shè)備問題(如閥門的滲漏或如閥門的滲漏或罐體腐蝕磨損罐體腐蝕磨損)，設(shè)備的腐蝕磨損所引起的染菌會，設(shè)備的腐蝕磨損所引起的染菌會出現(xiàn)每批發(fā)酵的染菌時間向前推移的現(xiàn)象。出現(xiàn)每批發(fā)酵的染菌時間向前推移的現(xiàn)象。個別發(fā)酵罐偶然染菌：個別發(fā)酵罐偶然染菌：原因比較復(fù)雜，因為各種原因比較復(fù)雜，因為各種染菌途徑都可能引起。染菌途徑都可能引起。 v系統(tǒng)問題，系統(tǒng)問題，如空氣過濾系統(tǒng)有問題，特別是總?cè)?/p>

21、空氣過濾系統(tǒng)有問題，特別是總過濾器長期沒有檢查，可能受潮失效；移種或過濾器長期沒有檢查，可能受潮失效；移種或補料的分配站有滲漏或滅菌不徹底等。補料的分配站有滲漏或滅菌不徹底等。 如果發(fā)酵罐偶而染菌，原因一時找不出時一如果發(fā)酵罐偶而染菌，原因一時找不出時一般可以采取以下措施：般可以采取以下措施：(1)(1)連續(xù)滅菌系統(tǒng)前的連續(xù)滅菌系統(tǒng)前的料液貯罐料液貯罐在每年在每年4 4一一1010月份月份( (雜菌較旺盛生長的時間雜菌較旺盛生長的時間) )加入加入0.2%0.2%甲醛，加熱至甲醛，加熱至8080C C，存放處理，存放處理4 4小時小時 。(2)(2)對染菌的罐，在培養(yǎng)液滅菌前先對染菌的罐，在培

22、養(yǎng)液滅菌前先加甲醛進行空加甲醛進行空消處理消處理。甲醛用量每立方米罐的體積。甲醛用量每立方米罐的體積70.17升。升。(3)(3)對染菌的種子罐可對染菌的種子罐可在罐內(nèi)放水在罐內(nèi)放水進行滅菌，滅菌進行滅菌，滅菌后水量占罐體的三分之二以上。這是因為細菌后水量占罐體的三分之二以上。這是因為細菌芽孢較耐干熱而不耐濕熱的緣故。芽孢較耐干熱而不耐濕熱的緣故。 3、雜菌污染的途徑及其預(yù)防、雜菌污染的途徑及其預(yù)防（1）種子帶菌及其防治）種子帶菌及其防治 種子帶菌的原因：種子帶菌的原因：滅菌不徹底滅菌不徹底(如假壓如假壓)；移種污染；移種污染；培養(yǎng)或保藏過程中污染；培養(yǎng)或保藏過程中污染；

23、無菌室管理不善；無菌室管理不善； 防止種子帶菌措施：防止種子帶菌措施：制備種子時對沙土管及搖瓶嚴格加以控制。制備種子時對沙土管及搖瓶嚴格加以控制。沙土制備時要多次間歇滅菌沙土制備時要多次間歇滅菌注意接種時的無菌操作注意接種時的無菌操作子瓶、母瓶的移種和培養(yǎng)子瓶、母瓶的移種和培養(yǎng)無菌室和搖床間都要保持清潔。無菌室內(nèi)要無菌室和搖床間都要保持清潔。無菌室內(nèi)要供給恒溫恒濕的無菌空氣，還要裝紫外燈用以供給恒溫恒濕的無菌空氣，還要裝紫外燈用以滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌。滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌。無菌室結(jié)構(gòu)要求無菌室結(jié)構(gòu)要求v無菌室面積不宜過大，一般約無菌室面積不宜過大，一般約4 46 6米米2 2，高約，高約2

24、 26 6米。米。 v為了減少外界空氣的侵入，無菌室要有為了減少外界空氣的侵入，無菌室要有1 13 3個套間個套間( (緩沖過緩沖過道道) ) v無菌室內(nèi)部的墻壁、天花板要涂白漆或采用磨光石子，要求無菌室內(nèi)部的墻壁、天花板要涂白漆或采用磨光石子，要求無裂縫，墻角最好做成圓弧形無裂縫，墻角最好做成圓弧形 。v室內(nèi)布置應(yīng)盡量簡單，最好能安裝空氣調(diào)節(jié)裝置，通入無菌室內(nèi)布置應(yīng)盡量簡單，最好能安裝空氣調(diào)節(jié)裝置，通入無菌空氣并調(diào)節(jié)室內(nèi)的溫濕度?？諝獠⒄{(diào)節(jié)室內(nèi)的溫濕度。 v無菌室的每個套間一般都用無菌室的每個套間一般都用紫外線滅菌紫外線滅菌。無菌室接種要求無菌室接種要求v 打開紫外燈，照半小時，關(guān)燈后打開紫

25、外燈，照半小時，關(guān)燈后15分鐘再接種。分鐘再接種。v 消毒藥水擦桌子、拖地，開啟超凈臺的通風，消毒藥水擦桌子、拖地，開啟超凈臺的通風，v 接種時必須在超凈臺上操作，保證無菌條件。接種時必須在超凈臺上操作，保證無菌條件。v 接種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精接種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。棉球擦干凈。（2）過濾空氣帶菌及其防治）過濾空氣帶菌及其防治 無菌空氣引起染菌的原因：無菌空氣引起染菌的原因：l流程或設(shè)備設(shè)計的合理性；流程或設(shè)備設(shè)計的合理性；l過慮介質(zhì)選用、裝填；過慮介質(zhì)選用、裝填；l過慮介質(zhì)的滅菌和管理；過慮介質(zhì)的滅菌和管理；l空氣除菌系統(tǒng)復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不

26、慎便會導(dǎo)致空氣除菌系統(tǒng)復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便會導(dǎo)致空氣除菌失敗。空氣除菌失敗?？諝饫鋮s器的列管穿孔泄露，冷卻水會滲入到空空氣冷卻器的列管穿孔泄露，冷卻水會滲入到空氣中，造成染菌。氣中，造成染菌。棉花棉花- -活性炭過濾器長期使用后變薄的一邊失效。活性炭過濾器長期使用后變薄的一邊失效。過濾介質(zhì)受潮失效：過濾器滅菌完畢應(yīng)立即緩慢過濾介質(zhì)受潮失效：過濾器滅菌完畢應(yīng)立即緩慢通入壓縮空氣，將水分吹干。超細纖維紙作過濾介通入壓縮空氣，將水分吹干。超細纖維紙作過濾介質(zhì)，滅菌時必須將管道中冷凝水放干凈，以免介質(zhì)質(zhì)，滅菌時必須將管道中冷凝水放干凈，以免介質(zhì)受潮失效。受潮失效。 在生產(chǎn)實踐中，空氣管道大多與其它

27、物料管道在生產(chǎn)實踐中，空氣管道大多與其它物料管道相接，要裝上止逆閥防止其它物料竄入空氣管道污相接，要裝上止逆閥防止其它物料竄入空氣管道污染過濾器，導(dǎo)致過濾介質(zhì)失效染過濾器，導(dǎo)致過濾介質(zhì)失效。（3）設(shè)備的滲漏或）設(shè)備的滲漏或“死角死角”造成的染菌及其防治造成的染菌及其防治發(fā)酵罐的發(fā)酵罐的“死角死角”v法蘭、內(nèi)襯、接口、表頭、罐內(nèi)部件及其支撐件如攪拌法蘭、內(nèi)襯、接口、表頭、罐內(nèi)部件及其支撐件如攪拌軸拉桿、聯(lián)軸器、冷卻盤管、擋板、空氣分布管及其支軸拉桿、聯(lián)軸器、冷卻盤管、擋板、空氣分布管及其支撐件。撐件。 口：人孔（或手孔）、排風管接口、燈孔、視鏡口、進口：人孔（或手孔）、排風管接口、燈孔、視鏡口、

28、進料管口料管口 。http:/ 消除方法：加強清洗并定期鏟除污垢；消除方法：加強清洗并定期鏟除污垢；管道安裝不當或配置不合理管道安裝不當或配置不合理形成的形成的“死角死角”安裝放汽邊閥安裝放汽邊閥 v消滅死角的措施消滅死角的措施減少擋板和開孔；減少擋板和開孔；焊接光滑；焊接光滑；法蘭、閥門連接正好；法蘭、閥門連接正好；減少殘渣沉積；減少殘渣沉積；嚴格清洗和檢查；嚴格清洗和檢查；定期檢修易壞部件定期檢修易壞部件化學(xué)腐蝕化學(xué)腐蝕電化學(xué)腐蝕電化學(xué)腐蝕磨蝕磨蝕設(shè)備加工不良設(shè)備加工不良防止設(shè)備滲漏：防止設(shè)備滲漏： 包括夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門包括夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門滲漏、攪拌

29、軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。v防止設(shè)備滲漏防止設(shè)備滲漏肉眼可見肉眼可見冷卻盤管、夾套穿孔、閥門滲漏冷卻盤管、夾套穿孔、閥門滲漏肉眼不可見肉眼不可見試漏試漏 水壓試漏法水壓試漏法 集氣桶試漏集氣桶試漏（4 4）培養(yǎng)基滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及其防治）培養(yǎng)基滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及其防治培養(yǎng)基滅菌不徹底原因：培養(yǎng)基滅菌不徹底原因：v原料性狀：原料性狀：v假壓假壓“冷壓冷壓”的形成；的形成；v滅菌時培養(yǎng)基產(chǎn)生泡沫滅菌時培養(yǎng)基產(chǎn)生泡沫v連續(xù)滅菌時參數(shù)不穩(wěn)定連續(xù)滅菌時參數(shù)不穩(wěn)定時間維時間維持不夠或壓力波動較大；持不夠或壓力波動較大；v滅菌后期的罐壓驟變滅菌后期的罐壓驟變“

30、負壓負壓”；v設(shè)備死角。設(shè)備死角。 v防治方法：防治方法：原料性狀：大顆粒的原料過篩除去。原料性狀：大顆粒的原料過篩除去。 實罐滅菌時要充分排除罐內(nèi)冷空氣實罐滅菌時要充分排除罐內(nèi)冷空氣。為什么蒸汽滅菌時會產(chǎn)生大量泡沫呢？為什么蒸汽滅菌時會產(chǎn)生大量泡沫呢？ 培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，如果滅菌時升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐如果滅菌時升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣排出較慢，就會產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上內(nèi)的空氣排出較慢，就會產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂，泡沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直升到發(fā)酵罐頂，泡沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被

31、殺死。接接觸，未被殺死。防止方法：緩慢開啟蒸汽閥門，或加入消泡劑防止方法：緩慢開啟蒸汽閥門，或加入消泡劑連消不徹底連消不徹底 ：最好采用自動控制裝置：最好采用自動控制裝置 滅菌后期罐壓驟變滅菌后期罐壓驟變 ：通無菌空氣維持正壓：通無菌空氣維持正壓死角死角 ：（5 5）加強操作和衛(wèi)生管理）加強操作和衛(wèi)生管理 v嚴格操作規(guī)程、保持環(huán)境干凈。嚴格操作規(guī)程、保持環(huán)境干凈。v提高操作人員素質(zhì)提高操作人員素質(zhì)v溫度壓力的維持溫度壓力的維持v培養(yǎng)基、傳感器培養(yǎng)基、傳感器（6 6） 噬菌體污染及其防治措施噬菌體污染及其防治措施v染噬菌體對發(fā)酵的影響染噬菌體對發(fā)酵的影響v產(chǎn)生噬菌體的原因：自然界中的噬菌體在活菌產(chǎn)生噬菌體的原因：自然界中的噬菌體在活菌體中大量生長。隨著風