動物免疫學(xué)第五版PPT課件[通用]

1、第二篇 免疫學(xué)基礎(chǔ)第一章 緒論(0.5) 第七章 抗感染免疫(1.5)第二章 免疫系統(tǒng) (1) 第八章 免疫防治(1.5)第三章 抗原(2.5) 第九章 血清學(xué)實驗技術(shù)(2)第四章 抗體(1.5) 第十章 變態(tài)反應(yīng)（自學(xué)1）第五章 細(xì)胞因子(0.5) 第十一章 粘膜免疫反應(yīng)（自學(xué)1）第六章 免疫應(yīng)答反應(yīng)(3)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物微生物室蔣文燦 制作第一章 緒論一、免疫及免疫學(xué)的概念(一) 免疫的概念1、古典免疫：免除兵役、賦稅。2、傳統(tǒng)免疫：免除傳染病。3、現(xiàn)代免疫：有機體識別自身（自身組織）和非自身（非自身物質(zhì)），并保持自身完整性的生物生理學(xué)反應(yīng)。(二)免疫學(xué)的概念 免疫學(xué)是研究有機體如何識別和

2、排斥“非已”抗原物質(zhì)的一門科學(xué)。動物在長期進化過程中，形成了一套完整的組織器官結(jié)構(gòu)，稱為免疫系統(tǒng)，具有精確的識別自身和非自身的能力。對自身組織不發(fā)生任何反應(yīng)，稱為天然免疫耐受現(xiàn)象，對非自身物質(zhì)（外來侵入者：微生物、寄生蟲、有害理化因素、致癌物質(zhì)等；內(nèi)部破壞者：衰老破損細(xì)胞、突變細(xì)胞）進行排除和消滅。二、免疫學(xué)發(fā)展歷史（一）經(jīng)驗時期：十一世紀(jì)1798。十一世紀(jì)我國的“痘癥防御法”。 甘肅牧區(qū)（ 1400）“灌花”防牛瘟。（二）實驗時期：1798年1945年。1798年Jenner（秦納）：天花疫苗的由來及效果的研究。天花病人（三）近代免疫學(xué)時期：1945年1960年。 型變態(tài)反應(yīng)；免疫耐受現(xiàn)象；

3、法氏囊的免疫功能。（四）現(xiàn)代免疫學(xué)時期：1960年現(xiàn)在。胸腺的免疫功能；單克隆抗體技術(shù)；基因工程疫苗。三、免疫基本特性1、識別特性：精確地識別自身和非自身。2、特異性：某種抗原剌激機體產(chǎn)生的免疫力，只針對相應(yīng)物質(zhì)。3、記憶性：免疫記憶。相同抗原物質(zhì)再次進入時，將其更快更有效地消滅和排除。四、免疫基本功能 1、抗傳染 阻止進入；抑制體內(nèi)繁殖；消滅繁殖的微生物 過高：傳染性變態(tài)反應(yīng)；過低：反復(fù)發(fā)病。 2、自身穩(wěn)定：清除衰老、破損細(xì)胞。否則自身免疫病。 3、免疫監(jiān)視：清除突變細(xì)胞。否則腫瘤和癌癥。五、免疫學(xué)在獸醫(yī)學(xué)科的應(yīng)用1、免疫診斷2、免疫預(yù)防3、免疫治療第二章 免疫系統(tǒng)第一節(jié) 免疫組織器官第二節(jié)

4、 免疫細(xì)胞第三節(jié) 免疫相關(guān)因子第一節(jié)免疫組織器官一、中央免疫器官 1、骨髓（bone marrow）免疫活性細(xì)胞發(fā)源地。哺乳動物兼有禽類法氏囊的功能。 2、胸腺(thymus)功能：使T細(xì)胞分化成熟。前T細(xì)胞（胸腺細(xì)胞），進入胸腺，胸腺激素作用下，轉(zhuǎn)化為Tc（胸腺依賴淋巴細(xì)胞）胸腺結(jié)構(gòu)圖示3、法氏囊（bursa of Fabricius）功能：B細(xì)胞分化成熟。哺乳動物無法氏囊，由胚肝、脾以及胚胎末期和出生后的骨髓代替。 法氏囊結(jié)構(gòu)圖示二、周圍免疫器官（secondary immune organs） 1、脾臟（spleen）體內(nèi)最大的淋巴器官，產(chǎn)生抗體的主要器官。（1）結(jié)構(gòu)特點 脾索：吻合成網(wǎng)

5、狀的淋巴組織索 紅髓 脾竇 非胸腺依賴區(qū)脾臟（BC） 脾小結(jié) 白髓：沿動脈分布 于脾索之間 淋巴鞘 胸腺依賴區(qū)（TC）（2）免疫功能（a）特異性免疫：體液免疫為主，細(xì)胞免疫為輔。 Bc：5065%，定居于非胸腺依賴區(qū)。Tc：3550%，定居于胸腺依賴區(qū)。（b）過濾作用：過濾并清除血液中異物及衰 老、破損細(xì)胞。2、淋巴結(jié)（lymph node）（1）結(jié)構(gòu) 淺皮質(zhì)區(qū)皮質(zhì) 深皮質(zhì)區(qū) 胸腺依賴區(qū)（TC：75）淋巴結(jié)髓索 非胸腺依賴區(qū)（BC：25）髓質(zhì) 髓竇（2）功能（a）免疫功能：細(xì)胞免疫為主，體液免疫為輔。 Tc：75%，定居于胸腺依賴區(qū)Bc：25%，定居于非胸腺依賴區(qū)（b）過濾作用：過濾淋巴液中微

6、生物及異物。第二節(jié) 免疫細(xì)胞一、免疫活性細(xì)胞（T、BC）（一）來源：來自骨髓的多能干細(xì)胞分化的淋巴樣干細(xì)胞。 （二）分化 前Tc 成熟Tc 細(xì)胞免疫 胸腺 胸腺依賴區(qū) 骨髓多能 淋巴樣 干細(xì)胞 干c 前Bc 成熟Bc 體液免疫 法氏囊 非胸腺依賴區(qū)T細(xì)胞紅細(xì)胞T細(xì)胞血小板3、TC亞群及功能（1）輔助性Tc（Helper T cell：TH）：約占Tc總量的1/3。協(xié)助Bc產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)，即Bc需要TH傳遞抗原信息；協(xié)助細(xì)胞免疫反應(yīng)的效應(yīng)，即活化TK。 （2）抑制性Tc（Suppressor T Cell：Ts）：約占Tc總數(shù)的10%，抑制體液免疫和細(xì)胞免疫。通過釋放抑制性因子，作用于TH而起

7、作用。 （3）殺傷性Tc（Killer T cell：TK）：占Tc總數(shù)的50%左右。識別和殺傷靶細(xì)胞。Tk的作用需Th的活化。二、吞噬細(xì)胞 包括血液中嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞；組織中巨噬細(xì)胞。（一）來源：骨髓多能干細(xì)胞。（二）分化紅細(xì)胞系：紅血球原血細(xì)胞系粒細(xì)胞系：嗜中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞骨髓多巨核細(xì)胞系：血小板能干細(xì)胞淋巴樣干細(xì)胞TC、BC、KC、NKC單核吞噬細(xì)胞單核細(xì)胞：游走于血液中巨噬細(xì)胞：定居于組織中肝：星狀細(xì)胞肺：塵細(xì)胞結(jié)締組織：組織細(xì)胞神經(jīng)組織：小膠質(zhì)細(xì)胞淋巴結(jié)、漿膜腔、脾：巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞單核細(xì)胞中性粒細(xì)胞(三)特點1、較強吞噬能力。2、識別能力。3、消化能力。

8、4、細(xì)胞表面有IgG Fc段受體和補體C3受體。(四)作用1、吞噬作用：機體免疫力、病原微生物毒力、數(shù)量不同、吞噬結(jié)果不同。完全吞噬：吞噬、殺滅并徹底消化降解異物。不完全吞噬：僅吞噬異物，不能將異物殺滅而長期存于細(xì)胞內(nèi)。吞噬細(xì)胞游走，將病原微生物帶到其它組織器官引起全身感染，造成更大危害。肺巨噬細(xì)胞吞噬大腸桿菌巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌2、遞呈抗原信息將抗原決定簇小肽片段，移向細(xì)胞表面，向具有相應(yīng)抗原受體的TC、BC遞呈抗原信息。3、合成和分泌各種活性因子溶菌酶、白介素1、干擾素、補體。4、調(diào)節(jié)抗原量 抗原量合適，才能刺激機體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。 抗原量過大，使TC、BC產(chǎn)生免疫麻痹，不能引起免疫反應(yīng)。

9、此時，吞噬細(xì)胞大量消毀和貯存抗原，少釋放。 抗原量過小，不足以刺激TC、BC產(chǎn)生免疫反應(yīng)。此時，吞噬細(xì)胞將抗原集中，從而調(diào)節(jié)抗原量。三、K細(xì)胞和NK細(xì)胞（一） 來源 骨髓多能干細(xì)胞 淋巴樣干細(xì)胞 胸腺 直接分化 法氏囊 TC KC 、NKC BC（二） 細(xì)胞特點及作用1、 Kc（kill cell）（1）細(xì)胞特點和數(shù)量：形態(tài)上不易與T、B細(xì)胞相區(qū)別，約占體內(nèi)淋巴細(xì)胞10。（2）作用：主要以ADCC效應(yīng)殺傷大的細(xì)胞性抗原，如病毒感染的宿主細(xì)胞、寄生蟲細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞移植的異體細(xì)胞。殺傷力強。（3）ADCC效應(yīng) 抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（antibody dependent cell medi

10、ated cytotoxicity)。 2、 NK細(xì)胞(natural kill cell)（1）細(xì)胞特點和數(shù)量：占淋巴細(xì)胞數(shù)不超過10%?？刹灰蕾嚳贵w而起殺傷作用，故又稱自發(fā)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。（2）作用：殺傷腫瘤細(xì)胞，殺傷力比Kc弱。不依賴抗體，在早期發(fā)揮作用。四、其他免疫細(xì)胞1、嗜酸性粒細(xì)胞：表面有IgE受體，在抗寄生蟲感染中起重要作用。2、嗜堿性粒細(xì)胞：表面有IgE受體，在I型變態(tài)反應(yīng)中起作用。3、紅細(xì)胞：表面有許多與免疫有關(guān)的物質(zhì)，參與免疫調(diào)節(jié)。第三節(jié) 免疫相關(guān)分子一、抗體（見抗體部分）二、補體（見非特異性免疫：補體）三、細(xì)胞因子（見特異性細(xì)胞免疫）第三章抗原（Antigen:A

11、g）第一節(jié) 抗原的概念刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞(免疫原性); 與相應(yīng)抗體、致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)(免疫反應(yīng)性)。Ag+、 Ag-、 Agx第二節(jié) 構(gòu)成抗原的條件一、異物性：機體以外的物質(zhì)。異物程度越高，免疫原性越強。 異種動物血清異種物質(zhì) 病原微生物及其外毒素 人紅細(xì)胞血型抗原同種異體物質(zhì) 組織相溶性抗原二、大分子物質(zhì)分子量越大，免疫原性越強。三、特定結(jié)構(gòu) 1、抗原決定簇：抗原內(nèi)部和表面的很多化學(xué)活 性基團。 決定抗原免疫原性、免疫反應(yīng)性。2、載體：抗原決定簇所依賴的基本結(jié)構(gòu)，起穩(wěn)定抗原決定簇、激活巨噬細(xì)胞及免疫記憶作用?？乖瓫Q定簇與抗體結(jié)合第三節(jié) 抗原的類型一、根據(jù)抗原免疫原性

12、分類1 完全抗原：既具有免疫原性，又具有特異反應(yīng)性的抗原。如各種微生物及其毒素、異種動物血清。2 半抗原：只具有特異反應(yīng)性，不具免疫原性的抗原。如多糖、類脂、藥物等，但半抗原與載體蛋白質(zhì)結(jié)合后具有了免疫原性，則轉(zhuǎn)變成完全抗原，半抗原根據(jù)特異反應(yīng)性是否出現(xiàn)可見反應(yīng)分：（1）復(fù)合半抗原：與抗體結(jié)合出現(xiàn)可見反應(yīng)的半抗原。這種復(fù)合抗原具有兩個以上的抗原決定簇，與抗體的結(jié)合價為多價，如細(xì)胞表面的多糖。（2）簡單半抗原：與抗體結(jié)合不出現(xiàn)可見反應(yīng)的半抗原。這種簡單半抗原只有一個抗原決定簇，與抗體的結(jié)合價為單價，如青霉素。這種簡單半抗原可抑制抗體與相應(yīng)的完全抗原或復(fù)合半抗原結(jié)合，不再出現(xiàn)可見反應(yīng)，故又稱阻抑半

13、抗原。 二、根據(jù)其刺激機體產(chǎn)生抗體是否需Tc協(xié)同分：1、 T細(xì)胞依賴性抗原：又稱胸腺依賴性抗原，這種抗原需要Tc協(xié)同才能刺激B細(xì)胞活化，大多數(shù)抗原均屬此類。 2 、非Tc依賴性抗原：又稱非胸腺依賴性抗原，這種抗原可直接刺激B細(xì)胞，使之活化，而不需Tc協(xié)同，如大腸桿菌脂多糖。三、據(jù)抗原性質(zhì)分類1、天然抗原2、人工抗原：人工化學(xué)改造天然抗原。3、合成抗原：用氨基酸人工合成具抗原性的多肽。四、據(jù)抗原來源分類1、異種抗原：來自不同種屬生物。2、同種異體抗原：血型抗原、組織相容性抗原。3、同種抗原：自身組織。五、據(jù)抗原存在部位分類1、表面抗原2、深部抗原六、據(jù)臨床應(yīng)用分類1、凝集原2、沉淀原3、病毒中和

14、抗原4、免疫保護性抗原5、血凝素抗原：有血凝性的病毒表面囊膜上的血凝素蛋白抗原。第四節(jié) 重要的抗原一、細(xì)菌的重要抗原1、菌體抗原（O抗原）2、鞭毛抗原（H抗原）3、莢膜抗原4、菌毛抗原二、病毒的重要抗原1、囊膜抗原2、衣殼抗原3、可溶性抗原：病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖釋放的內(nèi)部抗原物質(zhì)。三、毒素抗原四、寄生蟲抗原五、血型抗原：紅細(xì)胞膜上存在的同種異型表面抗原。第四章抗體（Antibody:Ab）Ab+、 Ab-、 Abx第一節(jié) 抗體的概念有機體在抗原刺激下產(chǎn)生的，并能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的一類球蛋白的總稱?？寡? 血清中含量最高。-球蛋白(丙種球蛋白): 活性部位位于球蛋白的區(qū)。免疫球蛋白（Imm

15、unoglobulin,Ig）: 1964年，將具抗體活性以及與抗體有關(guān)的球蛋白統(tǒng)稱免疫球蛋白。Ig對酸、堿、熱、光都較敏感，易破壞。第二節(jié) 抗體產(chǎn)生一般規(guī)律一、初次反應(yīng)：抗原首次進入機體所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)。特點：1、有一定潛伏期 抗原進入機體到血清中出現(xiàn)抗體的時間，一般活病毒2天，活的細(xì)菌3-5天，類病素2-3周,蜂膠滅活苗57天，油苗1014天。2、抗體量不高，只能達到最大量的20-30%。3、先產(chǎn)生IgM，將消失時IgG達最大量，再過2周出現(xiàn)IgA。 二、再次反應(yīng)首次抗體未消失，相同抗原再次進入所發(fā)生的免疫反應(yīng)。特點：1、無潛伏期2、抗體量大：達初次反應(yīng)的10-50倍。3、高峰期維持時間長

16、，下降緩慢。4、主要是IgG。三次、四次反應(yīng)同上。不能無限注射抗原，否則發(fā)生免疫耐受。 三、回憶反應(yīng)首次抗體已消失，相同抗原再次進入所發(fā)生的免疫反應(yīng)。特點：1、有較短的潛伏期，抗體量急劇上升，2、抗體量很大。3、高峰期維持時間長，下降緩慢，4、主要是IgG?？贵w產(chǎn)生規(guī)律圖示第三節(jié) 抗體基本結(jié)構(gòu)和功能一、抗體分子的基本結(jié)構(gòu)每個抗體分子由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈組成，重鏈之間，輕重鏈之間，鏈內(nèi)均由二硫鍵聯(lián)結(jié)。二、輕鏈結(jié)構(gòu)輕鏈可變區(qū)(Variable region of lignt chain:VL) 輕鏈穩(wěn)定區(qū)(Constant region of lignt chain:CL)。VL中含3

17、個高變區(qū)。 三、重鏈的結(jié)構(gòu)重鏈可變區(qū)(Variable region of heavy chain:VH)，重鏈穩(wěn)定區(qū)(Constant region of heavy chain:CH)，分別為CH1、CH2、CH3。CH2區(qū)有補體結(jié)合位點，CH2CH3又稱Fc段。VH區(qū)含3-4個高變區(qū)。CH1區(qū)與CH2區(qū)之間的一段多肽鏈含較多脯氨酸而不易折疊成立體結(jié)構(gòu)，呈裸露狀，但可轉(zhuǎn)動，稱樞紐區(qū)。CH2區(qū)雖有補體結(jié)合位點，但抗體未與抗原結(jié)合時，抗體呈” T ”狀，該位點被掩蓋，故不能結(jié)合補體而發(fā)揮免疫作用，但抗體與抗原結(jié)合后，樞紐區(qū)轉(zhuǎn)動，抗體呈“Y ”狀，該位點暴露，而易結(jié)合補體。 四、抗體的抗原結(jié)合部

18、位由重鏈高變區(qū)和輕鏈高變區(qū)構(gòu)成與抗原決定簇表面互補的分子構(gòu)型而與抗原結(jié)合的，一個抗體分子有兩個抗原結(jié)合位點。 第四節(jié) 抗體種類1、類：根據(jù)CH氨基酸組成不同分：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。2、亞類：根據(jù)CH微細(xì)差異分：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4IgA1、IgA2IgM1、IgM2IgD和IgE還未發(fā)現(xiàn)亞類。第五節(jié) 各種抗體特性一、IgG一個抗體分子構(gòu)成。機體主要抗感染抗體。占血清Ig總量的75-80%。人的IgG能通過胎盤傳給胎兒，但家畜不能，但人畜的初乳中IgG含量均較高，家畜從初乳獲得母源IgG。G1、 G2 、G3、 G4四個亞類。 二、IgA1、血清型IgA：血

19、清中含量僅次于IgG，約占5-25%。主要為IgA1 （占血清IgA總量的約80%）。 IgA1由一個抗體分子構(gòu)成。2、分泌型IgA：存在于唾液、淚液、初乳、呼吸道、胃腸道、胃液等分泌液中，是機體粘膜局部抗感染的重要因素，又稱局部抗體。其含量比血清型IgA高6-8倍，主要為IgA2 ，由兩個抗體分子和一個分泌片，一個J鏈組成，抗感染作用比血清型IgA強。 三、IgM主要存在于血清，以五聚體通過J鏈聯(lián)結(jié)形成。常表現(xiàn)五個抗原結(jié)合價。在凝結(jié)作用，活化補體，溶菌作用等方面比IgG大250倍。感染初期起重要作用。 四、IgD只在人、小白鼠中發(fā)現(xiàn)少量的游離IgD，其它動物未發(fā)現(xiàn)，量少，目前未發(fā)現(xiàn)具免疫活性

20、。五、IgE為單體，正常人畜IgE含量很低，I型變態(tài)反應(yīng)時顯著升高。五種抗體模式圖第六節(jié) 抗體抗原性（一）概念：指抗體進入機體后，可作為抗原刺激機體產(chǎn)生抗體，稱為抗抗體。這種抗抗體能與相應(yīng)的抗體發(fā)生結(jié)合產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。 A種動物血清免疫B種動物產(chǎn)生的抗抗體，能與A種動物產(chǎn)生的各種抗體特異性結(jié)合。第七節(jié) 抗體生物學(xué)活性一、特異性結(jié)合抗原：結(jié)構(gòu)互補，決定其結(jié)合的特異性。二、激活補體G1、G2、G3、M：激活補體經(jīng)典途徑。G4、A、E、D：激活補體替代途徑。 三、細(xì)胞結(jié)合1、IgG結(jié)合Kc：ADCC2、 IgE結(jié)合肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞：I型變態(tài)反應(yīng)。3、結(jié)合吞噬細(xì)胞：調(diào)理作用。第八節(jié) 單克隆抗

21、體（Monoclonal antibody：McAb）一、單克隆抗體的概念、概念：由一個抗原決定簇刺激產(chǎn)生的，只與該抗原決定簇特異結(jié)合的抗體。、Ab與多克隆抗體比較：多克隆抗體是由多種抗原決定簇刺激多種Bc產(chǎn)生的，具有高度的異質(zhì)性，目前為止，還不能用任何一種方法提純只針對某一特定抗原決定簇的同質(zhì)性抗體。而McAb是由一個Bc克隆接受一個抗原決定簇刺激而產(chǎn)生的抗體。因此，具有純度高、專一性強、重復(fù)性好，且能在動物體內(nèi)、外持續(xù)產(chǎn)生同質(zhì)性抗體的優(yōu)點。 二、單克隆抗體技術(shù) 把產(chǎn)生特定抗體的Bc與能無限生長的骨髓瘤細(xì)胞融合，形成Bc與骨髓瘤細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞，并通過克隆化雜交瘤細(xì)胞后擴大培養(yǎng)所產(chǎn)生的抗體稱

22、單克隆抗體。、雜交瘤細(xì)胞制備及抗體檢測：（）親本細(xì)胞A、免疫小鼠脾細(xì)胞 B、骨髓瘤細(xì)胞；無次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸糖基轉(zhuǎn)化酶（HGPRT酶）。 C、飼養(yǎng)細(xì)胞；小鼠腹腔巨噬細(xì)胞或胸腺細(xì)胞。（2）選擇培養(yǎng)基：HAT培養(yǎng)基，H為次黃嘌呤，T為胸腺嘧啶核酸，A為氨基嘌呤。 （3）細(xì)胞融合：細(xì)胞融合劑：50%PEG。 HAT選擇培養(yǎng)。HAT選擇原理嘌呤合成旁路：次黃嘌呤（H）谷氨酰胺 HGPRT酶多種氨基酸 次黃嘌呤核苷酸黃嘌呤核苷酸 鳥嘌呤核苷酸 四氫葉酸 二氫葉酸二氫葉酸還原酶核酸合成 DNA主要途徑 氨基喋呤（A）尿核苷單磷酸 胸腺嘧啶脫氧核苷酸嘧啶合成旁路：胸腺嘧啶核苷（T）胸腺嘧啶核苷激酶（4）抗

23、體檢測：小孔上清是否有特異性抗體。2、雜交瘤細(xì)胞的克隆化：有限稀釋法，710個細(xì)胞/ml?？寺?-3次。3、單克隆抗體的生產(chǎn)（1）體外法：克隆的陽性細(xì)胞用完全1640進行細(xì)胞擴大培養(yǎng)，上清液中即含McAb。濃度不高，只能達到10g/ml。（2）體內(nèi)法：克隆的陽性細(xì)胞注射到同系小鼠腹腔，710天后，腹水和血液中含大量McAb，濃度高，可達510mg/ml。但含有其它蛋白，須進一步純化。 4、細(xì)胞冷凍及復(fù)蘇（1）冷凍：緩凍。加入冷的含10%二甲基亞砜的完全1640。每5分鐘下降5，直至完全浸沒在液氮中。（2）復(fù)蘇：速融。立即置于37水浴，使之迅速融化，再擴大培養(yǎng)。三、單克隆抗體的應(yīng)用1、用于人、畜

24、傳染病、寄生蟲病的診斷。2、用于人、畜傳染病、寄生蟲病的預(yù)防和治療。3、用于抗原結(jié)構(gòu)的研究：針對某一抗原可制備出針對不同抗原決定簇的一系列McAb，從而研究該抗原的結(jié)構(gòu)，以及與該抗原關(guān)系密切的其它抗原在結(jié)構(gòu)上的異同，如豬瘟強、弱毒有那些抗原決定簇是相同的，那些是不同的。4、用于微生物的分型。5、在DNA重組技術(shù)中的應(yīng)用6、用McAb制備生物導(dǎo)彈的應(yīng)用7、McAb作為受體研究的工具8、其他應(yīng)用：人類遺傳學(xué)、酶遺傳學(xué)方面應(yīng)用。 第五章 細(xì)胞因子第一節(jié) 細(xì)胞因子的概念 細(xì)胞因子(cytokinc:CK)是指一類由免疫細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞）和相關(guān)細(xì)胞（成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞）產(chǎn)生的、調(diào)節(jié)細(xì)胞功能

25、的、高活性、多功能多肽或蛋白質(zhì)分子。不包括免疫球蛋的、補體和一般生理細(xì)胞產(chǎn)物。第二節(jié) 細(xì)胞因子共同特點一、細(xì)胞因子產(chǎn)生的多源性 一種細(xì)胞因子可由多種細(xì)胞產(chǎn)生； 一種細(xì)胞可逆生多種細(xì)胞因子。二、生物學(xué)功能的多樣性 一種細(xì)胞因子可具多種生物學(xué)功能，作用于多種靶細(xì)胞； 不同細(xì)胞因子可對同種靶細(xì)胞產(chǎn)生相同的效應(yīng)。3、生物學(xué)活力的高效性：10-12mol/l即可發(fā)揮顯著的生物學(xué)效應(yīng)。4、合成分泌的快速性：產(chǎn)生細(xì)胞受刺激后，迅速合成，快速釋放到細(xì)胞外發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。5、生物學(xué)作用的雙重性： 對機體有利：免疫調(diào)節(jié)、刺激造血、抗病毒、抗腫瘤 對機體不利：引起炎癥。第三節(jié) 細(xì)胞因子的種類一、白細(xì)胞介素（inte

26、rleukin, IL） 是由活化的單核巨噬細(xì)胞或淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一類主要負(fù)責(zé)信號傳遞、聯(lián)絡(luò)白細(xì)胞群、調(diào)節(jié)細(xì)胞的活化、增殖和分化作用的細(xì)胞因子。 IL-1、IL-2.、IL25。二、淋巴因子（一）腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor:TNF) 糖蛋白 TNF-：LPS剌激單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用。 TNF-：激活的T細(xì)胞產(chǎn)生，殺傷腫瘤細(xì)胞和移植的異體組織細(xì)胞。（二）集落剌激因子：是作用于不同公化階段的骨髓造血前體細(xì)胞，促進其增殖和分化以形成各種血細(xì)胞的蛋白質(zhì)。（三）轉(zhuǎn)化生長因子：調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的細(xì)胞因子。（四）趨化因子：趨化中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞到感染部位聚集

27、，發(fā)揮吞噬和殺菌功能。三、干擾素（IFN） 干擾素（interferon: IFN)是由干擾素誘生劑誘導(dǎo)動物細(xì)胞產(chǎn)生的一類具高活性、多功能的可溶性糖蛋白。 IFN生物學(xué)活性具有種屬特異性，即某種生物細(xì)胞產(chǎn)生的IFN，只作用于同種生物細(xì)胞。（一）I型IFN：分IFN-、IFN-。 具有廣譜抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用。（二）II型IFN：即IFN-。生物學(xué)活性廣，但比I型弱。第六章 免疫應(yīng)答反應(yīng)第一節(jié) 非特異性免疫應(yīng)答一、非特異性免疫的概念和特點 動物在長期的進化過程中，在同外來侵入者、內(nèi)部破壞者的斗爭中所建立的、對多種異物都能發(fā)揮防御作用的免疫力，稱為非特異性免疫。特點：1、作用發(fā)生迅速。2、

28、作用范圍廣、不具特異性。3、受遺傳控制，很穩(wěn)定。4、作用強度弱，對毒力強、數(shù)量大的微生物作用小。第二節(jié)、機體的防御屏障（一）皮膚粘膜屏障1、作用：阻止病原微生物進入機體內(nèi)。但個別微生 物（布氏桿菌、鼻疽桿菌等）例外。2、作用機理（1）皮膚角質(zhì)層的機械阻擋作用。（2）正常菌群的拮抗作用。（3）特殊結(jié)構(gòu)（鼻毛、氣管纖毛、粘液）的機械排除作用。 （4）胃液、唾液、乳汁、淚液中乳酸、溶菌酶的抑菌和殺菌作用。（二）血腦屏障1、作用：保護大腦、免除血液中病原微生物對大腦的侵襲作用。2、機理：大腦毛細(xì)血管緊密排列的內(nèi)皮細(xì)胞層通過胞飲作用，吞噬和消滅異物 。 （三）血胎屏障1、作用：阻止母體病原微生物進入胎兒

29、，保護胎兒。但個別微生物（布氏桿菌、沙門氏菌）例外。2、機理：由母體子宮內(nèi)膜、胎兒絨毛尿囊膜組成屏障結(jié)構(gòu)，阻止病原微生物從母體進入胎兒。第二節(jié) 參與非特異性免疫的細(xì)胞一、非特異免疫細(xì)胞種類（一）吞噬細(xì)胞：單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞（二）KC（三）NKC（四）嗜酸性粒細(xì)胞（五）嗜堿性粒細(xì)胞二、非特異免疫細(xì)胞的功能（一）趨化作用（二）識別作用（三）吞噬作用（四）消化殺滅作用第三節(jié) 補體系統(tǒng)一、 補體系統(tǒng)的組成1、補體 存在于正常人、動物的新鮮血清中的一種球蛋白。 C1C9， C1q、C1r、C1s。C12、備解素系統(tǒng)始動因子（IF）備解素（P）C3激活劑前體（B因子）C3激活劑前體轉(zhuǎn)化酶（D

30、因子）3、補體調(diào)節(jié)因子C1抑制劑C3滅活劑C6滅活劑B因子抑制劑過敏毒素抑制劑二、補體激活的途徑1、C1途徑。（1）激活經(jīng)典途徑的抗體：IgG1、IgG2、IgG3 、IgM的Fc段上有補體結(jié)合位點，能激活此途徑。（2）激活過程補體激活過程圖解2、C3途徑（1）激活旁路途徑的物質(zhì)： G-菌內(nèi)毒素、酵母多糖、菊糖、IgG4、IgA。（2）特點不需要C1、C2、C4，所以機體中缺乏C1、C2、C4時，補體同樣能被激活；對靶細(xì)胞的殺滅作用比經(jīng)典途徑弱；感染早期抗體形成前發(fā)揮較大作用。(3)旁路途徑激活過程G菌內(nèi)毒素、酵母多糖、菊 IFD B Bb C3 C3b C3bBb糖、 IgG4、IgA Ba

31、 C3a C3bBbP C9 C8 C7 C6 C5 3C3bBb 三、補體系統(tǒng)的調(diào)控1、內(nèi)源性調(diào)控：補體半衰期短，如C3b僅7分鐘。2、外源性調(diào)控（1）C1抑制劑：滅活C1s。（2）C3滅活劑：滅活C3b。（3）C6滅活劑：滅活C6。（4）B因子抑制劑：滅活B因子。（5）過敏毒素抑制劑：C3a和C5a，稱為過敏毒素。過敏毒素抑制劑可將其滅活。四、補體系統(tǒng)功能1、溶菌和殺菌補體細(xì)菌相應(yīng)抗體細(xì)菌抗體復(fù)合物細(xì)菌徹底溶解死亡表面結(jié)合、細(xì)菌僅失去致病力、仍存活，是可恢復(fù)的2、中和病毒：病毒-Ab-C3、調(diào)理作用：Ag-Ab-C-吞噬細(xì)胞 4、免疫粘附作用：Ag-Ab-C-紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板 5、過

32、敏毒素作用：適量的C3a、C5a趨化吸引吞噬細(xì)胞在局部的殺傷作用。第四節(jié)、正常體液中抗菌物質(zhì)一、溶菌酶 破壞細(xì)菌細(xì)胞壁粘肽的分子結(jié)構(gòu)。對G+菌殺傷力強，對G-菌殺傷力弱，對病毒無作用。二、干擾素 1、概念：機體細(xì)胞受到病毒、某些細(xì)菌、干擾素誘導(dǎo)劑等作用下產(chǎn)生的小分子糖蛋白。 2、作用：干擾和抑制病毒繁殖而間接殺滅病毒。 3、機理：刺激細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，從而抑制合成病毒所需的酶、核酸、結(jié)構(gòu)蛋白合成，病毒失去繁殖的原料。三、補體第五節(jié) 炎癥反應(yīng) 炎癥反應(yīng)是一種病理過程。 炎癥反應(yīng)也是一種防御和消滅異物的積極的非特異性免疫反應(yīng)。第二節(jié)特異性免疫應(yīng)答 一、特異性免疫應(yīng)答的概念 動物機體免疫系統(tǒng)受到抗

33、原刺激后，免疫細(xì)胞對抗原分子識別并產(chǎn)生系列免疫連鎖反應(yīng)、表現(xiàn)一定生物學(xué)效應(yīng)的過程。二、特異性免疫的特點及類型（一）特點 1、特異性：只針對某種特異抗原。2、免疫期：數(shù)月至數(shù)年至終生。3、免疫記憶4、后天獲得（二）類型 1、特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答：TC負(fù)責(zé)。 2、特異性體液免疫應(yīng)答：BC負(fù)責(zé)。三、特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答 Tc接受抗原刺激產(chǎn)生的免疫反應(yīng)，稱為細(xì)胞免疫應(yīng)答。 細(xì)胞內(nèi)寄生菌、立克次氏體、腫瘤細(xì)胞、病毒寄生細(xì)胞，多以細(xì)胞免疫為主。 （一）細(xì)胞免疫過程1、感應(yīng)階段 抗原遞呈細(xì)胞對抗原捕獲、加工、遞呈，Tc識別抗原的階段。在周圍免疫器官中進行。（1）抗原加工與遞呈 外源性抗原遞呈：帶有MHC II類

34、分子的細(xì)胞（單核巨噬細(xì)胞、樹狀突細(xì)胞、BC、朗罕氏細(xì)胞），主要對外源性抗原遞呈。巨噬細(xì)胞隨機地或通過FcR、C3bR 捕獲抗原，以吞噬、吞飲、吸附、調(diào)理等方式攝入抗原，抗原與溶酶體形成吞噬溶酶體后被水解成抗原多肽，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運來的MHC II類分子結(jié)合成抗原肽 MHC II類分子復(fù)合物，由高爾基體運輸至細(xì)胞表面，供CD4的TH細(xì)胞識別。內(nèi)源性抗原遞呈 帶有MHC I類分子的細(xì)胞（所有有核細(xì)胞，如受病毒或胞內(nèi)菌感染的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞），主要對內(nèi)源性抗原遞呈。內(nèi)源性抗原經(jīng)遞呈細(xì)胞處理后，形成約9個氨基酸的抗原肽，結(jié)合于MHC I類分子的肽結(jié)合區(qū)，形成肽 MHC I類分子復(fù)合物，由高爾基體運輸至細(xì)胞表

35、面，供CD8的CTL細(xì)胞識別。（2）TC對抗原識別 TH細(xì)胞對外源抗原的識別：TH細(xì)胞依靠其細(xì)胞表面的抗原受體TCR，識別抗原肽MHC II類分子復(fù)合物。CD3、CD4、CD2、CD58、CD11a、CD54、CD28、CD80等，是TH識別抗原的共刺激信號。 CTL細(xì)胞對內(nèi)源抗原的識別：CTL細(xì)胞依靠其細(xì)胞表面的抗原受體TCR，識別靶細(xì)胞抗原肽MHC I類分子復(fù)合物，直接殺傷靶細(xì)胞。2、反應(yīng)階段（reactive stage） TH識別抗原后活化，轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細(xì)胞，再轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。轉(zhuǎn)化過程中，分泌系列細(xì)胞因子（如IL2、IL4等）， 在IL2作用下，一部分轉(zhuǎn)化為效應(yīng)TC（CTL、TD）

36、，發(fā)揮細(xì)胞免疫效應(yīng)。 另一部分轉(zhuǎn)化為記憶TC，不再繼續(xù)分化，在機體中保持記憶，其壽命為數(shù)月或數(shù)年。3、效應(yīng)階段（effective stage） （1）TK的細(xì)胞毒作用：經(jīng)活化的TH產(chǎn)生的IL2等細(xì)胞因子的活化，具有了殺傷力。 （2）TK釋放穿孔素，導(dǎo)致靶細(xì)胞溶解；釋放淋巴毒素，與靶細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，誘導(dǎo)靶細(xì)胞自殺。一個TK細(xì)胞在數(shù)小時內(nèi)可連繼殺傷數(shù)十個靶細(xì)胞。（3）細(xì)胞因子的作用 干擾素（IFN）白細(xì)胞介素（interleukin, IL）（二）細(xì)胞免疫作用1、抗感染作用（1）對胞內(nèi)菌(結(jié)核、布氏、李氏、沙氏、馬鼻疽）的抗感染作用。（2）對病毒的抗感染作用。（3）對真菌、寄生蟲抗感染作

37、用。2、抗腫瘤作用：CTL、腫瘤壞死因子、穿孔素的作用。3、免疫損傷作用（1）引起型變態(tài)反應(yīng)：TD細(xì)胞與淋巴因子引起。（2）移植排斥反應(yīng)（3）自身免疫病細(xì)胞免疫應(yīng)答圖示四、特異性體液免疫 應(yīng)答 Bc接受抗原刺激后引起的免疫反應(yīng)。 （一）體液免疫過程1、感應(yīng)階段指抗原遞呈細(xì)胞對抗原捕獲、加工、遞呈，Bc識別抗原的階段。在周圍免疫器官中進行。（1）抗原加工與遞呈：同細(xì)胞免疫應(yīng)答。（2）BC對抗原的識別BC對TI抗原（非胸腺依賴抗原）的識別：TI1型抗原（如細(xì)菌LPS、多聚鞭毛素），在高濃度時與BC的絲裂原受體結(jié)合，而活化大多數(shù)BC；在低濃度時被BC表面抗原受體識別，并將它們聚集于BC表面而活化BC

38、。TI2型抗原（如肺炎鏈球菌多糖、D氨基酸聚合物），具有適當(dāng)間隔的、高度重復(fù)的決定簇，能與高親和力的BC的BCR交聯(lián)而使BC活化。BC對TD抗原（胸腺依賴抗原）的識別大部分抗原屬TD抗原，經(jīng)過巨噬細(xì)胞處理和遞呈的抗原肽上含有兩個抗原決定簇，一是供TH識別的載體決定簇，二是供BC識別的抗原表位（抗原決定簇）。巨噬細(xì)胞對抗原處理后遞呈給TH，BC識別TH上的抗原。2、反應(yīng)階段無活性的Bc在第二信號刺激下活化，第一信號是BC與TH接觸而識別抗原決定簇；第二信號為活化的TH產(chǎn)生的IL4和巨噬細(xì)胞釋放的IL1。活化的BC增殖分化為漿母細(xì)胞，多數(shù)再分化成漿細(xì)胞，少數(shù)分化成記憶Bc，前者產(chǎn)生抗體，后者保持記

39、憶。TI抗原：主要產(chǎn)生IgM，IgG很少，不分化出記憶Bc，缺乏免疫記憶。TD抗原：先IgM，后IgG、IgA。分化出記憶Bc，有免疫記憶。3、效應(yīng)階段指漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體進入血循環(huán)或粘膜表面，發(fā)揮作用的階段。 抗體作用特點：（1）高度特異性：只作用于相應(yīng)的抗原，甚至抗原決定簇。（2）分工合作IgM：早期起作用。IgG：主要對抗細(xì)菌，中和病毒和毒素。IgA：局部抗感染作用。（3）作用方式多樣性A、中和作用：中和病毒和毒素。B、凝集作用：凝集細(xì)菌。C、ADCC效應(yīng)D、調(diào)理作用：促進吞噬功能。E、溶細(xì)胞作用：抗體與細(xì)胞性抗原結(jié)合，活化補體，使細(xì)胞溶解。 F、免疫粘聯(lián)作用：形成抗原抗體補體復(fù)合物，與紅、

40、 白細(xì)胞、血小板的補體受體結(jié)合，徹底消滅抗原 的作用。（4）作用不徹底性：（5）作用雙重性：消滅抗原性異物對機體有利；引起炎癥、組織壞死（、型變態(tài)反應(yīng)），對機體不利。體液免疫過程 第七章 抗感染免疫第一節(jié) 概念1、顯性感染：微生物毒力大于機體抵抗力，表現(xiàn)一定癥狀和病理變化。2、隱性感染：微生物毒力與機體抵抗力相對平衡，不表現(xiàn)癥狀，有病理變化。3、抗傳染免疫：微生物毒力小于機體抵抗力，不表現(xiàn)癥狀和病理變化。稱抗傳染免疫。第二節(jié) 抗病毒感染免疫一、非特異性免疫抗抗病毒感染 1、種屬免疫（遺傳免疫） 2、吞噬細(xì)胞的吞噬作用 3、宿主年齡的抗病毒感染作用 4、皮膚粘膜的屏障作用 5、干擾素的抗病毒作用

41、 6、細(xì)胞因子的抗病毒作用二、特異性免疫抗病毒感染（一）體液免疫抗病毒感染 中和抗體、血凝抑制抗體、補體結(jié)合抗體。（二）細(xì)胞免疫抗病毒感染 細(xì)胞毒作用：主要對寄生病毒的細(xì)胞起殺傷作用。三、病毒逃逸機體免疫反應(yīng)的方式1、抗原變異或產(chǎn)生大量血清型不同的病毒株。2、抑制免疫應(yīng)答3、誘導(dǎo)免疫耐受：先天或幼齡感染后導(dǎo)致免疫耐受。4、免疫選擇：對免疫監(jiān)視敏感的病毒被殺滅，不敏感的存活下來。第三節(jié)抗細(xì)菌感染免疫一、抗胞外菌免疫 1、化膿性球菌：如葡萄球菌、鏈球菌，以吞噬細(xì)胞、抗體發(fā)揮主要作用。 2、毒素致病菌：主要以抗毒素發(fā)揮作用，如破傷風(fēng)梭菌。 3、其它胞外寄生菌：如大腸桿菌、沙門氏菌等，主要以吞噬細(xì)胞、

42、抗體、補體發(fā)揮抗傳染作用。（二）抗胞內(nèi)菌免疫 主要以細(xì)胞免疫、吞噬細(xì)胞發(fā)揮抗傳染作用，如結(jié)核桿菌、布氏桿菌等。第八章免疫防治第一節(jié) 機體獲得免疫力的方式 天然自動免疫：患傳染病，隱性傳染 自動免疫 人工自動免疫：接種菌苗、疫苗、 類毒素獲得性免疫 天然被動免疫：胎盤、初乳中母源抗體 被動免疫 人工被動免疫：免疫血清、丙種球蛋白 一、天然自動免疫 動物隱性傳染或傳染病康復(fù)而自動獲得的免疫力，稱為天然自動免疫。 不同病原微生物使動物獲利的天然自動免疫力和免疫期不同，有的免疫力低、免疫期短，有的免疫力堅強、免疫期長。二、人工自動免疫（一）概念 將疫苗、類毒素等生物制品接種于動物，使其產(chǎn)生針對相應(yīng)抗原

43、的免疫力，以達到預(yù)防傳染病的目的，稱人工自動免疫。如接種豬瘟兔化弱毒苗預(yù)防豬瘟。三、天然被動免疫從胎盤（人）、初乳（人、畜）、卵黃（禽）等天然獲得母源抗體而形成的免疫力稱為天然被動免疫。生產(chǎn)中盡量提高畜禽母源抗體水平（特別是引起幼畜禽致病的，母 源抗體更重要）；盡量使幼畜吃好初乳。四、人工被動免疫（一）概念：人為給動物體內(nèi)注射含特異性抗體的高免血清或淋巴因子等免疫活性物質(zhì)，使機體立刻獲得免疫力，稱為人工被動免疫。（二）特點1、免疫活性物質(zhì)是被動獲得，而非自身產(chǎn)生。2、免疫力出現(xiàn)快。3、免疫力維持時間短，一般2-3周。 4、可能引起過敏反應(yīng)。 （三）人工被動免疫生物制品 1、抗菌血清 2、抗病毒

44、血清 3、抗毒素 4、卵黃抗體（四）使用原則及注意事項1、盡早使用：潛伏初期病原微生物剛進入體內(nèi)，容易徹底消滅。如已大量繁殖，或進入細(xì)胞內(nèi)，則作用減弱。2、劑量和次數(shù)：一般劑量較大，才能徹底消滅。預(yù)防時可注射一次，治療則需間隔一定時間多次使用。3、防止過敏反應(yīng)。 第二節(jié) 疫苗種類 一、死疫苗用物理的或化學(xué)的方法，將病原微生物殺滅，使之失去致病性，但仍保持完整的抗原性，進入機體能刺激機體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)的疫苗統(tǒng)稱為死疫苗。如豬丹毒氫氧化鋁甲醛苗。二、活疫苗用某種方法使病原微生物減毒或用無毒病原體制成的疫苗，稱活疫苗。如豬瘟兔化弱毒疫苗。三、類毒素 細(xì)菌外毒素經(jīng)處理后，對機體毒力減弱，不再引起發(fā)

45、病，仍保持抗原性，能刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的一類生物制品，如破傷風(fēng)類毒素。 四、多聯(lián)苗將用于同一動物的幾種微生物用適當(dāng)?shù)姆椒ɑ煸谝黄鹬瞥傻纳镏破贰?五、多價苗將一種微生物的多種血清型毒株用適當(dāng)?shù)姆椒ɑ煸谝黄鹬瞥傻纳镏破贰?六、亞單位疫苗用適當(dāng)方法提取病原微生物具免疫活性的結(jié)構(gòu)單位，去掉具毒性的結(jié)構(gòu)單位，經(jīng)濃縮而配制成的疫苗。 七、基因工程疫苗將病原微生物具免疫原性的有用基因用酶切方法切下，抽提出來，重組到質(zhì)粒載體上，再導(dǎo)入非致病微生物，培養(yǎng)非致病微生物而制成的疫苗，被稱為第二代疫苗。 八、合成肽疫苗用人工的方法合成病原微生物具免疫原性的多肽鏈而制成的疫苗。被稱為第三代疫苗。如口蹄疫合成肽疫苗

46、。九、抗獨特型抗體疫苗十、基因疫苗第三節(jié) 疫苗的使用一、免疫方法 1、肌肉注射：腿肌注射勿刺傷神經(jīng)；胸肌注射勿穿進胸腔，刺傷心臟。 2、皮下注射： 3、刺種法： 4、滴眼或滴鼻 ：疫苗滴進眼、鼻后，待眼閉、鼻吸氣，確保疫苗進入后才放下禽。 5、飲水免疫 : 6、氣霧免疫 ：連續(xù)注射圖示飲水免疫技術(shù)要點（1）增加疫苗用量，增加1/2-1倍量。（2）飲用水要求：不含氯，可用地下水，深井水、冷開水，加0.2%脫脂奶。（3）根據(jù)氣候，斷水2-4小時。（4）飲水器充足，干凈，不用金屬飲水 器。（5）疫苗稀釋水量適宜，不能太少、太多，2小時內(nèi)飲完適宜。 氣霧免疫的技術(shù)要點（1）增加疫苗用量，增加1/2-1

47、倍量。（2）飲用水要求：不含氯，可用地下水，深井水、冷開水，加0.2%脫脂奶。 （3）氣霧前宜增加雞的密度。（4）霧粒大小適宜。（5）氣霧免疫時應(yīng)關(guān)閉門窗，10-20分鐘打開。（6）雛雞、幼雞氣霧前2天氣霧一次鏈霉素，1000單位/雞，防呼吸道疾病。 二、合理的免疫程序免疫程序就是指對畜或禽進行各種疫苗免疫的免疫時間，次數(shù)和順序等。免疫程序設(shè)計應(yīng)考慮的因素：（1）疫病流行情況：以當(dāng)?shù)亓餍械囊卟橹?。?）抗體水平：包括母源抗體水平和免疫抗體水平。（3）不同疫病的發(fā)病特點與流行規(guī)律。（4）生產(chǎn)目的：肉用、蛋用、種用。（5）飼養(yǎng)管理水平：粗放式（專業(yè)戶）與現(xiàn)代化養(yǎng)殖。（6）疫苗類型：選擇適當(dāng)?shù)囊呙?/p>

48、類型（活苗、死苗、聯(lián)苗 等）。（7）免疫方法。（8）實際免疫效果。 三、影響疫苗免疫效果的因素 1、抗原的性質(zhì)和免疫原性 2、接種途徑與病原體傳染的免疫機制 3、接種劑量與免疫反應(yīng)性 4、接種次數(shù)與間隔時間 5、有機體的免疫反應(yīng)性：年齡、母源抗體干擾、機體健康狀況。四、人工自動免疫的副作用 因疫苗的免疫接種而產(chǎn)生的對機體的有害反應(yīng)，稱免疫預(yù)防的副反應(yīng)。1、一般反應(yīng) （1）局部反應(yīng)：紅腫熱痛的炎癥反應(yīng)。（2）全身反應(yīng)：指輕度的體溫反應(yīng)，伴減食，精神差，屬正常反應(yīng)，2、異常反應(yīng)發(fā)生：表現(xiàn)為反應(yīng)率超過規(guī)定范圍，臨床癥狀嚴(yán)重，并有引起死亡。第九章免疫血清學(xué)技術(shù)第一節(jié)一般特點一、特異性和交叉性 二、最適

49、比和帶現(xiàn)象 抗原抗體須在適當(dāng)比例下才出現(xiàn)可見反應(yīng)，比例越合適，反應(yīng)越明顯，這個比例稱為抗原抗體反應(yīng)最適比。 如果抗原過多或抗體過多，則抗原抗體不能形成大的復(fù)合物而不呈現(xiàn)可見反應(yīng)，稱為帶現(xiàn)象。 抗體過剩，一個抗體分子只能結(jié)合一個抗原，形成可溶性小分子復(fù)合物，稱為前帶。 抗原過剩，兩個抗原分子只能與一個抗體結(jié)合，仍為小分子復(fù)合物，稱后帶。 凝集反應(yīng)?？贵w過剩而出現(xiàn)前帶，一般固定抗原濃度，稀釋抗體。 沉淀反應(yīng)?？乖^多而出現(xiàn)后帶，一般固定抗體濃度，稀釋抗原。最適比和帶現(xiàn)象圖示 三、反應(yīng)的二階段性 第一階段為抗原抗體特異結(jié)合，無可見反應(yīng)，第二階段為抗原抗體的可見階段。前者快，幾秒至幾分鐘，后者慢，幾分

50、鐘，幾十分鐘或更久。 四、反應(yīng)的敏感性 極高敏感性，可檢測極微量的抗原或抗體。 第二節(jié) 凝集性實驗 一、凝集實驗（一）概念細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在有電解質(zhì)存在下，抗原顆粒相互凝集成肉眼可見的凝集小塊，稱為凝集反應(yīng)。（二）凝集試驗類型1、玻片凝集實驗用已知的抗原（抗體）與待檢的血清（或菌液）各一滴在玻片上混合，數(shù)分鐘后，出現(xiàn)顆粒性或絮狀凝集。 玻片凝集實驗圖示2、試管凝集實驗 檢測待檢血清中是否存在相應(yīng)抗體和測定抗體的效價。 發(fā)生50%抗原凝集的血清最大稀釋度稱為該血清凝集價（或稱滴度）。試管凝集實驗圖示二、 沉淀實驗（一）概念可溶性抗原（細(xì)菌外毒素、菌體懸浮液、病毒、血清、

51、組織液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的白色沉淀。（二）沉淀試驗類型1、環(huán)狀沉淀實驗主要用于抗原定性，如炭疽Ascoli氏反應(yīng)。 環(huán)狀沉淀實驗圖示2、瓊脂擴散實驗 原理：1%瓊脂凝膠孔徑約85nm，能允許抗原抗體在其中自由擴散，并由近及遠(yuǎn)形成濃度梯度，二者在比例適當(dāng)處相遇，發(fā)生沉淀反應(yīng)，形成白色沉淀帶。瓊脂擴散沉淀實驗圖示3、對流免疫電泳（1）原理：在pH8.6的瓊脂電泳中，瓊脂中含瓊脂果膠，有一種從陽極向陰極的電滲作用力。大部分抗原帶較強的負(fù)電，克服電滲作用力，向陽極泳動。大多數(shù)IgG帶微弱負(fù)電 ，不能克服電滲力作用力，反向陰極倒退。將抗原加在陰極，抗體加在陽極，二者相遇

52、形成沉淀線。第三節(jié)標(biāo)記抗體技術(shù)一、熒光抗體技術(shù)（一）原理 將具有熒光特性的熒光材料聯(lián)接到提純的抗體分子上，制成熒光抗體。熒光抗體同樣保持特異性結(jié)合抗原的能力。當(dāng)抗原與熒光抗體結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察，即可對待檢的抗原進行定性和定位。常用的熒光材料是異硫氰酸熒光黃（FITC）。 （二）熒光抗體檢查法（1）直接法 常用于檢測病變組織中病毒抗原。病理組織冰凍切片或觸片，自然干燥，冷丙酮固定15分鐘，加熒光抗體，3730-60分鐘，PBS沖洗，加一滴pH9.0緩沖甘油，封片，顯微鏡觀察，有相應(yīng)抗原的部位顯黃綠色熒光。（2）間接法AgX Ab+ 熒光抗體 優(yōu)點：熒光亮度更強，檢出率更高，制備一種熒光抗抗

53、體，即可用該種動物的各種抗原檢測。 缺點：非特異性增強。（3）熒光補體法AgX Ab+ 熒光補體 優(yōu)點：制備一種熒光抗體，可用于各種Ag、Ab系統(tǒng)檢測。 缺點：非特異性較強。熒光補體不易保存。 （4）熒光抗補體法AgX Ab+補體熒光抗補體抗體 優(yōu)點：只制備一種熒光抗體，即可用于各種Ag、Ab系統(tǒng)檢測。 缺點：非特異性更強。 熒光抗體技術(shù)圖示二、 酶標(biāo)抗體技術(shù)1、原理：將特定的酶聯(lián)接于抗體分子上，制成酶標(biāo)抗體，抗原抗體特異性結(jié)合，并通過酶對底物的高效催化作用而顯色，從而對抗原（抗體）進行定性，定位，定量。常用酶有辣根過氧化物酶。 2、酶標(biāo)抗體染色法常用于抗原的定性、定位。病理組織經(jīng)冰凍切片或石

54、蠟切片后，用直接法（Ag+酶標(biāo)Ab）或間接法（Ag+Ab+酶標(biāo)抗Ab）染色，加底物顯色。本法優(yōu)點是不需特殊的熒光顯微鏡設(shè)備，且標(biāo)本可長期保存。 3.ELISA（Enzyme Linked immunosorlent assay） 即酶聯(lián)免疫吸附實驗。將抗原或抗體吸附于固相載體，在載體上進行免疫酶染色，底物顯色后肉眼或酶聯(lián)免疫測定儀判定結(jié)果的一種方法。（1）固相載體聚苯乙烯微孔型塑料板。（2）包被用pH9.6 0.1M緩沖液稀釋抗原或抗體，0.1ml/孔，4過夜。（3）封閉將包被板取出洗滌后，加入0.5%牛血清白蛋白或1%小牛血清封閉殘存的孔隙，0.1ml/孔，372小時。（4）洗滌（5）ELISA技術(shù)類型A、間接ELISA 用于測定未知抗體。Ag+Abx酶標(biāo)抗抗體底物間接ELISAB、雙抗體夾心ELISA 用于測定大分子抗原。 Ab Agx酶標(biāo)Ab 底物雙抗體夾心ELISAC、夾心間接ELISA 用于測定多種大分子抗原。Ab1 AgxAb2 酶標(biāo)抗Ab2抗體底物夾心間接ELISA（6）抗原抗體稀釋及作用條件保溫液（1%BSA-吐溫-20-PBS）稀釋，每一步加樣均須在37作用1-2h，以保證抗原抗體間的結(jié)合。（7）底物顯色臨用前配制鄰苯二胺（供氫體）-H