20-67890 結核分枝桿菌探針法LAMP試劑盒使用手冊V1.0(1)(1)

1、天凈沙系列CAT#:20-67890低溫運輸，-20保存結核分枝桿菌探針法LAMP試劑盒（含內參）Mycobacterium tuberculosis Probe LAMP Kit（with Internal Control）使用手冊V1.0江蘇天凈沙基因診斷技術有限公司網址： HYPERLINK ；電話：400-6005850；電郵：order產品及特點結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB），俗稱結核桿菌，是引起結核病的病原菌?？汕址溉砀髌鞴伲苑谓Y核為最多見。結核病至今仍為重要的傳染病。因此對結核分枝桿菌的快速準確鑒定有重要意義。本公司根據(jù)獨自開

2、發(fā)的探針法LMAP技術，開發(fā)了簡單快捷的結核分枝桿菌探針法LAMP檢測試劑盒，它具有下列特點：即開即用，用戶只需要提供DNA樣品。恒溫擴增，反應設置更加簡單。含熒光探針，可以對擴增進行實時熒光檢測（需要熒光PCR儀）。檢測靈敏性一般比PCR高10倍以上。特異性高，根據(jù)結核分枝桿菌保守序列設計的4條特異引物和1條探針，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應。一般630分鐘內出結果，比PCR快。上樣量大，對20 L的反應體系，最大樣品加樣量高達到14 L。內含的dUTP-UNG可防交叉污染。提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結果。提供內參，便于排除假陰性結果。本產品只能用于定性分析，不推薦用于定量分

3、析。本產品足夠50次20 L體系的探針法LAMP擴增。只可用于科研。規(guī)格及成分本產品采用5孔盒包裝成份編號規(guī)格五孔盒包裝4LAMP MasterMix（探針法，待加酶）220303a200L0.5mL綠蓋管Bst DNA聚合酶20.5mL紅蓋管20結核分枝桿菌探針法LAMP引物-探針混合液yp20-6789050L0.5mL棕色管結核分枝桿菌LAMP陽性對照（110E4拷貝/L）pc20-67890250L0.5mL黃蓋管結核分枝桿菌LAMP內參對照（110E4拷貝/L）Ic20-67890250L0.5mL紫蓋管使用手冊20-67890sc1份無運輸及保存低溫運輸

4、，-20保存，保存期限為一年。自備試劑待測樣品。使用方法一、樣品DNA的制備用自選方法純化樣品DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。如果有N個樣品，則需要做N+2個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。PC用10L本試劑盒提供的樣品陽性對照（110E4拷貝/L）和10L內參陽性對照（110E4拷貝/L）加一定量的水作為核酸提取陽性對照樣品，加水后的總體積必須跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣本體積一致。NC用10L本試劑盒提供的10L內參陽性對照（110E4拷貝/L）加一定量的水充當，加水后的總體積必須跟核酸純化試劑

5、盒所要求的起始樣本體積一致。二、探針法LAMP反應（20L體系）反應設置：如果有N+2個DNA純化樣品，則最好設置N+4個LAMP擴增，增加的兩個反應分別是LAMP擴增陽性對照和LAMP擴增陰性對照。首次使用本試劑盒時，需要將Bst DNA聚合酶2.0全部加入到4LAMP MasterMix（探針法）中，輕柔顛倒混勻1分鐘后再使用。未用完的部分需要放-20保存。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：成分N+2個樣品管LAMP陰性對照LAMP陽性對照4LAMP MasterMix（探針法，加酶后）各5 L5 L5 L20結核分枝桿菌LAMP引物-探針混合液各1 L1 L1 LN+2個樣品DNA各

6、14 L-超純水-14 L-結核分枝桿菌LAMP陽性對照（110E4拷貝/L）3.5 L結核分枝桿菌LAMP內參對照（110E4拷貝/L）-3.5 L如果使用熒光定量PCR儀，則設置60次循環(huán)，每次65保溫1分鐘，采集FAM通道和HEX通道的熒光信號。三、結果分析實驗有效性的判斷：樣品制備陽性對照和LAMP陽性對照的FAM信號（對應樣本）和HEX信號（對應內參）必須有標準的S擴增曲線，樣品制備陰性對照的HEX信號（對應內參）必須有標準的S擴增曲線，LAMP陰性對照的FAM信號和HEX信號必須呈現(xiàn)一條平線，沒有S曲線，否則提取實驗或擴增實驗無效。如果上述陽性對照和陰性對照結果正常，則實驗有效，可以分析樣品的情況。待測樣品的結果判斷：在實驗有效的情況下，才有必要分析代測樣品管的熒光信號。如果其FAM熒光信號曲線為S型（無論HEX信號如何），則說明樣品為陽性。如果FAM熒光信號為平線則說明待測樣品為陰