2016年臨床檢驗(yàn)技師微生物講義

1、弧菌科及檢驗(yàn)弧菌科是一群氧化酶陽(yáng)性、具有鞭毛、動(dòng)力陽(yáng)性、發(fā)酵葡萄糖的細(xì)菌?；【瓢?4 個(gè)菌屬，即弧菌屬、氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬和發(fā)光桿菌屬。前三屬細(xì)菌均可引起人類。弧菌屬：鞭毛、甘露醇、脂酶、生長(zhǎng)需要 NaCl、對(duì) O129 敏感五項(xiàng)為+，氣單胞菌屬：-+-，鄰單胞菌屬為+，發(fā)光桿菌屬為-+/-+。一、弧菌屬弧菌屬的細(xì)菌分布廣泛，以水中最多。分為四類：O-1 群霍亂弧菌；不典型 0-1 群霍亂弧菌；非O-1 群霍亂弧菌；其他弧菌：包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、弧菌、麥?zhǔn)匣【蛿M態(tài)弧菌。本屬菌共有 100 余種，對(duì)人類致病的主要有霍亂弧菌和副溶血性弧菌，分別引起霍亂和食物（一）霍亂弧菌

2、霍亂弧菌是霍亂的病原菌。1.生物學(xué)特性。（1）形態(tài)染色：呈弧形或逗點(diǎn)狀，有菌毛，有些菌株有莢膜。一端有一根粗而長(zhǎng)的鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。暗視野顯微鏡觀察呈穿梭樣或流星狀運(yùn)動(dòng)。液體培養(yǎng)物滴片染色鏡檢，可見(jiàn)排列如“魚群狀”菌。?。?）培養(yǎng)特性：耐堿不耐酸。常選用8.5 的堿性蛋白胨水增菌培養(yǎng)，在液體表面大量繁殖形成菌膜。在硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂平板（TCBS）上，形成黃色菌落。在碲酸鉀瓊脂平板上，因還原亞碲酸鉀成金屬碲，使菌落中心呈灰褐色?；驊c大霉素瓊脂上形成的菌落中心呈灰褐色?；魜y弧菌菌落特征（TCBS 瓊脂）TCBS 瓊脂：溴麝香草酚蘭和麝香草酚蘭是指示劑；霍亂弧菌（慶大霉素瓊脂）生化

3、反應(yīng)：兩個(gè)生物型的霍亂弧菌均能分解葡萄糖、乳糖（遲緩）、麥芽糖、甘露醇、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。氧化酶、明膠酶試驗(yàn)和 ONPG 試驗(yàn)均陽(yáng)性。能產(chǎn)生靛基質(zhì)，霍亂紅反應(yīng)（即亞硝基靛基質(zhì)試驗(yàn)）陽(yáng)性。抗原結(jié)構(gòu)與分型：O 抗原特異性高，是分群和分型的基礎(chǔ)。根據(jù)是否與 O1 群抗血清凝集分成 O1群和非 O1 群霍亂弧菌。O1 群霍亂弧菌的菌體抗原由A、B、C 三個(gè)抗原組成，根據(jù)其菌體抗原不同，又分為AC 的稻葉型，AB 的型，ABC 的彥島型。O2O138 群可引起散發(fā)的胃腸炎，從未引起過(guò)霍亂流行。這些血清群均不與 O1 群抗血清凝集，又稱為不凝集弧菌。而 1992 年發(fā)現(xiàn)的新流行菌株為一種新群，即 O139

4、 群。生物型，O1 群霍亂弧菌有兩個(gè)生物型：古典生物型和 EITor 生物型?？赏ㄟ^(guò)表加以鑒別。表霍亂弧菌兩個(gè)生物型的鑒別性狀古典型EI Tor 型溶血（羊紅細(xì)胞）-+血凝（雞紅細(xì)胞）-+V-P 試驗(yàn)-+多黏菌素B 敏感試驗(yàn)SR噬菌體 IV 組裂解+-噬菌體V 組裂解-+霍亂弧菌 EITor 生物型雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)多粘菌素 B 敏感試驗(yàn)2.微生物檢驗(yàn)（1）標(biāo)本：標(biāo)本以糞便為主，盡可能在患者用前采取。可用無(wú)菌棉拭子采取自然排出的新鮮糞便，亦可用直腸拭子由直腸 35cm 處。一般米泔水樣便采取 13ml，成形便采取蠶豆大小。的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)接種適宜培養(yǎng)基。不接種者，要接種于保存或運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)盡快送檢。

5、常用的保存或運(yùn)送培養(yǎng)基有堿性蛋白胨水、文-臘二氏保存液和卡-布運(yùn)送培養(yǎng)基等。（2）檢驗(yàn)方法及鑒定1）直接鏡檢：動(dòng)力觀察：可見(jiàn)流星或穿梭狀運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌；制動(dòng)試驗(yàn)：加-滴霍亂多價(jià)血清，弧菌凝集，運(yùn)動(dòng)停止，則可鑒定；涂片染色：取標(biāo)本涂片，用魚群狀排列的弧菌。染色，鏡檢觀察有無(wú)染色呈分離培養(yǎng)：直接分離培養(yǎng)：分離用弱選擇培養(yǎng)基（如堿性瓊脂和堿性膽鹽瓊脂）、強(qiáng)選擇培養(yǎng)基（慶大霉素瓊脂、TCBS 瓊脂）；增菌后分離培養(yǎng)：來(lái)自帶菌者的標(biāo)本，如含菌量少必須先增菌后分離。再作分離培養(yǎng)。鑒定：根據(jù)霍亂弧菌在各種選擇培養(yǎng)基上的特點(diǎn)，挑選可疑菌落進(jìn)行鑒定。鑒定以血清學(xué)試驗(yàn)（玻片凝集）為主，結(jié)合形態(tài)學(xué)、生化反應(yīng)作出判斷。（

6、二）O139 型霍亂弧菌屬非 O1 群霍亂弧菌，可與 O139 抗血清凝集。（三）副溶血性弧菌副溶血性弧菌是一種嗜鹽性弧菌。常存在于近海海水、海產(chǎn)品及鹽漬食品中。它是我國(guó)沿海地區(qū)最常見(jiàn)的食物病原菌。1.生物學(xué)特性（1）形態(tài)染色：桿菌，隨培養(yǎng)基不同菌體形態(tài)差異較大，呈多種形態(tài)。兩極濃染。菌體一端有單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。無(wú)芽胞、無(wú)莢膜。（2）培養(yǎng)特性：NaCl 最適濃度為 3.5%。最適為 7.7。需氧，在液體培養(yǎng)基表面形成菌膜。在 TCBS平板上形成稍隆起、混濁、無(wú)粘性、綠色菌落；在 SS 平板上不生長(zhǎng)或長(zhǎng)出 12.5mm 扁平無(wú)色半透明的菌落，不易挑起，挑起時(shí)呈黏絲狀。副溶血弧菌菌落特征（TCBS

7、 瓊脂）（3）生化反應(yīng)：本菌在 7.0%NaCl 培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。能分解葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、糖、淀粉產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、蔗糖。靛基質(zhì)、甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性，V-性：致病菌株能使人或兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血，對(duì)馬紅細(xì)胞不溶血。2.微生物檢驗(yàn)2S、尿素酶試驗(yàn)；神奈川試驗(yàn)陽(yáng)（1）標(biāo)本：患者的糞便、可疑食物等。（2）檢驗(yàn)方法及鑒定增菌培養(yǎng)：取標(biāo)本接種 4%NaCl 蛋白胨水中，37培養(yǎng)，若有本菌存在，一般數(shù)小時(shí)即出現(xiàn)明顯混濁，即可分離培養(yǎng)；分離培養(yǎng)：將標(biāo)本接種副溶血弧菌選擇培養(yǎng)基 35培養(yǎng) 1824h 觀察結(jié)果。菌落濕潤(rùn)、混濁、呈綠色；鑒定：根據(jù)其形態(tài)、染色、多形性、活潑動(dòng)力等特點(diǎn)及菌落特征，結(jié)合氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)

8、性，KIA：K/A，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生 H2S。MIU：+ + -。以及嗜鹽試驗(yàn)和血清學(xué)分型可作初步鑒定。3.臨床意義 致病因子有黏附因子（主要為菌毛）、毒素（如耐熱性溶血素、TDH 類毒素），所致疾病為食物等。及急性胃腸炎，常為被污染的海產(chǎn)品及鹽腌制品所引起，此菌尚可引起淺表、敗血癥4.治療原則 選用合適的抗生素及其他抗菌藥物，嚴(yán)重病例需輸液及補(bǔ)充電解質(zhì)。（四）其他弧菌1.擬態(tài)弧菌：可引起胃腸炎，但不引起暴發(fā)流行。2.弧菌：在致病性弧菌中，該菌引起的疾病最為嚴(yán)重，病程進(jìn)展非?？烨抑旅?。溶澡弧菌：是弧菌屬中耐藥性最強(qiáng)的致病菌。河弧菌。弗尼斯弧菌。6.弧菌。7.其他弧菌。二、氣單胞菌屬與鄰單胞菌

9、屬（一）氣單胞菌屬?gòu)V泛分布于自然界。有的種可引起人類腹瀉等多種。本菌屬主要有 10 種，包括嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌、溫和氣單胞菌、維隆氣單胞菌、氣單胞菌、簡(jiǎn)達(dá)氣單胞菌、易損氣單胞菌、殺鮭氣單胞菌、中間氣單胞菌、嗜泉?dú)鈫伟Ｇ?7 種均有臨床意義。1.生物學(xué)特性（1）形態(tài)染色：短桿菌，菌體兩端鈍圓，單極鞭毛，運(yùn)動(dòng)極為活潑（除殺鮭氣單胞菌外）。無(wú)芽胞，有窄的莢膜。（2）培養(yǎng)特性：最適生長(zhǎng)溫度 30，在普通培養(yǎng)基上 37經(jīng) 2448h 形成 13mm 大小，微白色半透明的菌落；在血瓊脂上多數(shù)菌株有溶血環(huán)，35 天后菌落呈暗綠色；在腸道選擇培養(yǎng)基上，大多數(shù)菌株形成乳糖不發(fā)酵菌落。嗜水氣單胞菌菌落

10、特征（血平板）（3）生化反應(yīng)：發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，在 6.5%NaCl 中不生長(zhǎng)。2.微生物檢驗(yàn)（1）標(biāo)本：根據(jù)不同疾病糞便或肛拭子、血液、膿汁、腦脊液、尿液等標(biāo)本。（2）檢驗(yàn)方法及鑒定1）直接涂片：標(biāo)本涂片染色鏡檢，呈短桿菌。懸滴標(biāo)本觀察動(dòng)力，運(yùn)動(dòng)活潑。2）分離培養(yǎng)：血液標(biāo)本經(jīng)增菌后轉(zhuǎn)種血瓊脂平板；膿汁、物等直接接種血瓊脂平板；糞便標(biāo)本接種腸道選擇培養(yǎng)基。另一部分標(biāo)本可接種于 PBS，置 4冷增菌后，于 1d、3d、5d、7d、14d 天移種分離平板上。標(biāo)本接種后，經(jīng) 35培養(yǎng) 2448h，觀察菌落。3）鑒定：挑可疑菌落移種 KIA、MIU 做初步生化反應(yīng)，KIA：K/A、產(chǎn)氣+/-、H2S，MIU：+-；氧化酶陽(yáng)性。最后鑒定：氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性可與腸桿菌科細(xì)菌鑒別，發(fā)酵葡萄糖可與非發(fā)酵菌鑒別。三種氣單胞菌的鑒定：葡萄糖產(chǎn)氣氣單胞菌，為+-者是溫和氣單胞菌。（二）鄰單胞菌屬鄰單胞菌屬只有一個(gè)種即類志為豚鼠氣單胞菌，葡萄糖產(chǎn)氣、七葉苷、水楊酸為+者是嗜水單胞菌。存在于水、魚、動(dòng)物和人類腸道。能引起人類水樣腹瀉和食物，在機(jī)