青蒿琥酯抑制人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞侵襲的研究

1、青蒿琥酯按捺人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞侵襲的研究范鈺，張尤歷，姚廣濤，李儀奎【摘要】目的不雅察中藥提取物青蒿琥酯arteisunate，ART對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲的作用，并探究其大概機(jī)制。要領(lǐng)接納差異濃度的青蒿琥酯處置懲罰結(jié)腸癌S620細(xì)胞，以軟瓊脂集落造就試驗(yàn)檢測(cè)癌細(xì)胞錨著不依靠性增殖，以Byden小室模子要領(lǐng)檢測(cè)癌細(xì)胞侵襲本領(lǐng)，以esternblt要領(lǐng)檢測(cè)細(xì)胞間黏附分子-1(interellularadhesinleule-1，IA-1)卵白變革。效果青蒿琥酯能有用地按捺結(jié)腸癌細(xì)胞S620的惡性增殖和侵襲本領(lǐng)，且呈劑量依靠性P0.01。青蒿琥酯能有用地按捺癌細(xì)胞IA-1基因卵白表達(dá)，呈時(shí)間和濃度依

2、靠性P0.01。結(jié)論青蒿琥酯可顯著按捺結(jié)腸癌S620細(xì)胞侵襲，其機(jī)制大概與下調(diào)IA-1卵白程度有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】青蒿琥酯；結(jié)腸腫瘤；錨著不依靠性增殖；細(xì)胞間黏附分子Abstrat：bjetiveTstudytheeffetsandehanisfArteisunatenhuanlnaner.ethdsAfterlnanerS620ellseretreatedithdifferentdsesfArteisunate,thegrthfanhrageindependenefanerellsasstudiedinsftagarlnyfratin,andinvasinabilityasdeterinedby

3、Bydenhaber,andtheprtEinlevelfinterellularadhesinleule-1(IA-1)asdetetedbyesternbltassay.ResultsArteisunateuldsignifiantlyinhibitbthinvasinabilityandanhrageindependenegrthinadse-dependentanner.ThelevelfprteinfIA-1asdn-regulatedasparedithntrlgrup.nlusinArteisunateaninhibitinvasinflnarinaelllineS620thru

4、ghdn-regulatingIA-1expressin.Keyrds：Arteisunate；lnarina；Anhrageindependenegrth；Interellularadhesinleule-1青蒿琥酯arteisunate，ART是中藥青蒿提取物的衍生物，研究創(chuàng)造，ART具有緊張的抗腫瘤作用1，但在胃腸道腫瘤細(xì)胞研究少少。細(xì)胞間黏附分子-1(interellularadhesinleule-1，IA-1)是體內(nèi)緊張的免疫活性分子，與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移具有嚴(yán)密的干系2，3。為此，本研究接納ART處置懲罰結(jié)腸癌S620細(xì)胞，不雅察了ART對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞錨著不依靠性增殖、侵襲和IA-1卵白

5、表達(dá)的影響，以探究其抗癌機(jī)制。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1質(zhì)料青蒿琥酯，廣西桂林第二制藥廠產(chǎn)物，用0.5%NaH3溶解后再用生理鹽水設(shè)置成所需濃度。RPI1640、新生小牛血清，購(gòu)自GIB公司。人結(jié)腸癌細(xì)胞株S620，浙江大學(xué)腫瘤研究所凍存。IA-1單克隆抗體購(gòu)自Santaruz公司。1.2細(xì)胞造就人結(jié)腸癌S620細(xì)胞在含15%新生小牛血清的RPI1640液中造就，置37，50l/L2造就箱中。逐日不雅察，待細(xì)胞至對(duì)數(shù)生恒久，接納差異濃度的青蒿琥酯處置懲罰后，然后預(yù)備舉行以下實(shí)行。1.3軟瓊脂集落造就實(shí)行將處置懲罰組及比擬組細(xì)胞用含0.01%EDTA的0.25%胰酶消化，制備單細(xì)胞懸液，調(diào)解細(xì)胞濃度為2

6、103細(xì)胞/l，置室溫備用。將1%的瓊脂凝膠于微波爐完全溶化后安排45水浴中，溫度平衡后與等體積45預(yù)溫的漢20%新生小牛血清的RPI1640造就液混勻，參加6孔板中，每孔4l，置超凈臺(tái)中室溫安排，令其充實(shí)凝固。剩余的瓊脂粉/造就基混淆物置于42水浴中待用。1.4體外侵襲按捺實(shí)行該實(shí)行在改進(jìn)的Byden小室中操縱，根據(jù)文獻(xiàn)要領(lǐng)4舉行。Byden小室的上下室之隔斷以孔徑為8的聚碳酸酯膜，膜上鋪勻12稀釋的基底膜膠atrigel。下室加預(yù)先制備的NIH3T3細(xì)胞造就上清液作為趨化因子，上室參加50800l待測(cè)的腫瘤細(xì)胞懸液。置于37，5%2造就箱中溫育12h，棄去上室液體，取出聚碳酸酯膜，用棉簽細(xì)

7、致擦盡膜上atrigel及未穿過(guò)的細(xì)胞，甲醛結(jié)實(shí)5in，HE染色。400倍光鏡下計(jì)數(shù)穿過(guò)聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)，以侵襲細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量表現(xiàn)腫瘤細(xì)胞侵襲本領(lǐng)。隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，取均勻值舉行統(tǒng)計(jì)處置懲罰，每組計(jì)數(shù)3份樣本。1.5IA-1基因卵白檢測(cè)根據(jù)上述時(shí)間網(wǎng)絡(luò)各組細(xì)胞，提取細(xì)胞總卵白，卵白定量后舉行通例esternblt檢測(cè)。使用KdakDigitalSiene1DIageAnalysisSftareEastanKdakpany，USA測(cè)定esternBlt條帶凈灰度值，并與內(nèi)參照-atin的測(cè)定效果比擬力，盤(pán)算其比值。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)要領(lǐng)接納SPSS8.0統(tǒng)計(jì)軟件包舉行統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰，所得到

8、的數(shù)值均以s表現(xiàn)。2效果2.1ART對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞軟瓊脂集落形成的影響結(jié)腸癌S620細(xì)胞在體外半固體造就體系中可以自覺(jué)地形成集落。而細(xì)胞經(jīng)青蒿琥酯處置懲罰后，所形成的集落數(shù)顯著淘汰，且呈劑量依靠性P0.01。見(jiàn)圖1。2.2ART對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲的影響網(wǎng)絡(luò)經(jīng)ART處置懲罰的細(xì)胞，接納Byden小室檢測(cè)癌細(xì)胞侵襲環(huán)境。效果創(chuàng)造，與比擬組比力，ART處置懲罰組癌細(xì)胞穿過(guò)濾膜的細(xì)胞數(shù)顯著落落，且呈濃度依靠性(P0.01)。見(jiàn)圖2。2.3ART對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞IA-1基因表達(dá)的影響本研究接納esternblt法檢測(cè)ART對(duì)癌細(xì)胞IA-1卵白程度的影響。效果創(chuàng)造，ART各個(gè)劑量組在作用細(xì)胞24h后，IA-1卵白

9、表達(dá)就開(kāi)始出現(xiàn)低落；隨著作用時(shí)間的延伸，IA-1卵白低落越發(fā)顯著，到72h時(shí)非常明顯。同時(shí)創(chuàng)造，IA-1卵白程度低落與ART作用濃度嚴(yán)密相干。見(jiàn)圖3。3討論正常真核細(xì)胞，除成熟血細(xì)胞外，大多須粘附于特定的細(xì)胞外基質(zhì)上才氣按捺凋亡而存活，稱為錨著依靠性anhragedependene。一樣平常以為，腫瘤細(xì)胞在軟瓊脂形成集落的幾多可反響腫瘤細(xì)胞錨著不依靠性增殖的特性，且與其惡性程度呈正相干。癌細(xì)胞侵襲本領(lǐng)強(qiáng)，那么在軟瓊脂上形成的集落數(shù)量多。本研究創(chuàng)造，經(jīng)差異濃度的青蒿琥酯處置懲罰的癌細(xì)胞軟瓊脂集落數(shù)顯著受到按捺。說(shuō)明，青蒿琥酯可在必然程度上按捺結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲本領(lǐng)。腫瘤細(xì)胞自己的活動(dòng)本領(lǐng)和侵襲力在

10、腫瘤轉(zhuǎn)移歷程中發(fā)揮緊張作用，活動(dòng)本領(lǐng)不但是腫瘤細(xì)胞侵襲四周構(gòu)造，并且是侵入血管和穿出血管所必需。從理論上講，按捺腫瘤細(xì)胞活動(dòng)將按捺腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。一旦腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤上脫落，它們將侵入宿主的細(xì)胞外基質(zhì),然后，穿透淋巴管和血管。為此，腫瘤細(xì)胞的侵襲必需穿透血管四周的細(xì)胞外基質(zhì)。本研究所用的基質(zhì)膠(atrigel)含有型膠原、層粘卵白、巢卵白(entatin)、硫酸肝素卵白多糖等身分，與細(xì)胞外基質(zhì)的身分非常相近。因此，能有用地在體外模擬腫瘤細(xì)胞的侵襲歷程。在體外侵襲實(shí)行中，我們不雅察到S620胞具有較強(qiáng)的侵襲及趨化本領(lǐng)。ART能使穿過(guò)聚碳酸脂膜的胃癌細(xì)胞數(shù)量淘汰，低落告終腸癌細(xì)胞的侵襲和趨

11、化本領(lǐng)。腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)龐大的歷程。粘附是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移歷程中的緊張環(huán)節(jié)。粘附因子介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)、血管內(nèi)皮細(xì)胞、靶器官細(xì)胞之間的彼此作用，因此與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移舉動(dòng)嚴(yán)密相干1。IA-1是一種跨膜卵白，通過(guò)與其配體淋巴細(xì)胞成效相干抗原-1(LFA-1，D11a/D18)和巨噬細(xì)胞相干復(fù)合體(a，D11b/D18)結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間的彼此活動(dòng)；到場(chǎng)呈遞抗原信息、激活細(xì)胞免疫等歷程4，5。正常環(huán)境下，IA-1僅在血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞低程度的表達(dá)，但在炎癥、器官移植、腫瘤免疫等環(huán)境下表達(dá)量顯著增多68。Natali等9研究創(chuàng)造IA-1表達(dá)程度與玄色素瘤瘤體厚度及臨床病程有很高的相干

12、性，IA-1高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移本領(lǐng)高。有學(xué)者創(chuàng)造，與癌旁構(gòu)造和結(jié)腸腺瘤構(gòu)造比力，結(jié)腸癌構(gòu)造中有IA-1過(guò)表達(dá)，這大概與結(jié)腸癌細(xì)胞能自排泄或刺激相近構(gòu)造旁排泄IA-1有關(guān)10。本研究接納ART處置懲罰癌細(xì)胞后，于差異時(shí)間網(wǎng)絡(luò)細(xì)胞，接納esternblt檢測(cè)IA-1卵白表達(dá)。效果創(chuàng)造，ART能有用地可下調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞IA-1卵白程度表達(dá)。隨著ART的濃度增長(zhǎng)，作用時(shí)間延伸，S620細(xì)胞IA-1卵白表達(dá)程度漸漸低落。說(shuō)明，ART按捺結(jié)腸癌細(xì)胞IA-1卵白表達(dá)，呈濃度和時(shí)間依靠性。由此提示，ART能有用地按捺結(jié)腸癌細(xì)胞惡性侵襲，大概與按捺IA-1表達(dá)有關(guān)。【參考文獻(xiàn)】1肖柳英，林培英，張丹，等.青

13、蒿琥酯對(duì)小鼠肝癌及S180實(shí)體瘤的按捺作用J.有用癌癥雜志，2001，16(3)：245.2王勤,吳理茂,李愛(ài)媛,等.青蒿琥酯抗肝癌作用的實(shí)行研究J.中國(guó)中藥雜志,2001,26(10):707.3LalaniELN,LaniadE,AbelPD.leularandellularbilgyfprstateanerJ.aneretastasisRev,1997,16(1):29.4范鈺，張尤歷，許那么豐.青蒿琥酯按捺結(jié)腸癌S620細(xì)胞侵襲的體外實(shí)行研究J.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)醫(yī)學(xué)版,2022,16(4)：298.5BessaX,ElizaldeJI,itjansF,etal.Leukytereruite

14、ntinlnaner:rlefelladhesinleules,nitrixide,andtransfringgrthfatrbeta1J.Gastrenterlgy,2002,122：1122.6BannerBF,SavasL,daBA.ExpressinfadhesinleulesinthehstrespnsetlnarinaJ.UltrastrutPathl,1995,19：113.7LiuYZ,henB,SheXD.Alinialevaluatinfserunentratinsfinterellularadhesinleule-1inpatientsithgastrianerJ.rldJGastrenterl,1998，4：225.8SunJJ,ZhuXD,ZhuG,etal.Expressinfinterellularadhesiveleule-1inliveranertissuesandliveraneretastasisJ.rl