Y染色體微缺失檢測(cè)

1、背景介紹根據(jù)國際衛(wèi)生組織調(diào)查數(shù)據(jù)，約15%育齡夫婦存在生育障礙，其中男性因素引起的生育障礙約占一半。在已知的導(dǎo)致男性不育的遺傳學(xué)因素中，發(fā)病率最高的兩種是Y染色體的微缺失和克氏綜合癥。Y染色體具有大量重復(fù)基因序列及回文結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)在維持Y染色體進(jìn)化穩(wěn)定性的同時(shí)也使回文結(jié)構(gòu)內(nèi)部基因易于丟失，進(jìn)而導(dǎo)致不育。缺失率最高的三個(gè)影響精子發(fā)生的區(qū)域被命名為AZFa,AZFb和AZFc,它們之中任何一個(gè)出現(xiàn)缺失都有可能導(dǎo)致育性下降或不育。Y染色體微缺失在無精癥或少精癥患者中發(fā)病率在10-15%，已成為男性不育患者的常規(guī)檢查項(xiàng)目。圖1,Y染色體AZF區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖（AZFa區(qū)兩端有兩段原病毒序列、AZFb/c

2、區(qū)內(nèi)部有5個(gè)序列高度一致的大的回文結(jié)構(gòu),這些序列和結(jié)構(gòu)導(dǎo)致相應(yīng)染色體片段易發(fā)生同源重組,造成缺失或復(fù)制。）歐洲男科學(xué)協(xié)會(huì)和歐洲分子遺傳實(shí)驗(yàn)質(zhì)控協(xié)作網(wǎng)（EAA/EMQN）2004年發(fā)表“Y染色體微缺失分子診斷指導(dǎo)意見”建議通過對(duì)各AZF區(qū)的共6個(gè)STS位點(diǎn)和兩個(gè)對(duì)照位點(diǎn)檢測(cè)Y染色體微缺失。產(chǎn)品簡介本劑盒通過“多重定量熒光PCR技術(shù)”（MultiplexQuantitativeFluorescentPCR），以一個(gè)高度復(fù)合的擴(kuò)增體系中擴(kuò)增至少15個(gè)Y染色體微缺失檢測(cè)相關(guān)的位點(diǎn)，并根據(jù)各位點(diǎn)有無擴(kuò)增產(chǎn)物及擴(kuò)增產(chǎn)物劑量判斷缺失類型。對(duì)于Y染色體微缺失，由于各AZF區(qū)片段相對(duì)較小，常規(guī)核型分析等方法難以

3、發(fā)現(xiàn)其缺失。本項(xiàng)目采用的檢測(cè)方法是：在各AZF區(qū)上分別選擇具有序列特異性的多個(gè)位點(diǎn)，通過多重定量熒光PCR方法檢測(cè)各位點(diǎn)。根據(jù)有無擴(kuò)增產(chǎn)物判定樣本染色體是否包含所檢測(cè)的序列特異性位點(diǎn)，進(jìn)而推斷樣本染色體是否在位點(diǎn)所在AZF區(qū)域發(fā)生缺失；通過部分位點(diǎn)擴(kuò)增產(chǎn)物相對(duì)劑量確定相關(guān)位點(diǎn)拷貝數(shù)比例，根據(jù)拷貝數(shù)比例推斷相關(guān)位點(diǎn)對(duì)應(yīng)區(qū)域是否發(fā)生缺失或復(fù)制，并對(duì)于AZFb和/或AZFc區(qū)部分缺失或復(fù)制，實(shí)現(xiàn)了首次檢測(cè)。該技術(shù)已經(jīng)申請(qǐng)國家專利。表1.試劑盒包括檢測(cè)位點(diǎn)基本信息位點(diǎn)位置備注SRYChrYpEAA/EMQN建議對(duì)照位點(diǎn)ZFYChrYpEAA/EMQN建議對(duì)照位點(diǎn)，可用于檢測(cè)性染色體數(shù)目異常sY81Ch

4、rYqAZFaAZFa區(qū)近端粒側(cè)邊界外sY86ChrYqAZFaEAA/EMQN建議STS位點(diǎn)sY84ChrYqAZFaEAA/EMQN建議STS位點(diǎn)CDY2ChrYqAZFb可用于檢測(cè)AZFb/c區(qū)部分缺失和復(fù)制SCMYChrYqAZFb可用于檢測(cè)性染色體數(shù)目異常sY127ChrYqAZFbEAA/EMQN建議STS位點(diǎn)sY134ChrYqAZFbEAA/EMQN建議STS位點(diǎn)sY1161ChrYqAZFb可用于檢測(cè)AZFb/c區(qū)部分缺失，并確定缺失類型sY1191ChrYqAZFc可用于檢測(cè)AZFb/c區(qū)部分缺失，并確定缺失類型sY254ChrYqAZFcEAA/EMQN建議STS位點(diǎn)sY

5、255ChrYqAZFcEAA/EMQN建議STS位點(diǎn)DAZChrYqAZFc可用于檢測(cè)AZFb/c區(qū)部分缺失和復(fù)制sY157ChrYqAZFc可用于輔助檢測(cè)AZFb/c區(qū)部分缺失和復(fù)制CDY1ChrYqAZFc可用于檢測(cè)AZFb/c區(qū)部分缺失和復(fù)制ZFXChrXp可用于檢測(cè)性染色體數(shù)目異常SCMXChrXp可用于檢測(cè)性染色體數(shù)目異常DAZLChr3p可用于檢測(cè)AZFb/c區(qū)部分缺失和復(fù)制產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)1）操作簡便，每個(gè)樣品只需一個(gè)擴(kuò)增檢測(cè)反應(yīng)，適于批量化檢測(cè)，可以在4-5小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)；2）模版需要量低，體系穩(wěn)定性好，兼容chelex提取方法；3）檢測(cè)位點(diǎn)包含EAA/EMQN指導(dǎo)意見中使用的全部6

6、個(gè)STR位點(diǎn)和2個(gè)對(duì)照位點(diǎn)，結(jié)果準(zhǔn)確性更高，可檢測(cè)AZFb區(qū)、AZFc區(qū)各常見部分缺失及復(fù)制；4）體系擴(kuò)增能力超過同類產(chǎn)品3-4倍，可以在一個(gè)反應(yīng)完成全部擴(kuò)增；5）成本低，檢測(cè)成本140元/人左右，適合批量化檢測(cè)。6）可同時(shí)對(duì)克氏綜合癥進(jìn)行檢測(cè)。產(chǎn)品應(yīng)用1）無精癥、少精子癥患者病因排查；2）男性不育癥患者選擇體外受精（IVF）或單精子卵泡漿內(nèi)注射（ICSI）生育前；3）精子庫對(duì)精子進(jìn)行遺傳背景篩查；4）男性不育伴隱睪和精索靜脈曲張或其他原因不明的不育癥患者病因排查；4）妻子為不明原因的習(xí)慣性流產(chǎn)患者的病因排查。產(chǎn)品表現(xiàn)JyQ占111-wasmibI.,LJ圖A:正常男性樣本圖B:AZFc區(qū)完全

7、缺失(b2/b4)圖C:gr/gr復(fù)制注：箭頭示缺失或比例異常位點(diǎn)。本項(xiàng)目所研制的檢測(cè)體系，與目前已有的應(yīng)用于Y染色體微缺失檢測(cè)的體系和產(chǎn)品比較，同樣具有顯著優(yōu)勢(shì)，具體性能比較如下表：定性PCRSouthernFISH熒光定量基因芯片本項(xiàng)目體系(QF-PCR)假陽性假陰性幾率高中中低高低檢測(cè)靈敏度低低中高中中操作簡便性中低中高低中設(shè)備需求低低中中高高每個(gè)反應(yīng)可檢測(cè)位點(diǎn)數(shù)1-511-51-5多15-30所需反應(yīng)數(shù)2-53-63-62-611是否可檢測(cè)部分缺失難難是難是是是否可檢測(cè)部分復(fù)制否否是否是是檢測(cè)成本最低低中低高低檢測(cè)周期低中中低高低EAA/EMQNP公司D公司T公司Y公司MicroRead位點(diǎn)數(shù)6+219+312+26+115+115+4擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)251241DNA需要量-250100-20050-100800-20005-10完全涵蓋EAA/EMQN-是是否否是檢測(cè)部分缺失/復(fù)制否否否否否是檢測(cè)XXY否否否否否是產(chǎn)品信息貨號(hào)產(chǎn)品規(guī)格說明價(jià)格/元MYD01AY微缺失標(biāo)準(zhǔn)試劑盒50次米用多重?zé)晒釶