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文檔簡(jiǎn)介
1、丹參酒的開(kāi)發(fā)(kif)與研究 丹參(dn cn)酒中有效成分的提取與檢測(cè)指導(dǎo)老師:夏道宗 合作(hzu)導(dǎo)師:蔣麗勤(浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,杭州,浙江 310053)摘 要:隨著中國(guó)逐漸步入老齡化社會(huì),以治療中老年人疾病為目的的保健品的開(kāi)發(fā)越來(lái)越多,對(duì)治療心血管疾病療效顯著的丹參酒市場(chǎng)前景廣闊。對(duì)丹參酒進(jìn)行深層的研究與開(kāi)發(fā),改善丹參酒的配方,優(yōu)化丹參酒原料的提取方案,優(yōu)選有效成分的提取與檢測(cè)方案。以水煎煮法提取原料;用HPLC法檢測(cè)提取液中的丹參酮,以丹參酮的提取率為指標(biāo),優(yōu)選最佳的有效成分提取方案。關(guān)鍵詞:丹參酒;丹參素;丹參酮;有效成分提??;有效成分檢測(cè)Development and re
2、search of Salvia wineextraction and detection of active ingredients in Salvia wineDirector:Dan-Zong Xia Associate Director:Li-Qing Jiang(Medical College, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou, China, 310053)Abstract: As China increasingly entered the aging society, development of health care
3、 products to treat diseases of the elderly more and more, Salvia wine treat the cardiovascular disease is efficacy significantly, and market prospect is broad. Conduct deeper research and development of Salvia wine, improve formulations of Salvia wine, optimize the Salvia wine raw materials extracte
4、d program, select the best extraction of active ingredients and detection solution. Use water decoction method extract raw materials; detected by HPLC extract of Tanshinone; as an index to extraction rate of Tanshinone choosing the best program to extract the active ingredients.Key Words:Salvia wine
5、; Danshensu; Tanshinone; extract the active ingredients; detection of active ingredients引 言現(xiàn)階段對(duì)于丹參酒的研究(ynji)還是以丹參浸泡制作藥酒為主,并沒(méi)有具體的配方,而且只有丹參一味中藥。雖然也有丹參(dn cn)酒的中藥方劑,但是口感并不好,不能大范圍推廣。本文將確定(qudng)一個(gè)新的丹參酒的配方,并優(yōu)選提取液的有效成分提取方案,然后進(jìn)行有效成分檢測(cè)。隨著人口老齡化愈演愈烈,對(duì)防治冠心病等老年性疾病的研究越來(lái)越重要,所以針對(duì)于老年人產(chǎn)品開(kāi)發(fā)前景相當(dāng)好。1丹參酒的開(kāi)發(fā)與研究1.1 丹參酒的配方確
6、定1.1.1丹參酒原料(1)丹參是一種中藥。性味苦,微寒。歸心、肝經(jīng)。有祛瘀止痛,活血通經(jīng),清心除煩之功效(2)三七:甘微苦,溫。功效:止血,散瘀,消腫,定痛。(3)甘草:味甘平。主五臟六府寒熱邪氣,堅(jiān)筋骨,長(zhǎng)肌肉,倍力,金創(chuàng),解毒。(4)玉竹:養(yǎng)陰,潤(rùn)燥,除煩,止渴。治熱病陰傷,咳嗽煩渴,虛勞發(fā)熱,消谷易饑,小便頻數(shù)。(5)山楂:酸甘,微溫。功效:消食積,散瘀血,驅(qū)絳蟲:,消食健胃,行氣散瘀。1.1.2丹參酒配方丹參15g 三七5g 甘草3g 山楂5g 玉竹3g 白酒250g1.2 丹參中丹參酮提取與檢測(cè)1.2.1丹參酮提取方案優(yōu)化有關(guān)丹參中丹參酮提取方法通常有:1超聲波提取、加熱回流提取和
7、組織破碎提??;2超臨界CO2流體萃取。檢測(cè)方法通常有:高效液相色譜法;3超高效液相色譜法;紫外法;薄層色譜法。4選定方法:以丹參酮A 和隱丹參酮為指標(biāo),用HPLC法分析測(cè)定,考察不同提取方式、不同溶劑對(duì)丹參酮提取率的影響,再進(jìn)行正交試驗(yàn),進(jìn)一步優(yōu)選提取條件。1.2.2儀器(yq)與試劑LC-10ATvp色譜(s p)泵,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,7725i型進(jìn)樣器和SPD-10Avp紫外檢測(cè)器,恒溫水浴鍋,ANASTER色譜工作站。試劑(shj):丹參酮A 和隱丹參酮對(duì)照品;雙蒸去離子水;將丹參等中藥材研磨粉碎后備用;色譜純甲醇。1.2.3方法與結(jié)果(1)4對(duì)照品溶液制備:精密稱定丹參酮A 和隱丹參酮對(duì)照品
8、5mg,置于10ml容量瓶中,用甲醇溶解后,定容至刻度線,搖勻。精密量取該溶液1ml,稀釋到10ml作為對(duì)照品,放置于冰箱內(nèi)備用。(2)色譜條件:色譜柱Kromasil C18(150mm*4.6mm,5m),流動(dòng)相:75%甲醇溶液,流速:1mLmin-1,檢測(cè)波長(zhǎng):270nm。在此條件下測(cè)得藥材粉末以及丹參酮A 和隱丹參酮對(duì)照品的色譜圖如圖1-1。圖1-1圖1-1中 藥材粉末色譜圖(A)和丹參酮A 和隱丹參酮對(duì)照品色譜圖(B)1. 隱丹參酮 2. 丹參酮A1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別配制不同濃度的對(duì)照品溶液,在上述條件下測(cè)定,進(jìn)樣量為10L。以丹參酮A 和隱丹參酮進(jìn)樣量(X)對(duì)峰面積(Y)進(jìn)
9、行線性擬合,丹參酮A 和隱丹參酮回歸方程分別為:Y=451.8X-13.5 r=0.9990Y=310.1X-14.2 r=0.9989結(jié)果隱丹參酮和丹參酮A在23mg2.3g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。1.2.5提取溶劑選擇精密稱取藥材細(xì)粉0.2g,分別加入一定體積的5種不同溶劑(甲醇、乙醇、80%乙醇、70%乙醇、60%乙醇),超聲提取30min。靜置12h,過(guò)濾,定容至10ml,離心后過(guò)濾,取濾液10g進(jìn)行上述檢測(cè),分析隱丹參酮和丹參酮A含量(表1)。結(jié)果表明:80%乙醇溶液和甲醇溶液作溶劑提取率較高,考慮實(shí)際情況,選擇80%乙醇溶液作為提取溶劑。表1 溶劑選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果提取溶劑隱丹參酮含量/mg
10、g-1丹參酮A含量/mgg-1乙醇1.461.30甲醇1.471.3560%乙醇1.401.2970%乙醇1.431.3380%乙醇1.511.351.2.6提取方式(fngsh)選擇精密(jngm)稱取藥材細(xì)粉0.2g,用80%乙醇溶液作為溶劑,分別用4種提取(tq)方式提取,過(guò)濾,定容至10ml。離心過(guò)濾后,吸取濾液10g進(jìn)行上述檢測(cè),分析隱丹參酮和丹參酮A含量(表2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,回流提取1h和5超聲提取,提取率較高。根據(jù)實(shí)際情況,還是選擇回流提取1h表2 提取方式選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果提取方法隱丹參酮含量/mgg-1丹參酮A含量/mgg-1放置過(guò)夜1.201.00回流提取1h1.351.222
11、h1.321.223h1.301.20索式提取1.351.30超聲提取30min1.311.2960min1.401.2590min1.401.291.2.7正交實(shí)驗(yàn)6用80%乙醇回流進(jìn)行實(shí)驗(yàn),取藥材細(xì)粉20g,采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)回流時(shí)間,回流次數(shù),提取溶劑量進(jìn)行研究(表3。將提取液定容,7用高效液相色譜法測(cè)隱丹參酮和丹參酮A含量,計(jì)算提取率(表4)。表3 因素水平表水平溶劑量/Vg-1回流次數(shù)/n回流時(shí)間/h1510.5h2621h3731.5h表4 正交實(shí)驗(yàn)表序號(hào)因素隱丹參酮含量丹參酮A含量ABC/mgg-1/mgg-111110.8880.76821221.3901.33431331.40
12、01.44742120.9450.92052231.5811.50162311.4991.39273131.3691.30283211.4861.42593321.4641.3711.2.8正交實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果分析8隱丹參酮和丹參酮A提取率為指標(biāo),將表4進(jìn)行方差分析,即用7倍量80%乙醇回流(hu li)2次,每次2h,提取效果最佳。2討論(toln)通過(guò)實(shí)驗(yàn),優(yōu)化了丹參酒的配方,使其對(duì)心血管疾病的效果更顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HPLC法測(cè)定丹參酒中丹參酮含量的靈敏度和準(zhǔn)確度較高,操作簡(jiǎn)便。9用甲醇和乙醇作為提取溶劑丹參酮的提取率較高,根據(jù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況,選用80%乙醇溶液作為提取溶劑。通過(guò)正
13、交實(shí)驗(yàn)確定了最佳回流時(shí)間,回流次數(shù),提取溶劑量。結(jié)果表明,10當(dāng)提取溶劑量超過(guò)7倍后,提取量無(wú)明顯差異,綜合考慮,選用7倍量進(jìn)行提取。而最佳回流時(shí)間為2h,回流次數(shù)為2次。參考文獻(xiàn)1 畢躍峰, 賈陸, 張小娟, 等. 不同提取方法對(duì)丹參中丹參酮 A 和丹酚酸 B 含量測(cè)定的影響J. 藥物分析雜志, 2009 (7): 1209-1212.2 蘇子仁, 葛發(fā)歡. 應(yīng)用 SFECO2 提取丹參脂溶性有效成分工藝研究J. 中成藥, 1998, 20(8): 1-2.3 閆豫君, 楊廣德. RPHPLC 法同時(shí)測(cè)定丹參中丹參酮 A 和隱丹參酮的含量J. 中草藥, 2002, 33(4): 363-36
14、5.4 楊廣德, 張繼業(yè), 張莉, 等. 丹參中丹參酮 A 和隱丹參酮的提取方法研究J. 藥物分析雜志, 2007, 26(12): 1807-1810.5 郭孝武, 沈志剛. 超聲提取對(duì)丹參藥材中脂溶性成分的影響J. 陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2007, 35(3): 48-51.6 胡廣林, 王小如, 黎先春. 回流提取過(guò)程中丹參酮的熱降解行為研究J. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 2007, 19(1): 120-122.7 任志會(huì), 蘇會(huì)霞, 柏艷柳. 丹參脂溶性及水溶性成分集成提取工藝研究 JJ. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志, 2009, 16(3): 54-56.8 Pan X, Niu
15、G, Liu H. Microwave-assisted extraction of tanshinones from Salvia miltiorrhiza bunge with analysis by high-performance liquid chromatographyJ. Journal of Chromatography A, 2001, 922(1): 371-3759儲(chǔ)茂泉, 劉國(guó)杰. 中藥提取過(guò)程的動(dòng)力學(xué)J. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2002, 37(7): 559-562.10 Shi Z, He J, Yao T, et al. Simultaneous determinatio
16、n of cryptotanshinone, tanshinone I and tanshinone IIA in traditional Chinese medicinal preparations containing Radix salvia miltiorrhiza by HPLCJ. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 2005, 37(3): 481-486.致謝(zh xi)在兩個(gè)月多的修改(xigi)下,終于完成了這篇論文,期間遇到了許許多多的問(wèn)題與困難,都在老師和同學(xué)的幫助(bngzh)下,順利的解決了。也要感謝我的導(dǎo)師夏老師,耐心的幫助我解決論文中的問(wèn)題,不斷的幫助我進(jìn)行
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