四核酸提取及鑒定

1、動(dòng)物組織中核酸的提取及其組成成分的鑒定生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) CQMU1【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私獗緦?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路學(xué)習(xí)離心技術(shù)，掌握離心機(jī)的正確使用2【實(shí)驗(yàn)思路】動(dòng)物肝組織核酸水解核酸核酸沉淀物糖、磷酸、堿基分別鑒定3 生物大分子制備方法的選擇是以生物大分子的性質(zhì)（如分子大小、形狀、溶解度、帶電性質(zhì)等）為依據(jù)，對(duì)于結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同的生物大分子，所選用的分離提純方法也不相同。 生物化學(xué)常用實(shí)驗(yàn)手段：比色、層析、電泳和離心四大技術(shù)?！緦?shí)驗(yàn)原理】4【實(shí)驗(yàn)原理】一、動(dòng)物細(xì)胞中核酸的存在形式二、核酸分離 肝勻漿 三氯醋酸沉淀出核蛋白 95%乙醇加熱除去附著在沉淀上的脂類(lèi)雜質(zhì)5【實(shí)驗(yàn)原理】10%氯化鈉從核蛋白中分

2、離出核酸(鈉鹽形式) 乙醇沉淀核酸鈉三、核酸水解 核酸（DNA+RNA） 硫酸 堿基（嘌呤、嘧啶）+戊糖（核糖、脫氧核糖） +磷酸6【實(shí)驗(yàn)原理】四、鑒定1磷酸：用鉬酸銨與之作用可生成磷鉬酸，磷鉬酸可被氨 基奈酚磺酸還原形成藍(lán)色鉬藍(lán)。2戊糖 核糖：用硫酸使之生成糠醛，糠醛與3,5-二羥甲苯縮合而成為一綠色化合物： 7【操作】1.制備勻漿 豬肝2.分離抽提肝勻漿倒入刻度離心管4ml立即加入2%三氯醋酸4ml攪勻攪勻后離心（3000轉(zhuǎn)/分，3分鐘）傾去上清液，沉淀中加入95%乙醇4ml攪勻在沸水浴中加熱至沸2分鐘取出流水冷卻后離心（3000轉(zhuǎn)/分，3分鐘）8傾去上層酒精液，離心管倒置于濾紙上，倒干乙

3、醇沉淀物中再加入10%NaCl溶液4ml攪勻再置于沸水浴中加熱5分鐘，用玻棒不斷攪拌取出流水冷卻后再離心（3000轉(zhuǎn)/分，3分鐘）將上清液倒入小燒杯內(nèi)取等量95%乙醇，逐滴加入小燒杯白色沉淀物，靜置2分鐘，轉(zhuǎn)入離心管再離心（3000轉(zhuǎn)/分，5分鐘）傾去上清液，即得到核酸鈉的白色沉淀93.核酸水解含有核酸離心管加入5%H2SO4溶液3ml用玻棒攪勻，在沸水中加熱8-10分鐘核酸水解液104.RNA和DNA成分鑒定1）磷酸的鑒定：試劑（滴）水解液5硫酸鉬酸銨試劑氨基萘酚磺酸觀察變化測(cè)定管101020沸水浴加熱至變色對(duì)照管101020112.核糖的鑒定試劑（滴）水解液5硫酸3、5二羥甲苯觀察變化測(cè)定管106沸水浴加熱至變色對(duì)照管10612離心機(jī)使用注意事項(xiàng)：1.記住離心管編號(hào)；2.離心管必須先平衡后才對(duì)稱(chēng)放入離心機(jī)；3.避免