食品安全快速檢測(cè)技術(shù)(2)

1、生物技術(shù)-免疫學(xué)技術(shù)基本概念抗原（antigen） 進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)能刺激動(dòng)物的免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，從而引起動(dòng)物產(chǎn)生抗體或形成致敏淋巴細(xì)胞，并能和抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì) 分完全抗原和半抗原抗體(antibody)： 抗原刺激動(dòng)物免疫系統(tǒng)，由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生分泌的能和相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白第三章整理ppt免疫學(xué)技術(shù)-抗原抗體反應(yīng)可對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測(cè)抗體抗原以非共價(jià)鍵結(jié)合不可見(jiàn)反應(yīng)：幾秒-幾分鐘 可見(jiàn)反應(yīng)：數(shù)分鐘（小時(shí)、日）影響因素 電解質(zhì) 溫度 酸堿度第三章整理ppt免疫學(xué)技術(shù)酶聯(lián)免疫法放射免疫法 將同位素分析的靈敏性和抗體抗原反應(yīng)的特異性這兩大特點(diǎn)結(jié)合

2、起來(lái)的免疫標(biāo)記測(cè)定技術(shù) 缺點(diǎn)：需特殊儀器設(shè)備; 一定的防護(hù)條件; 半衰期短及試驗(yàn)廢物難以處理熒光免疫法 以熒光素和羅丹明作為標(biāo)記物，可在熒光顯微鏡下檢查顯示熒光的復(fù)合物和所在部位 主要用于醫(yī)學(xué)實(shí)踐中各類病原微生物的快速診斷以及組織切片中特異抗體的檢測(cè)其他 膠體金標(biāo)記第三章整理ppt酶聯(lián)免疫法（enzyme immunoassay)以酶標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗體抗原反應(yīng)酶結(jié)合物應(yīng)具有雙功能： 高度特異的免疫反應(yīng)、生物催化放大作用基本方法 間接法 雙抗體夾心法 競(jìng)爭(zhēng)法生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidin system，BAS）某些新進(jìn)展整理ppt酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked i

3、mmunosorbent assay）間接法1、將已知可溶性抗原吸附于載體2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗體的待檢液4、溫育后清洗5、加入酶標(biāo)記的二抗6、溫育后清洗7、加入酶作用底物8、測(cè)定反應(yīng)顏色深淺整理ppt雙抗體夾心法1、將已知抗體吸附于載體上2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗原的待檢液4、溫育后清洗5、加入酶標(biāo)記特異性抗體6、溫育后清洗7、加入酶作用底物8、測(cè)定顏色反應(yīng)深淺酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）整理ppt競(jìng)爭(zhēng)法1、將已知抗體吸附于載體上2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗原的待檢液和酶標(biāo)記的已知抗原液4、溫育后清洗5、加

4、入酶作用底物6、測(cè)定顏色反應(yīng)深淺酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）整理ppt生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidin system）基本概念 生物素：是一種維生素H，經(jīng)活化后，可與抗體、抗原、酶以多 配一的方式共價(jià)結(jié)合，且不影響它們的活性 親和素：從卵蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，可與酶偶合，以1配多的方式對(duì)生物素有很強(qiáng)的親和力BAS用于檢測(cè)的基本方法： BAB法或BRAB法 BA法 ABC法酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）整理ppt酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosor

5、bent assay）整理ppt均相酶免疫測(cè)定法 無(wú)需“固定在載體上”；無(wú)需“溫育后清洗”斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn) 以微孔薄膜為載體，酶免疫反應(yīng)陽(yáng)性結(jié)果在膜上出現(xiàn)色斑點(diǎn) 膠體金標(biāo)記較酶標(biāo)記更為簡(jiǎn)便酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）整理ppt豬肉和尿液鹽酸克倫特羅的免疫膠體金法快速檢測(cè)整理ppt “瘦肉精”學(xué)名為鹽酸克倫特羅，醫(yī)學(xué)上又稱克喘素，常用于治療哮喘。 由于鹽酸克倫特羅添加于飼料飼喂動(dòng)物后可明顯促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng),提高 瘦肉率, 所以養(yǎng)殖戶稱其為“瘦肉精”，曾在國(guó)內(nèi)外廣泛用于動(dòng)物飼養(yǎng) 生豬食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，個(gè)別會(huì)出現(xiàn)腿抽搐，站不 穩(wěn)，爬坡困

6、難；宰后豬的肌肉特別鮮紅，后臀肌肉飽滿，肥肉非常薄瘦肉精介紹整理ppt瘦肉精介紹“瘦肉精”化學(xué)性質(zhì)特別穩(wěn)定，加熱到170時(shí)才能被分解，故一般家庭廚房加熱不能將其分解破壞食用后在胃腸道吸收快，作用維持時(shí)間持久。中毒后主要癥狀表現(xiàn)為頭疼、頭暈、心悸、心慌、面色潮紅、四肢發(fā)抖等癥狀 違法者使用該物質(zhì)以提高豬的瘦肉率和顏色鮮艷程度，不知情的市民 錯(cuò)誤地認(rèn)為這樣的肉才是“好肉”而特別喜歡選購(gòu)整理ppt 食品衛(wèi)生法食品添加劑衛(wèi)生管理辦法（GB2760）動(dòng)物性食品中獸藥殘留最高限量（農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)， 2002年12月24日）規(guī)定：禁用藥物，動(dòng)物性食品中不得檢出： 瘦肉精、沙丁胺醇、西馬特羅等31種 違

7、法者的法律責(zé)任：民事賠償、行政處罰、刑事處罰法律規(guī)定整理ppt鹽酸克倫特羅殘留檢測(cè)方法 動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定 （GB5009.192-2003） 第一法：氣相色譜質(zhì)譜法，檢出限：0.5ppb 第二法：高效液相色譜法，檢出限：0.5ppb 第三法：酶聯(lián)免疫法（ELISA篩選法） ，檢出限：0.5ppb 動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的測(cè)定氣相色譜/質(zhì)譜法 （NY/T 4682006），檢出限：2.0ppb 動(dòng)物尿液中鹽酸克倫特羅的測(cè)定氣相色譜/質(zhì)譜法 （NY/XQ 4212003），檢出限：1.0ppb尿液中鹽酸克侖特羅的測(cè)定膠體金免疫層析法 （NY/T933-2005），檢出限：3.0pp

8、b 整理ppt豬肉全程監(jiān)控中瘦肉精檢測(cè)方法的選擇生豬飼養(yǎng)屠宰場(chǎng)大型批發(fā)市場(chǎng)零售市場(chǎng)飼料檢測(cè)豬尿檢測(cè)豬尿檢測(cè)豬肉檢測(cè)豬肉檢測(cè)豬肉檢測(cè)酶聯(lián)免疫法免疫膠體金免疫膠體金酶聯(lián)免疫法免疫膠體金篩檢陽(yáng)性GC-MS確認(rèn)大型儀器確認(rèn)政府部門監(jiān)督抽檢GC-MS餐飲業(yè)豬肉檢測(cè)免疫膠體金銷毀和溯源陽(yáng)性GC-MS確認(rèn)大型儀器確認(rèn)陽(yáng)性整理ppt免疫膠體金快速檢測(cè)板的外觀圖整理ppt 免疫膠體金快速檢測(cè)板(試劑)的結(jié)構(gòu)圖整理ppt檢測(cè)原理鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試劑板的中央膜面上固定有兩條隱形線，克倫特羅抗原固定在測(cè)試區(qū)作為檢測(cè)線（T線），二抗固定在質(zhì)控區(qū)作為對(duì)照線（C線）。當(dāng)待檢樣品溶液滴入試劑板加樣孔后，樣品溶液因?qū)游鲎饔?/p>

9、往上擴(kuò)散。如果樣品溶液含有相應(yīng)藥物的殘留，藥物將和膠體金顆粒上的抗體先行反應(yīng)，因此當(dāng)膠體金顆粒隨樣品溶液擴(kuò)散至T線時(shí)，膠體金顆粒上抗體活性位點(diǎn)將因被樣品溶液中的藥物占據(jù)而無(wú)法與T線上藥物抗原結(jié)合；所以當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量1ppb(檢測(cè)限)以上時(shí)，試劑板上的T線將較C線顯色淡或甚至無(wú)顯色，判定為陽(yáng)性。反之，當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量在1ppb以下或無(wú)殘留時(shí)，試劑板上的T線顯色與C線相近或偏深，判定為陰性整理ppt靈敏度 肉樣或組織樣：1ppb(標(biāo)準(zhǔn)前處理)或5ppb（簡(jiǎn)單前處理） 尿樣： 1ppb(標(biāo)準(zhǔn)前處理)特異性：與沙丁胺醇等苯乙胺類藥物沒(méi)有交叉反應(yīng)；準(zhǔn)確性：與瘦肉精ELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果符合率90有效期：半年（冷藏閉光保存）膠體金免疫層析法檢測(cè)瘦肉精的技術(shù)指標(biāo)整理ppt操作步驟 于5ml離心管中加入5g左右剪碎或是高速勻漿過(guò)的豬肉組織樣，蓋緊管蓋 1 將裝有樣品的離心管在90以上水浴鍋中加熱10 分鐘 加熱完成后取出冷卻至室溫；可以明顯看到底部有溶液滲出32 吸取3滴（約100