免疫學應(yīng)用（91頁）

1、免疫學應(yīng)用應(yīng)用免疫學理論闡明有關(guān)疾病的發(fā)病機制和發(fā)展規(guī)律應(yīng)用免疫學原理和技術(shù)來診斷和防治疾病本章介紹 -常見的免疫學防治方法和常見的免疫學檢測技術(shù) 2021/4/261內(nèi)容提要第一節(jié) 免疫防治第二節(jié) 免疫學診斷第三節(jié) 移植免疫2021/4/262獲得性免疫接種的方式 哪些方式應(yīng)用于哪些情況 不同方式免疫接種的優(yōu)缺點 免疫接種的風險和益處 血清學反應(yīng)2021/4/263第一節(jié) 免疫學防治概念：是指利用免疫學原理，達到防病和治病目的所采取的措施，包括免疫預(yù)防和免疫治療。免疫預(yù)防：利用各種生物或非生物制劑來建立機體的免疫應(yīng)答，以達到預(yù)防疾病的目的。免疫治療：指應(yīng)用免疫學原理，針對疾病的發(fā)生機制，人為

2、地調(diào)整機體的免疫功能，以達到治療目的所采取的措施。2021/4/264一、 免疫預(yù)防免疫接種是一種對常見的和致病的病原提供特異性的保護作用 。特異性免疫獲得方式：自然免疫、人工免疫根據(jù)特異性免疫應(yīng)答的原理，采用人工方法將Ag/Ab制成各種制劑，接種于人體，使其產(chǎn)生/獲得特異性免疫力，達到預(yù)防某些疾病的目的。(人工主動/人工被動免疫)人工主動免疫：用疫苗或類毒素等抗原接種機體，使機體主動產(chǎn)生特異性免疫力，從而預(yù)防感染的措施。人工被動免疫：用抗體或細胞因子等制劑，使機體被動得特異性免疫，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。2021/4/265特異性免疫類型自然免疫人工免疫自然主動免疫：自然感染自然被動免疫

3、：母體抗體通過胎盤（IgG）或 初乳（SIgA）輸給嬰兒人工主動免疫：接種疫苗、類毒素人工被動免疫：注射動物免疫血清、胎盤球 蛋白、轉(zhuǎn)移因子等2021/4/266人工主動免疫常用生物制劑1死疫苗（滅活疫苗）是選用免疫原性強的病原體，經(jīng)理化方法使其失去活力制備而成的疫苗。如傷寒菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌、鉤端螺旋體、流感病毒、狂犬病病毒、乙腦病毒疫苗均為滅活疫苗。2減毒活疫苗是用減毒或無毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。3類毒素：外毒素0.3-0.4%甲醛 類毒素，如百白破三聯(lián)疫苗。4 新型疫苗 1）亞單位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBS

4、Ag 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 （無需培養(yǎng)微生物，可大量生產(chǎn)，無致癌、返祖的危險性） 3）基因工程疫苗 編碼免疫原基因載體體內(nèi) 酵母菌、大腸桿菌（體外培養(yǎng)）如：重組抗原疫苗、重組載體疫苗、DNA疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗2021/4/267種類死疫苗活疫苗制劑特點滅活，毒強株活，弱毒或無毒株接種途徑多采取皮下注射多為模擬自然感染途徑、少數(shù)經(jīng)皮下注射制品類型可多種疫苗混合使用一般單獨使用接種量及次數(shù)用量大，2-3次（間隔7-10天）用量小，1次保存及有效期易保存，穩(wěn)定，有效期約1年不易保存，穩(wěn)定性差，4數(shù)周免疫效果較差，維持數(shù)月-2年較好，維持3-5年甚至更長時間副作用較大,但無毒力回復(fù)突變較

5、小,但有毒力回復(fù)突變滅活疫苗與減毒疫苗比較2021/4/268分類獲準使用的疫苗研制中的疫苗細菌性疫苗活疫苗卡介苗口服霍亂疫苗、口服痢疾疫苗、口服傷寒疫苗（Ty21;vi-突變株）滅活疫苗霍亂、百日咳、傷寒、鉤端螺旋體疫苗口服霍亂疫苗+霍亂毒素B亞單位、麻風疫苗亞單位疫苗流感桿菌、腦膜炎球菌、肺炎球菌疫苗傷寒疫苗（ vi-攜帶者）DNA疫苗結(jié)核桿菌DNA疫苗類毒素破傷風、白喉病毒性疫苗活疫苗牛痘、麻疹、腮腺炎、風疹、水痘、黃熱病疫苗，脊髓灰質(zhì)炎疫苗（Sabin），腺病毒疫苗，流感病毒、登革病毒、乙型腦炎病毒疫苗、輪狀病毒疫苗滅活疫苗脊髓灰質(zhì)炎（Salk）、狂犬病、乙型腦炎、流感疫苗甲型肝炎苗亞

6、單位疫苗乙型肝炎疫苗流感疫苗HIV、乙型/丙型肝炎病毒、流感病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒DNA疫苗狂犬病毒DNA病毒疫苗制劑及其研究現(xiàn)狀 2021/4/269 毒素 類毒素 化學修飾 毒素基團 抗原決定基 化學修 飾 當致病作用是由毒素引起的，可把毒素處理為類毒素作為疫苗，如白喉，破傷風和霍亂等。2021/4/26109、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022/7/152022/7/15Friday, July 15, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022/7/152022/7/152022/7/157/15/2022 7:56:24 PM11、人總是珍惜為得到。2022/

7、7/152022/7/152022/7/15Jul-2215-Jul-2212、人亂于心，不寬余請。2022/7/152022/7/152022/7/15Friday, July 15, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022/7/152022/7/152022/7/152022/7/157/15/202214、抱最大的希望，作最大的努力。15 七月 20222022/7/152022/7/152022/7/1515、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。七月 222022/7/152022/7/152022/7/157/15/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022/

8、7/152022/7/1515 July 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022/7/152022/7/152022/7/152022/7/15我國兒童計劃免疫程序年齡疫苗年齡疫苗出生時BCG，乙肝疫苗（第1針）6個月乙肝疫苗（第3針）1個月乙肝疫苗（第2針）8個月麻疹疫苗（初種）2個月三價脊灰疫苗（初服）1.5歲三價脊灰疫苗（加服），百白破（加強）3個月三價脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第1針）4歲三價脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗（復(fù)種）4個月三價脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第2針）7歲BCG（復(fù)種），麻疹疫苗（復(fù)種），百白破（加強）5個月百白破（第3針）12歲BCG（農(nóng)村）2

9、021/4/26129、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022/7/152022/7/15Friday, July 15, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022/7/152022/7/152022/7/157/15/2022 7:56:24 PM11、人總是珍惜為得到。2022/7/152022/7/152022/7/15Jul-2215-Jul-2212、人亂于心，不寬余請。2022/7/152022/7/152022/7/15Friday, July 15, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022/7/152022/7/152022/7/152022/

10、7/157/15/202214、抱最大的希望，作最大的努力。15 七月 20222022/7/152022/7/152022/7/1515、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。七月 222022/7/152022/7/152022/7/157/15/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022/7/152022/7/1515 July 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022/7/152022/7/152022/7/152022/7/15人工主動免疫的注意事項接種對象接種劑量、次數(shù)和間隔時間接種途徑接種后反應(yīng)禁忌癥2021/4/2614人工被動免疫生物制品抗毒素：外/

11、類毒素馬Ab人丙種球蛋白：人血漿丙種球蛋白和胎盤球蛋白細胞因子單抗/基因工程抗體人工被動免疫注意事項注意防止超敏反應(yīng)早期和足量不濫用丙球被動免疫不能激活免疫系統(tǒng)，所以，不能產(chǎn)生記憶反應(yīng)，其保護作用是短暫的。!2021/4/2615馬血清抗毒素的兩重性：2、異種抗原，可刺激機體產(chǎn)生抗馬血清抗體。1、特異性抗體-中和毒素2021/4/2616人工主動免疫與人工被動免疫的比較人工主動免疫人工被動免疫輸入物質(zhì)抗原（疫苗、類毒素）抗體(抗毒素、丙種球蛋白)、活化的淋巴細胞、細胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫力出現(xiàn)時間慢（23周）快（注射即生效）免疫力維持時間較長，數(shù)月數(shù)年較短，23周用途多用于預(yù)防多用于

12、治療或緊急預(yù)防，調(diào)節(jié)機體免疫功能，治療腫瘤2021/4/2617二、免 疫 治 療概念：指針對機體低下或亢進的免疫狀態(tài)，人為地增強或抑制機體的免疫功能達到治療疾病的治療方法。用于免疫治療的制劑：抗體、細胞因子及其拮抗劑、免疫細胞、免疫增強劑和免疫抑制劑。分類（作用機制）： 1、被動免疫治療 被動增強：抗體、免疫效應(yīng)細胞、小分子免疫肽 間接作用：過繼免疫 2、免疫增強療法 免疫抑制療法2021/4/26181. 免疫缺陷 （Deficiency） ：先天或后天B細胞缺陷導(dǎo)致的抗體合成障礙或合并其他免疫缺陷。2. 易感人群接觸或可能接觸某種疾病，而時間不允許主動免疫產(chǎn)生足夠的保護作用。3. 疾病已

13、經(jīng)存在，抗體起改善和幫助抑制毒素作用，如破傷風。下列情況需應(yīng)用被動免疫：2021/4/2619（一）采用治療性疫苗進行的免疫治療1微生物抗原疫苗：人類的許多腫瘤與微生物感染有關(guān)。2 細胞疫苗：包括腫瘤細胞疫苗、基因修飾的瘤苗、樹突狀細胞疫苗等。細胞疫苗可增強機體的免疫應(yīng)答效應(yīng)。3 分子疫苗：合成肽疫苗、重組載體疫苗和DNA疫苗可作為腫瘤和感染性疾病的治療性疫苗。2021/4/2620（二）采用抗體進行的免疫治療免疫血清（1）抗毒素血清：主要用于治療和緊急預(yù)防外毒素所致的疾病。常用的有白喉抗毒素，破傷風抗毒素等。但由于 馬血清是異種蛋白，使用過程中有可能發(fā)生血清病或血清過敏性體克。（2）胎盤（丙

14、種）球蛋白：胎盤球蛋白是從健康婦女胎盤中提取的。若來自正常人血清，則稱為人血清丙種球蛋白。這些制劑主要用于預(yù)防麻疹、傳染性肝炎等疾病。（3）抗菌免疫血清：是用細菌免疫動物制成的免疫血清，主要用于該菌引起病癥的防治。（4）抗病毒免疫血清：是由病毒免疫產(chǎn)生的血清，現(xiàn)有抗麻疹免疫血清、抗狂犬病免疫血清、抗乙型腦炎免疫血清等。主要用于病毒性疾病的緊急預(yù)防和治療。（5）抗淋巴細胞丙種球蛋白：是用T淋巴細胞免疫動物制成的免疫血清，可抑制T細胞的作用。主要用于治療某些自身免疫性疾病或器官移植時治療排斥反應(yīng)。2021/4/2621 （二）采用抗體進行的免疫治療 2單克隆抗體（McAb）：主要用于檢測各種抗原分

15、子和微量物質(zhì)?；蜻B結(jié)抗腫瘤藥物、放射性核素用于腫瘤的定位治療和診斷。但目前所用McAb多為鼠源性的，用于人體后，機體會產(chǎn)生抗鼠源McAb的抗體，減弱其療效。 3基因工程抗體：這類型抗體具有更佳的生物學活性，且去除了鼠源性等不良因素。更具有免疫原性低、分子量小、穿透力強、容易進入局部等優(yōu)點。腫瘤特異性McAb（免疫導(dǎo)向療法）2021/4/2622（三）采用細胞因子及其拮抗劑進行的免疫治療 1.細胞因子補充和添加療法：常應(yīng)用重組細胞因子作為生物應(yīng)答調(diào)變劑治療腫瘤、感染、造血障礙等疾病。 2.細胞因子阻斷和拮抗療法：主要用于治療自身免疫性疾病、移植排斥、感染性體克等。 3.細胞因子基因療法：將細胞因

16、子或其受體基因?qū)塍w內(nèi)，使其在體內(nèi)持續(xù)表達并發(fā)揮治療效應(yīng)。目前多項基因療法用于治療惡性腫瘤、感染、自身免疫性疾病。2021/4/26232021/4/2624（四）采用過繼免疫治療和造血干細胞移植進行的免疫治療 1.過繼免疫：將供體的淋巴細胞或淋巴因子轉(zhuǎn)移給受者，以增強機體的免疫功能。如取腫瘤患者自體免疫效應(yīng)細胞（包括CTL、NK細胞、巨噬細胞、淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）、腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL） 等）經(jīng)體外激活、增殖后回輸給患者，主要用于治晚期腫瘤。 活化的免疫細胞（供者/自身） 2.造血干細胞移植：是指用患者自身造血干細胞移植或健康人的造血干細胞移植回輸給患者,讓干細胞進入患者體內(nèi)

17、定居、分化、增殖，使患者恢復(fù)造血能力和免疫力。包括自體骨髓移植、異種骨髓移植和臍血干細胞移植。主要用于治療免疫缺陷病、再生障礙性貧血及白血病等。2021/4/2625免疫重建定義：將免疫功能正常個體的造血干細胞或淋巴干細胞，移植給免疫缺陷個體，使后 者的造血能力、免疫功能全部或部分得 到恢復(fù)。方法：骨髓移植、臍血干細胞移植作用：治療免疫缺陷病、白血病、再障2021/4/2626 （五）采用免疫增強劑進行的免疫治療免疫因子：有轉(zhuǎn)移因子和免疫核糖核酸化學合成藥物：左旋咪唑TNK，西咪替丁Ts微生物制劑：有卡介苗和短小棒狀桿菌MCK 中藥制劑：如香菇、靈芝、黃芪、人參、刺五加 等 上述免疫增強劑能非

18、特異增強機體免疫功能，作為惡性腫瘤、免疫缺陷病、傳染病的輔助治療。 。2021/4/2627（六）采用免疫抑制劑進行的免疫治療細胞毒藥物：環(huán)磷酰胺（CTX）、氨甲喋呤激素及抗淋巴細胞抗體：影響抗原識別、處理、遞呈真菌代謝產(chǎn)物：如環(huán)孢素A(CsA)、FK-506等傳統(tǒng)中藥：如雷公藤多甙 免疫抑制劑用人工方法減弱或抑制對機體不利的免疫應(yīng)答，主要用于抗器官移植排斥反應(yīng)及自身免疫性疾病。方法是采用免疫抑制劑、放射線照射等。2021/4/2628第二節(jié) 免疫學診斷利用免疫學原理建立的免疫學檢測技術(shù)主要應(yīng)用于對多種免疫性疾?。ǜ腥拘约膊?、免疫缺陷病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反應(yīng)和腫瘤等）

19、的診斷、療效評估、發(fā)病機制探討、以及對抗原性物質(zhì)或免疫細胞的定性、定量，對細胞因子、粘附分子及細胞受體的檢測等。檢測抗原和抗體的體外實驗免疫細胞的測定2021/4/2629檢測抗原和抗體的體外實驗1抗原抗體檢測原理 抗原抗體特異性結(jié)合 檢測。2血清學反應(yīng)(血清學實驗)：體外的抗原抗體反應(yīng)。3抗原抗體反應(yīng)的特點特異性：抗原-抗體的結(jié)合。 可逆性：抗原抗體結(jié)合是分子表面的非 共價鍵結(jié)合。比例性：抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見的反應(yīng)現(xiàn)象，于兩者的分子比例密切相關(guān)。階段性：抗原抗體反應(yīng)可分為兩個階段 特異性結(jié)合階段 可見的反應(yīng)階段2021/4/2630抗原抗體比例對反應(yīng)現(xiàn)象的影響2021/4/2631抗原

20、-抗體反應(yīng)的影響因素1 電解質(zhì)：抗原-抗體反應(yīng)通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為稀釋液 ，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。2 溫度：一般常使用反應(yīng)在37度水浴 或孵育箱中進行。3.酸堿度：抗原-抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度 為PH68。2021/4/2632抗原抗體反應(yīng)又稱血清學反應(yīng)，主要有：1、凝集反應(yīng)2、沉淀反應(yīng)3、免疫標記技術(shù)常見抗原抗體反應(yīng)的種類2021/4/2633經(jīng)典血清學反應(yīng)的種類類型 抗原 抗體 輔助物 敏感度（ g抗體氮）凝集反應(yīng) 顆粒性 凝集素 0.01沉淀反應(yīng) 可溶性 沉淀素 5-10溶血（菌） 紅細胞 溶血素 補體 0.001-0.3反應(yīng) G-細菌 溶菌素 補體 （同上）補體結(jié)合 固定補

21、補體反應(yīng) 體抗體 SRBC 溶血素 0.1中和反應(yīng) 外毒素 抗毒素 靶細胞 0.01 病毒 中和抗體 靶細胞 （同上）2021/4/2634凝集反應(yīng)定義：顆粒性抗原+抗體凝集現(xiàn)象（顆粒性抗原：細菌、細胞等）2021/4/26352021/4/2636血 球 凝 集2021/4/2637沉淀反應(yīng)定義：可溶性抗原+抗體沉淀現(xiàn)象（可溶性抗原：血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組織浸液等）沉淀反應(yīng)可在液體中進行，如絮狀沉淀。大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。2021/4/2638單向瓊脂擴散是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當位置打孔后將抗原加入孔中擴散?？乖跀U散過

22、程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關(guān)。本法常用于測定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)2021/4/26392021/4/2640雙向瓊脂擴散 是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性 、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測。2021/4/26412021/4/2642對流免疫電泳是先將待側(cè)血清標本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區(qū)帶，然后與電泳方向平行挖一小槽，加入

23、相應(yīng)的抗血清，把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散，在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。2021/4/26432021/4/2644免疫標記技術(shù)定義：將抗原抗體反應(yīng)與標記技術(shù)相結(jié)合，以檢測抗原或抗體的一類方法。2021/4/2645主要的免疫標記物類別 標記物 用途熒光素 FITC、RB200、TRITC 免疫組化 鑭系元素螯合物 免疫分析測定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析測定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫組化 免疫分析測定化學發(fā)光物 Luminol、lucigenin 免疫分析測定金屬顆粒 膠體金、鐵蛋白

24、免疫組化 免疫分析測定 2021/4/2646是用酶（常用的有辣根過氧化物酶，HRP和堿性磷酸酶，AP) 標記的抗體進行的抗原抗體反應(yīng)。EIA將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。常用的方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA) ：是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法等。測定可溶性抗原或抗體酶免疫組化法：測定組織中或細胞表面的抗原。酶免疫測定(Enzyme Immunoassa

25、y, EIA)2021/4/26472021/4/26482021/4/2649是用熒光素（常用的有異硫氰酸熒光素，F(xiàn)ITC) 與抗體連接成熒光抗體，再與待測標本的抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光，借此對標本中的抗原作鑒定和定位。包括直接熒光法、間接熒光法和補體法。直接熒光法：將熒光素直接標記抗體作標本染色。該法的優(yōu)點是特異性強，但其缺點是每檢測一種抗原必須制備相應(yīng)的熒光抗體。間接熒光法：用一抗與標本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標記的二抗染色。該法的優(yōu)點是敏感性比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗可用于多種抗原的檢測，但非特異性熒光亦會增加。補體結(jié)合免疫熒光法：此法是在間接法

26、的第一步抗原抗體反應(yīng)時加入補體，使之與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合；再用熒光素標記的抗C3抗體進行示蹤。免疫熒光技術(shù)2021/4/26502021/4/2651是以硝酸纖維薄膜為載體吸附抗原，用膠體金標記代替酶標抗體的免疫標記技術(shù)。斑點金免疫層析實驗（一步金法）：HCG免疫膠體金技術(shù)2021/4/2652(Radioimmunoassay, RIA)是用放射性核素標記抗原進行的免疫學檢測技術(shù)。它將放射性核素顯示的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合，使檢測的敏感性達pg水平。常用于標記的放射性核素有I125和I131。常用于胰島素、生長激素、藥物等微量物質(zhì)的測定。放射免疫測定法2021/4/2653 Ag

27、* Ab Ag 標記抗原 特異性抗體 待測抗原( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab 和游離Ag*從標準曲線上讀知含量測定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性 放射免疫測定法(RIA)示意圖2021/4/2654RIA法原理及標準曲線 7550 30 100110100 1000未標記抗原濃度（ng/ml)結(jié)合/未結(jié)合的放射活性（%）2021/4/2655免疫印跡法(Immunoblotting)是將凝膠電泳與固相免疫測定結(jié)合，先把電泳分區(qū)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體，再用酶免疫、放射免疫等技術(shù)測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子量。常用于檢測多種病毒 如HI

28、V 的抗體或抗原。2021/4/2656免 疫 印 跡 法 示 意 圖2021/4/2657 二、免疫細胞的檢測免疫細胞數(shù)量檢測免疫細胞的功能檢測2021/4/2658(1) 抗凝靜脈血(2) 加等量NS(4) 密度梯度離心血漿分離液RBCPBMCPMN(3) 混勻后，緩慢加于分離液上外周血單個核細胞的分離2021/4/2659淋巴細胞類型和數(shù)量的測定1、花結(jié)試驗：E花結(jié)試驗可用于檢測T細胞數(shù)目。EA花結(jié)試驗可用于檢測B細胞數(shù)目。2、免疫熒光法：常采用間接免疫熒光法。3、流式細胞術(shù)：借助流式細胞儀（FCM)。2021/4/2660花結(jié)試驗示意圖2021/4/2661SmIg的熒光抗體檢測法20

29、21/4/2662免疫細胞功能的測定-T細胞功能測定體外法 ： T細胞增殖試驗 （淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗） 形態(tài)學檢查 3H-TdR摻入法體內(nèi)法 ： 用生物抗原或化學抗原作皮內(nèi)試驗。 OT-PPD皮試 SD-SK皮試 2021/4/2663淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（形態(tài)學示意圖）原理：人T細胞表面有PHA或ConA受體，T細胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛、且能進行分裂的淋巴細胞，以此測定T細胞的功能。 PHA刺激4872小時2021/4/2664培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性淋巴細胞增殖試驗（3H-TdR摻入法）示意圖2021/4/2665靶細胞5

30、1Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時細胞毒試驗（51Cr釋放法）示意圖2021/4/2666第三節(jié) 移植免疫概念：用正常的組織或器官置換受損或失去功能的組織或器官，以維持和重建機體的生理功能 ，這一過程稱為組織或器官移植。供者：移植時，提供移植物的個體。受者：移植時，接受移植物的個體。移植免疫或移植排斥反應(yīng)：受者的免疫系統(tǒng)與供者的移植物相互作用移植物中的免疫細胞對受者組織抗原識別而發(fā)生免疫應(yīng)答。2021/4/2667移植的類型自體移植同基因移植同種異體移植異種移植2021/4/2668Laws of transplantation 2021/4/26

31、69同種異型抗原識別的基礎(chǔ)同種異基因移植排斥反應(yīng)的本質(zhì)免疫應(yīng)答，由受者的T細胞介導(dǎo)的，針對移植抗原的免疫應(yīng)答同種異基因移植排斥反應(yīng)的靶抗原靶抗原是共顯性表達于移植物細胞表面的MHC 分子由受者的T細胞或B細胞對同種異基因移植供者的MHC分子進行識別2021/4/26702021/4/2671受者T細胞對供者MHC分子的直接識別直接識別：受者T細胞識別移植物細胞表面的完整的同種異型MHC分子機制：同種異型MHC分子加上某些抗原肽所形成的表位，在構(gòu)象上與自身MHC加上某些外來抗原肽所形成的表位具有明顯的相似性2021/4/2672受者T細胞對供者MHC分子的間接識別間接識別：受者T細胞識別經(jīng)過AP

32、C加工處理的來源于供者MHC分子的抗原肽2021/4/26732021/4/2674不同T細胞亞群識別不同的MHC分子CD4+ T細胞-MHC II類分子CD8+ T細胞MHC I類分子移植物內(nèi)的APC細胞對移植排斥反應(yīng)發(fā)揮作用2021/4/2675同種異基因移植排斥反應(yīng)的類型及效應(yīng)機制2021/4/2676效應(yīng)機制同種異型應(yīng)答的CD4+ T細胞活化、巨噬細胞動員-型超敏反應(yīng)同種異型應(yīng)答的CD8+ T細胞直接殺傷移植物的內(nèi)皮細胞、實質(zhì)細胞抗同種異型抗原抗體于相應(yīng)抗原形成復(fù)合物，激活補體2021/4/2677移植排斥反應(yīng)的類型宿主抗移植物反應(yīng)（host versus graft reaction

33、，HVGR ）：受者體內(nèi)的免疫效應(yīng)細胞和抗體對移植物進行攻擊，導(dǎo)致移植物被排斥。主要見于器官移植。 超急性排斥反應(yīng) 急性排斥反應(yīng) 慢性排斥反應(yīng)移植物抗宿主反應(yīng)（graft-versus-host reaction ，GVHR）：由于移植物中的抗原特異性淋巴細胞識別宿主組織抗原而發(fā)生的排斥反應(yīng)，一般難于逆轉(zhuǎn)。常見于骨髓移植后。2021/4/26782021/4/2679Graft versus host disease 發(fā)熱、腹瀉、關(guān)節(jié)痛、紅斑、消瘦、不適2021/4/2680GVHR早期表現(xiàn)：廣泛性皮膚壞死2021/4/2681GVHR晚期表現(xiàn)：背部硬化斑2021/4/2682急性期GVHR的

34、手掌部紅斑2021/4/26832021/4/2684同種異基因移植排斥的防治組織配型免疫抑制藥物誘導(dǎo)對移植抗原的特異性耐受2021/4/2685組織配型ABO血型必須符合：減少超急性移植排斥反應(yīng)HLA配型的規(guī)律HLA-A、B位點相配數(shù)越多，移植物存活率越多HLA-DR匹配至關(guān)重要，如DR匹配，DQ多匹配受者HLA-DR類型至關(guān)重要，是免疫應(yīng)答基因2021/4/2686免疫抑制藥物環(huán)孢菌素A：抑制T細胞活化過程中IL-2基因轉(zhuǎn)錄血液凈化：去除供體內(nèi)的抗體2021/4/26872021/4/2688誘導(dǎo)對移植抗原的特異性耐受方案：給受者輸入大劑量的根據(jù)供者MHC分子多態(tài)區(qū)順序合成的多肽或受者MHC分子給受者輸入大劑量的可溶性CTLA-4，阻斷B7與CD28的相互作用阻斷CD40-CD40L、CD2-LFA-3的信號傳遞2021/4/2689骨髓移植的特殊免疫學問題受者易發(fā)生對移植物的排斥移植物抗宿主病graft versus host disease GVHD可能伴有免疫缺陷：免疫重建不完善2021/4/26902021/4/26